Name: Bewertung von zellulären Stresses und Entzündung im diskreten Oxytocin-sezernierenden Gehirn Kerne bei Neugeborenen Ratten vor und nach der ersten Fütterung Kolostrum (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-14T14:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 12 s
Description: Erfahren Sie die Isolierung von Hirnkernen bei neugeborenen Ratten vor und nach der ersten Kolostrum-Fütterung. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung zellulären Stresses und Entzündungssignale im Oxytocin-sezernierenden Gehirn.

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Die Autoren danken für ihre Unterstützung bei der Vorbereitung dieses Protokolls Manon Ranger und Alexandra Schulz.

Diese Studie wurde von der institutionellen Animal Care und Nutzung Ausschüsse an der Columbia University und der New York State Psychiatric Institute genehmigt.
(1) Gewebe-Vorbereitung
<ol><li>Bestellen Sie zeitgesteuerte trächtigen Ratten vom Hersteller.</li>
	<li>Folgen Sie zeitgesteuerten trächtigen Ratten durch die Beobachtung ihrer wachsenden Bäuche in den Wochen nach ihrer Ankunft und anschließend auf der Suche nach Welpen auf den voraussichtlichen Liefertermin durch die Überprüfung des Käfigs alle 2 h bis Lieferung beginnt.</li>
	<li>Welpen mit einer behandschuhten Hand ihren Schwanz vor ihr erstes Futter für ungestrichenen Welpen (keine weiße Milch Bauch ergibt sich beim Bauch anzeigen) oder nach der ersten Fütterung für grundierte Welpen (an welcher Stelle ein weißen Bauch auf ihren Bauch sichtbar ist) zu entfernen, wie in der Timeli beschrieben Ne (Abbildung S1). Hinweis: Der erste Kolostrum-Feed wird als Grundierung der Welpe bezeichnet; Somit ist ein Welpe ungestrichenen bis das erste Futter, woraufhin Kolostrum grundiert sind.</li>
	<li>Enthaupten Sie schnell den unanesthetized Welpen mit scharfen, sauberen chirurgische Schere.</li>
	<li>Entfernen Sie das Gehirn durch Schneiden der Haut nach unten die Mittellinie und die Oberseite des Schädels an der Nase. Dann mit Pinzette, vorsichtig Hebeln Sie entfernt des Knochens um das Gehirn (Abbildung 1A) aufzudecken und zu lokalisieren Bregma, mit einem Stift markieren, da die Knochenplatten entfernt werden (Abbildung 1 b).</li>
	<li>Legen Sie das ganze Gehirn schnell in eine Polymethyl Methacrylat Gehirn Form bei Raumtemperatur für koronal schneiden bei Raumtemperatur (Abbildung 1).</li>
	<li>Ohne Verzögerung machen Sie 500 mm dicke Scheiben mit einer frischen Rasierklinge. Legen Sie die Scheiben rostral zur kaudalen in einer Petrischale weiterhin Orientierung der Abschnitte (Abbildung 2).</li>
	<li>Schnell hinzufügen künstlicher Liquor cerebrospinalis (ACFS; 1,0 mM KH2PO4, 26 mM Nahco33, 118,6 mM NaCl, 3,0 mM KCl, 203,3 mM MgCl2-6 H2O) ohne Glukose und inkubieren Sie die Scheiben für 60 min bei 28-30 ° C, ständig rühren, auf ein Orbitalschüttler metabolisch und differentiell versus Kolostrum-vorbereitete Gewebe die ungestrichenen herauszufordern.</li>
	<li>Die Gehirn-Kerne, die erforderlich sind, um Punsch mit einem Gehirn Atlas33 und anatomischen Landmarken auf Abschnitt Gewebe zu identifizieren. Legen Sie diese Scheibe mit den Kernen von Interesse in einer Petrischale und verschieben Sie ihn auf dem sezierenden Mikroskop.</li>
	<li>Sobald visualisiert, Stanzen Sie schnell 4 von 6 verschiedenen Kernen mit einem erbohrte Tool, Auswahl der Größe den Kern in Frage am besten Punsch und konsequent zwischen Proben (Abbildung 2 aus). Hinweis: Die übrigen Gehirn-Scheibe ein Loch haben nun dem Gehirngewebe entfernt wurde. In dieser Studie herausgeschnitten wir die folgenden Kerne mit den folgenden Koordinaten. Alle anterior/Posterior (A / P) Koordinaten sind von Bregma (mit Ausnahme von NTS, die unter Bezugnahme auf die Calamus Scriptorius ist). Alle dorsal/Ventral (D/V) Koordinaten sind von der Oberfläche des Kortex (mit Ausnahme von NTS, die von der Oberfläche der Medulla ist). Die folgenden Koordinaten enthalten A / P, Medial/Lateral (M/L) und D/V in mm: 1) einsame Trakt Kern (NTS, A / P, 0,4 bis 0,8; L, ± 0,2; D/V, 0.3 (von der Oberfläche der Medulla), 2) paraventrikulären Nukleus (PVN, -0,8; ± 0,2; 0), 3) supra-Optik Kern (Sohn, -1,1; ± 1,4; 4,3), 4) Kortex (CX, teilweise Kortex Bereich 1,-2.8; ± 1,5; 0,6), 5) Striatum Kerne (STR,-0.0; ± 1,6; 1,8), und 6) mediale Preoptic Kern (MPO, -0.6; ± 0,2; 4,2).</li>
	<li>Tauchen Sie schnell die gestanzten Kerne in 0,06 mL eiskaltes, Protein Extraktionspuffer mit Protease-Inhibitoren und Phosphatase-Inhibitoren für 60 Minuten (siehe Punkt 2.3).</li>
</ol>(2) Proteingewinnung
<ol><li>Bereiten Sie die Proteinlösung Extraktion mit dem Protein-Lyse-Kit (Table of Materials) am Tag vor der erwarteten Welpen Lieferung.</li>
	<li>Tauen Sie die gefrorenen (-20 ° C) wässrige Lösung der Protease und Phosphatase-Inhibitoren die Lyse-Puffer-Kit (auf Eis) und die Lyse Puffer und DMSO-Lösung der Proteasen/Phosphatasen Inhibitoren auf Eis.</li>
	<li>Fügen Sie 1,85 mL Lyse-Puffer in einer sauberen, eiskalte 15 mL-Tube. Fügen Sie 0,1 mL wässrige Lösung von Inhibitoren und 0,05 mL DMSO aufgelöst-Inhibitoren. Zu guter Letzt Kappe und kurz Vortex Rohr und halten Sie sie bei-20 ° C bis zur Verwendung.</li>
	<li>Beschriften Sie 24 sauber Mikrozentrifugenröhrchen (0,5 mL) für die Lyse-Verfahren. Designierte 12 Tuben pro Gehirn für die Kolostrum entschärften Gruppe (U) [6 links (L) und 6 rechts (R) Gehirn Kerne] und Etikett nach Kernen Akronym, Seite und Zustand (z. B.., NTS-L-U, NTS-R-U, etc.). Beschriften Sie die zweite Gruppe von 12 Rohre für das Kolostrum-vorbereitete Proben.</li>
	<li>Beschriften Sie zwei zusätzliche Sets von Rohren, wie in Schritt 2.4 für die Lager Protein-Extrakte (mit 1,5 mL Eppendorf-Stil Rohre) und der erste Satz der Probenvorbereitung (mit 0,5 mL Röhrchen) getan. Halten Sie diese Rohre in zwei separate, beschriftete Einfrieren Boxen (jeweils für 100 Rohre ausgelegt). Ein Feld wird für die ungestrichenen Proben, die andere für die präparierten Proben verwendet werden.</li>
	<li>Tauen Sie die Lyse-Lösung auf dem Eis auf, auf den Tag, an dem die Welpen geliefert werden, und während der Inkubation Gehirnscheiben in ACFS, aliquoten 0,06 mL Lyse-Lösung in die Lyse Verfahren Röhren (von Schritt 2.4) und fügen Sie Kerne Schläge und im Eis 60 min inkubieren.</li>
	<li>Zentrifugieren Sie der inkubierten lysierten Kerne für 30 min in einer gekühlten Mini-Zentrifuge bei 14000 u/min (10.000 x g) und abzusaugen Sie sorgfältig 0,055 mL überstand mit einer richtig eingestellten Pipette. Den Überstand in die vorgekühlte 1,5 mL Lager Röhren (von Schritt 2.5) übertragen und auf Eis gelegt. Vor dem Einfrieren (bei-20 ° C) die Protein Lager Rohre übertragen Sie 0,012 mL Überstand in 0,5 mL vorgekühlte Rohre für die erste Probenvorbereitung (aus Schritt 2.5) und lassen sie auf dem Eis.</li>
</ol>(3) Probenvorbereitung für die Messung In der Kapillare Protein
<ol><li>Verwenden Sie eine Kit und bereiten Sie die Reagenzien für die Trennung nach Anweisungen des Herstellers. Fügen Sie 0,003 mL Reagenz Master-Mix hinzu, jeder der 12 Proben in der 0,5 mL beschriftet Röhren (von Schritt 2.5) auf dem Eis, die 0,012 mL der Protein-Extrakte enthalten.</li>
	<li>Schalten Sie den Heizblock bis 95 ° C und 0,004 mL Reagenz in Schritt 3.1 an eine biotinylierte Molekulargewicht (MW) Leiter in einem Rohr mit 0,016 mL entionisiertem Wasser zubereitet. Um die Leiter und Proben zu denaturieren, legen Sie die Leiter-Röhre und 12 Proben von ungestrichenen Protein-Extrakten in Heizblock bei 95 ° C für 5 min und bei 4 ° C bis zur Verwendung aufbewahren.</li>
	<li>Wiederholen Sie die Schritte 2.0 bis 3.2 Proteingewinnung zur Probenvorbereitung für die Kerne von Kolostrum grundiert Ratten gestanzt.</li>
</ol>4. Elektrophorese-Vorbereitung
<ol><li>Tauen Sie das Biotin labeling Reagenz (gespeichert in der Tiefkühltruhe bei-80 oC) auf der Bank und bereiten Sie das Protein Detection Kit auf Eis bei 4 ° C nach den Anweisungen des Herstellers.</li>
	<li>Mischen Sie 0,15 mL von Luminol mit 0,15 mL Peroxid und laden Sie 0,01 mL in 25 Brunnen (Zeile E, Brunnen 1-25) der Platte für die automatische westlichen Maschine. Laden Sie 0,008 mL Streptavidin-HRP aus dem Kit in Brunnen D1, D25</li>
	<li>Laden Sie 0,01 mL diluent Antikörperlösung in Brunnen C1 C25 und B1.</li>
	<li>Spin die 24 Proteinproben und Leiter Rohre kurz (2-3 Sekunden) in einem Minicentrifuge zum Pool hinunter verdampfte Wasser von Rohr Kappen.</li>
	<li>Wells A2, A13, 0,003 mL 12 Kolostrum-vorbereitete Proben in Vertiefungen A14, A25 und 0,005 mL der biotinylierte Leiter in gut A1 bestücken Sie 0,003 mL 12 ungestrichenen Proben.</li>
	<li>Lassen Sie Reihe F leer und laden Sie 0,45 mL Waschpuffer in jeder der 5 Fächer in jeder der 3 Zeilen unter Zeile F. Cover der Platte mit Kunststoff Deckel um Verdunstung während der verbleibenden Verfahren zu vermeiden.</li>
	<li>Kurz die aufgetauten Biotin Wirbel Kennzeichnung Reagenz und 0,15 mL das Reagenz mit seiner ausgewiesenen Rohr; dann fügen Sie 0,15 mL Gesamtprotein Rekonstitution Agent hinzu und mischen sie zur Homogenität.</li>
	<li>Entfernen Sie die Abdeckung von der Platte und laden Sie 0,01 mL Agenten 1 und 2 in Vertiefungen B2 B25. Die Platte abdecken und für 10 min bei 1000 X g, Luftblasen aus den verschiedenen Lösungen zu entfernen zentrifugieren. Verwenden Sie einen leeren Teller in der Zentrifuge für Gleichgewicht.</li>
</ol>(5) Elektrophorese
<ol><li>Während sich die Platte dreht, öffnen Sie eine geführte Datei in der automatisierten westlichen Maschine angeschlossen Computer indem angibt, in der Dropdown-Liste-Seite von "Datei" zu einen Gesamt-Protein Assay laufen und auf den jeweiligen Ort.</li>
	<li>Beschriften Sie die Proben von Brunnen in den Computer. Dann entfernen Sie die Platte aus der Zentrifuge entfernen Sie die Abdeckung und ziehen Sie vorsichtig den Aluminium-Deckel aus die Trennung Lösung Fächer.</li>
	<li>Legen Sie die Platte in die automatisierte westlichen Instrument, ziehen Sie die Abdeckung von der Kapillare Patrone angezeigt, setzen Sie die Patrone in ihren vorgesehenen Platz und schließen Sie die Tür.</li>
	<li>Klicken Sie auf die Schaltfläche "Ausführen", und wenn Sie mit der Art des Tests ("Gesamt-Protein") aufgefordert werden, geben Sie den Namen der Proben (z. B. "entschärften 2-13 und Kolostrum grundiert 14-25"). Klicken Sie auf "OK", und wenn von aktivierten Laufdatum und ID-Nummer der Laufzeit-Datei aufgefordert werden, notieren Sie die Uhrzeit, zu der Flucht endet.</li>
	<li>Am Ende des Laufs (170 min nach dem Start) öffnen Sie die Tür des Instruments, entfernen Sie die Kapillare Patrone und entsorgen Sie es in der Kleie zur Verfügung. Entsorgen Sie die Platte in die biologische Materie zur Verfügung.</li>
	<li>Klicken Sie auf Trennung Kurven in der Seite "Analyse" der Laufzeit-Datei, und überprüfen Sie, dass alle Proben korrekt ausgeführt haben und verschiedene Protein-Kurven in alle Kapillaren zeigen.</li>
</ol>6. Analyse von Signalproteinen
<ol><li>Fügen Sie in einer beschrifteten 1,5 mL Tube 0,003 mL Kaninchen anti-Antikörper Phospho-eIF2a (p-eIF2a hinzu) und hängen Sie es in 0,3 mL (1: 100 Verdünnung) in Antikörper aus dem geeigneten Detection Kit Verdünnungsmittel. Dann halten Sie es auf dem Eis.</li>
	<li>Beschriften Sie ein Luminol-Rohr und fügen Sie 0,15 mL Luminol und 0,15 mL Wasserstoffperoxid aus dieser Erkennung Modul Kit und verzichten Sie 0,01 mL in Vertiefungen E1, E25 aus einer frischen, automatisierte westlichen Platte zu.</li>
	<li>Verzichten Sie 0,01 mL des sekundären anti-Kaninchen-Antikörper in Vertiefungen D2, D25 zu, und 0,01 mL Streptavidin-HRP aus dem Kit auf gut D1.</li>
	<li>0,01 mL des primären Antikörpers (aus Schritt 6.1) in Vertiefungen C2, C25 zu verzichten, und Wells C1 und B1 bis B25 0,01 mL diluent 2 Antikörperlösung hinzufügen.</li>
	<li>Lassen Sie die Zeile F Brunnen leer und füllen Sie 0,45 mL Waschpuffer in die 5 Fächer 3 Reihen unterhalb der F-Reihe.</li>
	<li>Kurz drehen die gekühlten Proben für 3 s, und 0,003 mL jede Probe, Reihe A in der gleichen Reihenfolge, die sie für die Gesamt-Protein Assay, ab A2 bis A25 hinzugefügt wurden. Hinzugeben Sie 0,005 mL die biotinylierte MW Leiter auch A1 und die Abdeckplatte.</li>
	<li>Zentrifugieren Sie die Platte, wie in Schritt 4.8 getan. Während sich die Platte dreht, (in der automatisierten Western-assoziierte Software- und Computer) öffnen Sie eine neue run-Datei und geben Sie in der Drop-down-Seite von "Datei", um eine Molekülgröße Assay ausführen indem Sie auf den jeweiligen Ort.</li>
	<li>Geben Sie in der Test-Seite die Probennamen in jede Kapillare, dann geben Sie den Namen des primären Antikörpers in der zugewiesenen Stelle und der sekundären Anti-Kaninchen-Antikörper darunter.</li>
	<li>Am Ende der Zentrifugation wiederholen Sie Schritte 5,3-5,5, außer die Bezeichnung für die geführte Datei diesmal "p-eIF2a auf ungestrichenen 2 – 13 und 14 – 25 Kolostrum grundiert" sein sollte.</li>
	<li>Überprüfen Sie nach der Elektrophorese Trennung die geführte Datei für Immune Reaktivität Gipfeln der Antigene in Größen von 40 – 43 kDa. Wo MW der Gipfel dieser Größe fehlen, mit der rechten Maustaste unterhalb der Kurve und geben Sie in der Dropdown-Liste hinzufügen MW bis zum Gipfel, die sicherstellt, dass die Größe und beliebiger Anzahl unterhalb der Kurve aufgezeichnet werden.</li>
</ol>7. Verarbeitung der Ergebnisse
<ol><li>Eine Tabellenkalkulationsdatei für Gesamt-Protein führen in die automatisierte Western Open Datei ausführen und bieten eine ID-Nummer.</li>
	<li>Öffnen Sie die geführte Datei den Gesamt-Protein Assay auf der Seite "Analyse" auf die Kurve-Modus und markieren Sie alle Berge im einzelnen Kapillaren. Dann kopieren Sie und fügen Sie sie in der Kalkulationstabelle und Summe der Flächen unter der Kurve aller Peaks, die in der gesamten Kapillare aufgenommen.</li>
	<li>Ordnen Sie in einer separaten Spalte die Gesamtmenge an Protein für jede Spalte mit Kapillar-Nummern, Namen von den jeweiligen Gehirn Kernen und die ID-Nummern der geführten Dateien.</li>
	<li>Öffnen Sie eine Tabelle für das p-eIF2a-Antigen und in einer einzigen Spalte, nehmen Sie die Fläche unter der Kurve aus jede Kapillare Side-by-Side mit seinen jeweiligen Kapillare und Name des Gehirn Zellkern und ID-Nummer der Laufzeit-Datei auf.</li>
	<li>Die Gesamt-Protein-Spalte (Parallel zu den p-eIF2a-Kurve-Mengen) in eine dritte Tabelle kopieren und compute-p-eIF2a:total-Protein-Verhältnis in einer dritten Spalte.</li>
	<li>Erfassen Sie Ergebnisse aus Schritte 4 bis 6 für jedes Gehirn Kern, ordnen Sie sie in Gruppen von Kernen und generieren Sie ein Balkendiagramm zu.</li>
</ol>

<ol><li>Hietaniemi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+profiles+in+fetal+and+neonatal+rat+offspring+of+energy-restricted+dams%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nutrigenetics+and+Nutrigenomics%22%5BJournal%5D)">Gene expression profiles in fetal and neonatal rat offspring of energy-restricted dams.</a> Journal of Nutrigenetics and Nutrigenomics. 2 (4-5), 173-183 (2009).</li>
<li>Okabe, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homogenous+glycine+receptor+expression+in+cortical+plate+neurons+and+Cajal-Retzius+cells+of+neonatal+rat+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Homogenous glycine receptor expression in cortical plate neurons and Cajal-Retzius cells of neonatal rat cerebral cortex.</a> Neuroscience. 123 (3), 715-724 (2004).</li>
<li>Mailleux, P., Takazawa, K., Erneux, C., Vanderhaeghen, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+the+neurons+containing+inositol+1%2C4%2C5-trisphosphate+3-kinase+and+its+messenger+RNA+in+the+developing+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Distribution of the neurons containing inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinase and its messenger RNA in the developing rat brain.</a> Journal of Comparative Neurology. 327 (4), 618-629 (1993).</li>
<li>Carter, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxytocin+and+Human+Evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Oxytocin and Human Evolution.</a> Current Topics in Behavioral Neuroscience. , (2017).</li>
<li>Sippel, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxytocin+and+Stress-related+Disorders%3A+Neurobiological+Mechanisms+and+Treatment+Opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Chronic+Stress+%28Thousand+Oaks%29%22%5BJournal%5D)">Oxytocin and Stress-related Disorders: Neurobiological Mechanisms and Treatment Opportunities.</a> Chronic Stress (Thousand Oaks). 1, (2017).</li>
<li>Agnati, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aspects+on+the+integrative+actions+of+the+brain+from+neural+networks+to+%22brain-body+medicine%22%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Receptors+and+Signal+Transduction+Research%22%5BJournal%5D)">Aspects on the integrative actions of the brain from neural networks to "brain-body medicine".</a> Journal of Receptors and Signal Transduction Research. 32 (4), 163-180 (2012).</li>
<li>Welch, M. G., Margolis, K. G., Li, Z., Gershon, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxytocin+regulates+gastrointestinal+motility%2C+inflammation%2C+macromolecular+permeability%2C+and+mucosal+maintenance+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+Physiology%3A+Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Oxytocin regulates gastrointestinal motility, inflammation, macromolecular permeability, and mucosal maintenance in mice.</a> American Journal Physiology: Gastrointestinal and Liver Physiology. 307 (8), G848-G862 (2014).</li>
<li>Welch, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+developmental+regulation+of+oxytocin+%28OT%29+and+oxytocin+receptors+%28OTR%29+in+the+enteric+nervous+system+%28ENS%29+and+intestinal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Expression and developmental regulation of oxytocin (OT) and oxytocin receptors (OTR) in the enteric nervous system (ENS) and intestinal epithelium.</a> Journal of Comparative Neurology. 512 (2), 256-270 (2009).</li>
<li>Prakash, B. S., Paul, V., Kliem, H., Kulozik, U., Meyer, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+oxytocin+in+milk+of+cows+administered+oxytocin%5BTitle%5D)+AND+%22Analytica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Determination of oxytocin in milk of cows administered oxytocin.</a> Analytica Chimica Acta. 636 (1), 111-115 (2009).</li>
<li>Solangi, A. R., Memon, S. Q., Mallah, A., Khuhawar, M. Y., Bhanger, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+separation+of+oxytocin%2C+norfloxacin+and+diclofenac+sodium+in+milk+samples+using+capillary+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Chromatography%22%5BJournal%5D)">Quantitative separation of oxytocin, norfloxacin and diclofenac sodium in milk samples using capillary electrophoresis.</a> Biomedical Chromatography. 23 (9), 1007-1013 (2009).</li>
<li>Klein, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxytocin+modulates+markers+of+the+unfolded+protein+response+in+Caco2BB+gut+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stress+and+Chaperones%22%5BJournal%5D)">Oxytocin modulates markers of the unfolded protein response in Caco2BB gut cells.</a> Cell Stress and Chaperones. 19 (4), 465-477 (2014).</li>
<li>Klein, B. Y., Tamir, H., Hirschberg, D. L., Glickstein, S. B., Welch, M. G. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0006291X13002398">Oxytocin modulates mTORC1 pathway in the gut.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 432 (3), 466-471 (2013).</li>
<li>Klein, B. Y., Tamir, H., Ludwig, R. J., Glickstein, S. B., Welch, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colostrum+oxytocin+modulates+cellular+stress+response%2C+inflammation%2C+and+autophagy+markers+in+newborn+rat+gut+villi%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+an+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Colostrum oxytocin modulates cellular stress response, inflammation, and autophagy markers in newborn rat gut villi.</a> Biochemical an Biophysical Research Communications. 487 (1), 47-53 (2017).</li>
<li>Donnet-Hughes, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+role+of+the+intestinal+microbiota+of+the+mother+in+neonatal+immune+education%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Nutritional+Society%22%5BJournal%5D)">Potential role of the intestinal microbiota of the mother in neonatal immune education.</a> Proceedings of the Nutritional Society. 69 (3), 407-415 (2010).</li>
<li>Perez, P. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+imprinting+of+the+neonatal+immune+system%3A+lessons+from+maternal+cells%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Bacterial imprinting of the neonatal immune system: lessons from maternal cells?</a> Pediatrics. 119 (3), e724-e732 (2007).</li>
<li>Takeda, S., Kuwabara, Y., Mizuno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concentrations+and+origin+of+oxytocin+in+breast+milk%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinolcia+Japonica%22%5BJournal%5D)">Concentrations and origin of oxytocin in breast milk.</a> Endocrinolcia Japonica. 33 (6), 821-826 (1986).</li>
<li>Quintana, D. S., Outhred, T., Westlye, L. T., Malhi, G. S., Andreassen, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+oxytocin+administration+on+brain+activity%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Systematic+Reviews%22%5BJournal%5D)">The impact of oxytocin administration on brain activity: a systematic review and meta-analysis protocol.</a> Systematic Reviews. 5 (1), 205(2016).</li>
<li>Dobbing, J., Sands, J. <a target="_blank" href="http://citeseerx.ist.psu.edu/viewdoc/download?doi=10.1.1.463.8516&rep=rep1&type=pdf">Comparative aspects of the brain growth spurt.</a> Early Human Development. 3 (1), 79-83 (1979).</li>
<li>Orr, M. E., Garbarino, V. R., Salinas, A., Buffenstein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extended+Postnatal+Brain+Development+in+the+Longest-Lived+Rodent%3A+Prolonged+Maintenance+of+Neotenous+Traits+in+the+Naked+Mole-Rat+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Extended Postnatal Brain Development in the Longest-Lived Rodent: Prolonged Maintenance of Neotenous Traits in the Naked Mole-Rat Brain.</a> Frontiers in Neuroscience. 10, 504(2016).</li>
<li>Hansson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-resolved+quantitative+proteome+analysis+of+in+vivo+intestinal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Time-resolved quantitative proteome analysis of in vivo intestinal development.</a> Molecular and Cellular Proteomics. 10 (3), (2011).</li>
<li>Mochizuki, K., Yorita, S., Goda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+changes+in+the+jejunum+of+rats+during+the+transient+suckling-weaning+period%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nutritional+Science+and+Vitaminology+%28Tokyo%29%22%5BJournal%5D)">Gene expression changes in the jejunum of rats during the transient suckling-weaning period.</a> Journal of Nutritional Science and Vitaminology (Tokyo). 55 (2), 139-148 (2009).</li>
<li>Rinaman, L., Banihashemi, L., Koehnle, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+life+experience+shapes+the+functional+organization+of+stress-responsive+visceral+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Early life experience shapes the functional organization of stress-responsive visceral circuits.</a> Physiology and Behavior. 104 (4), 632-640 (2011).</li>
<li>Johannes, G., Sarnow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cap-independent+polysomal+association+of+natural+mRNAs+encoding+c-myc%2C+BiP%2C+and+eIF4G+conferred+by+internal+ribosome+entry+sites%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">Cap-independent polysomal association of natural mRNAs encoding c-myc, BiP, and eIF4G conferred by internal ribosome entry sites.</a> RNA. 4 (12), 1500-1513 (1998).</li>
<li>Rinaman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hindbrain+noradrenergic+A2+neurons%3A+diverse+roles+in+autonomic%2C+endocrine%2C+cognitive%2C+and+behavioral+functions%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%3A+Regulatory%2C+Integrative+and+Comparative+Physiology%22%5BJournal%5D)">Hindbrain noradrenergic A2 neurons: diverse roles in autonomic, endocrine, cognitive, and behavioral functions.</a> American Journal of Physiology: Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 300 (2), R222-R235 (2011).</li>
<li>Walker, C. D., Toufexis, D. J., Burlet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothalamic+and+limbic+expression+of+CRF+and+vasopressin+during+lactation%3A+implications+for+the+control+of+ACTH+secretion+and+stress+hyporesponsiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Hypothalamic and limbic expression of CRF and vasopressin during lactation: implications for the control of ACTH secretion and stress hyporesponsiveness.</a> Progress in Brain Research. 133, 99-110 (2001).</li>
<li>Montiel-Castro, A. J., Gonzalez-Cervantes, R. M., Bravo-Ruiseco, G., Pacheco-Lopez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microbiota-gut-brain+axis%3A+neurobehavioral+correlates%2C+health+and+sociality%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Integrative+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The microbiota-gut-brain axis: neurobehavioral correlates, health and sociality.</a> Frontiers in Integrative Neuroscience. 7, 70(2013).</li>
<li>Blevins, J. E., Ho, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+oxytocin+signaling+in+the+regulation+of+body+weight%5BTitle%5D)+AND+%22Reviews+in+Endocrine+and+Metabolic+Disorders%22%5BJournal%5D)">Role of oxytocin signaling in the regulation of body weight.</a> Reviews in Endocrine and Metabolic Disorders. 14 (4), 311-329 (2013).</li>
<li>Welch, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+administration+of+secretin+and+oxytocin+inhibits+chronic+colitis+and+associated+activation+of+forebrain+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterology+Motility%22%5BJournal%5D)">Combined administration of secretin and oxytocin inhibits chronic colitis and associated activation of forebrain neurons.</a> Neurogastroenterology Motility. 22 (6), 654(2010).</li>
<li>Berthoud, H. R., Neuhuber, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+chemical+anatomy+of+the+afferent+vagal+system%5BTitle%5D)+AND+%22Autonomic+Neuroscience%3A+Basic+and+Clinical%22%5BJournal%5D)">Functional and chemical anatomy of the afferent vagal system.</a> Autonomic Neuroscience: Basic and Clinical. 85 (1-3), 1-17 (2000).</li>
<li>Taniuchi, S., Miyake, M., Tsugawa, K., Oyadomari, M., Oyadomari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+stress+response+of+vertebrates+is+regulated+by+four+eIF2alpha+kinases%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Integrated stress response of vertebrates is regulated by four eIF2alpha kinases.</a> Scientific Reports. 6, 32886(2016).</li>
<li>Altschuler, S. M., Bao, X. M., Bieger, D., Hopkins, D. A., Miselis, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viscerotopic+representation+of+the+upper+alimentary+tract+in+the+rat%3A+sensory+ganglia+and+nuclei+of+the+solitary+and+spinal+trigeminal+tracts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Viscerotopic representation of the upper alimentary tract in the rat: sensory ganglia and nuclei of the solitary and spinal trigeminal tracts.</a> Journal of Comparative Neurology. 283 (2), 248-268 (1989).</li>
<li>Shapiro, R. E., Miselis, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+central+neural+connections+of+the+area+postrema+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">The central neural connections of the area postrema of the rat.</a> Journal of Comparative Neurology. 234 (3), 344-364 (1985).</li>
<li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Rat+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press. (1997).</li>
<li>Nayak, R., Pintel, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+viruses+can+induce+phosphorylation+of+eIF2alpha+via+PKR+activation%2C+which+can+be+overcome+by+helper+adenovirus+type+5+virus-associated+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated viruses can induce phosphorylation of eIF2alpha via PKR activation, which can be overcome by helper adenovirus type 5 virus-associated RNA.</a> Journal of Virology. 81 (21), 11908-11916 (2007).</li>
<li>Zaborske, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+analysis+of+tRNA+charging+and+activation+of+the+eIF2+kinase+Gcn2p%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Genome-wide analysis of tRNA charging and activation of the eIF2 kinase Gcn2p.</a> Journal of Biological Chemistry. 284 (37), 25254-25267 (2009).</li>
<li>Hollis, J. H., Lightman, S. L., Lowry, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+systemic+and+visceral+sensory+information+by+medullary+catecholaminergic+systems+during+peripheral+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Integration of systemic and visceral sensory information by medullary catecholaminergic systems during peripheral inflammation.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1018, 71-75 (2004).</li>
<li>Klein, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxytocin+opposes+effects+of+bacterial+endotoxin+on+ER-stress+signaling+in+Caco2BB+gut+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Oxytocin opposes effects of bacterial endotoxin on ER-stress signaling in Caco2BB gut cells.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1860 (2), 402-411 (2016).</li>
<li>Kaltschmidt, B., Kaltschmidt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NF-kappaB+in+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Biology%22%5BJournal%5D)">NF-kappaB in the nervous system.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 1 (3), a001271(2009).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Eine Technik zur Mikrodissektion von diskreten, OTR-reiche Gehirn Kerne im neonatalen Rattengehirn wird in diesem Papier präsentiert. Es ist bekannt, dass Neuronen hoch, sogar innerhalb von gut charakterisierten Kerne im Gehirn spezialisiert sind. Diese hoch reproduzierbare Herangehensweise an bestimmte OTR-reiche Kerne isolieren kann robuste Hypothesentests. Verwendung von automatisierten Western blotting, waren die Konsistenz und Reproduzierbarkeit der Ergebnisse weiter verbessert. Während eine Einschränkung dieser Tec...

Im Gegensatz zu unserem Verständnis der frühen Entwicklung des Gehirns im Laufe von Tagen bis Wochen nach der Geburt auftreten, ist relativ wenig über die Vielzahl von dynamischen Veränderungen in den ersten Stunden des Lebens in Ratten bekannt. Eine zentrale Herausforderung wurde die geringe Größe des Gehirns neonatalen Ratte und eine Voraussetzung für High-Tech-Werkzeuge, diskrete Hirnregionen oder einzelne Zellen zu isolieren. Studien beurteilen oft gen Transkription und keine Übersetzung1,2, die kein festes Verständnis der funktionalen Ebenen der aktivierten Signalmoleküle geben. Andere untersuchen Ausdruck verwenden Immunohistochemistry, Referenz Hirnregionen, die für die Quantifizierung der Ausdruck Level3nicht zulässt. Keine Studie bis heute hat die Aktivierung der Signalwege verbunden mit Ratten erste Colostrum ernähren sich in diskreten Hirnregionen, die erfordert schnelle Isolierung und Opfer und Messung der Proteinexpression und Protein-Phosphorylierung mit westlichen untersucht beflecken. Während auf älteren und größeren Gehirn Gehirn Mikrodissektion durchgeführt wird, haben wir keinen Verweis durchführen einen Single-Cell Gehirn Schlag in einem P0 Gehirn identifiziert. Dieser Beitrag stellt ein Protokoll für die Isolierung von eingeschränkter Hirnregionen Neugeborenen mit einer relativ Low-Tech-Punch-Technik und ein Western-Blot-Verfahren zur Proteinexpression in relativ kleinen Proben zu messen. Dieses Protokoll möglicherweise geeignet für Forschungsfragen, die die Beurteilung der Proteinexpression und post-translationalen Modifikationen erfordern (z. B.., Phosphorylierung) in relativ begrenzten Regionen kleine Gehirne aller Arten, sofern die Benutzer kann die Hirnregion des Interesses mit Atlas und identifizierbaren Wahrzeichen optisch identifizieren.
Diese Technik wurde entwickelt, um Veränderungen im Gehirn durch die Neugeborenen Ratten erste Kolostrum zu füttern, die ist reich an Oxytocin (OT) zu verstehen. OT ist seit langem bekannt für seine Fähigkeit, Milch Milchspendereflex und uterine Kontraktion zu stimulieren. OT ist jedoch jetzt bekannt, um eine Vielzahl von Rollen spielen bei der Regulation vieler Körperfunktionen und Verhaltensweisen4. Z. B. OT wendet sich gegen Stress und Entzündungen in Verbindung mit adaptive affiliative Verhaltensweisen5, verzögert die Magenentleerung und verlangsamt die Darmpassage. OT-Rezeptoren (OTR) wurden im enterischen Neuronen und Darmepithel6,7,8nachgewiesen. Die Magen-Darm-Wirkungen der OT sind besonders wichtig für das Kind während der frühen postnatalen Periode. Zum Beispiel stillen ist verbunden mit der Lieferung von erheblichen Mengen von OT zu den Neugeborenen Darm9,10, und Daten zeigen, dass die OTR während die Milch, die Periode8Spanferkel im Zwölffingerdarm Zotten stark überexprimiert ist.
In-vitro- Experimente mit einer Darm-Zelllinie haben auf zellulärer Ebene unter Beweis gestellt, dass Oxytocin moduliert wichtiger Moleküle in den Stress Weg11,12 -Signalisierung und spielt eine regulierende Rolle in der Übersetzung von Proteinen 12. diese Studien deuten darauf hin, dass Bestandteile der Milch, einschließlich exogener Oxytocin von der Mutter in unfolded Protein Response beim Neugeborenen zu zellulären Stresses13wichtig sind.
In Vivo und ex Vivo -Studien haben gezeigt, dass Kolostrum OT die zellulären Stress Response, Entzündung und Autophagie Marker in Neugeborene Ratte Darmzotten moduliert. Neugeborenen Enterozyten erleiden erhebliche zellulären Stresses auf ihrer luminalen Seite wenn Darm Microbiota gleichzeitig von der Mutter in Kolostrum14,15 und zahlreichen Proteinen, einschließlich der Hormone wie OT9 ausgesetzt ist , 10 , 16.
Die Auswirkungen der OT auf das Gehirn wurden studierte17. Die OT Signalisierung Mechanismen im Darm während der frühen postnatalen Periode nachgewiesen wurden jedoch nicht im Gehirn untersucht. In diesem Papier wird eine Methode zur Isolierung von diskreten Gehirn Kerne in der neonatalen Ratte Hirnstamm und Hypothalamus mit Elektrophorese verwendet, isolierte Hirnregionen zu profilieren. Das übergeordnete Ziel dieser Methode ist es, den Zustand der Zelle signalisieren in Hirnareale so nah wie möglich an Geburt, vor und nach der ersten Milch saugen, im Hirngewebe mit dem niedrigsten Glia/neuronale Index zu erfassen. Die Gründe für die Entwicklung dieser Technik ist, dass es für die schnelle Lokalisierung der eingeschränkt, mikroskopische Gehirnregionen bei neugeborenen Welpen mit einer homogeneren Sammlung von Neuronen für ex-Vivo -Studien mit einer automatisierten Western blotting Methodik, bietet sehr konsistente Ergebnisse auf relativ kleine seziert Proben. Ein Manko der vorherige Arbeit beinhaltet mehr Brutto Dissektion (Gehirnscheiben oder ganze Gehirn) und ältere Tiere18,19. Die Gehirne von jungen Welpen sind unglaublich dynamisch, mit Wellen von Gliazellen Differenzierung nach der Geburt. Um Veränderungen im Gehirn beeinflusst durch der Welpen erste Fütterung zu studieren, ist das Studium beschränkt neuronalen Kerne mit reproduzierbaren Dissektion notwendig.
Milch-Feed wird in der Regel für ihre Ernährungs- und immunologische Auswirkungen auf Gesundheit oder gen-Ausdruck (z. B. im Enterozyten20,21), analysiert, während seine Wirkung auf Hirnareale während der Entwicklung des Gehirns ist kaum untersucht. Die Wirkung der Milch Transit im Darm auf die Gehirnfunktion wurde in Anlehnung an Darm Cholecystokinin Rezeptoren vagalen Relais Hirnstamm Kerne, aber nicht auf intrazelluläre Signal-Wege22analysiert. Gibt es eine umfangreiche Literatur auf das sich entwickelnde Gehirn Neugeborene Anfälligkeit für Unterernährung der Mütter während der Schwangerschaft23, aber der Stress und Entzündungen Signale werden nicht angesprochen. Die aktuelle Methode nutzt vor allem ein Phänomen bei Tag Null Ratte Neugeborenen, das Blut geboren Kolostrum Reize von vagalen Relais des viszeralen Reize isoliert. Dies ist die so genannte Hypo-Reaktionsfähigkeit Stressphase geprägt von unreifen Nucleus Gowersbündel Solitarius (NTS)-Hypothalamus Schaltung unmittelbar nach der Geburt24,25 , die NTS, paraventrikulären Nukleus (PVN), einschränkt und supraoptischen Kern (Sohn) Signale auf Blut geboren Reize.
Diese Methode ist nützlich für die Analyse von mehreren Signalwege und relativ auf neuronalen Zellen beschränkt, sofern Hirngewebe bei postnatalen Tag-0 bei Ratten geerntet wird, neben ob Mütter in Frage gestellt haben, indem Sie jede Art von Behandlung während der Schwangerschaft. Würfe können für die Wirkungen von Kolostrum feed versus Pre füttern Signalisierung analysiert werden. Beim Vergleich von Signalen zwischen den Hirnarealen mit Armen im Vergleich zu reiche Proteinausbeute ermöglicht diese Methode in der Kapillare Bestimmung des Gesamt-Protein der Polypeptid-Bands in Kapillaren, die parallel zur immun-Quantifizierung der Protein-Antigene. Diese Methode ermöglicht den quantitativen Vergleich, mit willkürlichen Maßeinheiten, Ergebnisse, die durch die gleichen Antikörper ohne quantitative Standardkurven und unter Bezugnahme auf Gesamt-Protein pro Kapillare. Vergleich der Ergebnisse von verschiedenen Antikörpern ist möglich nur mit quantitativen standard Kurven.
Diese Methode erlaubt für die Beurteilung der bidirektionalen Signaltechnik zwischen Darm und Gehirn und dass Funktion in beiden Organen26auswirken kann. Die Zuordnung zwischen Oxytocin und Nahrungsaufnahme, die in den letzten Jahren27ausführlich studiert hat, unterstützt einen Zusammenhang zwischen erhöhten Oxytocin Signal- und Nährstoffverfügbarkeit. Diese Studien auch unterstützen das Converse-Konzept diese Energie, die Defizite mit Reduzierung des Hypothalamus Oxytocin Signalisierung gekoppelt sind.
Frühere Studien über die Wirkung von OT auf Aktivität des Gehirns gezeigt, dass induzierte Darm Entzündung cFos Transkription im Hypothalamus PVN, Amygdala und Piriform Rinde löste die refraktär gegenüber Vagotomie28war. Systemische Infusion von OT mit Sekretin sank jedoch die Gehirn cFos Reaktion provoziert entzündliche Reaktion in der Darm-28. Dies suggeriert, dass die Wirkung von exogenen OT durch Strecken außer vagalen Relais, möglicherweise durch Blut übertragbare Signalmoleküle, durchgeführt durch die Area Postrema6,29durchgeführt wurde.
In dieser Studie wurden die zellulären Stresses Signalwege, die zuvor im Darm beobachtet haben im Gehirn bewertet. Die Hypothese war, dass Milchbestandteile können zu schützen oder die Wirkung von Entzündungen im Darm Durchlässigkeit für mikrobielle und andere Metaboliten zu verschieben, und wiederum, die Auswirkungen auf die Gehirnfunktion. Die klare antagonistischen Unterschiede in der IkB versus BiP Signalisierung gefunden in Zotten, vor und nach dem Grundieren von Kolostrum13, vorgeschlagen, dass die Gehirne von Neugeborenen, noch in der Entwicklung, diese Signale Kolostrum-induzierte Darm spüren können.
Signalisierung Protein-Marker verwendet in früheren Darm-Experimente, die mit endoplasmatische Retikulum Stress verbunden sind, wurden gemessen. Dazu gehören das ER Chaperon BiP, Übersetzung Einleitung Faktor eIF2a (dient als eine Stress-Reaktion Integrator30), eIF2a-Kinase p-PKR, und zwei Entzündung-Signalisierung Proteine (NF-kB und die IkB-Hemmer).
Sechs Regionen des Gehirns aufgrund ihrer Fähigkeit bei Erwachsenen absondern oder reagieren auf OT wurden ausgewählt. NTS, befindet sich in der oberen Medulla, ist das erste Relais der viszeralen Eingabe und erhält direkte Signalisierung von vagalen sensorischen Neuronen im Darm31 und möglicherweise Blut geboren Zytokine, Toxine und Hormone über die angrenzenden Bereich Postrema32. Der PVN supraoptischen Kern (Sohn), Striatum Kerne (STR), Großhirnrinde (CX) und mediale präoptischen Kern (MPO) erhalten aus dem Bauch heraus über die NTS-Signalisierung.
Ergebnisse zeigten, dass die zellulären Stress-Reaktion während der unmittelbaren postnatalen vor Kolostrum Grundierung und unmittelbar nach der ersten Fütterung in NTS im Vergleich zum PVN und Sohn unterscheidet. Signalisierung im CX, unterschieden sich STR und MPO PVN und Sohn, sowie. Die unterschiedlichen Schutzfunktionen der zuvor gezeigten Zelle Stress und Entzündungen im Darm zu modulieren OT sind wahrscheinlich durch einige Bereiche des Gehirns spürte. Kollektiv, zeigen die Daten, dass auf zellulärer Ebene, während der ersten Stunden nach der Geburt, das Gehirn zu den metabolischen Stress mit Nährstoff-Insuffizienz reagiert. Die Daten zeigen auch, dass das Ausmaß und die Richtung der modulierenden Wirkungen der feed Kolostrum Region-abhängig sind und in einigen Regionen sie OT Effekte im Darm zuvor gezeigten spiegeln.

<table><tbody><tr><td>Bradford-Lösung</td><td>Bio Rad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Protein-Lyse-Kit</td><td>Protein einfach</td><td>CBS403</td><td>Bicine/CHAPS</td></tr><tr><td>WES-Kits</td><td>Protein einfach</td><td>WES-Maus 12-230 Master-Kit (PS-MK15), WES-Rabbit 12-230 Master-Kit (PS-MK14), WES 12-230 kDa insgesamt Protein-Master-Kit (PS-TP07)</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus-IgG HRP-Konjugat</td><td>Protein einfach</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kaninchen anti-phospho-eIF2a</td><td>Zellsignaltechnologie</td><td>SER51, 9721</td><td></td></tr><tr><td>Maus mAb anti-PKR</td><td>Zellsignaltechnologie</td><td>2103</td><td></td></tr><tr><td>Kaninchen anti-phospho-PKR</td><td>Millipore</td><td>Thr451, 07-886</td><td></td></tr><tr><td>Kaninchen mAb anti-PKR</td><td>Zellsignaltechnologie</td><td>12297</td><td></td></tr><tr><td>Kaninchen mAb anti-GAPDH</td><td>Zellsignaltechnologie</td><td>2118</td><td></td></tr><tr><td>Maus-mAb Anti-Phospho-IKB-Zell-Signaltechnologie</td><td></td><td>9246</td><td></td></tr><tr><td>Maus-mAb Anti-IKB-Zell-Signaltechnologie</td><td></td><td>4814</td><td></td></tr><tr><td>Kaninchen Anti-BiP-Zell-Signaltechnologie</td><td></td><td>3183</td><td></td></tr><tr><td>Kaninchen Anti-GCN2-Zell-Signaltechnologie</td><td></td><td>3302</td><td></td></tr><tr><td>Kaninchen mAb Anti-Phospho-GCN2</td><td>BIORBYT</td><td>T899</td><td></td></tr><tr><td>schwanger Sprague-Dawley Ratten</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stanzgerät</td><td>WellTech Rapid Core oder Harris Uni-Core</td><td>0.35, 0.50, 0.75, 1.0, 1.20, 1.50</td><td></td></tr></tbody></table>

bewertung von zellulären stresses und entzündung im diskreten oxytocin-sezernierenden gehirn kerne bei neugeborenen ratten vor und nach der ersten fütterung kolostrum

Assessing Cellular Stress and Inflammation in Discrete Oxytocin-secreting Brain Nuclei in the Neonatal Rat Before and After First Colostrum Feeding

Das Ziel dieses Protokolls ist, Oxytocin-Rezeptoren reichen Gehirn Kerne im neonatalen Gehirn vor und nach der ersten Fütterung Kolostrum zu isolieren. Die Expression von Proteinen reagieren auf metabolischer Stress bekannt wurde im Gehirn-Kerne Isolate mit Western blotting gemessen. Dies wurde getan, um festzustellen, ob metabolischen Stress-induzierte Nährstoff Mangel im Körper neuronalen Stress ausgelöst. Wir haben bereits gezeigt, dass Nährstoff Insuffizienz bei Neugeborenen metabolischer Stress im Darm entlockt. Darüber hinaus moduliert Kolostrum Oxytocin zellulären Stress Response, Entzündung und Autophagie Marker in Neugeborene Ratte Darmzotten vor und nach ersten Feed. Signalisierung von Protein-Marker, die mit dem endoplasmatischen Retikulum Stress [ER Chaperon Immunglobulin Bindeprotein (BiP), eukaryotic Übersetzung Einleitung Faktor 2A (eIF2a), und eIF2a-Kinase Proteinkinase R (p-PKR)], sowie zwei Entzündung-Signalisierung Proteine [nuklearer Faktor κB (NF-kB) und Inhibitor κB (IkB)], wurden in Neugeborenen Gehirn Kerne gemessen [Kern des einsamen Trakt (NTS), paraventrikulären Nukleus (PVN), supra-Optik Kern (Sohn), Kortex (CX), Striatum Kerne (STR), und mediale präoptischen Kern (MPO)] vor der ersten Feed (entschärften von Kolostrum) und nach dem Start der Krankenpflege (grundiert von Kolostrum). Ausdruck des BiP/GRP78 und p-eIF2a wurden hochreguliert in ungestrichenen und herunterreguliert in grundiert NTS Gewebe. NF-κB wurde (hoch) in das Zytoplasma CX, STR und MPO beibehalten, während NF-κB niedriger und im NTS, PVN und Sohn unter beiden Bedingungen unverändert war. Die kollektiven BiP und p-eIF2 Erkenntnisse stehen im Einklang mit einer Stress-Reaktion. eIf2a war der Sohn, CX, STR und MPO durch DsRNA abhängige Kinase (p-PKR) phosphoryliert. Allerdings wurde in der NTS (und in geringerem Maße in PVN), eIf2a von einem anderen Kinase, allgemeine Kontrolle-Nonderepressible-2-Kinase (GCN2) phosphoryliert. Die Stress-modulierende Mechanismen zuvor beobachtet in Neugeborenen Darm Enterozyten erscheinen in einigen OTR-reiche Gehirnregionen gespiegelt werden. Die NTS und PVN kann einen unterschiedlichen Phosphorylierung-Mechanismus (unter Nährstoffmangel) aus anderen Regionen zu nutzen und refraktär gegenüber den Auswirkungen der Nährstoff-Insuffizienz. Diese Daten zufolge Kollektiv Gehirn Reaktionen auf Nährstoff-Insuffizienz Stress durch Signalisierung von Kolostrum grundiert Enterozyten ausgeglichen sind.

Die repräsentative Bands Immunoreactivity bezogen auf Gesamt-Protein zeigen, dass es Gehirn Kerne mit sehr niedrigen geschlagenem Eiweiß. Dies erfordert die Verwendung der automatisierten Western-Blot-Technik, die sehr empfindlich im Vergleich zu den kanonischen Western-Blot ist. Dieser Ansatz kann mit fortyfold weniger Protein pro Kapillare im Vergleich zu der pro-Spur in Western Blots ausgeführt werden.
Differentielle Effekte von...

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur Gehirn Kerne im neonatalen Rattengehirn in Verbindung mit der ersten Fütterung Kolostrum zu isolieren. Diese Technik erlaubt die Studie von Nährstoff-Insuffizienz Stress im Gehirn wie von Enterozyten Signal moduliert.

Bewertung von zellulären Stresses und Entzündung im diskreten Oxytocin-sezernierenden Gehirn Kerne bei Neugeborenen Ratten vor und nach der ersten Fütterung Kolostrum

The goal of this protocol is to isolate oxytocin-receptor rich brain nuclei in the neonatal brain before and after first colostrum feeding. The expression ...

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im postnatalen Entwicklungsbereich zu beantworten, wie Milchsäugung die Stresssignalisierung im Gehirn beeinflusst. Diese Technik kann verwendet werden, um bestimmte Hirnbereiche während der ersten natürlichen Hungerperiode zu erfassen und sie mit den jeweiligen Bereichen kurz nach dem ersten natürlichen Kolostrumfutter zu vergleichen. Das Verstehen, wie Dassäugen die Physiologie von Verhalten und Emotion beeinflusst, ermöglicht die Verwendung eines Antagonisten an verschiedenen Rezeptoren während der Ex-vivo-Gehirngewebeanalyse.Um die Kernschläge zu erhalten, entfernen Sie die Rattenwelpen am Schwanz mit einer handgeliebten Hand. Nach der Ernte des Gehirns, legen Sie schnell das gesamte Organ in einem Polymethylmethacrylat Gehirnform bei Raumtemperatur und sofort verwenden eine neue Rasierklinge, um 500 Mikrometer dicke Scheiben des Gewebes zu machen. Legen Sie die Scheiben rostral zu kaudal in einer Petrischale, wie sie erhalten werden, um die richtige Ausrichtung der Abschnitte zu halten.Wenn das gesamte Gehirn geschnitten wurde, fügen Sie schnell künstliche zerebrale Rückenmarksflüssigkeit ohne Glukose in die Schale und inkubieren Sie die Scheiben für 60 Minuten bei 28 bis 30 Grad Celsius unter ständigem Rühren auf einem Orbitalschüttler. Verwenden Sie einen Hirnatlas und anatomische Landmarken auf jedem Gewebe, um die zu stanzten Hirnkerne zu identifizieren und die Scheibe mit den Kernen von Interesse in eine neue Petrischale unter einem Sezierendes Mikroskop zu platzieren. Nach der Visualisierung verwenden Sie ein Koringwerkzeug, um schnell vier bis sechs verschiedene Kerne auszustechen und jeden gestanzten Kern schnell in 0,06 ml eiskalten Proteinextraktionspuffer in das entsprechend gekennzeichnete Mikrozentrifugenrohr mit Proteusinhibitoren und Phosphataseinhibitoren für 60 Minuten einzutauchen.Zentrifugieren Sie am Ende der Inkubation die extrahierten Kerne in einer gekühlten Minizentrifuge und übertragen Sie mit einer Mikropipette sorgfältig 0,055 ml Überstand von jedem Rohr in das entsprechende vorgekühlte 1,5 ml Mikrozentrifugenrohr auf Eis. Vor der negativen Lagerung von 20 Grad Celsius 0,012 ml Überstand aus jedem Proteinstockrohr in die entsprechende 0,5 ml vorgekühlte Röhre auf Eis für die erste Probenvorbereitung übertragen. Um die Proben für die Messung des kapillaren Proteins vorzubereiten, fügen Sie 0,003 ml Master-Mix-Reagenz aus einem Proteinlyse-Kit zu jeder der Proben in den 0,5 ml-markierten Röhrchen hinzu.Als nächstes fügen Sie 0,004 ml Master-Mix-Reagenz zu einer biotinylierten Molekulargewichtsleiterlösung in 0,016 ml entionisiertem Wasser hinzu und denaturieren die Leiter- und Proteinextraktproben in einem 95 Grad Celsius-Wärmeblock, wodurch alle Rohre nach fünf Minuten bei vier Grad Celsius gelagert werden. Für die Signalproteinanalyse 0,01 ml frisch zubereitete Luminolperoxidlösung zu den Brunnen E-1 bis E-25 einer neuen automatisierten Westernplatte, 0,01 ml sekundärem Anti-Maus-Antikörper zu den Brunnen D-2 bis D-25 hinzufügen und 0,01 ml Streptavidin-Meerrettichperoxidase vom Kit auf gut D-1 hinzufügen. Fügen Sie 0,01 ml frisch zubereiteten Primärantikörper in die Brunnen C-2 bis C-25 und 0,01 ml Antikörperverdünnungsmittel zwei Lösungen für die Bohrungen C-1 und B-1 bis B-25 hinzu.Lassen Sie die Bohrungen der Reihe F leer und füllen Sie die fünf Fächer der drei Reihen unterhalb der F-Reihe mit 0,45 ml Waschpuffer. Als nächstes drehen Sie die gekühlten Proben 30 Sekunden lang kurz und fügen Sie 0,03 ml jeder Probe zu jedem Brunnen der Reihe A hinzu, beginnend mit A-2. Dann 0,005 ml der biotinylierten Molekulargewichtsleiter zu gut A-1 hinzufügen und die Platte für die Zentrifugation bedecken.Während die Platte zentrifugiert ist, öffnen Sie eine neue Run-Datei in der automatisierten Western-Software und initiieren Sie einen molekularen Größentest. Geben Sie auf der Assay-Seite die Beispielnamen in jede Kapillare sowie die Namen der primären und sekundären Antikörper ein. Am Ende der Zentrifugation die Platte in das automatisierte Western-Instrument legen und die Abdeckung aus der Kapillarpatronenbox schälen.Nach der Zentrifugation vergessen Sie nicht, Luftblasen zu untersuchen, denn Luftblasen in der Kapillare können den elektrophoretischen Strom blockieren und die ganze Runde ausfallen lassen. Setzen Sie die Patrone in die vorgesehene Position innerhalb des Geräts ein und schließen Sie die Tür. Klicken Sie auf Start.Wenn Sie den Typ des Testes dazu auffragen, geben Sie den Namen des Experiments in das entsprechende Textfeld ein, und klicken Sie auf "OKAY". Wenn Sie vom aktivierten Ausführungsdatum und der ID-Nummer in der Ausführungsdatei aufgefordert werden, notieren Sie sich die Zeit, zu der die Ausführung endet. Entsorgen Sie am Ende des Laufs die Kapillarpatrone in die Schärfeentsorgung und die Platte in die Entsorgung biogefährlicher Stoffe.Nach der Elektrophorese-Trennung, überprüfen Sie die Run-Dateien auf ImmunreaktivitätSpitzen von Antigenen bei 40 bis 43 Kilodalton, die für phosphorylierte eukaryotische Translation Initiationsfaktor 2A stehen. Wenn Molekulargewichtsspitzen dieser Größe fehlen, klicken Sie mit der rechten Maustaste unter die Kurve, und wählen Sie Molekulargewicht hinzufügen, um sicherzustellen, dass die Größen und beliebigen Größen unterhalb der Kurve aufgezeichnet werden. Innerhalb der unprimeds Gewebeproben sind die bindungden Aminoglobulinproteinspiegel in den Kernen der Einsittbahn im Vergleich zu allen anderen Regionen signifikant höher.Die Primierung des Darmgewebes mit Kolostrum verringert den bindungden Aminoglobulin-Proteinspiegel in den Kernen der Einsit-Track und hat keinen Einfluss auf paraventrikuläre Kerne und superoptische Kerne. Umgekehrt erhöht die Grundierung den Bindungs-Aminoglobulin-Proteinspiegel innerhalb der Kortex, der Striationskerne und der medialen präoptischen Kerne relativ zum nicht grundierten Gewebe, was bedeutet, dass die bindungden Aminoglobulin-Proteinspiegel in den verschiedenen getesteten Hirnkernen unterschiedlich auf Darmgrundierung reagieren und es noch kein nachgewiesenes Übersprechen zwischen den verschiedenen getesteten Kernen gibt. Eukaryotische Translation Initiationfaktor 2A und phosphorylierte eukaryotische Translation InitiationFaktor 2A Ebenen sind in der unprimed Zustand im Vergleich zu anderen Kernen erhöht.Nach der Grundierung werden die Konzentrationen sowohl des eukaryotischen Translationsinitiationsfaktors 2A als auch des phosphorylierten eukaryotischen Translationinitiationsfaktors 2A im Vergleich zu Denkernen der einsamen Spur im Vergleich zu nicht grundiertem Gewebe reduziert. In allen anderen getesteten Kernen erhöht die Grundierung den Eukaryotischen Translationinitiationsfaktor 2A und den phosphorylierten eukaryotischen Translationsinitiationsfaktor 2A im Verhältnis zu nicht grundiertem Gewebe. Jedoch, Ebenen der phosphorylierten Proteinkinase-Rezeptor sind niedrig in unprimed Proben relativ zu grundierten Proben in Kernen der einsamen Spur, stark darauf hindeutet, dass eine andere Kinase an der Phosphorylierung der eukaryotischen Translation Initiationfaktor 2A beteiligt ist.Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet der postnatalen Entwicklung, um die Signalwege zu erforschen, die an Gewebewachstum und -differenzierung beteiligt sind und ob sie durch Säugen beeinflusst oder unabhängig vom Säugen sind. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit flüchtigen Reduktionsmitteln wie z. B. Dithiothreitol gefährlich sein kann, und Vorsichtsmaßnahmen wie die Vorbereitung in der chemischen Haube sollten bei der Vorbereitung dieses Verfahrens immer getroffen werden.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Wir beschreiben ein Rattenmodell der Posttraumatischen Belastungsstörung (PTSD), die die anhaltenden Veränderungen im neuroendokrinen Funktion und die verzögerte langfristige, übertriebene Angstreaktion, die charakteristisch für PTBS-Patienten zeigt. Das Tiermodell und hier beschriebenen Methoden sind nützlich zum Korrelieren Biomarkern in Gehirnkernen, die mechanistische sind, aber nicht bei Patienten gemessen werden, wobei Biomarkern in peripheren weißen Blutzellen, welches kann.

Biomarker in einem Tiermodell für die Aufdeckung Neural, hämatologischen und Behavioral Korrelate der PTSD

Dieses Video zeigt die Isolierung von Oxytocin-Rezeptor-reichen Kernen aus dem Gehirn von neonatalen Ratten. Das koronale Schneiden, gefolgt von der Identifizierung und präzisen Stanzung von Oxytocin-Rezeptor-reichen Hirnkernen, ermöglicht die effektive Extraktion von Oxytocin-Rezeptor-reichen Kernen für die weitere Analyse.

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Dieser Artikel beschreibt die Verwendung von chronischen resident Eindringling sozialem Stress als ethologisch relevant Paradigma Modell postpartale Depression und Angst bei stillenden Nagetiere.

Mit Chronische Sozial Stress zu Modell postpartalen Depression in Lactating Nagetiere

Dieser Beitrag beschreibt die Verfahren für die taktile Stimulation von Rattenjungen und anschließende Golgi-Cox-Färbung der neuronalen Morphologie. Taktile Stimulation ist eine positive Erfahrung, die in der Perinatalperiode durch Streicheln Welpen mit einem Haushalts duster verwaltet wird. Golgi-Färbung cox ist ein zuverlässiges Verfahren ermöglicht die Visualisierung der gesamten Neuronen.

Visualisierung der Auswirkungen einer Früh Positive Erfahrung, taktile Stimulation, auf dendritischen Morphologie und synaptische Verbindungen mit Golgi-Cox Färbung

Wir messen perigenital mechanische Empfindlichkeit und Mastzellaktivierung in der Prostata von männlichen C57BL / 6-Mäuse, die eine frühe Leben Stress Paradigma erfuhr - Neugeborenen von Müttern Trennung, um einen präklinischen Modell der chronischen Prostatitis / chronischem Schmerzsyndrom des Beckens zu induzieren.

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Stressige Lebensereignisse beeinträchtigen die kognitive Funktion und erhöhen das Risiko psychiatrischer Störungen. Dieses Protokoll veranschaulicht, wie Stress die kognitive Flexibilität beeinflusst, indem ein automatisiertes paradigmatisches Paradigma der operanten Strategie bei männlichen und weiblichen Sprague-Dawley-Ratten verwendet wird. Spezifische Gehirnbereiche, die bestimmten Verhaltensweisen zugrunde liegen, werden diskutiert und die translationale Relevanz der Ergebnisse untersucht.

Bewertung von Stresseffekten auf die kognitive Flexibilität anhand eines operanten Strategiewechsel-Paradigmas

Das Paradigma des chronischen psychosozialen Stresses (CGS) verwendet klinisch relevante Stressoren während der Schwangerschaft bei Mäusen, um psychiatrische Störungen von Müttern und Säuglingen zu modellieren. Hier bieten wir eine Schritt-für-Schritt-Anleitung zur Anwendung des CGS-Paradigmas und nachgelagerter Bewertungen, um dieses Modell zu validieren.

Verwendung eines murinen Modells psychosozialen Stresses in der Schwangerschaft als translational relevantes Paradigma für psychiatrische Störungen bei Müttern und Säuglingen

Hier stellen wir ein prägnantes Protokoll zur Erstellung eines Frühgeborenen-Rattenmodells vor, das die Forschung zur frühen postnatalen Schmerzbehandlung erleichtert. Bei der Methode wird drei Tage vor der erwarteten Geburt ein Kaiserschnitt durchgeführt, Frühgeborene von Ratten mittels Hysterektomie extrahiert und mit den biologischen Nachkommen einer Leihmutter integriert.

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Frühgeburten (Entbindung &lt; 37. Woche) sind ein dringendes globales Gesundheitsproblem mit suboptimalen Präventions- und Behandlungsmöglichkeiten. Wir stellen ein Mausmodell der aufsteigenden vaginalen bakteriellen Infektion induzierten Frühgeburt vor und skizzieren, wie die daraus resultierende neonatale Morbidität und Mortalität analysiert werden kann.

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Dieses Protokoll beschreibt ein Tiermodell, um zu untersuchen, wie sich Widrigkeiten im frühen Leben, hervorgerufen durch eine verarmte Umwelt und unvorhersehbare mütterliche Fürsorge in der frühen postnatalen Phase, auf die Gehirnentwicklung und das zukünftige Risiko psychischer Störungen auswirken.

Begrenztes Einstreuen und Nisten als Modell für Widrigkeiten im frühen Leben bei Mäusen

Der Artikel bietet ein umfassendes Protokoll zur Erstellung eines mütterlichen Immunaktivierungsmodells (MIA), das die Auswirkungen früher Schwangerschafts-Entzündungen auf die Neuroentwicklung untersucht, einschließlich wichtiger Kennzahlen zur Gewährleistung von Zuverlässigkeit und Reproduzierbarkeit.

Erzeugung des frühgestationalen mütterlichen Immunaktivierungsmodells zur Beurteilung pränataler Entzündungen auf die Neuroentwicklung

Erfahren Sie die Isolierung von Hirnkernen bei neugeborenen Ratten vor und nach der ersten Kolostrum-Fütterung. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung zellulären Stresses und Entzündungssignale im Oxytocin-sezernierenden Gehirn.

Bewertung von zellulären Stresses und Entzündung im diskreten Oxytocin-sezernierenden Gehirn Kerne bei Neugeborenen Ratten vor und nach der ersten Fütterung Kolostrum (Video) | JoVE Journal

Bewertung von zellulären Stresses und Entzündung im diskreten Oxytocin-sezernierenden Gehirn Kerne bei Neugeborenen Ratten vor und nach der ersten Fütterung Kolostrum

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