Das Schneiden und schwimmende Methode für Paraffin-eingebetteten Gewebe für Schneiden

Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen im morphologischen Bereich zu beantworten, wie z.B. die Paraffinschnitte. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass das Schneiden und der Faltvorgang kulminiert werden und der Übertragungsprozess vermieden wird, der bei der herkömmlichen Methode erforderlich ist. Sammeln Sie zunächst alle vorgefertigten Teile in einem Abzug.

Verwenden Sie Chloroform, um die sieben Acrylplatten zu kombinieren, wie hier gezeigt. Das Endprodukt wird ein Tank sein, der mit einem Schnittkanal und einem Wasserbad ausgestattet ist. Installieren Sie das röhrenförmige elektrische Heizelement durch das Loch in der Acrylplatte Nummer zwei.

Bohren Sie mit einer elektrischen Bohrmaschine ein kleines Loch in die Acrylplatte Nummer sieben und installieren Sie ein digitales Thermostat am Tank, wobei Sie darauf achten, dass er mindestens einen Zentimeter unter dem Niveau der vorgesehenen Wasseroberfläche liegt, was durch den schwarzen Punkt auf dem Tank angezeigt wird. Stellen Sie die Spannung so ein, dass sie unter 24 Volt liegt, bevor Sie das Gerät einschalten. Nehmen Sie die Ablaufschale aus dem Mikrotom.

Verwenden Sie anschließend einen neutralen Silikondichtstoff, um den Kanal der Abschnitte mit dem Mikrotom-Klingenhalter zu verbinden, und achten Sie darauf, dass kein Dichtmittel über die Oberseite der Klinge gelangt. Lassen Sie das Setup über Nacht trocknen, damit das Chloroform und der neutrale Silikondichtstoff Zeit haben, sich zu verfestigen. Setzen Sie die Klinge am nächsten Tag in den Klingenhalter ein.

Gib Wasser in das Wasserbad und achte darauf, dass die Wasseroberfläche nur die Oberseite der Klinge berührt. Schalten Sie nach der herkömmlichen Paraffinsektion das Gerät ein, um eine verbesserte Paraffinsektion zu starten. Verwenden Sie den Temperaturerkennungsschalter, um die Heizung zu öffnen.

Stellen Sie die Zieltemperatur für eine Stunde zwischen 38 Grad Celsius und 40 Grad Celsius ein, um das Wasser zu erwärmen. Verwenden Sie ein Messer, um den durch die Paraffineinbettung erworbenen Paraffinblock zu modifizieren. Setzen Sie dann den Block auf die Kassettenklemme des Mikrotoms und verriegeln Sie ihn.

Schneiden Sie die dickeren Abschnitte, um sich der Probe schnell zu nähern. Stellen Sie die Dicke auf eine geeignete Querschnittsdicke für die Proben ein. Durch Drehen des Handrads werden die Sektionen automatisch in Sektionen, Kanal und Bad geladen.

Anschließend wird die Probe in einem langsamen und gleichmäßigen Schnitthub geschnitten. Führen Sie die Abschnitte so in die Badkammer, dass sie in einer Linie schwimmen. Wenn das Kopfteil an der Kammerwand haftet, verwenden Sie eine Bürstenführung, um es schwebend zu halten.

Nachdem sich die Abschnitte im Wasserbad vollständig entfaltet haben, trenne sie mit einer Pinzette und nimm sie dann auf einem Objektträger auf. Schieben Sie die Objektträger in einen auf 42 Grad Celsius eingestellten Ofen, um sie über Nacht zu trocknen. Die Objektträger können dann unbegrenzt bei Raumtemperatur gelagert werden, bis sie zur Analyse bereit sind.

Wenn Sie zur Analyse bereit sind, verwenden Sie die Hämatoxylin-Eosin-Färbung, um die Schnitte mit der verbesserten Methode zu bewerten. In dieser Studie wird eine verbesserte Methode zur Präparation von Paraffinschnitten für adultes Maus-Hippocampusgewebe, adulte Mausnieren, embryonale Mausgehirne und Zebrafischaugen verwendet. Wie hier gezeigt, vermeidet die neue Methode Schnittverluste und erhöht den Anteil intakter Schnitte in jeder Art von untersuchtem Gewebe.

Bei der Durchführung von Schnitten ganzer Serien wird diese Methode als Beschleunigung der Paraffinschnittgeschwindigkeit in allen getesteten Proben angesehen. Mit anderen Worten, diese Methode bietet eine qualitativ hochwertigere Paraffintrennung in kürzerer Zeit als die herkömmliche Methode. Serienschnitte der optischen Netzhaut des Zebrafisches werden dann durch Hämatoxylin-Eosin-Färbung beobachtet.

Die Schnitte, die mit der verbesserten Methode entnommen werden, weisen eine bessere Integrität auf als diejenigen, die mit der herkömmlichen Paraffin-Schnittmethode entnommen werden. Während es beim Vergleich dieser beiden Methoden keine signifikanten Unterschiede in der Qualität der meisten geernteten Abschnitte gibt, wird festgestellt, dass einige Abschnitte, die mit der konventionellen Methode geerntet wurden, von relativ geringer Qualität sind. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Chloroform äußerst gefährlich sein kann und bei der Durchführung dieses Verfahrens immer Vorsichtsmaßnahmen wie Abzüge getroffen werden sollten.

Wenn Sie dieses Verfahren versuchen, ist es wichtig, daran zu denken, vorsichtig Wasser hinzuzufügen und eine Überfüllung zu vermeiden.