Name: Bewertung neuroprotektive Wirkung Glycyrrhizae Radix et Rhizoma extrahieren mit einer vorübergehenden mittlere zerebrale Arterie Okklusion Maus-Modell (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-12-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Erfahren Sie die Bewertung neuroprotektiver Wirkungen mit einem modifizierten MCAO-Mausmodell. Die orale Gabe von Glycyrrhizae Radix et Rhizoma-Extrakt reduziert signifikant das Infarktvolumen nach Schlaganfall.

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Alle Verfahren, die Tiere wurden von der Ethikkommission der Pusan National University (Zulassungsnummer, PNU-2016-1087) genehmigt. Eine grafische Übersicht über diese Studie ist in Abbildung 1dargestellt.
1. Erstellung und Verwaltung von GRex
Hinweis: Die in dieser Studie verwendeten GR wurde aus einem kommerziellen Pharmaunternehmen gekauft.
<ol><li>200 g GR in 2.000 mL Methanol und 5 Tage bei Raumtemperatur (25 ° C) inkubieren.</li>
	<li>Filtern Sie das Gemisch mit Filterpapier mit 0,26 mm Dicke und 5 µm Porengröße, und entfernen Sie dann den überstand. Der GR-Rückstand 1.000 mL Methanol hinzufügen und erneut filtern.</li>
	<li>Kombinieren der zwei Überstände, durch Filterpapier Filtern unter Vakuum zu konzentrieren und dann Installationsprogrammen des Rückstands um GRex zu produzieren.</li>
	<li>Lösen Sie der GRex in Dimethyl Sulfoxid (DMSO), mit physiologischer Kochsalzlösung 0,9 % verdünnen auf und durch einen 0,45 µm-Spritze-Filter filtern. Passen Sie dann die Endkonzentration von DMSO auf < 5 %.</li>
	<li>Verwalten Sie GRex (300 mg/kg Körpergewicht) 1 h nach der Reperfusion des MCAO über orale Magensonde. DMSO verdünnt in physiologischer Kochsalzlösung (10 mL/kg Körpergewicht) nur für die normale Gruppe und Kontrollgruppen, bzw. zu verwalten. Hinweis: Die Konzentration von GRex verwendet in diesem Experiment wurde entsprechend der Konzentration bestimmt, die durch unsere vorherigen Studie8aktiv war.</li>
</ol>(2) Maus-Modell der MCAO
<ol><li>Verwendung männliche C57BL/6 Mäusen im Alter von 6 Wochen und mit einem Gewicht von 22-25 g. alle Tiere mit freiem Zugang zu standard Chow, Wasser und Haus bieten, sie in einer Umgebung mit kontrollierter Temperatur (22 ± 1 ° C) und ein 12 h hell/dunkel-Zyklus.<ol>
<li>Teilen Sie die Mäuse in Gruppen von jeweils sechs Mäuse, die Schein-betrieben Normal, Kontrolle und GRex Behandlungsgruppen bestehen soll.</li>
		<li>Operieren Sie MCAO (Modifikation der Methode von Koizumi Et al. 9) über die Kontrolle und GRex Behandlungsgruppen mit einem Stereo-Mikroskop.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Inhalation Anästhesie in den Mäusen mit 2 % Isofluran 70 % N2O und 30 % O2zu induzieren. Anästhesie ist als ausreichend angesehen, wenn die Maus reagiert nicht auf mechanischen Reiz auf seinen Schweif angewendet wird. Pflegen Sie die Körpertemperatur der Mäuse auf 36,5 ± 0,5 ° C mit einem Körper Temperatur-Holding Decke mit einem Thermometer verbunden.</li>
	<li>Entfernen Sie die Haare auf der Brust und Hals der Mäuse durch das Rasieren gefolgt von Verwendung von Haarentfernungs-Creme, desinfizieren der Operationsstelle Haut mit Betadine Scrub abwechselnd mit Alkohol für zwei Mal und dann machen Sie einen Schnitt von ca. 2 cm lang mit chirurgischen Klinge in der Mitte des Halses. Isolieren Sie sorgfältig die linke gemeinsame Halsschlagader (LCCA), äußere Halsschlagader und der Zweig der inneren Halsschlagader aus den umliegenden Bindegewebe.</li>
	<li>Verbinden Sie die äußere Halsschlagader und die gemeinsame Halsschlagader mit einer chirurgischen Naht (4: 0 Seide Naht, Hälfte Haken Knoten), um die Durchblutung vorübergehend zu blockieren in der inneren Halsschlagader, während des Betriebs.</li>
	<li>Legen Sie eine Silikon beschichteten Nylon-Naht (8: 0 Monofile, 11 mm lang) durch der inneren Halsschlagader auf den Ursprung des linken MCA. Die Zähflüssigkeit des Silikon-beschichteten Teils des Fadens auf einen Bereich von 0,10-0,12 mm.</li>
	<li>Messen Sie den Rückgang der relative zerebralen Blutflusses (rCBF) in der MCA mit einem Laser-Doppler-Durchflussmesser. MCAO wird bestätigt, wenn der rCBF auf < 20 % der ruhenden Zustand Werte während des gesamten ischämischen gehalten wird.</li>
	<li>Die eingefügte Filament, das Blutgefäß für 2 h zu beheben, während die zerebrale Arterie verschlossen ist, und dann vorsichtig zurückziehen des Fadens um die Durchblutung für 22 h der Reperfusion wiederherzustellen. Naht der Haut durch Nähen an 5 Orten (3: 0 Seide Naht, zwei halbe Anhängevorrichtungen Knoten) und lassen jede Maus aus der Narkose erwachen.</li>
	<li>Führen Sie im Bereich "normal" einen Schein-Vorgang nach dem gleichen Verfahren über (bis 2,4), mit folgender Ausnahme. Verbinden Sie die gemeinsame Halsschlagader und Naht die eingeschnittenen Muskel und Haut.</li>
</ol>3. Messung des Volumens von beschädigten Hirngewebe
<ol><li>Nach der Euthanasie der Mäuse für Hirnschäden Messung mit CO2 Einatmen Gehirne Verbrauchsteuern die Maus 24 h nach Beginn der MCAO mit Iris chirurgische Schere und abgewinkelte Zange.<ol>
<li>Nach dem Entfernen der Kopf mit einer Schere, machen Sie einen Einschnitt in der Mittellinie Haut des Kopfes, über die Haut aus dem Schädel zu kippen.</li>
		<li>Brechen Sie das Scheitelbein mit abgewinkelten Pinzette, Dura abziehen egal, zur gleichen Zeit, und dann das Gehirn vorsichtig aus dem Schädel zu isolieren.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Schnitt die ausgeschnittenen Gewebe in Abschnitte (1 mm dick) mit einer Maus Gehirn Matrix und dann färben die Abschnitten 17 min in einer Lösung von 2 % 2,3,5-Triphenyltetrazolium Chlorid (TTC).</li>
	<li>In den Abschnitten 10 % Formalin für mindestens 2 h zu beheben und dann sie mit einer Digitalkamera fotografieren. TTC werden beobachtet, um tragfähige Gewebe rot zu färben, während die nekrotischen Bereiche weiß werden.</li>
	<li>Analyse und Quantifizierung der Hirninfarkt Bereich jedes Abschnitts mit ImageJ.</li>
</ol>4. Hämatoxylin und Eosin (H & E) und Cresyl violette Färbung der histologischen Abschnitte
<ol><li>Einschläfern Sie die Mäuse für die histologische Untersuchung von CO2 Inhalation und Durchspülen sie Transcardially mit 10 mL der Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS), gefolgt von 10 mL 4 % Paraformaldehyd (PFA). Das Gehirn mit dem gleichen Verfahren wie oben (3.1) zu isolieren und das Gehirn in 10 mL 30 % Saccharose über Nacht Tauchen.</li>
	<li>Das Hirngewebe in optimale Arbeitstemperatur (OCT) zusammengesetzte einbetten und koronal in 15 µm dicke Abschnitte mit einem Kryostat schneiden. Montieren Sie die Abschnitte auf Objektträgern, gefolgt von Färbung mit Hämatoxylin und Eosin (H & E) oder Cresyl violett.</li>
	<li>Tauchen Sie den Objektträger in 80 % Ethanol für 1 min, gefolgt von Färbung Hämatoxylin Lösung für 5 min.<ol>
<li>Folien in 1 % Säure Alkohol zweimal tauchen, Tauchen in gesättigten Lithiumcarbonat Lösung für 30 s, waschen mit Wasser aus dem Wasserhahn für 30 s, und dann Gegenfärbung in Eosin-Lösung für 30 s.</li>
		<li>Die Folien in Leitungswasser abspülen, Einweichen in 95 % und absoluten Ethanol nacheinander.</li>
		<li>An der Luft trocknen der Folien, in Xylol mindestens 10 min lang klar und befestigen Sie dann die Eindeckmittel mit Deckgläsern.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Legen Sie den Objektträger auf einer Folie wärmer für mindestens 1 h, gefolgt von Eintauchen in 50 % igem Ethanol über Nacht mit Chloroform verdünnt.<ol>
<li>Färben Sie die Folien mit 0,1 % Cresyl violett für 10 min im Ofen 40 ° C trocken.</li>
		<li>Tauchen in 95 % igem Ethanol für 30 min, dann entwässern in absoluten Ethanol für 2 Mal.</li>
		<li>Deaktivieren Sie 2 Mal in Xylol für 5 min, dann montieren Sie mit Eindeckmedium nach Lufttrocknung.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Beobachten Sie unter Verwendung eines Mikroskops, die histologischen Veränderungen, die nach MCAO-induzierten Hirnverletzung.</li>
</ol>5. statistische Analyse
<ol><li>Die experimentellen Ergebnisse als Mittel ± Standardabweichung Express und bestimmen die statistische Signifikanz zwischen den Gruppen mit einem One-Way Varianzanalyse (ANOVA) gefolgt von Tukey post Hoc Analyse anhand einer Datenanalyse-Software.</li>
	<li>Legen Sie die statistische Signifikanz bei einem p-Wert < 0,05.</li>
</ol>

<ol><li>Bejot, Y., Delpont, B., Giroud, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rising+stroke+incidence+in+young+adults%3A+more+epidemiological+evidence%2C+more+questions+to+be+answered%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Rising stroke incidence in young adults: more epidemiological evidence, more questions to be answered.</a> Journal of the American Heart Association. 11 (5), (2016).</li>
<li>Hadadha, M., Vakili, A., Bandegi, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+the+inhibition+of+hydrogen+sulfide+synthesis+on+ischemic+injury+and+oxidative+stress+biomarkers+in+a+transient+model+of+focal+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Stroke+and+Cerebrovascular+Diseases%22%5BJournal%5D)">Effect of the inhibition of hydrogen sulfide synthesis on ischemic injury and oxidative stress biomarkers in a transient model of focal cerebral ischemia in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 24 (12), 2676-2684 (2015).</li>
<li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Article+in+Handbook+of+Clinical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Animal models of ischemic stroke.</a> Article in Handbook of Clinical Neurology. 92, 43-66 (2009).</li>
<li>Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+of+Stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+and+Neurorehabilitation%22%5BJournal%5D)">Animal Models of Stroke.</a> Brain and Neurorehabilitation. 4 (1), 1-11 (2011).</li>
<li>Rizzato, G., Scalabrin, E., Radaelli, M., Capodaglio, G., Piccolo, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+exploration+of+licorice+metabolome%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">A new exploration of licorice metabolome.</a> Food Chemistry. 221, 959-968 (2017).</li>
<li>Zhu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+determination+of+flavonoids+in+licorice+and+comparison+of+three+licorice+species%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Separation+Science%22%5BJournal%5D)">Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species.</a> Journal of Separation Science. 39 (3), 473-482 (2016).</li>
<li>Ota, M., Mikage, M., Cai, S. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herbological+study+on+the+medicinal+effects+of+roasted+licorice+and+honey-roasted+licorice%5BTitle%5D)+AND+%22Yakushigaku+Zasshi%22%5BJournal%5D)">Herbological study on the medicinal effects of roasted licorice and honey-roasted licorice.</a> Yakushigaku Zasshi. 50 (1), 38-45 (2015).</li>
<li>Lim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Licorice+pretreatment+protects+against+brain+damage+induced+by+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medicinal+Food%22%5BJournal%5D)">Licorice pretreatment protects against brain damage induced by middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Journal of Medicinal Food. 21 (5), 474-480 (2018).</li>
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<li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li>
<li>Zhu, Y., Liu, F., Zou, X., Torbey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+unbiased+estimation+of+neuronal+number+in+the+rat+hippocampus+with+different+staining+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of unbiased estimation of neuronal number in the rat hippocampus with different staining methods.</a> Journal of Neuroscience Methods. 254, 73-79 (2005).</li>
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<li>Pinto, A., Tuttolomondo, A., Di Raimondo, D., Fernandez, P., Licata, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrovascular+risk+factors+and+clinical+classification+of+strokes%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Vascular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cerebrovascular risk factors and clinical classification of strokes.</a> Seminars in Vascular Medicine. 4 (3), 287-303 (2004).</li>
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<li>Feuerstein, G. Z., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Today%22%5BJournal%5D)">Animal models of stroke.</a> Molecular Medicine Today. 6 (3), 133-135 (2000).</li>
<li>Herson, P. S., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+stroke%3A+translational+potential+at+present+and+in+2050%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Neurology%22%5BJournal%5D)">Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050.</a> Future Neurology. 9 (5), 541-551 (2014).</li>
<li>Kumar, A., Gupta Aakriti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+animal+models+of+stroke%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">A review on animal models of stroke: an update.</a> Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).</li>
<li>O'Collins, V. E., Donnan, G. A., Howells, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((History+of+animal+models+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Stroke%22%5BJournal%5D)">History of animal models of stroke.</a> International Journal of Stroke. 6 (1), 77-78 (2011).</li>
<li>Ji, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioactive+constituents+of+Glycyrrhiza+uralensis+%28licorice%29%3A+discovery+of+the+effective+components+of+a+traditional+herbal+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Bioactive constituents of Glycyrrhiza uralensis (licorice): discovery of the effective components of a traditional herbal medicine.</a> Journal of Natural Products. 79 (2), 281-292 (2016).</li>
<li>Yang, R., Wang, L. Q., Yuan, B. C., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pharmacological+activities+of+licorice%5BTitle%5D)+AND+%22Planta+Medica%22%5BJournal%5D)">The pharmacological activities of licorice.</a> Planta Medica. 81 (18), 1654-1669 (2015).</li>
<li>Yang, R., Yuan, B. C., Ma, Y. S., Zhou, S., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anti-inflammatory+activity+of+licorice%2C+a+widely+used+Chinese+herb%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Biology%22%5BJournal%5D)">The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb.</a> Pharmaceutical Biology. 55 (1), 5-18 (2017).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Mit der zunehmenden Verbreitung von Stoffwechselerkrankungen wie chronischem Bluthochdruck, Diabetes und Hyperlipidämie, die wichtigsten Risikofaktoren für einen Schlaganfall sind geworden Schlaganfall-Prävention und Behandlung ein wichtiger Bereich der medizinischen Forschung12, 13. Defizite in Sprache und Bewegung nach einem Schlaganfall sind stark korreliert mit dem Grad der Beschädigung des Gehirns Gewebe14 und führen zu einer schlecht...

Schädigung des Gehirns verursacht durch Ischämie und Reperfusion des zerebralen Blutflusses führt zu den Tod von Nervenzellen und Verlust von Gehirngewebe. Diese Art der Schädigung des Gehirns steigt mit der zunehmenden Verbreitung von zerebrovaskulären Erkrankungen, die durch die Verbreitung von Stoffwechselerkrankungen wie Adipositas, Bluthochdruck und Diabetes Mellitus1,2. Die absolute Zahl der älteren Patienten mit Schlaganfall weltweit sprunghaft angestiegen, und die Kosten der medizinischen Versorgung für diese Patienten, die oft mit langfristigen Behinderungen zurückbleiben, ist eine große gesellschaftliche Belastung. Daher sollten sekundäre Behinderungen so weit wie möglich reduzieren die wirtschaftliche Belastung1,2gemildert werden.
Das am häufigsten verwendete Nagetiere Modell der Hirninfarkt ist das mittlere zerebrale Arterie (MCA) Okklusion (MCAO) Modell, in dem die MCA mit einem Silikon-beschichtete chirurgische Box-Filament, Durchblutung, blockieren verschlossen ist verursacht ischämischen Schlaganfall3, 4. mit einem Faden wie Okklusion Material die Kontrolle der Okklusion Zeit und Beständigkeit ermöglicht durch Manipulation der Dauer der Intra-luminalen Filament Einfügung.
Frühere Studien haben gezeigt, dass selbst wenn das gleiche Modell für Nager MCAO benutzt wird, das Gesamtvolumen der Hirninfarkt zwischen Experimente variiert, verursacht geringe Reproduzierbarkeit der Studien. Um die Reproduzierbarkeit zu verbessern, haben wir die Dicke der Glühfaden Minze verwendet im Experiment optimiert. Die Ergebnisse einer Vorstudie zerebralen ischämischen und induzierte Infarkt hat gezeigt, dass eine ischämische länger als 60 min die volumetrische Region erlaubt beschädigt Hirngewebe beobachtet und quantifiziert werden.
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GR), auch bekannt als Lakritze, bestehend aus den getrockneten Wurzeln und Wurzelstöcke von Glycyrrhiza Uralensis und G. Glabra. Es wird für verschiedene Zwecke, u.a. als Lebensmittelzusatzstoff und medizinisch5,6,7in der chinesischen und koreanischen traditionellen Medizin eingesetzt.
In einer früheren Studie8, Vorbehandlung mit GR-Methanol-Extrakt (GRex) zeigte eine Anti-apoptotische Wirkung bei MCAO Mäusen einschließlich bedeutende Prävention aus dem Rückgang der Proteinexpression von B-Zell-Lymphom 2 (Bcl-2) und Bcl extragroßen (Bcl-xL). Diese Studie wurde durchgeführt, um die Reproduzierbarkeit der herkömmlichen MCAO-Maus-Modell wird gesteigert, Bewertung ihrer Effizienz zu ermitteln, ob Post-Infarkt-Behandlung mit GRex effektiv das Infarkt-Volumen in MCAO-induzierten zerebralen Schäden reduziert.

<table><tbody><tr><td>Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td><td>Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea</td><td></td><td>Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td></tr><tr><td>Qualitatives Filterpapier</td><td>Advantec</td><td>Filterpapier Nr. 2</td><td>Qualitatives Filterpapier</td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid (DMSO)</td><td>Sigma</td><td>D8418-250ML</td><td>Dimethylsulfoxid (DMSO)</td></tr><tr><td>Spritzenvorsatzfilter (0,45 &Mikro; m)</td><td>Sigma</td><td>CLS431220</td><td>Spritzenvorsatzfilter (0,45 &Mikro; m)</td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Leica</td><td>M50</td><td>Stereomikroskop</td></tr><tr><td>Stereomikroskop Nikon</td><td></td><td>SMZ745</td><td>Stereomikroskop</td></tr><tr><td>Laser Doppler</td><td>Moor Instrument</td><td>moorVMS-LDF</td><td>Laser Doppler</td></tr><tr><td>Anästhesie Tischhalterung mit N2O& O2 Durchflussmesser-System</td><td>Harvard Appratus</td><td>34-1352</td><td>Anästhesie-Tischhalterung mit N2O& O2 Flowmeter System</td></tr><tr><td>Homöothermisches Überwachungssystem</td><td>Harvard Appratus</td><td>55-7020</td><td>Homöothermisches Überwachungssystem</td></tr><tr><td></td><td>Digitalkamera Canon</td><td>Eos-M2</td><td>Digitalkamera</td></tr><tr><td>Kryostat</td><td>Leica</td><td>CM3050S</td><td>Kryostat</td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Carl Zeiss</td><td>Zeiss Axio</td><td>Mikroskop</td></tr><tr><td>Datenanalyse</td><td>Systat Software Inc.</td><td>SigmaPlot Version 12</td><td>Datenanalyse</td></tr><tr><td>Datenanalyse</td><td>NIH Bild</td><td>BildJ</td><td>Datenanalyse</td></tr><tr><td>Mausdiät</td><td>Doo Yeol Biotech</td><td>Standard Nagetierfutter</td><td>Mausdiät</td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>JOONGWAE</td><td>A02104781</td><td>Isofluran</td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>TROIKAA</td><td>ISOTROIKA 100</td><td>Isofluran</td></tr><tr><td>Seidennaht (4-0 Schwarze Seide)&nbsp;</td><td>AILEE</td><td>SK47510</td><td>Seidennaht (4-0 Schwarze Seide)&nbsp;</td></tr><tr><td>Seidennaht (3-0 Weiße Seide)&nbsp;</td><td>Baekjae</td><td>57</td><td>Seidennaht (3-0 Weiße Seide)&nbsp;</td></tr><tr><td>Nylon-Naht (8-0 monofil)&nbsp;</td><td>AILEE</td><td>NB825</td><td>Nylon Naht (8-0 monofil)&nbsp;</td></tr><tr><td>2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC)</td><td>Sigma</td><td>T8877-25G</td><td>2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC)</td></tr><tr><td>Formalin (Formaldehydlösung)</td><td>JUNSEI</td><td>69360-1263 20KG</td><td>Formalin (Formaldehydlösung)</td></tr><tr><td>Hämatoxylin (Harris Hämatoxylin)</td><td>YD Diagnostik</td><td>EasyStain</td><td>Hämatoxylin (Harris Hämatoxylin)</td></tr><tr><td>Eosin (1% Eosin Y-Lösung)</td><td>MUTO PURE CHEMICALS</td><td>3200-2</td><td>Eosin (1% Eosin Y-Lösung)</td></tr><tr><td>Cresylviolett (Acetat)</td><td>Sigma</td><td>C5042-10G</td><td>Cresylviolett (Acetat)</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148-1KG</td><td>Paraformaldehyd&nbsp;</td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>JUNSEI</td><td>31365-0350 1KG</td><td>Saccharose</td></tr><tr><td>Verbindung mit optimaler Schnitttemperatur (OCT)</td><td>Scigen</td><td>4583</td><td>Verbindung mit optimaler Schnitttemperatur (OCT)</td></tr><tr><td></td><td>Trennmesser Fine Science Tools</td><td>10055-12</td><td>Trennmesser</td></tr><tr><td>#4 Pinzette</td><td>Fine Science Tools</td><td>11241-30</td><td>#4</td></tr> <tr><td>Pinzette #5 Pinzette</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td>#5 Pinzette</td></tr><tr><td>#6 Pinzette</td><td>Fine Science Tools</td><td>11260-20</td><td>#6 Pinzette</td></tr><tr><td>#7 Feine Pinzette</td><td>Fine Science Tools</td><td>11274-20</td><td>#7 Feine Pinzette</td></tr><tr><td>Chirurgische Schere</td><td>Fine Science Tools</td><td>14001-12</td><td>Chirurgische Schere</td></tr><tr><td>Extra feine Bonn Schere</td><td>Fine Science Tools</td><td>14084-08</td><td>Extra feine Bonn Schere</td></tr><tr><td>Moria Pascheff-Wolff Feder Schere</td><td>Fine Science Tools</td><td>15371-92</td><td>Moria Pascheff-Wolff Federschere</td></tr><tr><td>Gefäßdilatationszange</td><td>Fine Science Tools</td><td>18153-11</td><td>Gefäßdilatationszange</td></tr></tbody></table>

bewertung neuroprotektive wirkung glycyrrhizae radix et rhizoma extrahieren mit einer vorübergehenden mittlere zerebrale arterie okklusion maus-modell

Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model

Ischämie Reperfusion des zerebralen Blutflusses nach einem Schlaganfall gefolgt führt zu den Tod von Nervenzellen und Verlust von Gehirngewebe. Die am häufigsten verwendete Tiermodell zur Erforschung von Schlaganfall ist das mittlere zerebrale Arterie Okklusion (MCAO) Modell. Frühere Studien haben verschiedene Infarkt Größen berichtet, auch wenn die gleichen experimentellen Tierarten unter ähnlichen Bedingungen der MCAO verwendet wurde. Daher entwickelten wir eine verbesserte experimentelle Methode um diese Diskrepanz zu beheben. Mäuse wurden MCAO mit einem Filament als Okklusion Material imitieren menschlichen Schlaganfall Bedingungen unterworfen und Filament Dicke wurde optimiert, um mehr reproduzierbare Infarkt Volumen zu schaffen. Mäuse mit einem Methanol behandelten Auszug aus Glycyrrhizae Radix et Rhizom (GRex) nach Schlaganfall Induktion zeigte eine deutlich verminderte totale Infarkt Volumen und erhöhte Anzahl der Überlebenden Zellen im Vergleich zu den unbehandelten Kontrollgruppe. Das experimentelles Protokoll erfolgreich geändert und reproduzierbar demonstriert die wohltuende Wirkung von GRex auf ischämischen Schlaganfall.

Im Bereich Schein betrieben "normal" ist kein Hirninfarkt beobachtet, während in der Kontrollgruppe eine relativ breite Palette von Schadstellen beobachtet wird. Bei den Mäusen wird verabreicht 300 mg/kg GRex in der MCAO-Model-Gruppe, eine statistisch signifikante Reduktion im beschädigten Bereich (Abbildung 2) beobachtet.
Die histologischen Veränderungen sind durch ischämische Gehirn Abschnitte mit...

In dieser Studie modifizieren wir eine vorhandene experimentellen Methode um mehr reproduzierbare Ergebnisse zu erhalten, durch die Schaffung einer mittleren zerebralen Arterie Okklusion (MCAO) Maus-Modell. Orale Verabreichung von Glycyrrhizae Radix et Rhizom (GR)-Methanol-Extrakt (GRex) nach Schlaganfall Induktion deutlich zurückgegangen insgesamt Infarkt Volumen im Vergleich zu den unbehandelten Kontrollgruppe.

Bewertung neuroprotektive Wirkung Glycyrrhizae Radix et Rhizoma extrahieren mit einer vorübergehenden mittlere zerebrale Arterie Okklusion Maus-Modell

Ischemia followed by reperfusion of cerebral blood flow after a stroke leads to the death of nerve cells and loss of brain tissue. The most commonly used ...

Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen in der Neurowissenschaft und traditionellen oralen Medizin Forschungsfelder über Screening für neuroprotektive natürliche Verbindungen relevant für das Modell zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass die höhere Produzierbarkeit des Infektionsvolumens in Übereinstimmung mit ischämischer Timing-Dosis ist. Die visuelle Demonstration dieser Methode ist von entscheidender Bedeutung, da es typisch ist, ein sehr dünnes Gerät mit einem sterilen Mikroskop in das Original, die mittlere Kleinhirnarterie, einzufügen.Demonstriert wird das Verfahren von Se-Eun Lee, einer Klasse, die in meinem Labor studiert. Um den Glycyrrhizae Radix et Rhizome Extrakt, oder GRex vorzubereiten, fügen Sie zuerst 200-Gramm Glycyrrhizae Radix et Rhizome, oder GR, zu zwei LiterMethanol für eine fünftägige Inkubation bei Raumtemperatur hinzu. Am Ende der Inkubation die Lösung durch 0,26 Millimeter dickes Filterpapier mit einer Porengröße von fünf Mikrometern abseihen.Fügen Sie den GR-Rückstand in einen Liter frisches Methanol ein und filtern Sie die Lösung erneut. Kombinieren Sie die beiden Filtrate und belasten Sie sie durch ein neues Stück Filterpapier. Ko

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A. cerebri media (MCA) Ligation ist eine Technik, fokaler zerebraler Ischämie im Tiermodell zu studieren. Bei dieser Methode ist die mittlere Hirnarterie durch Kraniotomie freigelegt und ligiert durch Kauterisation. Diese Methode liefert gut reproduzierbare Infarktvolumen und erhöhte postoperative Überlebensrate im Vergleich zu anderen Methoden zur Verfügung.

Die Anwendung des dauerhaften mittleren Hirnarterie Ligation in der Maus

 Bewertung der neuroprotektiven Effekte der sauren Postkonditionierung in einem Mausmodell der zerebralen Ischämie

Quelle: Lee, S. E., et al. Bewertung der neuroprotektiven Wirkung von Glycyrrhizae Radix et Rhizoma-Extrakt unter Verwendung eines Mausmodells mit transientem Verschluss der mittleren Hirnarterie. J. Vis. Exp. (2018)Dieses Video zeigt das Verfahren zur Beurteilung der neuroprotektiven Wirkung einer Testsubstanz in einem Mausmodell mit Verschluss der mittleren Hirnarterie. Die Verbindung dringt in das Gehirn ein, verhindert den neuronalen Tod und reduziert das Infarktvolumen, was ihre...

Bewertung der neuroprotektiven Wirkung einer Testsubstanz in einem Mausmodell für einen Verschluss der mittleren Hirnarterie

Dieses Protokoll beschreibt die wiederholte hypoxische Präkonditionierung oder kurze Exposition gegenüber systemischer Hypoxie, die das Infarktvolumen und die Störung der Blut-Hirn-Schranke nach einem vorübergehenden Verschluss der mittleren Hirnarterie bei Mäusen reduziert. Es wird auch die duale Quantifizierung des Infarktvolumens und der Störung der Blut-Hirn-Schranke nach einem Schlaganfall beschrieben, um die Wirksamkeit des neurovaskulären Schutzes zu bewerten.

Die Quantifizierung der neurovaskulären Schutz Nach Repetitive hypoxische Präkonditionierung und Transient mittleren Hirnarterie Occlusion in Mice

Um die Pathophysiologie des Schlaganfalls zu verstehen, ist es wichtig, zuverlässige Modelle zu verwenden. Dieses Papier wird eine der am häufigsten verwendeten Taktmodelle bei Mäusen beschreiben, die Arteria cerebri media Okklusion (MCAo) Modell genannt (auch bezeichnet als die intraluminale Faden oder Naht Modell) mit Reperfusion.

Chirurgische Ansatz für Arteria cerebri media Occlusion und Reperfusion fokaler zerebraler Ischämie bei Mäusen

Chirurgische Verschluss eines distalen Arteria cerebri media Zweig (MCAo) ist ein häufig verwendetes Modell in experimentellen Schlaganfallforschung. Diese Handschrift beschreibt die grundlegende Technik der Dauer MCAo, mit der Einfügung eines seitlichen Schädelfenster kombiniert werden, die die Möglichkeit für eine Längsintravitalmikroskopie in Mäusen bietet.

Lateral Chronic Cranial Fenster Vorbereitung Ermöglicht In Vivo Beobachtung Nach Artery Occlusion Distal cerebri bei Mäusen

Wir beschreiben ein Mausmodell für einen Schlaganfall, der durch den Verschluss der mittleren Hirnarterie mit einer silikonbeschichteten Naht induziert wird. Das Protokoll kann angewendet werden, um einen dauerhaften Verschluss oder eine vorübergehende Ischämie mit anschließender Reperfusion zu induzieren.

Die Induktion von ischämischem Schlaganfall und Ischämie-Reperfusion bei Mäusen die Mittel Artery Occlusion Technik und Visualisierung von Infarktbereich verwenden

Hier beschreiben wir ein Mausmodell der retinalen Ischämie durch vorübergehende bilaterale gemeinsame Karotisarterienverschluss mit einfachen Nähten und einer Klemme. Dieses Modell kann nützlich sein, um die pathologischen Mechanismen der retinalen Ischämie zu verstehen, die durch kardiovaskuläre Anomalien verursacht wird.

Ein murines Modell der ischämischen Netzhautverletzung induziert durch transiente bilaterale gemeinsame Carotis ArterieNverschluss

Dieses Protokoll demonstriert ein einzigartiges Mausschlagmodell mit einem mittelgroßen Infarkt und einer ausgezeichneten Überlebensrate. Dieses Modell ermöglicht es präklinischen Schlaganfallforschern, die Dauer der Ischämie zu verlängern, gealterte Mäuse zu verwenden und langfristige funktionelle Ergebnisse zu bewerten.

Ein modifiziertes transkranielles Modell für den Verschluss der mittleren Hirnarterie zur Untersuchung von Schlaganfallergebnissen bei gealterten Mäusen

In dieser Arbeit stellen wir ein Protokoll zur Etablierung eines distalen Modells für einen Verschluss der mittleren Hirnarterie (dMCAO) durch transkranielle Elektrokoagulation bei C57BL/6J-Mäusen vor und bewerten das anschließende neurologische Verhalten und die histopathologischen Merkmale.

Induktion eines akuten ischämischen Schlaganfalls bei Mäusen mit der Technik des distalen Mittelarterienverschlusses

Erfahren Sie die Bewertung neuroprotektiver Wirkungen mit einem modifizierten MCAO-Mausmodell. Die orale Gabe von Glycyrrhizae Radix et Rhizoma-Extrakt reduziert signifikant das Infarktvolumen nach Schlaganfall.

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