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DOI: 10.3791/58165-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article describes a reproducible and efficient quantitative PCR (qPCR) method for enumerating T7 bacteriophage. The protocol includes genomic DNA preparation, PCR reaction setup, cycling conditions, and data analysis.
Eine reproduzierbare und genaue Zeit effizientere quantitative PCR (qPCR) Methode aufzuzählenden T7 Bakteriophagen wird hier beschrieben. Das Protokoll beschreibt klar Phagen genomische DNA-Vorbereitung, PCR Reaktion Vorbereitung, qPCR Radsport Bedingungen und qPCR Datenanalyse.
Diese Methode könnte helfen, Schlüsselprobleme in den Bereichen Virologie und Mikrobiologie im Zusammenhang mit der Aufzählung von Bakteriophagen aus komplexen Proben und Bakteriophagen basierenden Diagnostiken und Therapeutika zu lösen. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie eine zeiteffiziente und genaue Quantifizierung einer großen Anzahl von Proben aus Phagen-Display-Biopanning-Experimenten ermöglicht, die mit herkömmlichen Assays nicht möglich sind. Demonstriert wird das Verfahren von Rashmi Mohanty und Jasmim Leal, Absolventen meines Labors.
Nach dem Entwerfen der Primer und der Erstellung einer Lagerkonzentration erhalten Sie Referenz T7 Phagen-DNA in einer Konzentration von 0,1 Mikrogramm pro Mikroliter. Mit Reinstwasser verdünnen Sie diese DNA seriell verzehnfacht, von einer Million Femtogrammen pro Mikroliter auf ein Femtogramm pro Mikroliter in 0,2 Milliliter PCR-Röhren. Bereiten Sie 20 Mikroliter jeder Konzentration vor, stellen Sie sicher, dass Diepipe-Spitzen und Wirbel der Rohre zwischen jeder Stufe der Verdünnung zu ändern.
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