Schnelle Sammlung von floralen Duftflüchtigen mit einer Headspace Volatile Collection Technique für GC-MS Thermal Desorption Sampling

Hier präsentieren wir ein Protokoll zum Sammeln der blumigen Duftflüchtige aus blühenden Blüten, mit einem zerstörungsfreien Probenahmeverfahren.

Da Blumenduft ist entscheidend für die Anziehung von Bestäubern, Diese Methode könnte verwendet werden, um besser zu verstehen oder sogar die Bestäubung von einheimischen Blumenarten zu verbessern. Bei dieser Methode werden Duftflüchtige mit einer zerstörungsfreien Methode mit einer leicht zu transportierenden Maschine abgetastet. Diese Methode verwendet eine schnelle Probenahme und verkürzt die Probenahmezeit von zwei auf drei Stunden auf 10 Minuten.

Diese Methoden bieten eine Möglichkeit, flüchtige Stoffe, die von Blumen produziert werden, schnell zu beproben und könnten auch zur Probe von Flüchtigen von anderen Proben, wie Insektenpheromone, verwendet werden. Um zu beginnen, wählen Sie eine Blume, die zunächst ungeöffnet ist, und markieren Sie die Blume mit Flagging Tape, um eine wiederholte Probenahme der gleichen Blume zu gewährleisten. Ofenbeutel 30 Minuten in Wasser kochen, um Restkunststoffverbindungen zu entfernen.

Zum Trocknen im Ofen bei 175 Grad Celsius 60 Minuten backen. Sobald die Säcke getrocknet sind, fügen Sie eine Polypropylen-Schott-Union zu jeder Ecke des geschlossenen Endes der Ofenbeutel hinzu. Alle Beutel und Schläuche mit 75% Ethanol abspülen und an der Luft trocknen lassen.

Dann backen Sie die Säcke und die Rohre in einem Ofen bei niedriger Hitze, zwischen 74 bis 85 Grad Celsius für 30 Minuten. Je nach Dauer der Blütezeit, wenn möglich, warten Sie mindestens 24 Stunden nach der Blüte, um die Probe zu sammeln. Bedecken Sie die ausgewählte Blume mit einem Backbacksack.

Cinch die Tasche zusammen mit einem Kunststoff-Reißverschluss Krawatte unter der Blume, um unerwünschte Luftfluss in den Beutel zu verhindern. Mit sterilen Neoprenhandschuhen befestigen Sie ein Rohr aus dem Luftauslass des Entnahmegeräts und verbinden Sie es mit einer der Schottenverbände auf dem Ofenbeutel. Befestigen Sie auf der anderen Schott-Union eine Glasfilterpatrone, die poröses Polymeradsorbieren enthält.

Befestigen Sie ein zweites Rohr an der Sammeleinrichtung am Vakuumeingang. Schließen Sie das Ende des zweiten Rohres an die glasflüchtige Sammelfilterpatrone an. Schalten Sie sowohl die Luftpumpe als auch das Vakuum gleichzeitig ein und stellen Sie 0,05 Liter pro Minute ein.

Der Kopfraum um die Blume ist mit Luft gefüllt, aber nicht überhöht. Das System zieht Luft aus dem Beutel durch den Filter und fängt die floralen Flüchtigen ein. Lassen Sie den Computer 10 Minuten laufen.

Und dann schalten Sie sowohl die Luftpumpe als auch das Vakuum aus. Zerlegen Sie die Rohre und die Glasfilterpatrone. Den Filter in eine Glasflasche geben und an einer Kappe verschrauben.

Versiegeln Sie die Durchstechflasche mit PTFE-Rohrgewindeband. Bewahren Sie die Probe bis zur GCMS-Analyse in einem Gefrierschrank auf. Wiederholen Sie diesen Vorgang mit einem leeren Ofenbeutel, um eine leere Luftprobe als Kontrolle zu sammeln.

Für konsistente Replikationen der gleichen Flüchtigen, wiederholen Sie die Probensammlung zur gleichen Zeit jeden Tag, da einige Blumen im Laufe des Tages unterschiedliche Duftwerte erzeugen. Entfernen Sie zunächst die Glasfilterpatrone aus dem Gefrierschrank und legen Sie sie in ein GCMS im Injektoranschluss. Um Kopfraumflüchtige freizugeben, die auf porösem Polymeradsorbengung aus dem Adsorbens gesammelt werden, erhitzen Sie die wärmende Sammelfalle acht Minuten lang auf 220 Grad Celsius bei einem Strom von Heliumgas bei 1,2 Milliliter pro Minute.

Vergleichen Sie Chromatogramme gesammelter Flüchtiger, um häufig wiederkehrende Spitzen zu identifizieren. Nach der Identifizierung der Spitzenflüchtige, verwenden Sie Pherobase, um festzustellen, ob sie zuvor in floralen Düften beschrieben wurden. In dieser Studie werden repräsentative Daten aus dem GCMS als Chromatogramm dargestellt.

Spitzen zwischen 10 und 15 Minuten sind blumige Flüchtige. Die gesammelten flüchtigen Stoffe wurden in Pherobase referenziert, um festzustellen, ob sie zuvor in einem floralen Duft beschrieben wurden. Beispielsweise wurde die Verbindung Nummer 21 mit einer Retentionszeit von 10.311 als Benzaldehyd identifiziert.

Benzaldehyd ist auf Pherobase durchsuchbar mit einer Liste aller Blütenarten, organisiert nach Pflanzenfamilie, aus der diese Duftverbindung identifiziert wurde. Hier werden die Orchideenarten gezeigt, von denen Benzaldehyd im floralen Duft nachgewiesen wurde. Frühere Methoden dauerten zwei bis vier Stunden pro Probe.

Die Verwendung eines Lösungsmittels zum Entfernen der Probe aus dem Filter würde zu einer Lösungsmittelspitze auf dem GCMS führen. Dies würde die Verbindungen von null bis 3,5 Minuten verbergen. Diese Methode ermöglicht es, alle Verbindungen zu sehen.