Name: Unterdrückung des multiplen Myeloms Zellwachstum In Vivo durch Single-Wall Carbon Nanotube (SWCNT)-MALAT1 Antisense Oligos geliefert (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-12-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 24 s
Description: Erfahren Sie eine Methode zur Oligonukleotid-Lieferung mit Single-Wall Carbon Nanotubes für die Behandlung von Multiplem Myelom. Diese Technik ermöglicht effiziente in vivo Wirkstoffabgabe.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Die Autoren der Lerner Forschungsinstitut Proteomik, genomische, und bildgebenden Kerne für ihre Hilfe und Unterstützung danken. Finanzierung: Diese Arbeit wurde von NIH/NCI Stipendium R00 CA172292 (J.J.Z.) und Startkapital (zu J.J.Z.) und die klinische und translationale Wissenschaft Collaborative (CTSC) der Case Western Reserve University Core Auslastung Pilot Grant (zu J.J.Z.) finanziell unterstützt. Dabei verwendet der Leica SP8 confocal Mikroskop, das gekauft wurde, mit finanzieller Unterstützung von nationale Institute der Gesundheit SIG Grant 1S10OD019972-01.

Alle Experimente mit Tieren wurden vorab von der Cleveland Clinic IACUC (institutionelle Animal Care und Use Committee) genehmigt.
1. Synthese funktionalisierter SWCNTs
<ol><li>Mischen Sie 1 mg SWCNTs, 5 mg DSPE-PEG2000-Amin und 5 mL sterilisiert Nuklease-freies Wasser in ein Glas funkeln Fläschchen (20 mL). Schütteln Sie es gut auf alle Reagenzien vollständig auflösen.</li>
	<li>Beschallen Sie das Fläschchen in einem Wasser-Bad-Sonikator einer Sendeleistung von 40 Watt für 1 h bei Raumtemperatur (RT, 20 min x 3, wechseln Sie das Wasser alle 20 min um eine Überhitzung zu vermeiden). Dann, bei 24.000 X g für 6 h Zentrifugieren Sie und sammeln Sie die überstehende Lösung. Diese funktionale SWCNT Lösung kann für 2 Monate bei 4 ° C aufbewahrt werden.</li>
	<li>Hinzugeben Sie 1 mL SWCNT Lösung aus Schritt 1.2 auf einem 100 kDa MWCO zentrifugale Filter Gerät, gefolgt von 4 mL sterilisiert Nuklease-freies Wasser. Zentrifuge für 10 min bei 4.000 X g bei RT, zusätzliche DSPE-PEG2000-Amin zu entfernen. Wiederholen Sie den Zusatz von 4 mL Wasser und der Zentrifugierung 5 X. Mehr als 0,5 mL der übrig gebliebenen SWCNT Lösung verbleibt im Filter nach jedem Zentrifugation.</li>
	<li>Messen der Konzentration der SWCNT Lösung übrig gebliebenen im Filter ein UV/VIS-Spektrometer mit 808 nm nach dem letzten waschen. Die letztendliche Konzentration ist in der Regel ca. 50 mg/L (berechnet nach der Methode von Kam Et Al.18entwickelt). Hinweis: Sicherstellen Sie, dass DSPE-PEG-funktionalisiert SWCNTs wasserlöslich nach Schritt 1.4 sind und sind in verschiedenen biologischen Lösungen ohne sichtbare Aggregation nach ein paar Wochen stabil.</li>
</ol>2. Konjugation von Anti-MALAT1 Gapmer DNA flankiert von 2'-O modifizierte RNAs an funktionalisierten SWCNT
<ol><li>Fügen Sie 0,5 mg Sulfo-LC-SPDP in 450 µL DSPE-PEG2000-Amin SWCNT funktionalisiert. Fügen Sie 50 µL 10 X PBS und dann 2 h bei RT inkubieren</li>
	<li>Um zusätzliche Sulfo-LC-SPDP zu entfernen, fügen Sie die Reaktion der Schritt 2.1 auf einem 100 kDa MWCO zentrifugale Filter Gerät, gefolgt von 4 mL Nuklease-freies Wasser. Zentrifugieren Sie 5 X für 10 min bei 4.000 X g bei RT Repeat Zugabe von 4 mL Wasser und der Zentrifugierung.</li>
	<li>Fügen Sie 200 nM Thiol-modifizierten Anti-MALAT1-Cy3 Gapmer DNA in 1,5 mL der kommerziellen DVB-t-Lösung und inkubieren Sie 90 min bei RT Purify das Produkt mit einer NAP-5 Spalte, nach der Hersteller-Protokolls. Eluieren Anti-MALAT1-Cy3 mit 500 µL sterilisierte Nuklease-frei 1 x PBS. Hinweis: Die funktionalisierten SWCNT speicherbar mit zusätzlichen DVB-t, das Disulfid Anleihen bei der Lagerung von Thiolated Anti-MALAT1 Gapmer DNA gebildet Spalten könnte. Die zusätzlichen DVB-t kann durch aNAP-5 Spalte vor Konjugation mit SWCNT entfernt werden.</li>
	<li>Die Sulfo-LC-SPDP-behandelten DSPE-PEG2000-Amin SWCNT Lösung bleibt im Filter sammeln und mit 500 µL Anti-MALAT1-Cy3 Lösung verdünnen. Inkubieren Sie es dann bei 4 ° C für 24 h. 3 Wochen kann die konjugierte SWCNT-Anti-MALAT1 bei 4 ° C aufbewahrt werden. Nach dem gleichen Verfahren kann die konjugierte SWCNT mit Scramble antisense Oligo synthetisiert und als SWCNT-Kontrolle verwendet werden.</li>
</ol>(3) Tail Vene Injektion von SWCNT-Anti-MALAT1
<ol><li>
Ein MM disseminierter Mausmodell zu generieren.
	<ol>
<li>Um die besten Ergebnisse des Vergleichs zu erreichen, ordnen Sie nach dem Zufallsprinzip 14 NOD. CB17-Prkdcscid/J Mäusen (8 Wochen alt) in Test- oder Kontrolle Gruppen (sieben in jeder Gruppe) mit dem gleichen Verhältnis Männer/Frauen.</li>
		<li>Reinigen Sie die Betrieb-Bank und sterilisieren sie mit 70 % Alkohol.</li>
		<li>Verwenden Sie eine Wärmelampe, die Maus, um das Heck Vene erscheinen helfen warm. Die Maus richtig mit einer Rute Injektion Restrainer zurückhalten.</li>
		<li>5 x 106 MM.1S-Luc-mCherry Zellen in 50 µL PBS durch die Rute Vene ohne Betäubung zu injizieren. Drücken Sie die Einstichstelle mit einem Alkoholtupfer für 30 S. Mark der injizierten Maus und schicken Sie es an einem sauberen Käfig.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Beginnen Sie die Behandlung am 7. Tag nach der Injektion MM.1S Zelle.
	<ol>
<li>50 µL PBS mit SWCNT-Anti-MALAT1 in die Rute Vene der Maus zu injizieren. Verwenden Sie PBS, SWCNT-Steuerelement als Steuerelement enthält.</li>
		<li>Drücken Sie die Einstichstelle mit einem Alkoholtupfer für 30 s.</li>
		<li>Beachten Sie die lokale Blutung auf das Heck und das allgemeine Verhalten der Maus für 1 min, und dann zu einem sauberen Käfig zurückkehren. Beobachten Sie alle eingespritzten Mäuse wieder vor der Rückkehr des Käfigs in das Rack, um sicherzustellen, dass die Injektionen gut vertragen werden.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Wiederholen Sie die Injektion alle 7 Tage bis zur Beendigung des Experiments.
	<ol>
<li>Das Experiment zu beenden, wenn die allgemeine Gesundheit der Maus verschlechtert: als nicht essen oder trinken, das Erscheinungsbild der blasse Pfoten, eine subkutane Blutung, Kurzatmigkeit, verringerte Aktivität, eine Lähmung der unteren Gliedmaßen und/oder eine berührbare Masse in die Bauch wird beobachtet.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Bewertung der Fortschreiten der Erkrankung
<ol><li>Bewerten Sie den allgemeinen Status der Mäuse jeden Tag nach der Injektion MM.1S-Luc-mCherry Zelle. Achten Sie besonders wenn die Mäuse entwickeln lähmt der unteren Extremitäten.</li>
	<li>
Bewerten Sie das Tumorwachstum mit einer in-vivo imaging-System 1 x in der Woche vor der Injektion SWCNT-Anti-MALAT1.
	<ol>
<li>Bereiten Sie frische 15 mg/mL D-Luciferin mit 1 X PBS.</li>
		<li>Die Mäuse mit einer Isofluran-Verdampfer (3 – 5 % für die Induktion und 1 – 3 % für die Wartung, abhängig vom Status der Mäuse) zu betäuben.</li>
		<li>150 mg/kg D-Luciferin in jeder Maus intraperitoneale Injektion, 5 min vor Bildgebung; dann Bild die Mäuse in Bauchlage mit einem Spektrum imaging-System.</li>
		<li>Sammeln Sie aufeinander folgenden Bildern der Mäuse alle 2 min bis Lumineszenz Sättigung erreicht ist. Stellen Sie die Intervallzeit entsprechend dem D-Luciferin Aufnahme/Signal.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Verwenden Sie CO2 , die Mäuse zu opfern, die Beendigung des Experiments angelangt ist.</li>
	<li>
Da es ein MM verbreiteten Modell handelt, verarbeiten Sie die Mäuse wie folgt.
	<ol>
<li>Wiegen Sie die Maus vor der Präparation.</li>
		<li>Peripheren Blut aus dem Herzen für ein komplettes Blutbild (CBC)-Assay durchgeführt durch eine Blutzelle Zähler Maschine zu sammeln. Die Anzahl der weißen Blutkörperchen und rote Blutkörperchen sowie das Verhältnis von Lymphozyten, sind die primären Indizes.</li>
		<li>Isolieren Sie die Milz zu und wiegen Sie es. Berechnen Sie das Verhältnis der Milz/Körpergewicht; Ansicht > 0,5 % als Erweiterung der Milz.</li>
		<li>Das Gewebe von Knochenmark, Lymphknoten, Milz, Nieren und das Gewebe mit sichtbaren Metastasen zu sammeln.</li>
		<li>Sammeln Sie die Wirbelsäule, wenn die Maus eine Lähmung der unteren Gliedmaßen entwickelt.</li>
		<li>RNA und Proteine aus dem Knochenmarkproben zu extrahieren.</li>
		<li>Beheben Sie alle restlichen Gewebe in Formalin.</li>
		<li>Tauchen Sie für Entkalkung die Knochenproben in 0,25 M EDTA-Lösung (pH 8,0) für 5 Tage nach 24 Stunden nach der Fixierung.</li>
		<li>Tauchen Sie alle Proben in 75 % Alkohol für langfristige Lagerung.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Vergleichen Sie die Signalstärke der Luciferase zu den gleichen Zeitpunkten in zwei Gruppen. Zeichnen Sie aus beiden Gruppen die Opfer-Termine für jede Maus und berechnen Sie Survival-Kurven der beiden Gruppen mit Software zu. Hinweis: Alle Verfahren sind in Abbildung 1zusammengefasst.</li>
</ol>

<ol><li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNase+non-sensitive+and+endocytosis+independent+siRNA+delivery+system%3A+delivery+of+siRNA+into+tumor+cells+and+high+efficiency+induction+of+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">RNase non-sensitive and endocytosis independent siRNA delivery system: delivery of siRNA into tumor cells and high efficiency induction of apoptosis.</a> Nanoscale. 5 (16), 7256-7264 (2013).</li>
<li>Murakami, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water-dispersed+single-wall+carbon+nanohorns+as+drug+carriers+for+local+cancer+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Water-dispersed single-wall carbon nanohorns as drug carriers for local cancer chemotherapy.</a> Nanomedicine (Lond). 3 (4), 453-463 (2008).</li>
<li>Kam, N. W., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+nanotubes+as+intracellular+protein+transporters%3A+generality+and+biological+functionality%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Carbon nanotubes as intracellular protein transporters: generality and biological functionality.</a> Journal of the American Chemical Society. 127 (16), 6021-6026 (2005).</li>
<li>Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functionalization+of+carbon+nanotubes+via.+cleavable+disulfide+bonds+for+efficient+intracellular+delivery+of+siRNA+and+potent+gene+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Functionalization of carbon nanotubes via. cleavable disulfide bonds for efficient intracellular delivery of siRNA and potent gene silencing.</a> Journal of the American Chemical Society. 127 (36), 12492-12493 (2005).</li>
<li>Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+nanotubes+as+intracellular+transporters+for+proteins+and+DNA%3A+an+investigation+of+the+uptake+mechanism+and+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition+in+English%22%5BJournal%5D)">Carbon nanotubes as intracellular transporters for proteins and DNA: an investigation of the uptake mechanism and pathway.</a> Angewandte Chemie International Edition in English. 45 (4), 577-581 (2006).</li>
<li>Ntziachristos, P., Abdel-Wahab, O., Aifantis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+concepts+of+epigenetic+dysregulation+in+hematological+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Emerging concepts of epigenetic dysregulation in hematological malignancies.</a> Nature Immunology. 17 (9), 1016-1024 (2016).</li>
<li>Evans, J. R., Feng, F. Y., Chinnaiyan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bright+side+of+dark+matter%3A+lncRNAs+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">The bright side of dark matter: lncRNAs in cancer.</a> Journal of Clinical Investigation. 126 (8), 2775-2782 (2016).</li>
<li>Ronchetti, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+lncRNA+transcriptional+fingerprints+characterize+progressive+stages+of+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Distinct lncRNA transcriptional fingerprints characterize progressive stages of multiple myeloma.</a> Oncotarget. 7 (12), 14814-14830 (2016).</li>
<li>Wong, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+silencing+of+a+long+non-coding+RNA+KIAA0495+in+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer%22%5BJournal%5D)">Epigenetic silencing of a long non-coding RNA KIAA0495 in multiple myeloma.</a> Molecular Cancer. 14, 175(2015).</li>
<li>Schmidt, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+long+noncoding+MALAT-1+RNA+indicates+a+poor+prognosis+in+non-small+cell+lung+cancer+and+induces+migration+and+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+Oncology%22%5BJournal%5D)">The long noncoding MALAT-1 RNA indicates a poor prognosis in non-small cell lung cancer and induces migration and tumor growth.</a> Journal of Thoracic Oncology. 6 (12), 1984-1992 (2011).</li>
<li>Ji, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALAT-1%2C+a+novel+noncoding+RNA%2C+and+thymosin+beta4+predict+metastasis+and+survival+in+early-stage+non-small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">MALAT-1, a novel noncoding RNA, and thymosin beta4 predict metastasis and survival in early-stage non-small cell lung cancer.</a> Oncogene. 22 (39), 8031-8041 (2003).</li>
<li>Luo, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptomic+and+genomic+analysis+of+human+hepatocellular+carcinomas+and+hepatoblastomas%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Transcriptomic and genomic analysis of human hepatocellular carcinomas and hepatoblastomas.</a> Hepatology. 44 (4), 1012-1024 (2006).</li>
<li>Guffanti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transcriptional+sketch+of+a+primary+human+breast+cancer+by+454+deep+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">A transcriptional sketch of a primary human breast cancer by 454 deep sequencing.</a> BMC Genomics. 10, 163(2009).</li>
<li>Cho, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALAT1+long+non-coding+RNA+is+overexpressed+in+multiple+myeloma+and+may+serve+as+a+marker+to+predict+disease+progression%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">MALAT1 long non-coding RNA is overexpressed in multiple myeloma and may serve as a marker to predict disease progression.</a> BMC Cancer. 14, 809(2014).</li>
<li>Handa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+non-coding+RNA+MALAT1+is+an+inducible+stress+response+gene+associated+with+extramedullary+spread+and+poor+prognosis+of+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Haematology%22%5BJournal%5D)">Long non-coding RNA MALAT1 is an inducible stress response gene associated with extramedullary spread and poor prognosis of multiple myeloma.</a> British Journal of Haematology. 179 (3), 449-460 (2017).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+MALAT1%2FPARP1%2FLIG3+complex+induces+DNA+damage+and+apoptosis+in+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Targeting the MALAT1/PARP1/LIG3 complex induces DNA damage and apoptosis in multiple myeloma.</a> Leukemia. , (2018).</li>
<li>Lennox, K. A., Behlke, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+localization+of+long+non-coding+RNAs+affects+silencing+by+RNAi+more+than+by+antisense+oligonucleotides%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">Cellular localization of long non-coding RNAs affects silencing by RNAi more than by antisense oligonucleotides.</a> Nucleic Acids Research. 44 (2), 863-877 (2016).</li>
<li>Kam, N. W., O'Connell, M., Wisdom, J. A., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+nanotubes+as+multifunctional+biological+transporters+and+near-infrared+agents+for+selective+cancer+cell+destruction%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Carbon nanotubes as multifunctional biological transporters and near-infrared agents for selective cancer cell destruction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (33), 11600-11605 (2005).</li>
<li>Zeineldin, R., Al-Haik, M., Hudson, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+polyethylene+glycol+integrity+in+specific+receptor+targeting+of+carbon+nanotubes+to+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">Role of polyethylene glycol integrity in specific receptor targeting of carbon nanotubes to cancer cells.</a> Nano Letters. 9 (2), 751-757 (2009).</li>
<li>Amodio, N., D'Aquila, P., Passarino, G., Tassone, P., Bellizzi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+modifications+in+multiple+myeloma%3A+recent+advances+on+the+role+of+DNA+and+histone+methylation%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Therapeutic+Targets%22%5BJournal%5D)">Epigenetic modifications in multiple myeloma: recent advances on the role of DNA and histone methylation.</a> Expert Opinion on Therapeutic Targets. 21 (1), 91-101 (2017).</li>
<li>Ahmad, N., Haider, S., Jagannathan, S., Anaissie, E., Driscoll, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+theragnostics+for+the+clinical+management+of+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">MicroRNA theragnostics for the clinical management of multiple myeloma.</a> Leukemia. 28 (4), 732-738 (2014).</li>
<li>Amodio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drugging+the+lncRNA+MALAT1+via.+LNA+gapmeR+ASO+inhibits+gene+expression+of+proteasome+subunits+and+triggers+anti-multiple+myeloma+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Drugging the lncRNA MALAT1 via. LNA gapmeR ASO inhibits gene expression of proteasome subunits and triggers anti-multiple myeloma activity.</a> Leukemia. , (2018).</li>
<li>Highleyman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FDA+approves+fomivirsen%2C+famciclovir%2C+and+Thalidomide.+Food+and+Drug+Administration%5BTitle%5D)+AND+%22BETA%22%5BJournal%5D)">FDA approves fomivirsen, famciclovir, and Thalidomide. Food and Drug Administration.</a> BETA. 5, (1998).</li>
<li>Smith, R. J., Hiatt, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+new+drugs+for+homozygous+familial+hypercholesterolemia%3A+managing+benefits+and+risks+in+a+rare+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Two new drugs for homozygous familial hypercholesterolemia: managing benefits and risks in a rare disorder.</a> JAMA Internal Medicine. 173 (16), 1491-1492 (2013).</li>
<li>Aartsma-Rus, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FDA+Approval+of+Nusinersen+for+Spinal+Muscular+Atrophy+Makes+2016+the+Year+of+Splice+Modulating+Oligonucleotides%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acid+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">FDA Approval of Nusinersen for Spinal Muscular Atrophy Makes 2016 the Year of Splice Modulating Oligonucleotides.</a> Nucleic Acid Therapeutics. 27 (2), 67-69 (2017).</li>
<li>Nelson, S. F., Miceli, M. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28399245">FDA Approval of Eteplirsen for Muscular Dystrophy.</a> The Journal of the American Medical Association. 317 (14), 1480(2017).</li>
<li>Liu, Z., Sun, X., Nakayama-Ratchford, N., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supramolecular+chemistry+on+water-soluble+carbon+nanotubes+for+drug+loading+and+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22American+Chemical+Society+Nano%22%5BJournal%5D)">Supramolecular chemistry on water-soluble carbon nanotubes for drug loading and delivery.</a> American Chemical Society Nano. 1 (1), 50-56 (2007).</li>
<li>Ali-Boucetta, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiwalled+carbon+nanotube-doxorubicin+supramolecular+complexes+for+cancer+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+communications+%28Cambridge%29%22%5BJournal%5D)">Multiwalled carbon nanotube-doxorubicin supramolecular complexes for cancer therapeutics.</a> Chemical communications (Cambridge). (4), 459-461 (2008).</li>
<li>Bianco, A., Kostarelos, K., Partidos, C. D., Prato, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15672140">Biomedical applications of functionalised carbon nanotubes.</a> Chemical communications. (5), Cambridge. 571-577 (2005).</li>
<li>Hadidi, N., Kobarfard, F., Nafissi-Varcheh, N., Aboofazeli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+single-walled+carbon+nanotube+solubility+by+noncovalent+PEGylation+using+experimental+design+methods%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Optimization of single-walled carbon nanotube solubility by noncovalent PEGylation using experimental design methods.</a> International Journal of Nanomedicine. 6, 737-746 (2011).</li>
<li>Padilla-Parra, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+imaging+of+endosome+acidification+and+single+retrovirus+fusion+with+distinct+pools+of+early+endosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Quantitative imaging of endosome acidification and single retrovirus fusion with distinct pools of early endosomes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (43), 17627-17632 (2012).</li>
<li>Wu, H., Zhu, L., Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pH-sensitive+poly%28histidine%29-PEG%2FDSPE-PEG+co-polymer+micelles+for+cytosolic+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">pH-sensitive poly(histidine)-PEG/DSPE-PEG co-polymer micelles for cytosolic drug delivery.</a> Biomaterials. 34 (4), 1213-1222 (2013).</li>
<li>Oishi, M., Nagatsugi, F., Sasaki, S., Nagasaki, Y., Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smart+polyion+complex+micelles+for+targeted+intracellular+delivery+of+PEGylated+antisense+oligonucleotides+containing+acid-labile+linkages%5BTitle%5D)+AND+%22Chembiochem%22%5BJournal%5D)">Smart polyion complex micelles for targeted intracellular delivery of PEGylated antisense oligonucleotides containing acid-labile linkages.</a> Chembiochem. 6 (4), 718-725 (2005).</li>
<li>Dong, H., Ding, L., Yan, F., Ji, H., Ju, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+polyethylenimine-grafted+graphene+nanoribbon+for+cellular+delivery+of+locked+nucleic+acid+modified+molecular+beacon+for+recognition+of+microRNA%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The use of polyethylenimine-grafted graphene nanoribbon for cellular delivery of locked nucleic acid modified molecular beacon for recognition of microRNA.</a> Biomaterials. 32 (15), 3875-3882 (2011).</li>
<li>Arunachalam, B., Phan, U. T., Geuze, H. J., Cresswell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+reduction+of+disulfide+bonds+in+lysosomes%3A+characterization+of+a+gamma-interferon-inducible+lysosomal+thiol+reductase+%28GILT%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Enzymatic reduction of disulfide bonds in lysosomes: characterization of a gamma-interferon-inducible lysosomal thiol reductase (GILT).</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (2), 745-750 (2000).</li>
<li>Lelimousin, M., Sansom, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+perturbation+by+carbon+nanotube+insertion%3A+pathways+to+internalization%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Membrane perturbation by carbon nanotube insertion: pathways to internalization.</a> Small. 9 (21), 3639-3646 (2013).</li>
<li>Thomas, M., Enciso, M., Hilder, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insertion+mechanism+and+stability+of+boron+nitride+nanotubes+in+lipid+bilayers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Chem+B%22%5BJournal%5D)">Insertion mechanism and stability of boron nitride nanotubes in lipid bilayers.</a> J Phys Chem B. 119 (15), 4929-4936 (2015).</li>
<li>Jin, H., Heller, D. A., Strano, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-particle+tracking+of+endocytosis+and+exocytosis+of+single-walled+carbon+nanotubes+in+NIH-3T3+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">Single-particle tracking of endocytosis and exocytosis of single-walled carbon nanotubes in NIH-3T3 cells.</a> Nano Letters. 8 (6), 1577-1585 (2008).</li>
<li>Jin, H., Heller, D. A., Sharma, R., Strano, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size-dependent+cellular+uptake+and+expulsion+of+single-walled+carbon+nanotubes%3A+single+particle+tracking+and+a+generic+uptake+model+for+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22American+Chemical+Society+Nano%22%5BJournal%5D)">Size-dependent cellular uptake and expulsion of single-walled carbon nanotubes: single particle tracking and a generic uptake model for nanoparticles.</a> American Chemical Society Nano. 3 (1), 149-158 (2009).</li>
<li>Ruggiero, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paradoxical+glomerular+filtration+of+carbon+nanotubes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Paradoxical glomerular filtration of carbon nanotubes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (27), 12369-12374 (2010).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Beweis hat gezeigt, dass bei der Regulierung der zahlreiche physiologische und pathophysiologische Prozesse im Krebs, einschließlich MM7,8,9LncRNAs teilnehmen; Sie haben das Potenzial für die Krebsbehandlung, ausgerichtet werden, die von antisense Oligonukleotide20,21,22realisiert werden können. Die US Food and Drug Administration (FDA)...

Die SWCNT ist eine neuartige Nanomaterialien, die verschiedenen Arten von Drogen, wie Proteine, kleine Moleküle und Nukleinsäuren, stabil und effizient mit ideale Verträglichkeit und minimale Toxizität in Vitro1 und in-vivo2liefern kann. Funktionalisierten SWCNT kann hat große Biokompatibilität und Wasser Löslichkeit, kann als ein Shuttle für kleinere Moleküle verwendet werden, und sie dringen in die Zellmembran3,4,5.
LncRNAs sind eine Gruppe von RNA (> 200 nt), die aus dem Genom zu mRNA transkribiert werden, aber nicht in Proteine übersetzt werden. Erhöhung der Beweis hat gezeigt, dass LncRNAs in der Regulation der Gene Expression6 beteiligen und engagieren sich in der Initiierung und Progression der meisten Arten von Krebs, einschließlich MM7,8,9. MALAT1 ist ein nuklearer bereichert forensisches Transkript 2 (NEAT2) und einer hoch konservierten LncRNA10. MALAT1 wird zunächst im metastasierten nicht-kleinzelligen Lungenkrebs (NSCLC) Krebs11erkannt, aber hat in zahlreichen Tumoren5,12,13überexprimiert wurden; Es ist eines der höchst exprimierten LncRNAs und korreliert mit einer schlechten Prognose in MM8,14. Die Expression des MALAT1 ist signifikant höher bei tödlichen Kurs extramedulläre MM Patienten im Vergleich zu denen nur als MM15diagnostiziert.
In einer früheren Studie haben wir bestätigt, dass Anti-MALAT1 Oligos robust zu DNA-Schäden und Apoptose in MM16 führen mithilfe von Gapmer DNA antisense Oligonucleotides targeting MALAT1 (Anti-MALAT1) in MM-Küvetten. Die Gapmer DNA besteht aus antisense-DNA und verbunden durch 2'-OMe-RNAs, die MALAT1 Spaltung durch RNase H-Aktivität nach der Bindung17veranlassen könnte. Die in-vivo Transporteffizienz antisense Oligos begrenzt noch seiner klinischen Verwendung.
Um die Lieferung zu testen SWCNT-Effekt für Anti-MALAT1 Gapmer Oligos, die Anti-MALAT1-Gapmer, die DNA zu DSPE-PEG2000-Amin konjugiert wird funktionalisiert SWCNT. SWCNT-Anti-MALAT1 wird in einem MM disseminierter Mausmodell dann intravenös injiziert; eine markante Hemmung wird nach vier Behandlungen beobachtet.

<table><tbody><tr><td>SWCNTs</td><td>Millipore-Sigma</td><td>704113</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-PEG2000-Amine</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>880128</td><td></td></tr><tr><td>Bad-Ultraschallgerät</td><td>VWR</td><td>97043-992</td><td></td></tr> 4 <tr><td>mL Zentrifugalfilter</td><td>Millipore-Sigma</td><td>Z740208-8EA</td><td></td></tr><tr><td>UV/VIS-Spektrometer</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>accuSkan GO UV/Vis Mikrotiterplatten-Spektralphotometer</td><td>Extinktionskoeffizient von 0,0465 L/mg/cm bei 808 nm</td></tr><tr><td>Sulfo-LC-SPDP</td><td>ProteoChem</td><td>c1118</td><td></td></tr><tr><td>DTT-Lösung</td><td>Millipore-Sigma</td><td>43815</td><td></td></tr><tr><td>NAP-5 Säule</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0853-01</td><td></td></tr><tr><td>In-vivo-Bildgebungssystem</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NOD. CB17-Prkdcscid/J Mäuse</td><td>Charles River Labor</td><td>250</td><td></td></tr><tr><td>Durchflusszytometer</td><td>Becton Dickinso</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine</td><td>Invitrogen</td><td>11668019</td><td>Lipofectamine2000</td></tr><tr><td>Fetales Rinderserum (FBS)</td><td>Invitrogen</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>RMPI-1640 Medium</td><td>Invitrogen</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>MALAT1-QF:</td><td>synthetisiert durch IDT Unternehmen</td><td></td><td>5' - GTTCTGATCCCGCTGCTATT - 3'</td></tr><tr><td>MALAT1-QR:</td> <td>synthetisiert von IDT Company</td><td></td><td>5' - TCCTCAACACTCAGCCTTTATC - 3'</td></tr><tr><td>GAPDH-QF:</td> <td>synthetisiert von IDT Company</td><td></td><td>5' - CAAGAGCACAAGAGGAAGAGAG - 3'</td></tr><tr><td>GAPDH-QR:</td> <td>synthetisiert von IDT Company</td><td></td><td>5' - CTACATGGCAACTGTGAGGAG - 3'</td></tr><tr><td>Quantitative PCR mit SYBR Green PCR Mastermix</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A25780</td><td></td></tr><tr><td>RevertAid First-Stand cDNA-Synthesekit</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>K1621</td><td></td></tr><tr><td>anti-MALAT1</td><td>synthetisiert von IDT Company</td><td></td><td>5'-mC*mG*mA*mA*mA*C*A*T*T *G*G*C*A*C*A*mC*mA*mG*mC*mA-3'</td></tr><tr><td>Cell Viability Assay Kit</td><td>Promega Corporation</td><td>G7570</td><td>CellTiter-GloLumineszierendes Zellviabilitäts-Assay-Kit</td></tr><tr><td>accuSkan GO UV/Vis Mikrotiterplatten-Spektralphotometer</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zentrifugalfilter</td><td>Millipore-Sigma</td><td>UFC910008</td><td></td></tr><tr><td>SPSS Software</td><td>IBM</td><td>Version 24.0</td><td></td></tr><tr><td>D-Luciferin</td><td>Millipore-Sigma</td><td>Nr. L9504</td><td></td></tr></tbody></table>

unterdrückung des multiplen myeloms zellwachstum in vivo durch single-wall carbon nanotube (swcnt)-malat1 antisense oligos geliefert

Repression of Multiple Myeloma Cell Growth In Vivo by Single-wall Carbon Nanotube (SWCNT)-delivered MALAT1 Antisense Oligos

Die einwandigen Kohlenstoff-Nanoröhrchen (SWCNT) ist eine neue Art von Nanopartikel, die verwendet wurde, um mehrere Arten von Drogen in Zellen, wie Proteine, Oligonukleotide und synthetischen kleinen Molekül-Drogen zu liefern. Die SWCNT verfügt über anpassbare Dimensionen, oberflächliche großflächig und kann flexibel mit Drogen durch verschiedene Modifikationen an seiner Oberfläche binden; Daher ist es ein ideales System, Medikamente in die Zellen zu transportieren. Lange forensisches RNAs (LncRNAs) sind eine Gruppe von mehr als 200 nichtcodierender RNA nt, die nicht in Protein übersetzt werden, sondern spielen eine wichtige Rolle in biologischen und pathophysiologischen Prozessen. Metastasen-assoziierten Lunge Adenokarzinom Transkript 1 (MALAT1) ist eine hoch konservierte LncRNA. Es konnte gezeigt werden, dass höhere MALAT1 die schlechte Prognose der verschiedenen Krebsarten, einschließlich Multiples Myelom (MM) verbunden sind. Wir haben gezeigt, dass MALAT1 DNA-Reparatur und Zelle Tod im MM regelt; So können MALAT1 als ein therapeutisches Ziel für MM betrachtet werden. Die effiziente Bereitstellung von antisense Oligo zu hemmen/Zuschlag MALAT1 in-vivo ist jedoch nach wie vor ein Problem. In dieser Studie wir SWCNT mit PEG-2000 zu ändern und eine Anti-MALAT1-Oligo zu konjugieren, testen die Lieferung dieses mittels in-vitro-injizieren es intravenös in einem verbreiteten MM-Maus-Modell und beobachten eine deutliche Hemmung der MM-Progression, was darauf hindeutet Diese SWCNT ist eine ideale Lieferung-Shuttle für Anti-MALAT1 Gapmer DNA.

Um die Wirkung der Hemmung der Anti-MALAT1 Gapmer DNA in MM zu demonstrieren, wir die Expression von MALAT1 abgerissen und in H929 und MM.1S Zellen verwendet. Achtundvierzig Stunden später wurden Zellen für die Analyse der Knock-down Effizienz und der Status der Apoptose in Zellen mit Anti-MALAT1 Gapmer oder Kontrolle DNA transfiziert. qRT-PCR-Ergebnisse zeigten, dass der MALAT1 Ausdruck in H929 und MM.1S Zellen effizient Anti-MALAT1 Gapmer DNA abgerissen (Abb. 2</str...

Dieses Manuskript beschreibt die Synthese von einem einwandigen Kohlenstoff-Nanoröhrchen (SWCNT)-konjugiert MALAT1 antisense Gapmer DNA-Oligonukleotid (SWCNT-Anti-MALAT1), welche die zuverlässige Zustellung der SWCNT und potente Wirkung des zeigt Anti-MALAT1 in vitro und in vivo. Methoden zur Synthese, Modifikation, Konjugation und Injektion von SWCNT-Anti-MALAT1 werden beschrieben.

Unterdrückung des multiplen Myeloms Zellwachstum In Vivo durch Single-Wall Carbon Nanotube (SWCNT)-MALAT1 Antisense Oligos geliefert

The single-wall carbon nanotube (SWCNT) is a new type of nanoparticle, which has been used to deliver multiple kinds of drugs into cells, such as ...

Die Methode, die wir hier verwenden, kann helfen, Oligonukleotid mit einwandigem Kohlenstoff-Nanorohr zu verpacken, das eine neue Art von Nanopartikeln für die Medikamentenabgabe ist. Der Hauptvorteil dieser Technik ist eine effizientere Abgabe von Oligonukleotid-Medikamenten in Zellen in vivo. Die Implikationen dieser Technik erstrecken sich auf die Forschung multiples Myelom, weil es Nanopartikel eingeführt hat, um die Abgabe von Oligonukleotid-Medikamenten zu verbessern.Durch diese Methode kann Einblick in die Behandlung von multiplem Myelom geben. Es kann auch auf andere Krankheiten angewendet und mit anderen Ladungen konjugiert werden, wie Proteine und kleine Moleküle. Mischen Sie zunächst ein Milligramm einwandiges Kohlenstoff-Nanoröhren, fünf Milligramm DSPE-PEG 2000-Amin und fünf Milliliter sterilisiertes Nuklease-freies Wasser in einer 20-Milliliter-Glas-Szintillationsdurchstechflasche.Beschallen Sie die Durchstechflasche in einem Wasserbad-Sonicator bei einem Leistungsniveau von 90 Watt für eine Stunde bei Raumtemperatur. Zentrieren Sie die Durchstechflasche nach der Beschallung sechs Stunden lang mit 24.000 mal g. Dann sammeln Sie die Überstand-Lösung.Fügen Sie einen Milliliter der einwandigen Kohlenstoff-Nanoröhrenlösung zu einem 100-Kilodalton-Molekulargewichts-Cutoff-Zentrifugalfiltergerät hinzu, gefolgt von vier Millilitern sterilisiertem nukleasefreiem Wasser. Zentrifuge für 10 Minuten bei 4.000 mal g bei Raumtemperatur, um den überschüssigen Amin zu entfernen. Fügen Sie 0,5 Milligramm Sulfo-LC-SPDP zu 450 Mikrolitern der amin-funktionalisierten einwandigen Kohlenstoff-Nanoröhre hinzu.Dann 50 Mikroliter 10x PBS hinzufügen und zwei Stunden bei Raumtemperatur inkubieren. Als nächstes fügen Sie das Reaktionsgemisch zu einem 100-Kilodalton-Molekulargewichts-Cutoff-Zentrifugalfiltergerät hinzu, gefolgt von vier Millilitern nukleasefreiem Wasser. Zentrifugieren Sie die Probe für 10 Minuten bei 4.000 mal g bei Raumtemperatur, um den überschüssigen Sulfo-LC-SPDP zu entfernen.Sammeln Sie die Sulfo-LC-SPDP-behandelte Amin-Einwand-Kohlenstoff-Nanoröhrenlösung, die im Filter verbleibt, und verdünnen Sie sie mit 500 Mikrolitern zuvor hergestellter Anti-MALAT1-Cy3-Lösung. Dann inkubieren Sie die Probe bei vier Grad Celsius über Nacht. Um die besten Vergleichsergebnisse zu erzielen, ordnen Sie nach dem Zufallsprinzip 14 Mäuse in Versuchs- oder Kontrollgruppen mit sieben in jeder Gruppe und mit dem gleichen Verhältnis von Mann zu Frau in jeder Gruppe an.Als nächstes reinigen Sie die Operationsbank und sterilisieren Sie sie mit 70% Ethylalkohol. Verwenden Sie eine Heizlampe, um eine der Mäuse zu erwärmen, um die Schwanzvene erscheinen zu helfen. Halten Sie die Maus richtig mit einem Schwanz Injektion Restrainer.Injizieren Sie MM.1S-luc/mCherry-Zellen in 50 Mikroliter PBS durch die Schwanzvene. Drücken Sie die Injektionsstelle mit einem Alkoholtupfer für 30 Sekunden. Markieren Sie dann die injizierte Maus und geben Sie sie in einen sauberen Käfig zurück.Am siebten Tag, nach der MM1S-Zellinjektion, injizieren Sie 50 Mikroliter PBS, die einwandige Kohlenstoff-Nanoröhren anti-MALAT1 enthalten, in die Schwanzvene der Maus. Drücken Sie dann die Injektionsstelle mit einem Alkoholtupfer für 30 Sekunden. Beobachten Sie die lokale Blutung am Schwanz und das allgemeine Verhalten der Maus für eine Minute, und geben Sie sie dann in einen sauberen Käfig zurück.Beobachten Sie alle injizierten Mäuse erneut, bevor Sie den Käfig ins Rack zurückbringen, um sicherzustellen, dass die Injektionen gut vertragen werden. Wägen Sie jede Maus vor der Zerlegung. Sammeln Sie peripheres Blut aus dem Herzen für einen vollständigen Blutbild-Assay, der von einer Blutkörperchen-Zählermaschine durchgeführt wird.Als nächstes sammeln Sie die Gewebe des Knochenmarks, der Milz, des Lymphknotens, der Niere und des Gewebes mit sichtbarer Metastasierung. Extrahieren Sie RNA und Protein aus den Knochenmarkproben. Fixieren Sie alle verbleibenden Gewebe in Formalin.Nach 24 Stunden Fixierung die Knochenproben zur Entkalkung fünf Tage lang in eine 0,5-molar-EDTA-Lösung eintauchen. Dann tauchen Sie alle Proben in 75%Ethylalkohol für die langfristige Lagerung. QRT PCR-Ergebnisse zeigten, dass Anti-MALAT1-GapmeR-DNA die MALAT1-Expression niederschlug und Apoptose in H929- und MM.1S-Zellen signifikant induzierte.Einwandiges Kohlenstoff-Nanorohr-Anti-MALAT1-Cy3 wurde in den Zellkern von MM-Zellen geliefert und unterdrückte den endogenen MALAT1-Spiegel sowohl in H929- als auch mm.1S-Zellen signifikant. Die Lebensfähigkeit der BMEC-1-Zelle hat keinen signifikanten Unterschied nach der Behandlung von einwandigen Kohlenstoff-Nanoröhren-Anti-MALAT1-Cy3 oder Kontrolle bei verschiedenen Dosierungen und Zeitpunkten. Dies deutet darauf hin, dass die Toxizität von einwandigen Kohlenstoff-Nanoröhren anti-MALAT1-Cy3 hat eine begrenzte und akzeptable Toxizität für normale Zellen bei hoher Dosierung.Ein menschliches MM-disseminiertes Mausmodell wurde erstellt, um die Behandlungseffekte von einwandigen Kohlenstoff-Nanoröhren anti-MALAT1 in vivo zu bewerten. Die Luziferonsignale von Mäusen in der einwandigen Kohlenstoff-Nanoröhren-Anti-MALAT1-Behandlungsgruppe waren im Vergleich zur Kontrolle nach 21 Behandlungstagen deutlich niedriger. Aus diesen Ergebnissen wurde geschlossen, dass die einwandige Kohlenstoff-Nanorohr-Anti-MALAT1-Behandlung mittels intravenöser Injektion die Anti-MALAT1-Oligos effektiv an Tumorzellen liefern könnte.Es wurden keine signifikanten Nebenwirkungen der Behandlung beobachtet, was darauf hindeutet, dass einwandige Kohlenstoff-Nanoröhren-Anti-MALAT1-Injektion eine sichere Behandlung für Mäuse ist. Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, sich daran zu erinnern, dass die Zusammensetzung des Zellmoleküls die Lieferung, Effizienz und therapeutische Wirkung der Oligonukleotid-Medikamente beeinflussen wird. Nach diesem Verfahren können andere Methoden wie die Konjugation von Proteinen oder kleinen Molekülen durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen zu beantworten.Wie die Verwendung von einwandigen Kohlenstoff-Nanoröhren, um andere Medikamente zu liefern.

repression-multiple-myeloma-cell-growth-vivo-single-wall-carbon

Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

Humanen multiplen Myelom (MM) Zellen erfordern die Mikroumgebung, die von mesenchymalen Zellen und extrazellulären Matrixkomponenten für das Überleben und die Proliferation. Wir gründeten eine in vivo Hühnerembryo-Modell mit eingepflanzten menschlichen Myelom und mesenchymalen Zellen zu Wirkungen von Krebsmedikamenten auf das Tumorwachstum, Invasion und Angiogenese zu untersuchen.

Einrichtung eines Menschen Multiple Myeloma Xenograftmodell im Huhn, das Tumorwachstum, Invasion und Angiogenese Studieren

Hier beschreiben wir eine Methode der Langzeit-Zeitraffermikroskopie, um einzelne Zellen als Reaktion auf Anti-Krebs-Therapeutika longitudinal zu verfolgen.

Durch den Spiegel: Zeitraffer-Mikroskopie und Longitudinal-Tracking von Einzelzellen Anti-Krebs-Therapeutika zu studieren

Hier beschreiben wir die Lieferung von MicroRNA verwenden ein rekombinantes Adeno-assoziierten Virus Serotyp 9 in einem Mausmodell der neuromuskulären Erkrankungen. Eine einzelne periphere Verabreichung bei Mäusen führte zu nachhaltigen MiRNA Überexpression in Muskel und motorischen Neuronen, bietet eine Möglichkeit, MiRNA Lernfunktion und therapeutische Potenzial in Vivo.

Systemische Lieferung von MicroRNA mit rekombinanten Adeno-assoziierten Virus Serotyp 9 zur Behandlung von neuromuskulärer Erkrankungen bei Nagern

Hier verwenden wir Biolumineszenz, Röntgen und Positronen-Emissions-Tomographie/berechnet Tomographie Bildgebung wie hemmende mTOR-Aktivität zu studieren Auswirkungen des Knochenmarks pfropfte Myelom Tumoren in einem Xenograft-Modell. Dies ermöglicht eine physiologisch relevante, nicht-invasive und multimodalen Analysen der Anti-Myelom-Wirkung von Therapien gezielt Knochenmark pfropfte Myelom Tumoren in Vivo.

Multimodale Biolumineszenz und Positronic-Emissions-Tomographie/Computational Tomographie Bildgebung des multiplen Myeloms Knochenmark Xenotransplantate NOG Mäuse

Dieses Protokoll beschreibt Xenograft- und orthotopische Mausmodelle der menschlichen Schilddrüsentumorigenese als Plattform, um mikroRNA-basierte Inhibitorbehandlungen zu testen. Dieser Ansatz ist ideal, um die Funktion nicht-kodierender RNAs und ihr Potenzial als neue therapeutische Ziele zu untersuchen.

In Vivo Hemmung von MicroRNA zur Verringerung des Tumorwachstums bei Mäusen

MiRNA-Therapeutika haben erhebliches Potenzial bei der Regulierung der Tumorprogression. Hier demonstriert werden analytische Ansätze zur Identifikation der Aktivität einer kombinatorischen MiRNA-Behandlung in der Eindämmung des Zellzyklus und Angiogenese verwendet.

Analyse der kombinatorischen MiRNA Behandlungen zur Regulierung des Zellzyklus und Angiogenese

Diese Arbeit beschreibt die Synthese und Charakterisierung eines pomalidomidbasierten, bifunktionellen Homo-PROTAC als einen neuartigen Ansatz zur Induzieren von Ubiquitination und Abbau des E3 Ubiquitin Ligase Cereblon (CRBN), dem Ziel von Thalidomid-Analogen.

Chemische Inaktivierung des E3 Ubiquitin Ligase Cereblon durch Pomalidomid-basierte Homo-PROTACs

Hier beschreiben wir eine Methode zur Abgabe von Medikamenten an das zentrale Nervensystem der Ratte, indem wir einen Katheter in den lendenintrathekalen Raum der Wirbelsäule implantieren. Wir konzentrieren uns auf die Lieferung von Antisense-Oligonukleotiden, obwohl diese Methode auch für die Lieferung anderer therapeutischer Modalitäten geeignet ist.

Intrathekale Lieferung von Antisense Oligonukleotiden im Zentralen Nervensystem der Ratte

Hier beschreiben wir das Protokoll für die in vivo Verabreichung von magnetischen Eisenoxid-Nanopartikeln, die RNA-Oligomere tragen, an metastasierenden Brustkrebs in Tiermodellen und bieten damit einen klinisch praktikablen Ansatz für das therapeutische Silencing von onkogenen Nukleinsäuren.

Überwachung der Akkumulation von Nanomedikamenten in Brustkrebsmetastasen bei Mäusen

Die Blut-Hirn-Schranke ist eine große Hürde bei der Bereitstellung von Therapien für das Glioblastom, eine Krankheit, für die es keine Heilung gibt. Hier berichten wir über eine in vivo bildgesteuerte therapeutische Nanoplattform für Eisenoxid, die diese physiologische Barriere aufgrund ihrer Größe umgehen und sich im Tumor anreichern kann.

Nanopartikel-Verabreichung einer Oligonukleotid-Nutzlast in einem Glioblastom-Multiforme-Tiermodell

Erfahren Sie eine Methode zur Oligonukleotid-Lieferung mit Single-Wall Carbon Nanotubes für die Behandlung von Multiplem Myelom. Diese Technik ermöglicht effiziente in vivo Wirkstoffabgabe.

Unterdrückung des multiplen Myeloms Zellwachstum In Vivo durch Single-Wall Carbon Nanotube (SWCNT)-MALAT1 Antisense Oligos geliefert (Video) | JoVE Journal

Unterdrückung des multiplen Myeloms Zellwachstum In Vivo durch Single-Wall Carbon Nanotube (SWCNT)-MALAT1 Antisense Oligos geliefert

Weitere Videos entdecken