Name: Gemultiplexten fluoreszierende immunhistochemische Färbung, Bildverarbeitung und Analyse in histologischen Proben des Lymphoms (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: Lernen Sie die gemultiplexte fluoreszierende Immunhistochemie zur Lokalisierung mehrerer Krebs-assoziierter Antigene in Lymphom-Gewebeschnitten. Diese Methode ermöglicht die quantitative Analyse von Biomarkern und deren räumlichen Beziehungen.

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S.-B.N und A.D.J. werden von Singapur Gesundheitsministeriums medizinische Forschung Rat Übergang Staatspreise (NMRC/TA/0020/2013 und NMRC/TA/0052/2016) unterstützt. Die Autoren erkennen ein Forschungsstipendium Yong Siew Yoon, A.D.J. von der National University Cancer Institut von Singapore in Richtung zum Kauf von einem Vectra spectral imaging Mikroskop. Diese Studie ist von Singapur NHG Domäne bestimmte Review Board B zugelassen (2014/00693).

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A.D.J. wird finanziell unterstützt von PerkinElmer zu reisen, Benutzer-Sitzungen. Die Autoren haben keine andere Interessenkonflikte offenlegen.

MF-IHC hat das Potenzial, Pathologen, Diagnosticcriteria in lymphatischen Pathologie zu verfeinern und Analyse die Rolle von Biomarkern in bestimmten Zelltypen in Richtung einer Vorhersage des klinischen Ergebnisses ermöglichen. Als eine neue Forschungsmethode ist mf IHC zunehmend auf die quantitative und räumliche Identifizierung von mehreren Immunparameter Tumor Zellen17angewendet. Die Erkennung von mf-IHC Co Ausdruck der Tumor Biomarker hat sich gezeigt, reproduzierbare und zuverlässige<sup cla...

Lymphoide Neubildungen entstehen durch das unkontrollierte maligne Proliferation von Lymphozyten. Diese Zellen sind wichtige Komponenten des Immunsystems und die primäre und sekundäre immun Organe wie Knochenmark, Lymphknoten, Milz und anderen Mukosa-assoziierten lymphatischen System zu lokalisieren. Lymphatischen Tumoren bilden eine heterogene Gruppe von Erkrankungen, die eingestuft werden, basierend auf einer Konstellation von Features, einschließlich Morphologie, Immunophenotype, genetischen Eigenschaften und klinische Präsentation. Während jeder Parameter eine Rolle spielt, bleibt ein bezeichnendes Merkmal Abstammung und bildet die Grundlage für das Klassifikationssystem der WHO, das Neubildungen abgeleitet von B-Zellen, T-Zellen und natürlichen killer (NK) Zellen1erkennt.
Entscheidend für die Einstufung des Lymphoms ist die Charakterisierung von Antikörpern gegen Leukozyten Oberflächenmarker der verschiedenen Untertypen von Lymphozyten2gewesen. Immunhistochemie (IHC) ist traditionell für die Analyse solcher Marker benutzt worden und basiert auf dem Prinzip der spezifischen Antigen-Antikörper-Anerkennung, Zell- und gewebebasierten Moleküle erkennen, die durch das Lichtmikroskop visualisiert werden können 3. die Identifizierung von mehreren Zielen auf eine einzelne Folie durch konventionelle Hellfeld chromogene multiplex IHC hat jedoch Einschränkungen, da es oft schwierig, mehrere Farbsignale auf einem einzigen Gewebe zuverlässig zu unterscheiden ist – vor allem für Antigene mit sehr geringe Expression4. Visuelle Beurteilung und Quantifizierung der Färbung auch kann subjektiv, Variabilität in der Analyse und Interpretation5verursachen.
Deshalb ist herkömmlichen IHC auf Formalin fixiert, Paraffin-eingebetteten (FFPE) Proben nicht möglich für die simultane Detektion von mehreren Zielen bei immunologisch unterschiedlichen Erkrankungen wie Lymphom. Darüber hinaus ist die Unterscheidung neoplastischer Lymphozyten aus den umliegenden Immunzellen oft ungenau. Dies behindert den Studien über die Relevanz der neue Biomarker Lymphom. In diesem Zusammenhang multiplex fluoreszierende IHC (mf-IHC) bietet eine viel versprechende Alternative, da die quantitative Bewertung von Antigen Coexpression und eine räumliche Beziehung mit höherer Präzision bei gleichzeitiger Einsparung von begrenzt6,Proben7. Wenn diese imaging-Technologie eine mit der digitalen Bildanalyse-Software Partnerschaft ist, die Interpretation der Daten ist effizienter gestaltet und erleichtert das Studium der Tumor und Mikroumgebung Heterogenität8,9. In diesem Protokoll eine Tyramide-basierte Immunfluoreszenz (IF) multiplexing-Verfahren wird angewendet, um das Signal zu verstärken und ist kompatibel mit jedem IHC validiert Antikörper aus jedem Wirtsarten, auch diejenigen entwickelt, die in der gleichen Spezies5,7 , 10. Tyramide-basiertes Protokoll ermöglicht die direkte Konjugation der Fluorophor des Gewebes von Interesse, dass die primäre und sekundäre Antikörper nach jedem Schritt, die sequenzielle Anwendung mehrere Flecken entfernt werden kann ohne Antikörper Kreuzreaktivität.
Eine gebündelte Strategie wird für die Vorhersage Prognose und Behandlung Ergebnisse durch die Identifizierung von Zielen und deren Variante immunologischen Muster in Lymphome nützlich sein. Multiplex-Leuchtstofflampen IHC angewendet wurde in unserem Labor für die Studie eines Panels von T- und B-Lymphozyten und T-follikulären Helfer Marker Angioimmunoblastic T-Zell-Lymphom (AITL), ein Subtyp des eine periphere T-Zell-Lymphom zeichnet sich durch aggressive klinische Verhalten und Tumor Heterogenität11. Der Nutzen dieser Methode zeigt auch diffuse große B-Zell-Lymphom (DLBCL) wo die erhöhte Signalisierung eines B-Zell-Rezeptors mit gleichzeitiger C-MYC und BCL-2 Ausdruck den möglichen therapeutischen Einsatz von Brutons Tyrosin-Kinase Hemmung schlägt 12 . 
Hier beschreiben wir das gesamte Protokoll von Antikörper-Validierung, die Auswahl der angemessenen Kontrolle Gewebe und Multiplexen mit Lymphom FFPE Gewebe, mit einer späteren Analyse der gefärbten Folien mit einer Scan-automatisierte quantitative Pathologie Bildgebung System.

<table><tbody><tr><td>Antikörper-Verdünnungsmittel</td><td>DAKO</td><td>REF S3022</td><td>Blockierung</td></tr><tr><td>Peroxidase Blockierungslösung</td><td>DAKO</td><td>S2023</td><td>Zur Peroxid-Blockierung</td></tr><tr><td>Vectra multispektrales automatisiertes Mikroskop</td><td>Perkin Elmer</td><td>Vectra2.0.8</td><td>Spektrale Bildgebung</td></tr><tr><td>absolut Ethanol</td><td>EMSURE</td><td>1.00983.2500</td><td>Ethylalkohol zur Rehydratation</td></tr><tr><td>Amplifikation Verdünnungsmittel</td><td>PERKIN ELMER</td><td>FP1135</td><td>Fluorophor-Verdünnungspuffer</td></tr><tr><td>Anti-Maus-IgG [Ziege] HRP-markierter</td><td>PERKIN ELMER</td><td>NEF822001EA</td><td>Sekundärer Antikörper</td></tr><tr><td>Anti-Kaninchen-IgG [Ziege] HRP-markierter</td><td>PERKIN ELMER</td><td>NEF812001EA</td><td>Sekundärer Antikörper</td></tr><tr><td>BCL2</td><td></td><td>DAKO Klon 124 ( Los Nr. 20031561)(RRID-AB578693)</td><td>Primärantikörper</td></tr><tr><td>BCL6</td><td>LEICA</td><td>NCL-L-Bcl6-564(Los-Nr.6050438)(RRID-AB563429)</td><td>Primärer Antikörper</td></tr><tr><td>CD20</td><td>DAKO</td><td>Klon L26 (Los-Nr.20028627) (RRID-AB442055)</td><td>Primärer Antikörper</td></tr><tr><td>c-MYC</td><td>ABCAM</td><td>Y 69, Klon ab32072 (Los-Nr. GR29511133)(RRID-AB731658)</td><td>Primärantikörper</td></tr><tr><td>Cy 5</td><td>PERKIN ELMER</td><td>FP1171</td><td>Geeignetes Fluoreszenzreagenz auf Tyramidbasis</td></tr><tr><td>Graphpad Prism 7</td><td>Graphpad</td><td></td><td>Statisitcal Software</td></tr><tr><td>HistoClear Clearing Agent</td><td>SIGMA</td><td>H2779-1L</td><td>Histoclear zum Entparaffinieren und Clearing</td></tr><tr><td>inForm Advanced Bildanalysesoftware</td><td>Perkin Elmer</td><td>Inform Software 2.2.1</td><td>Datenanalysesoftware</td></tr><tr><td>KI67</td><td>DAKO</td><td>Klon MIB-1 (Lot No.20040401) (RRID-AB2314699)</td><td>Primärantikörper</td></tr><tr><td>KOS MILESTONE multifunktionaler Gewebeprozessor</td><td>Milestone</td><td></td><td>Mikrowelle für die Gewinnung von hitzeinduzierten Epitopen</td></tr><tr><td>Mikrowelle</td><td>PANASONIC</td><td>NN-ST651M</td><td>Mikrowellenstripping</td></tr><tr><td>Mowiol</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>81381 Aldrich Mowiol&reg; 4-88</td><td>Eindeckmittel</td></tr><tr><td>Opal 570</td><td>PERKIN ELMER</td><td>FP1488</td><td>Geeignetes Fluoreszenzreagenz auf Tyramidbasis</td></tr><tr><td>Opal520</td><td>PERKIN ELMER</td><td>FP1487B21</td><td>Geeignetes Fluoreszenzreagenz auf Tyramidbasis</td></tr><tr><td>Opal540</td><td>PERKIN ELMER</td><td>FP1494</td><td>Geeignetes Fluoreszenzreagenz auf Tyramidbasis</td></tr><tr><td>Opal620</td><td>PERKIN ELMER</td><td>FP1495</td><td>Geeignetes Tyramid Fluoreszenzreagenz</td></tr><tr><td>Poly-L-Lysin-beschichteter Objektträger</td><td>FISHER SCIENTIFIC</td><td>120-550-15</td><td>Objektträger für die Adhäsion von Gewebeschnitten in der histologischen Routine</td></tr><tr><td>Spectral DAPI</td><td>PERKIN ELMER</td><td>FP1490</td><td>Nukleinsäure-Färbung</td></tr><tr><td>Target Retrieval Solution, pH9.0(10x)</td><td>DAKO</td><td>S2367</td><td>Für HIER</td></tr><tr><td>Tris Puffer Kochsalzlösung (TBS)</td><td>1. BASE</td><td>BUF3030 20X4L</td><td>für Puffer wash</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>P1379-1L</td><td>Tween</td></tr></tbody></table>

gemultiplexten fluoreszierende immunhistochemische färbung, bildverarbeitung und analyse in histologischen proben des lymphoms

Multiplexed Fluorescent Immunohistochemical Staining, Imaging, and Analysis in Histological Samples of Lymphoma

Immunhistochemische (IHC) Methoden für die in-Situ -Analyse der Proteinexpression durch Lichtmikroskopie sind ein mächtiges Werkzeug für Forschung und Diagnostik. Die Visualisierung und Quantifizierung von mehreren Antigenen in einem einzigen Gewebe-Abschnitt mit konventionellen chromogenen IHC ist jedoch anspruchsvoll. Gemultiplexten Bildgebung ist besonders relevant in der Lymphom-Forschung und Diagnostik, wo Markierungen im Rahmen einer komplexen Tumor Mikroumgebung interpretiert werden. Hier beschreiben wir ein Protokoll für Multiplex fluoreszierende IHC Färbung um die quantitative Bewertung der mehrere Ziele in bestimmten Zelltypen des Interesses an Lymphom zu ermöglichen. Die Methode umfasst Aspekte der Antikörper-Validierung, Antikörperoptimierung, die Multiplex-Optimierung mit Markern der Lymphom-Subtypen, die Färbung des Gewebes Microarray (TMA) rutschen und das Scannen von Dias, gefolgt von Datenanalyse, mit spezifischen Verweis auf Lymphom. Mit dieser Methode werden Noten für beide die mittlere Intensität der Marker für die Zinsen und die prozentuale Positivität generiert, um Quantitative Analyse weiter zu erleichtern. Multiplexen minimiert Probe Auslastung und bietet interessante räumliche Informationen für jede Markierung.

MF-IHC-Bilder für eine DLBCL Probe mit C-MYC und BCL2-gen-Umlagerung (Doppel-Hit Lymphom) sind in Abbildung 1dargestellt. Abbildung 2 veranschaulicht die simulierten Hellfeld immunhistochemische Bilder. Abbildung 3 zeigt die Generation der Prozentsatz Daten. Abbildung 4 zeigt die Details einer medianen Formel für die Erzeugung von numerischen Daten. ...

Hier beschreiben wir ein Protokoll für Multiplex-fluoreszierende immunhistochemische Färbung und imaging für die gleichzeitige Lokalisierung von mehreren Krebs-assoziierte Antigene in Lymphom. Dieses Protokoll kann für die NS1 Analyse von Biomarkern in allen Gewebeschnitte erweitert werden.

Gemultiplexten fluoreszierende immunhistochemische Färbung, Bildverarbeitung und Analyse in histologischen Proben des Lymphoms

Immunohistochemical (IHC) methods for the in-situ analysis of protein expression by light microscopy are a powerful tool for both research and diagnostic ...

Lymphome sind histologisch komplexe Tumoren. Daher bietet multiplexierte fluoreszierende Immunhistochemie Vorteile gegenüber der herkömmlichen chromogenen Immunohistochemie, um Marker zu untersuchen, die für die Tumorzellen und die Mikroumgebung von Interesse sind. Diese Technik hat das Potenzial, die Bewertung von Antikörper-basierten Färbungen in histologischen Lymphomproben zu standardisieren, ein Prozess, der aufgrund der Komplexität der Tumormikroumgebung historisch schwierig war.Insbesondere multiplexierte fluoreszierende Immunhistochemie und Spektralbildgebung ermöglicht die quantitative Messung mehrerer Flecken innerhalb eines einzigen Dias, wodurch die Beurteilung der Antigen-Co-Expression und der räumlichen Beziehung innerhalb des klinischen Materials ermöglicht wird. Beginnen Sie mit dem Eintauchen der entwachsten und rehydrierten Dias in einen Standard-Antigen-Abrufpuffer in einer Mikrowelle, die Glas speichern und wärmeinduzierte Epitop-Retrieval in einer geeigneten Mikrowelle durchführen. Führen Sie zusätzliche Runden des Mikrowellen-Strippings basierend auf der Position des Antikörpers in der endgültigen Multiplexsequenz durch.Zum Beispiel erfordert der vierte Antikörper drei zusätzliche Runden Mikrowellen-Stripping vor der Färbung. Nach Abschluss des Abisoliervorgangs verwenden Sie Zangen und hitzebeständige Handschuhe, um die Dias bei Raumtemperatur für mindestens 10 Minuten abkühlend auf destilliertes Wasser zu übertragen. Wenn die Antigen-Retrieval-Lösung abgekühlt ist, blockieren Sie die Gewebeperoxidase-Aktivität mit einem kommerziellen Peroxidaseblock für 10 Minuten, gefolgt von einer fünfminütigen Wäsche in tris-gepufferter Salin, oder TBS, und einem nicht ionischen Reinigungsmittel.Blockieren Sie jede unspezifische Färbung mit einer 10-minütigen Inkubation im Sperrpuffer, gefolgt von inkubationsweise mit dem primären Antikörper von Interesse bei Raumtemperatur für 30 Minuten und drei fünfminütigen Waschungen mit TBS-D-Puffer. Anschließend die Proben mit einem geeigneten Meerrettichperoxidase konjugierten Sekundärantikörper für 15 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, gefolgt von drei Waschungen im TBS-D-Puffer, wie gezeigt. Nach der letzten Wäsche ein geeignetes tyramidbasiertes fluoreszierendes Reagenz auf die Dias für eine fünfminütige Inkubation bei Raumtemperatur auftragen, gefolgt von drei fünfminütigen TBS-D-Waschungen.Führen Sie eine zusätzliche Mikrowellen-basierte Stripping, um die primären und sekundären Antikörper in frischen Antigen-Retrieval-Lösung zu entfernen, wie gezeigt. Am Ende der Bergung die Dias in destilliertem Wasser abkühlen und die Bereiche auf den Dias ohne Gewebe mit Labortüchern trocknen. Inkubieren Sie Rutsche mit Dappy für 10 Minuten bei Raumtemperatur gefolgt von drei TBS-D-Waschungen.Trocknen Sie dann die Dias sorgfältig mit Labortüchern, ohne das Gewebe zu kontaktieren, und montieren Sie die Proben mit einem geeigneten Montagemedium für die Bildgebung. Wählen Sie für das Scannen von Monoplex-Dias die entsprechenden Filter aus den Fluorophoren aus, die für die Kennzeichnung der Proben verwendet werden, und untersuchen Sie jeden Marker und den entsprechenden Fluoreszenzkanal, um eine geeignete Belichtungszeit für die Gewinnung eines sauberen Signals zu ermitteln, wobei der Schwerpunkt auf der Gewebekomponente liegt, die das stärkste Signal für den Marker aufweisen sollte. Um einen vergleichungsübergreifender Pixelintensität zu ermöglichen, verwenden Sie die Einstellung der Live-Kamera, um die Belichtungszeit in jedem einzelnen Kanal anzupassen, bis sich keine überbelichteten Bereiche im Live-Kamerabild befinden.Wenn alle Dias gescannt wurden, erfassen Sie simulierte helle Feldbilder, um sie visuell mit dem normalen immunhistochemischen Muster zu vergleichen und um festzustellen, ob das Färbemuster korrekt ist. Um Gewebe-Mikroarray-Dias zu scannen, verwenden Sie den Gewebe-Mikroarray-Scan-Modus im Bildgebungssystem und einen geeigneten Autofokus-Algorithmus. Lassen Sie die Dias für ganze Gewebeteilfolien von einem qualifizierten Pathologen überprüfen, um optimale Bilder aus den repräsentativsten Tumorbereichen auszuwählen.Bevor Sie mit der Analyse beginnen, wählen Sie einen Tumormarker aus, um die für die Analyse von Interesse endenden Zellen zu identifizieren. Lassen Sie einen Pathologen die Bilder überprüfen und entscheiden, ob eine Gewebesegmentierung erforderlich ist. Wählen Sie bei Bedarf die entsprechenden Kontrollbereiche für die Segmentierung aus und überprüfen Sie, ob die Bildanalysesoftware solche Regionen korrekt identifizieren kann.Lassen Sie nach der Zellsegmentierung den Pathologen die Segmentierungskarte überprüfen, um die Genauigkeit des beabsichtigten Segmentierungsansatzes sicherzustellen, und überprüfen Sie einzelne Bilder, um festzustellen, ob die Zellsegmentierung angemessen ist oder ob eine zusätzliche Gewebesegmentierung erforderlich ist, um Regionen auszuwählen, die für Tumorzellen, Stroma und Nekrose angereichert sind. Bestimmen Sie dann den optischen Intensitäts-positiven Cutoff-Wert für jeden Marker in Verbindung mit dem Pathologen und generieren Histogramme in einem geeigneten Statistik-Softwareprogramm, um die Frequenzverteilung der Markerintensität pro Zelle zu analysieren. Um prozentuale Daten für bestimmte Interessenspunkte innerhalb definierter Zellen zu generieren, fügen Sie eine Pivot-Tabelle in das Datenblatt ein, und wählen Sie Summe aus, um den Positivitätsprozentsatz einer einzelnen Interessenmarkierung zu berechnen.Die Gesamtzahl der Marker-positiven Zellen dividiert durch die Gesamtzahl wird berechnet. Das Ergebnis ist der Marker-positive Zellprozentsatz mit einem Kern oder einer Studiennummer. Um numerische Daten zu generieren, erhalten Sie die mittlere Intensität jedes Markers, der für alle Zellen in einer Stichprobe untersucht wird, um die mediane normalisierte Anzahl für jeden Marker jedes Kerns oder jeder Studiennummer zu extrahieren.Hier werden repräsentative multiplexfluoreszierende immunhistochemische Bilder für eine diffuse große B-Zell-Lymphomprobe mit c-MYC- und BCL2-Genumlagerung gezeigt. Simulierte immunhistochemische Hellfeldbilder zeigen ein ähnliches Tumormarker-Färbungsmuster. Die Anwendung von multiplexfluoreszierenden immunhistochemischen Bildern auf ein T-Zell-Panel bei angioimmunoblastischen T-Zell-Lymphomen zeigt die Zellheterogenität der Tumorprobe.Hier werden die Optimierung einer Tonsillenkontrollprobe und die daraus resultierende Datenanalyse dargestellt. Eine Vielzahl von Bildanalyse-Software-Programme können nach dem Unmix-Schritt verwendet werden, um Markerexpression und Lokalisierung in Tumorzellen und der Tumormikroumgebung zu quantitieren. Diese Technik ebnet den Weg für Forscher, die Koexpression mehrerer Marker innerhalb bestimmter Zelltypen in einzelnen Gewebeabschnitten des Lymphoms zu untersuchen.Achten Sie darauf, hitzeinduzierte Verletzungen während der Mikrowaving-Schritte zu verhindern und sich der Sturzrisiken während der Scanschritte bewusst zu sein, die im Deck durchgeführt werden.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Immunhistochemie ist eine leistungsfähige Labortechnik zur Bewertung der Proteinlokalisierung und -expression in Geweben. Aktuelle halbautomatische Methoden zur Quantifizierung führen zu Subjektivität und führen oft zu nicht reproduzierbaren Ergebnissen. Darin beschreiben wir Methoden zur Multiplex-Immunhistochemie und zur objektiven Quantifizierung der Proteinexpression und Co-Lokalisierung mittels multispektraler Bildgebung.

Die Quantifizierung der Proteinexpression und Co-Lokalisation Mit Multiplexed immunhistochemischen Anfärbung und Multispektraltechnik

Ein detailliertes Protokoll für ein sechs-Marker multiplex Immunfluoreszenz-Panel optimiert und durchgeführt ist, mit Hilfe einer automatisierten Stainer für konsistentere Ergebnisse und eine kürzere Verfahrensdauer. Dieser Ansatz kann direkt von jedem Labor für Immuno-onkologischen Studien angepasst werden.

Automatisierte Multiplex Immunfluoreszenz Panel für Immuno-Onkologie-Studien auf Formalin fixiert Karzinom Gewebeproben

Multiplex-Fluoreszenz-Immunhistochemie ist eine neue Technologie, die die Visualisierung mehrerer Zelltypen innerhalb intakten formalinfixierten, paraffineingebetteten (FFPE) Gewebeermöglicht. Präsentiert werden Richtlinien zur Sicherstellung eines erfolgreichen 7-Farben-Multiplex mit Anweisungen zur Optimierung von Antikörpern und Reagenzien, zur Vorbereitung von Dias, Design und Tipps zur Vermeidung von häufigauftretenden Problemen.

Optimierung, Design und Vermeidung von Fallstricken in der manuellen Multiplex-Fluoreszenz-Immunhistochemie

Hier beschreiben wir eine einfache und zugängliche Strategie zur Visualisierung, Quantifizierung und Kartierung von Immunzellen in formalinfixierten Paraffin-eingebetteten Tumorgewebeabschnitten. Diese Methode kombiniert vorhandene Bildgebungs- und digitale Analysetechniken mit dem Ziel, die Multiplexing-Fähigkeit und die Multiparameteranalyse von Imaging-Assays zu erweitern.

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Multiplex-Barcoding-Bildanalyse zur Immunprofilierung und räumlichen Kartierung bei der Einzelzellanalyse von Paraffingewebeproben

In diesem Artikel wird ein Protokoll zur manuellen Tyramid-Signalverstärkung (TSA) Multiplex-Immunfluoreszenz (mIF) in Kombination mit Bildanalyse und räumlicher Analyse beschrieben. Dieses Protokoll kann mit formalinfixierten Paraffin-eingebetteten (FFPE) Schnitten für die Färbung von zwei bis sechs Antigenen pro Objektträger verwendet werden, je nachdem, welcher Objektträgerscanner im Labor verfügbar ist.

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Dieses Protokoll beschreibt detailliert, wie die Immunzellcharakterisierung der Tumormikroumgebung mittels Multiplex-Immunhistochemie durchgeführt wird.

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Multiplex-Immunhistochemie-Färbung für paraffineingebettetes Lungenkrebsgewebe

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Zyklische Multiplex-Fluoreszenz-Immunhistochemie

Dieser Bericht beschreibt ein automatisiertes Protokoll für Multiplex-Immunfluoreszenz-Assays (mIF) auf einem automatisierten Objektträgerfärbegerät. Es demonstriert die hohe Reproduzierbarkeit der räumlichen Proteomik auf Standard-Hochdurchsatz-Gewebe-Autostainern und Ganzobjektträger-Fluoreszenz-Imagern, was ideal für kundenspezifische mIF-Assays über eine große Anzahl von Gewebeobjektträgern in der translationalen Forschung ist.

Automatisierte Hochdurchsatz-Multiplex-Immunfluoreszenz-Assays für die translationale Forschung

Lernen Sie die gemultiplexte fluoreszierende Immunhistochemie zur Lokalisierung mehrerer Krebs-assoziierter Antigene in Lymphom-Gewebeschnitten. Diese Methode ermöglicht die quantitative Analyse von Biomarkern und deren räumlichen Beziehungen.

Gemultiplexten fluoreszierende immunhistochemische Färbung, Bildverarbeitung und Analyse in histologischen Proben des Lymphoms

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