Name: Messung der Schlunddrüsen Drüse Acinus Größe in Honigbiene (Apis Mellifera) Arbeitnehmer (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 11 s
Description: Erfahren Sie die Messung der Hypopharyngealdrüsen bei Honigbienen-Arbeiterinnen mittels Präparation, Giemsa-Färbung und Bildanalyse. Diese Methode ermöglicht präzise Aussagen zur Ernährungsqualität und Gesundheit des Bienenvolkes.

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Diese Arbeit wurde unterstützt durch interne Fonds von der USDA-ARS (Projektnummer: 2022-21000-017-00-D). Die ARS/USDA ist ein Anbieter und Chancengleichheit.

(1) sezieren und Färbung der Schlunddrüsen Drüsen von Krankenschwester Arbeitnehmer
<ol><li>Machen Sie einen Wachs Dissektion Teller durch schmelzen kühlen Einstellung Wachs in ein kleines (60 mm x 15 mm) oder großen (100 mm x 15 mm) Glas Petrischale. Kühlen Sie das Wachs vollständig ab, bevor Sie mit der Platte für Sezierungen.</li>
	<li>Für jede Biene zu bearbeitenden vorbereiten 20 µL einer 01:20 arbeiten Giemsa-Lösung (01:20 V/V von Giemsa Fleck in Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung vorbereitet (PBS: 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 1,8 mM KH2PO4)). Achtung: Giemsa Fleck enthält Methanol und ist brennbar. Es ist giftig bei Einatmen, Verschlucken oder Hautkontakt kommt es. Es sollte laut Anforderungen der lokalen Institution entsorgt werden. Hinweis: Stellen Sie immer einen frischer Tanklösung nur für den aktuellen Stapel von Proben, weil Giemsa Fleck schnell verschlechtert, sobald es verdünnt wird. Verwerfen Sie den verdünnten Fleck, wenn ein Niederschlag entsteht.</li>
	<li>Pipettieren 20 µL Giemsa Fleck in die Vertiefungen der Objektträger und 50 – 100 µL Saline auf der Folie neben dem Brunnen.</li>
	<li>Lösen Sie den Kopf von einer Biene, mit der 10 mm-Mikro-Feder-Schere und Betten Sie der vorderen Kopfseite bis in die Wachs-Dissektion-Platte mit Zange und einem Wachs-Carving-Stift ein. Festzunageln Sie den Kopf in die Wachs-Platte für zusätzliche Stabilität durch Einfügen von Nadeln in die Augen und den Mund.</li>
	<li>Eine kleine machen mit einer scharfen zerbrechlich Rasierklinge in einen Schraubstock Pin fixiert (~ 2 – 3 mm) Einschnitt zwischen den Augen und Mandibeln auf jeder Seite der Frontplatte. Sanft laufen Sie die Mikro Schere unter der Frontplatte und Schnitten Sie den riechzentrum Nerv, der zwischen den Antennen und das Gehirn läuft.</li>
	<li>Mit feinen Pinzette, Schnapp dir die Frontplatte durch den Mund, es hochklappen und Heften Sie es an die Wachs-Platte mit feinen Spitze Pinzette und eine Pin. Wenn nötig, entfernen Sie die Stirnplatte vollständig.</li>
	<li>Pipettieren 20 µL PBS auf den Schnitt öffnen Bereich des Kopfes. Hinweis: Die Drüsen können schweben bis zu diesem Zeitpunkt oder man muss nach ihnen suchen. Die Drüsen aussehen wie eine Perlenkette und befinden sich auf der Oberseite des Gehirns wenn intakt.</li>
	<li>Verwenden Sie Superfein Punkt Zange, um eine der schlunddrüsen Drüsen entfernen sanft (die Drüse kann brechen, erfordert es in Segmenten entfernt werden), und sofort übertragen Sie die Drüse auf den Giemsa Fleck auf der Mikroskopie-Folie.</li>
	<li>Ermöglichen Sie die Drüse in der Giemsa-Lösung für 5 min inkubieren, und verwenden Sie Zange, um die Drüse an den Pool der Saline auf derselben Folie übertragen. Bei Bedarf schneiden Sie die Drüse in kleinere Stücke mit der Schere Mikro. Hinweis: Dies hilft, um die Drüsen in ein flacher Ebene, wodurch es leichter zu erhalten klare Bilder von der Drüse Azini liegen zu machen.</li>
</ol>2. Messung der schlunddrüsen Drüse Azini
<ol><li>Schalten Sie das Mikroskop und öffnen Sie das Messprogramm. Die Lichtquelle für das Mikroskop schalten Sie ein, wenn es nicht bereits auf. Die Mikroskop-Vergrößerung auf 10 X gesetzt.</li>
	<li>Die Drüsen zu finden und das vergrößerte Bild im Okular, ohne den Computer zu konzentrieren. Erhöhen Sie die Vergrößerung auf 60 – 80 X und konzentrieren Sie das Bild im Okular zu.</li>
	<li>Auf der Registerkarte "Acquire" einstellen und die Drüsen auf das live-Bild auf dem Computer konzentrieren.</li>
	<li>Geben Sie Bild Name/Beispielbeschreibung in das Feld "Bild" und klicken Sie auf "Bild holen", um ein Bild von den Drüsen für weitere Messungen zu nehmen.</li>
	<li>Wählen Sie die Registerkarte 'Analyse' wählen Sie die "Flächenwerkzeug" (hervorgehoben in ergänzenden Abbildung 1A) und deaktivieren Sie "Wert" unter "Display Labels", die auch 'Einheit' aufheben wird. Legen Sie alle anderen Einstellungen auf Standard (ergänzende Abbildung 1A). Hinweis: Die Software kalibriert automatisch die Flächenmaße nach dem Grad der Vergrößerung, so dass das Gebiet von niedrigerer Vergrößerung erhalten das gleiche wie die von einer höheren Vergrößerung erhalten ist.</li>
	<li>Messen Sie jeden Acinus indem stetig oder kontinuierlich halten Sie die linke Maustaste gedrückt und Rückverfolgung der Acinus Perimeter so schonend wie möglich. Messen Sie mindestens 10 Azini pro Biene. Hinweis: Mehr erforderlich sein je nach dem Experiment (siehe Diskussion). Sie benötigen mehrere Bilder/Abschnitte der Drüse, genügend klar, richtig ausgerichtet Azini für Messung zu finden.</li>
	<li>Sobald alle die Azini von einem einzigen Image gemessen wurden, wählen Sie "Bericht erstellen". Sicherstellen Sie, dass die Optionen ausgewählt sind, wie in zusätzliche Abbildung 1 b dargestellt und klicken Sie auf "exportieren".</li>
	<li>Speichern Sie den Bericht, wie gewünscht. Wenn eine Datei bereits für den Satz von Proben erstellt wurde und weitere Messungen werden hinzugefügt, stellen Sie sicher, dass die Report-Datei nicht geöffnet ist, damit die neuen Daten an die vorhandene Datei hinzugefügt werden.</li>
	<li>Wenn Sie fertig sind, schalten Sie das Mikroskop-Kamera und Lichtquelle. Wischen Sie die Flüssigkeit und die Drüsen aus der Mikroskopie-Folien und entsorgen Sie sicher aller verwendeten Materialien. Die Folien mit destilliertem Wasser spülen und sauber wischen mit Ethanol (70 % V/V in Wasser) zur Wiederverwendung.</li>
</ol>

<ol><li>Kulhanek, K., et al. <a target="_blank" href="https://www.tandfonline.com/doi/full/10.1080/00218839.2017.1344496">A national survey of managed honey bee 2015-2016 annual colony losses in the USA.</a> Journal of Apicultural Research. 56 (4), 328-340 (2017).</li>
<li>Jacques, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pan-European+epidemiological+study+reveals+honey+bee+colony+survival+depends+on+beekeeper+education+and+disease+control%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A pan-European epidemiological study reveals honey bee colony survival depends on beekeeper education and disease control.</a> PLoS One. 12 (3), e0172591(2017).</li>
<li>Zee, R. vd, et al. <a target="_blank" href="https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.3896/IBRA.1.53.1.02">Results of international standardised beekeeper surveys of colony losses for winter 2012-2013: analysis of winter loss rates and mixed effects modelling of risk factors for winter loss.</a> Journal of Apicultural Research. 53 (1), 19-34 (2014).</li>
<li>Decourtye, A., Mader, E., Desneux, N. <a target="_blank" href="https://www.apidologie.org/articles/apido/abs/2010/03/m09128/m09128.html">Landscape enhancement of floral resources for honey bees in agro-ecosystems.</a> Apidologie. 41 (3), 264-277 (2010).</li>
<li>Vaudo, A. D., Tooker, J. F., Grozinger, C. M., Patch, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bee+nutrition+and+floral+resource+restoration%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Insect+Science%22%5BJournal%5D)">Bee nutrition and floral resource restoration.</a> Current Opinion in Insect Science. 10, 133-141 (2015).</li>
<li>Snodgrass, R. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSnodgrass%2C+RE+%22Anatomy+of+the+Honey+Bee%22">Anatomy of the Honey Bee</a>. , Comstock Pub. Associates. (1984).</li>
<li>Winston, M. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWinston%2C+ML+%22The+Biology+of+the+Honey+Bee%22">The Biology of the Honey Bee</a>. , Harvard University Press. (1987).</li>
<li>Johnson, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Division+of+labor+in+honeybees%3A+form%2C+function%2C+and+proximate+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Ecology+and+Sociobiology%22%5BJournal%5D)">Division of labor in honeybees: form, function, and proximate mechanisms.</a> Behavioral Ecology and Sociobiology. 64 (3), 305-316 (2010).</li>
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<li>Corby-Harris, V., Snyder, L., Meador, C., Ayotte, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey+bee+%28Apis+mellifera%29+nurses+do+not+consume+pollens+based+on+their+nutritional+quality%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Honey bee (Apis mellifera) nurses do not consume pollens based on their nutritional quality.</a> PLoS One. 13 (1), e0191050(2018).</li>
<li>Corby-Harris, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional%2C+translational%2C+and+physiological+signatures+of+undernourished+honey+bees+%28Apis+mellifera%29+suggest+a+role+for+hormonal+factors+in+hypopharyngeal+gland+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Transcriptional, translational, and physiological signatures of undernourished honey bees (Apis mellifera) suggest a role for hormonal factors in hypopharyngeal gland degradation.</a> Journal of Insect Physiology. 85, 65-75 (2016).</li>
<li>Corby-Harris, V., Jones, B. M., Walton, A., Schwan, M. R., Anderson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+markers+of+sub-optimal+nutrition+in+developing+Apis+mellifera+nurse+workers%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Transcriptional markers of sub-optimal nutrition in developing Apis mellifera nurse workers.</a> BMC Genomics. 15, 134(2014).</li>
<li>Sagili, R. R., Pankiw, T., Zhu-Salzman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+soybean+trypsin+inhibitor+on+hypopharyngeal+gland+protein+content%2C+total+midgut+protease+activity+and+survival+of+the+honey+bee+%28Apis+mellifera+L%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Effects of soybean trypsin inhibitor on hypopharyngeal gland protein content, total midgut protease activity and survival of the honey bee (Apis mellifera L).</a> Journal of Insect Physiology. 51 (9), 953-957 (2005).</li>
<li>Sagili, R. R., Pankiw, T. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s00265-007-0379-1">Effects of protein-constrained brood food on honey bee (Apis mellifera L.) pollen foraging and colony growth.</a> Behavioral Ecology and Sociobiology. 61 (9), 1471-1478 (2007).</li>
<li>Hrassnigg, N., Crailsheim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+of+hypopharyngeal+gland+development+to+the+brood+status+of+honeybee+%28Apis+mellifera+L.%29+colonies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Adaptation of hypopharyngeal gland development to the brood status of honeybee (Apis mellifera L.) colonies.</a> Journal of Insect Physiology. 44 (10), 929-939 (1998).</li>
<li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+Image+to+ImageJ%3A+25+years+of+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nature Methods. 9, 671(2012).</li>
<li>Jack, C. J., Uppala, S. S., Lucas, H. M., Sagili, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+pollen+dilution+on+infection+of+Nosema+ceranae+in+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Effects of pollen dilution on infection of Nosema ceranae in honey bees.</a> Journal of Insect Physiology. 87, 12-19 (2016).</li>
<li>Crailsheim, K. <a target="_blank" href="https://hal.archives-ouvertes.fr/hal-00890873/document">The protein balance of the honey bee worker.</a> Apidologie. 21, 417-429 (1990).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Schlunddrüsen Drüse Größe ist empfindlich auf die Menge an Protein und Pollen in der Ernährung und ist ein kritischer Marker für Nahrung in jungen Erwachsenen Bienen. Hier zeigen wir eine kostengünstige und reproduzierbare Möglichkeit zu zerlegen und dieses Gewebes zu messen. Diese Gewebe können schwierig sein zu sezieren, aber mit etwas Übung kann man zunehmend sauberere Sezierungen mit dem Gewebe relativ intakt erhalten. Der wesentliche Vorteil der hier vorgestellten Methode ist, dass das Gewebe befleckt ist, wodurch d...

Honigbienen sind unerlässlich für die Landwirtschaft, weil sie eine Vielzahl von Pflanzen bestäuben, die durch Menschen und Tiere verbraucht werden. Viel Aufmerksamkeit wurde auf den Rückgang der Bienenvölker Honig als Kolonie Verluste schweben rund 30-40 % jährlich in den Vereinigten Staaten1 und 10 – 15 % in Europa2,3gelegt. Mehreren Faktoren ab, einschließlich eingeschränkten Zugang zu qualitativ hochwertigen Futter, wahrscheinlich Akt zusammen, um negative Auswirkungen auf Bienengesundheit. Monokultur, Dürre, nicht nachhaltige Imkerei Praktiken und andere Faktoren verringern die Vielfalt und Menge an natürlichen Pollen Kolonien4,5zur Verfügung. Da Honigbienen abgeleitet fast alle ihre diätetischen Proteine und Lipide aus Pollen werden, kann eingeschränkter Zugang zu Pollen schränken Gesundheit Individuum und Kolonie.
Die schlunddrüsen Drüsen sind sekretorischen Strukturen in die Biene Kopf zwischen Auge und Gehirn-6. Unter normalen Umständen spiegeln die Entwicklungs- und funktionale Flugbahn der Drüsen, die von der Biene, in dem sie aufhalten. In ca. 5 – 10 Tage alt führt die Biene im Bienenstock Krankenpflege Verhaltensweisen. Zur gleichen Zeit erreichen die schlunddrüsen Drüsen ihre Maximalgröße und sekretorischen Kapazität, produzieren die großen Proteinfraktion futtersaft oder Gelee gefüttert, Larven und andere Erwachsene, wie die Königin zu entwickeln. Auf diese Maximalgröße ähneln die Drüsen Weintraube, wo jede Traube eine diskrete Lappen Struktur bekannt als die Acinus ist (plural: Azini). Da die Arbeitsbiene altert und verschiedene Aufgaben im Bienenstock übernimmt, die schlunddrüsen Drüsen schrumpfen und übernehmen verschiedene Funktionen, wie Abbau von Zucker im Nektar7,8. Die schlunddrüsen Drüsen sind daher mit dem Alter die Biene und ihre Aufgabe altersassoziierter korreliert.
Krankenschwester schlunddrüsen Drüse Größe reagiert empfindlich auf die Quantität und Qualität von Protein in ihrer Ernährung9,10,11. Wenn ammenbienen gut ernährt werden, sind ihre Drüsen groß. In der Erwägung, dass die Drüsen sind kleiner ist als die Biene Pollen, besonders in der ersten Woche der Erwachsenen Entwicklung beraubt. Um den Ernährungszustand einer Krankenschwester Biene festzustellen, Forscher in der Regel messen die schlunddrüsen Drüsen, entweder durch direkte Messung Drüse Acinus Größe11,12,13,14 oder Protein Inhalt15,16 , durch die Messung des Proteins Inhalt11 oder frisch Gewicht17 von den ganzen Kopf, wo sie sich befinden. Jede Methode hat ihre eigenen vor- und Nachteile. Wir bevorzugen die Auflösung von Messung der Drüse Azini erhalten, obwohl diese Methode in zwei wesentlichen Punkten schwierig sein kann. Die erste Herausforderung ist es, richtig zu identifizieren und zu zergliedern, die Drüse. Die zweite ist ein genaues Maß für jede Acinus erhalten. Unter einem sezierenden Lichtmikroskop die Drüsen erscheinen klar oder milchig weiß und die Grenzen der Azini können schwierig sein zu definieren. Werkzeuge, um den Rand der Azini besser zu definieren und erhöhen die Wahrscheinlichkeit der Erlangung genauer Drüse Messungen ist vorteilhaft für jeden Honig Biene Ernährung zu studieren.
Hier zeigen wir interessierten Forschern wie zu sezieren, färben, Bild, und schlunddrüsen Drüsen zu messen, so dass genaue Messungen der Acinus Größe erreicht werden können. Die Methode, die wir beschreiben bietet Forscher eine einfache, präzise und reproduzierbare Methode zur Erreichung Mehrfachmessung Drüse in relativ kurzer Zeit, wenn der Experimentator ausreichend praktiziert wird. Man könnte getrost die Drüsen von fast 10 Personen in knapp einer Stunde messen. Wir bieten Informationen über die Methode und Materialien benötigt, um diese Messungen zu erhalten. Die wichtigsten Aspekte der unten beschriebenen Methoden sind die richtige Präparation und Färbung der Drüsen. Obwohl wir die vergrößerten Bilder erfassen und der Azini mit kommerzieller Software Messen, adaptierbar die Methoden, die wir präsentieren leicht auf anderen Plattformen18.

<table><tbody><tr><td>Cool setting wax</td><td>Grobet USA</td><td>21.450</td><td></td></tr><tr><td>Petrischale aus Glas, klein</td><td>VWR</td><td>89000-310</td><td></td></tr><tr><td>Petrischale aus Glas, groß</td><td>VWR</td><td>89000-314</td><td></td></tr><tr><td>Super Max Wax Pen</td><td>Eurotool</td><td>PEN-520.00</td><td></td></tr><tr><td>Zerbrechliche Rasierklingen</td><td>Elektronenmikroskopie Sciences</td><td>72004</td><td></td></tr><tr><td>Stiftschraubstock</td><td>BioQuip</td><td>4845</td><td></td></tr><tr><td>2A-SA Zange mit flacher/abgerundeter Spitze</td><td>Rubis/BioQuip</td><td>4522</td><td></td></tr><tr><td>Zange mit feiner Spitze</td><td>Rubis/BioQuip</td><td>4523</td><td></td></tr><tr><td>5A-SA Zange mit superfeiner Spitze</td><td>Rubis/BioQuip</td><td>4525</td><td></td></tr><tr><td>10 mm Mikro-Federzange</td><td>BioQuip</td><td>4715</td><td></td></tr> 3 <tr><td>mm Mikro-Feder Vannas Schere</td><td>Roboz</td><td>RS-5610</td><td></td></tr><tr><td>Glas-Depressionsobjektträger, Einzelkavität</td><td>GSC International</td><td>4-13057-DZ-12</td><td></td></tr><tr><td>PBS-Tabletten</td><td>VWR</td><td>97062-730</td><td></td></tr><tr><td>Giemsa-Fleck, modifizierte Lösung</td><td>Sigma Aldrich</td><td>32884</td><td></td></tr><tr><td>Insektenstifte</td><td>ENTO SPHINX S.R.O.</td><td>02.02</td><td></td></tr><tr><td>Leica Applications Suite Messsoftware</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>Jede Messsoftware, auch kostenlose Software, kann verwendet werden</td></tr></tbody></table>

messung der schlunddrüsen drüse acinus größe in honigbiene (apis mellifera) arbeitnehmer

Measuring Hypopharyngeal Gland Acinus Size in Honey Bee (Apis mellifera) Workers

Die Krankenschwester schlunddrüsen Drüsen produzieren die Proteinfraktion des Arbeitnehmers und Gelée Royale, das zur Entwicklung von Larven und Königinnen gespeist wird. Diese gepaarten Drüsen, die befinden sich in den Kopf der Biene sind sehr empfindlich auf die Quantität und Qualität der Pollen und Blütenstaub ersetzt, dass die Krankenschwester Biene verbraucht. Die Drüsen werden kleiner, wenn Krankenschwestern mangelhafte Ernährung zugeführt werden und sind groß, wenn sie komplette Diäten gefüttert werden. Da Krankenschwester schlunddrüsen Drüse Größe ein robuster Indikator für Krankenschwester Ernährung ist, ist es wichtig, dass Studierende Honig Biene Ernährung wissen, wie man diese Drüsen zu messen. Hier bieten wir detaillierte Methoden zum sezieren, Beizen, imaging und Krankenschwester Biene schlunddrüsen Drüsen zu messen. Wir stellen Vergleiche von ungefärbten und gefärbten Gewebe und Daten, die verwendet wurden, um die Auswirkungen der Pollen auf Drüse Größe zu studieren. Mit dieser Methode zu testen, wie Ernährung wirkt sich schlunddrüsen Drüse Größe aber weitergehende Nutzung für das Verständnis der Rolle dieser Drüsen im Bienenstock Gesundheit hat.

Schlunddrüsen Drüsen wurden seziert von Krankenschwester Arbeiter und visualisiert mit und ohne Flecken bei 60 – 80 X Vergrößerung (Abbildung 1). Im ungefärbten Gewebe ist es schwierig, die richtigen Kontrast voll konzentrieren und definieren die Kanten der Azini zu finden. Im gefärbten Gewebe sind die Kanten der Azini aufgrund der verbesserten Kontrast zwischen den gefärbten Gewebe und der weiße Hintergrund scharf.
<p class="jove_content" fo:keep-togethe...

Schlunddrüsen Drüse Acinus Größe ist ein robustes Maß der Krankenschwester Honig Biene Ernährung. Hier bieten wir ein detailliertes Protokoll zum sezieren, Beizen, imaging und Krankenschwester Biene schlunddrüsen Drüse Azini zu messen.

Messung der Schlunddrüsen Drüse Acinus Größe in Honigbiene (Apis Mellifera) Arbeitnehmer

The nurse hypopharyngeal glands produce the protein fraction of the worker and royal jelly that is fed to developing larvae and queens. These paired ...

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich der Honigbienenernährung zu beantworten, über den Zusammenhang zwischen schlechter Ernährung und Hypopharyngealdrüsenwachstum und -entwicklung. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass man sie verwenden kann, um Bienenhypopharyngealdrüsen leicht zu färben, zu visualisieren und zu messen. Im Allgemeinen, Personen neu zu dieser Methode wird kämpfen, weil die hypopharyngealdds kann schwierig sein, ohne visuelle Führung zu lokalisieren und zu sezieren.Bevor Sie mit dem Eingriff beginnen, gießen Sie geschmolzenes kühles Einstellwachs in eine Glas-Petrischale. Fügen Sie 20 Mikroliter frisch zubereiteten Giemsa-Flecken in einen Brunnen und 50 bis 100 Mikroliter Saline in einen angrenzenden Brunnen eines Mikroskopschlittens, pro Zubearbeiten von Krankenschwestern und Krankenschwestern, hinzu. Wenn das Wachs gesetzt hat, verwenden Sie 10 Millimeter Mikrofederschere, um den Kopf von der ersten Biene zu entfernen und Zangen, ein Sezieren Mikroskop und einen Wachsschnitzstift zu verwenden, um den Kopf nach vorne in die Wachssesektionsplatte einzubetten.Legen Sie Stifte in die Augen und den Mund, um den Kopf auf der Platte zu sichern, und v

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Research

Forschung

JoVE Journal

Environment

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Wir zeigen, wie eine Verhaltens-Pharmakologie-Methode in einem appetitive olfaktorischen Konditionierung bei Honigbienen (Apis mellifera) durch systemische Applikation von Medikamenten zu implementieren. Diese Methode erlaubt Erforschung der Mechanismen, die Lernen und Gedächtnisbildung in eine einfache und zuverlässige Weise.

Behavioural Pharmacology in Classical Conditioning der Proboscis Erweiterung Reaktionszeit in Honigbienen ( Apis mellifera)

In diesem Protokoll zeigen wir, wie Bedingung Honigbienen auf taktile Reize genutzt und die Einführung einer 2D-Motion-Capture-Technik zur Analyse der Kinematik feinskaligen antennalen Abtastmuster.

Tactile Conditioning und Bewegungsanalyse der antennalen Sampling Strategies In Honey Bees (<em&gt; Apis mellifera</em&gt; L.)

In diesem Protokoll beschreiben wir zwei Strategien, die gleichzeitig zwei Gene unterdrücken (doppelte Gen Knockdown) in Honigbienen. Dann präsentieren wir, wie die Rüssel extension response (PER) Test, um die Wirkung der doppelten Gen Knockdown auf Honigbiene geschmacklichen Wahrnehmung studieren verwenden.

RNAi-vermittelte Gene Knockdown Doppelzimmer und Gustatorisch Perception Measurement in Honey Bees (<em&gt; Apis mellifera</em&gt;)

Das Proboscis Extension Response (PER) Konditionierungsprotokoll, das für die Honigbiene (Apis mellifera) entwickelt wurde, bietet ein ökologisch relevantes und leicht quantifizierbares Mittel, um verschiedene Lernmechanismen bei vielen Insektenarten zu untersuchen.

Eine Nasennebenschutz-Protokoll für die Untersuchung Verhaltensplastizität bei Insekten: Anwendung auf Grund, Biomedizinische und Agrarforschung

Es wird ein neuartiger Verhaltensassay beschrieben, um die kurzfristigen Geschmacksreaktionen der Mundwerkzeuge von frei beweglichen Hummeln (Bombus terrestris) auf Nährstoffe und Toxine in Lösung zu untersuchen.

A Novel Verhaltenstest Gustatory Antworten einzelner, frei beweglichen Bumble Bees zur Untersuchung (<em&gt; Bombus terrestris</em&gt;)

Hier beschreiben wir unser ausführliches Protokoll zur Herstellung von Single-Kohorte Bienenvölker - ein nützliches Werkzeug für die Analyse der Rolle-assoziierten Arbeiter Physiologie. Wir beschreiben auch detaillierte Protokolle für Arbeitnehmer mit Juvenilhormons und Ecdyson Behandlung der Beteiligung dieser Hormone an der Regulation der Arbeiter Verhalten und / oder Physiologie zu bewerten.

Erstellung von Einzel-Kohorte Kolonien und Hormonbehandlung von Arbeitshonigbienen Physiologie Assoziierte Analysieren mit Rolle und / oder endokrine System

Dieses Manuskript beschreibt mehrere Protokolle für pharmakologische Mittel zur Verabreichung von Honigbienen, einschließlich einfacher nicht-invasive Methoden zur freifliegenden Bienen, sowie mehr invasive Varianten, die eine präzise lokalisierte Behandlung von zurückhaltender Bienen ermöglichen.

Neuropharmakologische Manipulation von Verhaltene und Free-Fliegen-Honig-Bienen,<em&gt; Apis mellifera</em

Hier präsentieren wir   ein Verfahren Pestizid kontaminierte Lebensmittel sowohl mit einer einzelnen Honigbiene und einer Bienenkolonie zu ernähren. Das Verfahren bewertet die Pestizid Auswirkungen auf die einzelnen Honigbienen durch in - vivo - Zufuhr von basischen Larven Ernährung und auch auf den natürlichen Zustand der Bienenkolonie.

Die Bewertung der Wirkung von Umweltchemikalien auf Honig-Bienen-Entwicklung von der Person zu Colony Ebene

Subletale Dosen von Pestiziden können Kolonien auf Art und Weise beeinflussen, die schwer zu erkennen, nur periodische oder visuelle Methoden sind. Methoden zur gesamten Erwachsenen Biene Masse messen Brut und Nahrungsressourcen durch Wiegen Nesselsucht und Bienenkorb-Teile, Rahmen zu fotografieren und Installation von Sensoren, stehen zur Verfügung. Die Datenanalyse wird auch angesprochen.

Überwachung der Kolonie-Ebene Auswirkungen der subletalen Schädlingsbekämpfungsmittelbelichtung auf Honigbienen

Hier beschreiben wir zwei Protokolle: Erstens, um große Mengen von nicht umhüllten Viruspartikeln der Honigbiene zu vermehren, zu extrahieren, zu reinigen und zu quantifizieren, einschließlich einer Methode zur Entfernung von Honigbienenpuppen, und zweitens, um die Auswirkungen einer Virusinfektion mit einem hochgradig wiederholbaren Käfigbioassay mit hohem Durchsatz zu testen.

Herstellung von virusangereichertem Inokulum zur oralen Infektion von Honigbienen (Apis mellifera)

Immunhistochemische Methoden sind in der Honigbienenforschung nützlich, um den Grad der Apoptose und Nekrose in den Mitteldarm- und Hypopharynxdrüsen erwachsener Bienen zu erkennen und zu beurteilen.

Histologische Grundlagen und Zelltodnachweis in Honigbienengewebe

Erfahren Sie die Messung der Hypopharyngealdrüsen bei Honigbienen-Arbeiterinnen mittels Präparation, Giemsa-Färbung und Bildanalyse. Diese Methode ermöglicht präzise Aussagen zur Ernährungsqualität und Gesundheit des Bienenvolkes.

Messung der Schlunddrüsen Drüse Acinus Größe in Honigbiene (Apis Mellifera) Arbeitnehmer

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