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DOI: 10.3791/58426-v
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Hier präsentieren wir ein Protokoll für die Isolierung der leukämischen Zellen aus dem Knochenmark Leukämie Patienten und Analyse ihrer metabolischen Zustand. Bewertung des metabolischen Profils der primäre Leukämie-Zellen könnte dazu beitragen, um die Nachfrage von Primärzellen besser zu charakterisieren und könnte bis zu mehr personalisierte Medizin.
Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen bezüglich Metabolische Pfad Einrichtung in Leukämie-Zellen zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass sie die Messung des Stoffwechsels von primären Leukämiezellen in Echtzeit in lebenden Zellen ermöglicht. Beginnen Sie mit der Verdünnung einer Knochenmarkprobe, die von einem Leukämiepatienten in PBS im Verhältnis eins zu eins erhalten wurde.
Sorgfältig sechs Milliliter der verdünnten Knochenmarkprobe über sechs Milliliter frisch präpariertes Dichtegradientenmedium in einem 15 Milliliter konischen Rohr schichten und die Zellen durch Dichtegradientenzentrifugation trennen. Verwenden Sie eine Pasteur Pipette, um die Schnittstellenschicht mononukleistischer Zellen sorgfältig auf ein neues 50-Milliliter-Konusrohr mit fünf MilliliterPBS für eine Zentrifugationswäsche zu übertragen. Dann setzen Sie das mononukleäre Zellpellet in zwei Millilitersterilen PBS zum Zählen wieder aus.
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