Real Time <em>In Vivo</em> Tracking of Thymocytes in the Anterior Chamber of the Eye by Laser Scanning Microscopy

Elisa Oltra; Alejandro Caicedo

doi:10.3791/58236

Echtzeit- In Vivo Verfolgung von Thymozyten in die Vorderkammer des Auges durch Laser-Sc...

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Biology

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Real Time In Vivo Tracking of Thymocytes in the Anterior Chamber of the Eye by Laser Scanning Microscopy

Echtzeit- In Vivo Verfolgung von Thymozyten in die Vorderkammer des Auges durch Laser-Scanning-Mikroskopie

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08:21 min

October 2, 2018

DOI: 10.3791/58236-v

Elisa Oltra^1,2, Alejandro Caicedo³

¹School of Medicine and Dentistry,Universidad Católica de Valencia San Vicente Mártir, ²Unidad Mixta CIPF-UCV,Centro de Investigación Príncipe Felipe, ³Department of Medicine,University of Miami

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study demonstrates a protocol for longitudinal intravital real-time tracking of thymocytes using laser scanning microscopy in thymic implants within the anterior chamber of the mouse eye. This innovative approach allows for continuous monitoring of progenitor cell recruitment and the egress of mature T-cells, providing insights into the mechanisms of autoimmunity and immunodeficiency.

Key Study Components

Research Area

Immunology
Thymocyte behavior
In vivo microscopy techniques

Background

Importance of studying thymus function
Role of thymocytes in immune response
Mechanisms of autoimmunity and immunodeficiency

Methods Used

Longitudinal intravital imaging
Mouse models with thymic implants
Laser scanning microscopy

Main Results

Real-time visualization of thymocyte dynamics
Tracking of cell recruitment and egress
Insights into thymus physiology and its dependence on vascularization

Conclusions

This study highlights a novel method for observing thymus activity in a living organism.
It opens avenues for further research into immunological disorders and cell behavior in grafted tissues.

Frequently Asked Questions

What is the purpose of the thymic implant in this study?

The thymic implant allows researchers to observe the behavior of thymocytes in a living system, providing insights into their roles in immune responses.

How does laser scanning microscopy contribute to this research?

Laser scanning microscopy enables real-time visualization of cellular dynamics and interactions within the thymic graft, allowing for detailed analysis of immunological processes.

What are the implications of tracking T-cell egress?

Tracking T-cell egress is crucial for understanding the development of the immune system and the potential dysregulation in autoimmune diseases.

Can this technique be applied to other tissues?

Yes, the method can also be adapted for studying other tissues such as pancreatic islets and kidney glomeruli.

What is the significance of vascularization in this context?

Vascularization is important as it influences thymus physiology and is critical for the delivery of nutrients and immune factors necessary for thymocyte development.

What challenges are associated with thymus transplantation?

Challenges include ensuring proper engraftment, avoiding immune rejection, and maintaining tissue integrity during surgical procedures.

What advancements does this protocol represent in immunology research?

This protocol represents a significant advancement by enabling longitudinal studies of thymocyte behavior in a living organism, thereby providing unprecedented insights into immune system functioning.

Das Ziel des Protokolls ist längs intravitalen Echtzeitverfolgung der Thymozyten durch Laser-scanning-Mikroskopie in der zebrafischembryonen Implantate in die Vorderkammer des Auges Maus zeigen. Die Transparenz der Hornhaut und Vaskularisierung des Transplantats ermöglicht kontinuierlich aufzeichnen Stammvater Zelle Rekrutierung und Reife T-Zell-Ausstieg.

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich der Immunologie über die Mechanismen der Autoimmunität, Immunschwäche, zentrale Toleranz und Thymus-Involution zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass sie in vivo Längsaufzeichnung von VorläuferRekrutierung und reife T-Zell-Egression in vaskularisierten und transplantierten Maus-Thymus-Segmenten ermöglicht. Obwohl diese Methode einen Einblick in die Entwicklung und Funktion des Thymus geben kann, kann auch auf andere Gewebe wie Pankreasinseln oder Nierenglomeruli angewendet werden.

Um den Thymus zu isolieren, legen Sie die Maus auf sterile saugfähige Papierhandtücher in der dorsalen aufrechten Position in einer laminaren Durchflusshaube und sprühen und wischen Sie den Mausbauch mit 70% Ethanol ab. Machen Sie einen oberflächlichen V-förmigen Schnitt im Unterbauch, um die Brusthöhle freizulegen, und verwenden Sie ein Paar gerade 10-Zentimeter-Sezieren der Schere, um einen 0,5 bis 1 Zentimeter großen Schnitt in der Brust entlang der ventralen Mittellinie zu machen. Falten Sie die Haut über jede Seite der Brust, um die Brusthöhle freizulegen, und machen Sie zwei zusätzliche tiefere 0,5 bis ein Zentimeter seitliche Einschnitte durch das Zwerchfell und den Rippenkäfig, um auf das überlegene Mediastinum in der vorderen Brusthöhle zuzugreifen.

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