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DOI: 10.3791/58472-v
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This article presents a method for producing large amounts of recombinant RNA in Escherichia coli using a chimeric RNA scaffold. The circular RNA produced facilitates purification to homogeneity, making it suitable for various applications.
Hier präsentieren wir ein Protokoll, um produzieren große Mengen an rekombinanten RNA in Escherichia coli Co zum Ausdruck bringen, eine Chimäre RNA, die die RNA in ein Viroid-Gerüst und eine Pflanze enthält tRNA-Ligase. Das Hauptprodukt ist ein kreisförmigen Molekül, das erleichtert die Reinigung zur Homogenität.
Diese Methode kann dazu beitragen, große Mengen an rekombinanten RNAs zu produzieren, die für die Anwendung in der Forschung oder in der Industrie von Interesse sind. Der Hauptvorteil ist, dass rekombinante RNA in Escherichia coli in einem billigen Verfahren produziert wird, das leicht skaliert werden kann. Wichtig ist, dass die RNA auf einem kreisförmigen RNA-Gerüst produziert wird, was die Reinigung zur Homogenität erleichtert.
Im Gegensatz zu DNA oder Proteinen werden RNAs von Interesse nicht leicht in großen Mengen in biofaktorischen Systemen, einer solchen Escherichia coli-Kultur, produziert. Unsere Methode basiert auf der Koexpression der RNA von Interesse, die in ein hochstabiles kreisförmiges Gerüst eingefügt wird, und auf einer Ligase, die die RNA-Zirkularisierung vermittelt. Das kreisförmige RNA-Gerüst leitet sich von einem patentierten Viroid ab.
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