Name: Low-Cost-Protokoll der Footprint Analysen und hängen-Box-Test für Mäuse angewendet die chronische Zurückhaltung Stress (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Lernen Sie ein kostengünstiges Ganganalyse-Protokoll zur Bewertung von Bewegungsstörungen bei Mäusen nach chronischer Immobilisierung. Diese Methode erfasst motorische Phänotypen mit minimalem Equipment.

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Diese Arbeit wurde unterstützt von JSPS (Japan Society for Promotion of Science) KAKENHI (Beihilfe für wissenschaftliche Forschung C), Nummer 18K 07373 (HS) und Subventionen für Private Universitäten zu gewähren.

Alle Tierversuche wurden auf humane Weise durchgeführt. Der institutionellen Tier Experiment Ausschuss des Jichi medizinischen Universität bewilligt. Die im Einklang mit den institutionellen Verordnung für Tier-Experiment und grundlegende Leitlinie für die ordnungsgemäße Durchführung der Tier Experiment und damit zusammenhängende Tätigkeiten in akademischen Forschungseinrichtungen unter der Gerichtsbarkeit des MEXT Japan Studie wurde. In diesem Protokoll verwendeten Mäuse wurden21beschrieben.
(1) hängen-Box-Test
<ol><li>Nehmen Sie das Gewicht jeder Maus. Markieren Sie das Heck durch Markierung Feder für individuelle Diskriminierung (z.B.., eine Linie, Linien und drei Zeilen). Hinweis: Wachstumskurven sind für einen Index der allgemeinen Gesundheit22verwendet.</li>
	<li>Legen Sie die Mäuse im Versuchsraum mindestens 30 min vor dem behavioral Test. Legen Sie die hängende Feld, bestehend aus einer klaren Box (25 X 25 X 40 cm3) mit einem drehbaren Mesh Deckel auf der Oberseite (Abbildung 1). Die Netz-Deckel kann entlang einer zentralen Bar gedreht werden, so dass oben 180 Grad gekippt wird.</li>
	<li>Setzen Sie eine Maus in der Mitte des Deckels Netz. Drehen Sie vorsichtig den Mesh Deckel Seite nach unten.</li>
	<li>Messen Sie die Herbst-Latenz (hängende Zeit) der Maus aus dem Netz-Deckel. Hinweis: Wenn die Maus nicht innerhalb von 5 min fällt, notieren Sie die Latenz als 5 min.</li>
	<li>Die Maus zu Hause Käfig zurück. Reinigen Sie die hängenden Kasten mit 70 % Ethanol nach jedem Test.</li>
</ol>2. Footprint Analysen
Hinweis: Im Anschluss an die hängenden Box test, Footprint Analysen durchführen.
<ol><li>
Einrichten die Start-und Landebahn (Abbildung 2A).<ol>
<li>Schneiden Sie ein Stück weißes Papier (29,7 x 42 cm x 0,09 mm) längs in drei Längen von gleicher Breite. Legen Sie ein Stück weißes Papier (9,9 x 42 cm) auf dem Tisch.</li>
		<li>Setzen Sie die dunklen Ziel Kasten am distalen Ende des Papiers. Setzen Sie andere Boxen (etwa die gleiche Länge wie die des Papiers) mit den Wänden auf beiden Seiten der Start-und Landebahn, die Flucht von Mäusen zu verhindern.</li>
		<li>Schwarze Tinte und roter Tinte in separaten Petrischalen (35 mm Durchmesser) genommen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Trainingseinheit. Hinweis: Führen Sie das Training nur bei 4 Wochen alt.<ol>
<li>Setzen Sie eine Maus am proximalen Ende des Papiers (Gesicht der Kopf auf den Ziel-Quader). Lassen Sie die Maus aus dem proximalen Ende in das Ziel-Feld zu gehen. Entfernen Sie die Maus aus dem Ziel-Feld. Wenn die Maus nicht auf dem Papier mehr, schieben Sie die Maus in das Ziel-Feld mit dem Finger.</li>
		<li>Halten Sie die Maus durch das Greifen des Genicks zwischen Daumen und Zeigefinger um die Bewegung der Vorderbeine zu begrenzen. Greifen Sie dann, den Rücken und die Rute zwischen den Ball mit dem Daumen und die anderen Finger, die Bewegung der Hintergliedmaßen zu begrenzen. Hinweis: Unzureichende Durchführung eines Maus-führt zu Flecken der Tinte auf Kleidung.</li>
		<li>Tauchen Sie die Böden der Vorderbeine in roter Tinte und die Böden der Hinterbeine in schwarzer Tinte. Sofort setzen Sie die Maus auf das proximale Ende des Papiers (Gesicht der Kopf auf den Ziel-Quader). Lassen Sie die Maus aus dem proximalen Ende in das Ziel-Feld zu gehen. Wenn die Maus nicht auf dem Papier mehr, schieben Sie die Maus in das Ziel-Feld mit dem Finger.</li>
		<li>Entfernen Sie die Maus aus dem Ziel-Feld. Gehen Sie zu den Test-Session.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Sitzung zu testen.
	<ol>
<li>Nach der Trainingseinheit, richten Sie die Start-und Landebahn für Spuren mit einem neuen Schnitt Stück weißes Papier.</li>
		<li>Halten Sie die Maus durch das Greifen des Genicks zwischen Daumen und Zeigefinger um die Bewegung der Vorderbeine zu begrenzen. Greifen Sie dann, den Rücken und die Rute zwischen den Ball mit dem Daumen und die anderen Finger, die Bewegung der Hintergliedmaßen zu begrenzen.</li>
		<li>Tauchen Sie die Böden der Vorderbeine in roter Tinte und die Böden der Hinterbeine in schwarzer Tinte. Sofort setzen Sie die Maus auf das proximale Ende des Papiers. Lassen Sie die Maus aus dem proximalen Ende in das Ziel-Feld zu gehen. Hinweis: Da Mäuse Dunkeln bevorzugen, wird das Wandern gleichmäßiger als die Maus Feld dunkle Ziel nähert. Wenn die Maus nicht auf dem Papier mehr, schieben Sie die Maus in das Ziel-Feld mit dem Finger. Dann, wenn zuverlässige Fußabdrücke für die Analyse nicht erhalten werden (siehe Punkt 2.4. Analyse der Footprints für details) weil die Maus gestoppt, wiederholen Sie die Test-Session.</li>
		<li>Die Maus zu Hause Käfig aus dem Ziel-Feld zurück. Reinigen Sie das Ziel-Feld mit 70 % Ethanol nach jedem Test-Session. Trocknen Sie die Fuß-bedruckte Papier an der Luft.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Analyse der Spuren
	<ol>
<li>Erhalten Sie drei Messungen der einzelnen Parameter (Länge der Vorderbeine und Hinterbeine, Vorder- und Hinterbeine Basis breiten zu schreiten, Überschneidung von Vorderbein und Megalosauridae, Abb. 2 b) mit einem Lineal von Fuß-bedruckte Papier. Hinweis: Da Spuren der proximalen und distalen enden häufig große Unterschiede wegen Beendigung zeigen oder ausgeführt wird, wählen Sie den Teil mit einem stetigen Gangbild von Fußspuren. Der mittlere Teil des Fuß-bedruckten Papiers werden in der Regel geeignet für die Analyse.<ol>
<li>Messen Sie für die Schrittlänge die Abstände zwischen den gleichen Teilen von der Pfote (z. B. Pfote Pad oder Zehe).</li>
			<li>Zeichnen Sie für die vorderen Basisbreite eine Linie zwischen aufeinander folgenden rechts (oder links) vordere Fußabdrücke. Dann messen Sie die Länge der vertikalen Linie aus dem Pad des linken (oder rechten) vordere Footprints auf der Linie zwischen den Spuren rechten (oder linken).</li>
			<li>Zeichnen Sie für die Hinterbeine Basisbreite eine Linie zwischen aufeinander folgenden rechts (oder links) hinteren Fußspuren. Dann messen Sie die Länge der vertikalen Linie aus dem Pad des linken (oder rechten) hinteren Footprints auf der Linie zwischen den Spuren rechten (oder linken).</li>
			<li>Überlappung messen Sie den Abstand zwischen Pads von links (oder rechts) Vorder- und Hinterbeine Fußabdrücke.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Durchschnitt der drei Messungen für jeden einzelnen. Verwenden Sie die einzelnen Durchschnitt der einzelnen Parameter für die statistische Auswertung.<ol>
<li>Verwenden Sie für die Schrittlänge den Durchschnittswert der einzelnen Durchschnitte von der linken und rechten Fortschritte.</li>
			<li>Verwenden Sie für Asymmetrie der Schrittlänge der Absolute Wert der Differenz zwischen einzelnen Durchschnitte der linken Extremität und rechten Extremität Schrittlänge.</li>
			<li>Verwenden Sie für die statistische Auswertung der anderen Parameter (vordere Basisbreite, Hinterbeine Basisbreite und Überlappung) den individuellen Durchschnitt direkt.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Zurückhaltung Stress be-
<ol><li>
Vorbereitung der Zurückhaltung Röhren.
	<ol>
<li>16 Löcher (ca. 2 mm im Durchmesser) in einem 50 ml konische Röhrchen (30 mm Durchmesser X 115 mm in der Länge) entlang der Skala Markierungen zu machen (5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 mL) und die Rückseite jeder Skala Markieren von quadratischen Bohrmaschine (Abbildung 3). Machen Sie ein Loch an der Spitze von 50 mL konische Rohr (ca. 5 mm Durchmesser) für die Atmung durch das Abschneiden der Spitze. Machen Sie ein Loch (ca. 4 mm im Durchmesser) in der Röhre Kappe, das Ende der Mäuse zu übergeben.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Stress-Belastung
	<ol>
<li>Legen Sie die Mäuse in den Versuchsraum.</li>
		<li>Halten Sie eine Maus durch das Genick zwischen dem Daumen und dem Zeigefinger greifen. Geben Sie die Maus in der Zurückhaltung Rohr aus dem Kopf. Übergeben Sie das Heck durch das Loch in der Kappe. Schließen Sie den Deckel. Hinweis: Schränken die Bewegung der Vordergliedmaße, weil Mäuse ablehnen, Eintritt in das Rohr durch die Vorderbeine.</li>
		<li>Halten Sie die Maustaste 2 h auf dem Schreibtisch bei Raumtemperatur eingeschlossen. Entfernen Sie die Maus aus der Tube Zurückhaltung und dem Hause Käfig zurück. Hinweis: Die Zurückhaltung Rohre können nach dem Waschen und trocken wiederverwendet werden.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. experimentelle Zeitplan (Abbildung 4):
<ol><li>Führen Sie das hÃ ¤ ngen box-Test und den Footprint Analysen am selben Tag im Alter von 4 Wochen (siehe Schritt 1. Hängende Boxentest und Schritt 2. Footprint Analysen für Details) als eine Basismessung auf alle Mäuse vor die Gruppierung in "Stress-Gruppe" und "non-Stress-Gruppe". Hinweis: Ca. 8-10 Mäuse in 2-3 Würfe geeignet sein können, in einem Experiment zu verwenden. Footprint Analysen im Alter von 4 Wochen besteht aus Trainings und Test.</li>
	<li>Teilen Sie nach dem Zufallsprinzip die Mäuse in ein "Stress-Gruppe" und "non-Stress-Gruppe". Hinweis: Wenn die Mäuse verwendet werden, bestehend aus mehreren Würfen teilen Sie Wurfgeschwistern gleichmäßig in beide Gruppen. In jeder Gruppe besteht aus ca. 4-5 Mäusen.</li>
	<li>Zuweisen des Zurückhaltung-Stress "Stress-Gruppe" 6-Mal im Laufe von zwei Wochen (siehe Schritt 3. Zurückhaltung Stress Laden für Details). Hinweis: 6 Mal Zurückhaltung gelten alle zwei Wochen, gefolgt von einer hängenden box Test und Footprint Analysen von 6-12 Wochen alt. Gelten nicht die Zurückhaltung Stress am Testtag der hängenden box Test und den Footprint Analysen.</li>
	<li>Führen Sie das hÃ ¤ ngen box Test und Test-Session des Footprint Analysen am selben Tag bei 6, 8, 10 und 12 Wochen alt.</li>
</ol>

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<li>Cecchi, M., Khoshbouei, H., Morilak, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulatory+effects+of+norepinephrine%2C+acting+on+alpha1+receptors+in+the+central+nucleus+of+the+amygdala%2C+on+behavioral+and+neuroendocrine+responses+to+acute+immobilization+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Modulatory effects of norepinephrine, acting on alpha1 receptors in the central nucleus of the amygdala, on behavioral and neuroendocrine responses to acute immobilization stress.</a> Neuropharmacology. 43 (7), 1139-1147 (2002).</li>
<li>Chu, X., Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((24-hour-restraint+stress+induces+long-term+depressive-likephenotypes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">24-hour-restraint stress induces long-term depressive-likephenotypes in mice.</a> Scientific Reports. 6, 32935(2016).</li>
<li>Freeman, M. L., Sheridan, B. S., Bonneau, R. H., Hendricks, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychological+Stress+Compromises+CD8%2B+T+cell+control+of+latent+herpes+simplex+virus+type+1+infections%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Psychological Stress Compromises CD8+ T cell control of latent herpes simplex virus type 1 infections.</a> The Journal of Immunology. 179 (1), 322-328 (2007).</li>
<li>Lauretti, E., Di Meco, A., Merali, S., Praticò, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+behavioral+stress+exaggerates+motor+deficit+and+neuroinflammation+in+the+MPTP+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Chronic behavioral stress exaggerates motor deficit and neuroinflammation in the MPTP mouse model of Parkinson's disease.</a> Translational Psychiatry. 6, e733(2016).</li>
<li>Quartermain, D., Stone, E. A., Charbonneau, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+stress+disrupts+risk+assessment+behavior+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Acute stress disrupts risk assessment behavior in mice.</a> Physiology and Behavior. 59 (4-5), 937-940 (1996).</li>
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</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Der Footprint Analysen und die hängenden Box testen sind einfache und kostengünstige Verhaltens Tests für die Motorik von Mäusen. Die Neurobehavioral Phänotypen in verschiedenen Mausmodellen wurden erfolgreich durch diese Tests nachgewiesen. Z. B. verkürzte Schrittlänge Amyotrophe Lateralsklerose24, Zunahme der Länge asymmetrische Schrittlänge in Ataxie-Teleangiektasie25, Zunahme der Länge der Überlappung in Huntington-Krankheit26 und Dystonie<sup cl...

Bewegungsstörungen werden als Störungen des Nervensystems zeigen ein Überschuss oder Mangel an freiwilligen oder automatische Bewegungen1definiert. Gangstörung ist besonders häufig bei Patienten mit Bewegung Störungen2,3,4dokumentiert. Ganganalyse deshalb einen geeigneten Verhaltens Test für die Validierung von Tiermodellen von Bewegungsstörungen. Bei Mäusen wurden automatisierte Gangart Analysen durchgeführt zum Wandern bei natürlichen Geschwindigkeit5 und einstellbare Geschwindigkeiten Laufband6,7. Diese Analysen liefern quantitative Ergebnisse des Gehens automatisch. Eine alternative Methode zur Erkennung von Gangstörungen nennt Footprint Analysen. Nach Kennzeichnung der Unterseite der Füße mit Tinte, Mäuse Fuß auf dem Papier, und die Spuren ausgewertet. Zunächst, Vaseline und pulverisierter Kohle wurden verwendet, um den Fußabdruck8visualisieren, und wurden dann durch Tinte auf Polygraph Papier9 und fotografische Entwickler auf Fotopapier10ersetzt. Eine billigere und weniger toxische Methode mit Tinte und Papier als die anderen Methoden bleibt bislang11. Footprint Analysen ist weniger teuer im Vergleich mit automatisierten Analyse5,6,7 und wäre sinnvoll, die Bewegungsstörungen in Mausmodellen für die Forscher ohne reichlich Forschungsgelder bewerten .
Das hÃ ¤ ngen-Box-Test ist eine Art von vier Gliedmaßen hängen Tests mit Draht Käfig Deckel12 und Maschendraht Bildschirm13. Die Box ist eine Vorrichtung mit drehbaren Mesh Deckel auf der Oberseite Box entlang einen Mittelsteg. Neben Ganganalyse kann der Test kostengünstig und einfach durchgeführt werden. Daher führten wir das hÃ ¤ ngen-Box-Test, Griffstärke und Balance, zusätzlich zu den Footprint Analysen in diesem Protokoll zu bewerten.
Stress induziert die Symptome der Bewegung Störungen14,15. Motorische Defizite werden oft von mehreren chronischen Spannungen induziert, auch wenn keine spontane motor Phänotyp in Mausmodellen eine Bewegung Störung16,17,18beobachtet wird. Zurückhaltung ist eine der häufigsten verwendeten Methoden für Stress bei Mäusen, laden, weil das Tier nicht körperlich geschädigten19 und Kosten ist weniger im Vergleich mit anderen Methoden wie Stromschläge mit eigenen Apparat und gezwungen, mit Einsatz von einem Laufband laufen. Zurückhaltung mit einer Röhre, die durchgeführt wird, durch die Beschränkung einer Maus in eine gelochte 50 mL konische Rohr ist einfacher als andere Methoden wie z. B. Draht Sieb, getapten Bein und Verhüllung des Tieres mit Gaze (bewertete20 Mesh). In diesem Artikel fassen wir die Protokolle des Footprint Analysen und die hängenden Box testen nach Zurückhaltung durch ein Rohr. Dieses Protokoll würde helfen, Maus-Modellen von Bewegungsstörungen ohne spontane motor Phänotyp zu verwenden.

<table><tbody><tr><td>Hängebox</td><td>O' Hara & Ko.</td><td>http://ohara-time.co.jp/products/wire-hanging-test/</td><td></td></tr> <tr><td>Markierungsstift</td><td>ZEBRA</td><td>MO-120-MC-BK</td><td></td></tr><tr><td>Torbox</td><td>O' Hara & Ko.</td><td>http://ohara-time.co.jp/products/balanced-beam-test/</td> <td>Zubehör für Geräte für den Schwebebalken</td></tr><tr><td></td><td> Hara & Ko.</td><td>-</td><td>Seitenwand des Laufstegs</td></tr><tr><td>Schwarze Tinte Shin-asahi-Rote</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Tinte</td><td>Maruyamakogyo</td><td>BC-6</td><td></td></tr><tr><td>Einweg-Petrischale</td><td>, Corning</td><td>351008</td><td>Petrischalen (35 mm Durchmesser)</td></tr><tr><td>Askul Multipaper Super White J Monochrom A3</td><td>Askul</td><td>701-712</td><td>Weißes Papier (29,7 cm x 42 cm x 0,09 mm)</td></tr><tr><td>50 mL Konisches Röhrchen</td><td>Corning</td><td></td><td></td>430829</tr><tr><td>Vierkantbohrer</td><td>KAKURI Corporation</td><td>DIY FABRIK (K32-0313)</td><td></td></tr></tbody></table>

low-cost-protokoll der footprint analysen und hängen-box-test für mäuse angewendet die chronische zurückhaltung stress

Low-cost Protocol of Footprint Analysis and Hanging Box Test for Mice Applied the Chronic Restraint Stress

Gangstörung ist häufig bei Patienten mit Bewegungsstörungen zu beobachten. In Mausmodellen für Bewegungsstörungen verwendet ist Ganganalyse wichtiger Verhaltens Test um festzustellen, ob die Mäuse die Symptome des Patienten zu imitieren. Motorische Defizite werden oft durch Stress induziert, wenn keine spontane motor Phänotyp in den Mausmodellen beobachtet wird. Ganganalyse, gefolgt von Stress laden wäre daher eine sensitive Methode zur Bewertung des motorischen Phänotyps in Mausmodellen. Allerdings haben Forscher das Erfordernis einer teuren Apparatur quantitative Ergebnisse automatisch Ganganalyse einzuholen. Für Stress ist Stress laden durch einfache Methoden ohne teure Apparate für elektrischen Schlag erforderte und zwang ausgeführt wünschenswert. Daher stellen wir eine einfache und kostengünstige Protokoll bestehend aus Footprint Analysen mit Papier und Tinte, hängend-Box-Test zur Beurteilung der motorischen Funktion, und Stress-Belastung durch Zurückhaltung mit einem konischen Rohr definiert. Die motorischen Defizite von Mäusen wurden erfolgreich durch dieses Protokoll erkannt.

Die heterozygoten männliche Mäuse Atp1a3 (Atp1a3+ / −), die im Mausmodell für schnellen Wirkungseintritt Dystonie Parkinsonismus und Wildtyp Wurfgeschwistern wurden in dieses Protokoll verwendet. Atp1a3+ / − zeigte deutlich kürzere Schrittlängen der Vordergliedmaße und Megalosauridae als der Wildtyp bei 4 Wochen alt (Abb. 5A und 5 b Abbildung, Kreis und Quadrat öffnen). "Gestresst"...

Das kostengünstige Protokoll bestehend aus Footprint Analysen und hängen-Box-Test nach Zurückhaltung Stress nützlich ist für die Bewertung der Bewegungsstörungen des Mausmodells.

Low-Cost-Protokoll der Footprint Analysen und hängen-Box-Test für Mäuse angewendet die chronische Zurückhaltung Stress

Gait disturbance is frequently observed in patients with movement disorders. In mouse models used for movement disorders, gait analysis is important ...

Unser Protokoll mittels Ganganalyse ist sehr nützlich, um festzustellen, ob Mausmotoren von Bewegungsstörungen das Symptom des Patienten mit Gangstörungen imitieren. So kann die Ganganalyse im Belastungstest einfach und ohne teure Ausrüstung durchgeführt werden, um bestimmte Motorphäpuschen bei Mäusen ohne spontane Effekte zu erkennen. Zeichnen Sie vor dem Beginn des Verhaltenstests das Gewicht jeder Maus auf, und verwenden Sie einen Markierungsstift, um jeden Schwanz zu beschriften.Wenn alle Tiere gewogen und markiert sind, legen Sie die Mäuse mindestens 30 Minuten in den Versuchsraum und legen Sie eine klare, 25 mal 25 mal 40 Zentimeter große Hängebox mit drehbarem Netzdeckel auf die Laborbank. Wenn sich die Mäuse geakklimatisiert haben, legen Sie eine Maus in die Mitte des Netzdeckels und drehen Sie den Deckel vorsichtig auf den Kopf. Messen Sie dann die Falllatenz der Maus aus dem Netzdeckel, bevor Sie die Maus in ihren Heimkäfig zurückführen.Wenn alle Mäuse getestet wurden, legen Sie ein 9,9 mal 42 Zentimeter großes Blatt weißes Papier auf die Laborbank und legen Sie eine dunkle Zielbox am distalen Ende des Papiers. Platzieren Sie andere Boxen, die ungefähr die gleiche Länge wie das Papier haben, auf beiden Seiten der Start- und Landebahn, um eine Flucht zu verhindern. Und fügen Sie schwarze und rote Tinte hinzu, um 35 Milliliter Petrischalen zu trennen.Um die Mäuse für die Analyse zu trainieren, platzieren Sie eine Maus am proximalen Ende des Papiers, mit Blick auf das Zielfeld, und lassen Sie die Maus vom proximalen Ende des Papiers zum Zielfeld laufen. Wenn die Maus die Box erreicht, schrubbdas Tier sanft, den Rücken und Schwanz zwischen der Kugel des Daumens und den anderen Fingern zu stecken, um die Bewegung der Hinterbeine zu begrenzen. Und tauchen Sie die Böden der Vorderbeine in rote Tinte und die Unterseite der Hinterbeine in schwarze Tinte ein.Legen Sie dann die Maus sofort wieder auf das proximale Ende des Papiers, mit Blick auf das Torfeld, und lassen Sie die Maus vom proximalen Ende zum Zielfeld laufen. Nach dem Lufttrocknen des Fußdrucks verwenden Sie ein Lineal, um drei Messungen der Schrittlänge zu erhalten, indem Sie die Abstände zwischen den gleichen Teilen der Pfotenabdrücke messen. Von der vorderen Basisbreite, indem eine Linie zwischen aufeinander folgenden, gleichseitigen, vorderen Fußabdrücken gezeichnet und die Länge der vertikalen Linie vom Pad des vorderen Footprints bis zur Linie zwischen den Footprints gemessen wird.Und von der Hintergrundbreite, indem eine Linie zwischen aufeinanderfolgenden rechten Hinterfußabdrücken gezeichnet und die Länge der vertikalen Linie vom Pad des linken Hintergrunds, bis zur Linie zwischen den anderen rechten Fußabdrücken gemessen wird. Messen Sie bei Überlappung den Abstand zwischen den Pads der Vorder- und hinteren Fußabdrücke. Um ein Rückhalterohr vorzubereiten, verwenden Sie einen quadratischen Bohrer, um 16 Zwei-Millimeter-Löcher in einem 50-Milliliter-Rohr entlang der Maßstabsmarkierungen und der Rückseite jeder Maßstabsmarkierung zu machen.Schneiden Sie die Spitze des Rohres ab, um ein fünf Millimeter Loch für die Atmung zu machen, und machen Sie ein vier Millimeter Loch in der Rohrkappe, für den Schwanz. Für den Stress-Belastungstest eine Maus zerschwirn und das Tier zuerst in den zurückhaltenden Schlauchkopf legen, wobei die Vorderbeine sanft eingeengt sind. Passieren Sie den Schwanz durch das Loch in der Kappe, bevor Sie das Rohr verkappen.Und legen Sie die Maus auf die Bank oben für zwei Stunden bei Raumtemperatur. Am Ende der Belastungsphase entfernen Sie die Maus aus dem Rohr und bringen Sie das Tier in den heimischen Käfig zurück. Wie in diesen repräsentativen Zahlen beobachtet, zeigen heterozygote, schnell aufgesetzte Dystonie-Parkinsonismus-Modellmäuse deutlich kürzere Vor- und Hinterkieferschrittlängen, als ihre Wildtyp-Wurfgefährten im Alter von vier Wochen.Stress heterozygote schnell aufgehende Dystonie Parkinsonismus Modell Mäuse, zeigen auch deutlich kürzere Schrittlängen beider Gliedmaßen als die von gestressten Wild-Typ-Wurf-Kollegen im Alter von acht Wochen. Die Asymmetrien der Schrittlängen beider Gliedmaßen unterscheiden sich in keiner Gruppe von Mäusen in jedem Alter erheblich. Die vordere Basis und die Überlappungen beider Gliedmaßen sind ebenfalls in allen Gruppen in allen Altersgruppen ähnlich.Die Hinterbasis ist bei diesen gestressten heterozygoten, schnell aufgesetzten Dystonie-Parkinsonismus-Modellmäusen deutlich breiter als bei den Stress-Wildtiertieren im Alter von 10 Wochen, was darauf hindeutet, dass Stress motorische Defizite bei heterozygoten, schnell aufgehenden Parkinsonismus-Modellmäusen verursacht. Bei vier bis zehn Wochen alten Tieren werden keine signifikanten Unterschiede in der Hängezeit zwischen Wildtyp und Mutant beobachtet. Im Alter von 12 Wochen ist die Hängezeit von Stress-Wildtyp-Mäusen jedoch deutlich länger als die der anderen Tiere, was darauf hindeutet, dass das motorische Defizit bei heterozygoten, schnell aufgehenden Parkinsonismus-Modellmäusen durch Rückhaltetests bei älteren Tieren von Wildtypmäusen unterschieden werden kann.Legen Sie die Maus auf das Papier unmittelbar nachdem die Maus die Böden der Gliedmaßen in die Tinte hängt, um zu vermeiden, dass die Tinte vor dem Gehtest trocknet. Zusätzliche Tests auf emotionale Eigenschaften, wie offenes Feld, erhöhtes Plus-Maze und ganze Schwimmtests, können durchgeführt werden, um zu beantworten, ob die Ganganomalie nur aus einem motorischen Defizit resultiert. Unser Protokoll kann verwendet werden, um die Spannungsanfälligkeit zu untersuchen, indem die Anzahl und Dauer der Spannungsbelastung geändert und Motorphänotypen zwischen verschiedenen Belastungsbedingungen verglichen werden.Unser Protokoll kann verwendet werden, um die Spannungsanfälligkeit zu untersuchen, indem die Anzahl und Dauer der Spannungsbelastungen geändert und Motorphänotypen zwischen verschiedenen Belastungsbedingungen verglichen werden.

low-cost-protocol-footprint-analysis-hanging-box-test-for-mice

Research

Forschung

JoVE Journal

Behavior

Verhalten

Der Schwanz-Suspension-Test ist als ein experimentelles Verfahren zur antidepressiven Wirksamkeit von medikamentösen Behandlungen bei Mäusen zu bewerten validiert. Mäuse sind an ihren Schwänzen für sechs Minuten unterbrochen und die Flucht Verhaltensweisen bewertet werden. Wir beschreiben die Verfahren bei der Durchführung der Schwanz Suspensionsversuch verwendet.

The Tail Suspension Test-

In diesem Video beschreiben wir das Verfahren zum Testen des Fußabdrucks und die damit verbundene Analyse zur Beurteilung des Gangs und der motorischen Koordination bei Mäusen.

Beurteilung des Gangs durch Fußabdruckanalyse: Eine Methode zum Testen der motorischen Koordination bei Mäusen

Das Protokoll für unvorhersehbaren chronischen milden Stress (UCMS) ist eine validierte Methode zur Untersuchung von Verhaltens- und physiologischen Veränderungen, die mit chronischem Stress und depressiven Symptomen verbunden sind. Acht Wochen nach der Einführung des UCMS-Protokolls führen bei Nagetieren beiderlei Geschlechts zu Verhaltensänderungen und schlechten Gesundheitsergebnissen.

Ein unberechenbarer Chronische leichter Stress Protokoll zur Anstiftung depressive Symptome, Verhaltensänderungen und negativen gesundheitlichen Folgen in Nagetiere

Hier präsentieren wir das unberechenbare milde Dauerstress Protokoll bei Mäusen. Dieses Protokoll induziert einen langfristige Depressive-ähnlichen Phänotyp und ermöglicht es, um die Wirksamkeit von vermeintlichen Antidepressiva bei der Umkehr der Verhaltens- und Neuromolecular depressiv-ähnliche Defizite zu beurteilen.

Das unvorhersehbare milde Dauerstress Protokoll zur Induktion Anhedonie bei Mäusen

Eine umfassende Verhaltens-Testbatterie der Motorik, Stimmung – einschließlich sozialer Interaktion, Depression und Angst – und Kognition ist für die wiederholte Bewertung der Neurodegeneration im Zusammenhang mit Veränderungen im Verhalten von Mäusen.

Eine Verhaltenstherapie Testbatterie für die wiederholte Beurteilung der Motorik, Stimmung und Kognition bei Mäusen

Dieser Artikel bietet ein vereinfachtes und standardisiertes Protokoll zur Induktion von depressivem Verhalten bei chronisch immobilisierten Mäusen mit einem Restrainer. Darüber hinaus werden Verhalten und physiologische Techniken zur Überprüfung der Induktion von Depressionen erklärt.

Ein chronisches Immobilisierungs-Stressprotokoll zur Induzieren von Depressionen-ähnlichem Verhalten bei Mäusen

Dieser Artikel beschreibt eine Handhabungstechnik bei Mäusen, die 3D-Handhabungstechnik, die die routinemäßige Handhabung erleichtert, indem sie angstähnliche Verhaltensweisen reduziert, und präsentiert Details zu zwei bestehenden verwandten Techniken (Tunnel- und Schwanzhandhabung).

Handhabungstechniken zur Stressreduzierung bei Mäusen

Der soziale Bedrohungs-Sicherheits-Test ermöglicht eine gleichzeitige Bewertung der Entwicklung sozialer Vermeidung als Maß für aversives konditioniertes Lernen und soziale Bedrohungs-Sicherheits-Unterscheidungsfähigkeit, die beide verwendet werden, um stressanfällige und stressresistente Individuen innerhalb einer einzigen Gruppe von chronisch sozial besiegten männlichen Mäusen zu identifizieren.

Sozialer Bedrohungs-Sicherheits-Test deckt psychosoziale Stress-bedingte Phänotypen auf

Durch die Integration von vier täglichen sozialen Stressoren beschreibt die vorliegende Studie ein mehrfach integriertes soziales Stressmodell (MISS) für psychiatrische Störungen bei weiblichen C57BL/6J-Mäusen. Nach zehn Tagen wiederholter MISS-Exposition entwickelten die Mäuse depressive und angstähnliche Phänotypen, was ein natürliches, ätilogisch basiertes Tiermodell für die Untersuchung psychiatrischer Störungen bei weiblichen Probanden darstellt.

Ein multiples integriertes soziales Stressmodell für psychiatrische Störungen bei weiblichen C57BL/6J-Mäusen

Dieser Artikel behandelt die Verfahren zur Induktion von Stressreaktionen unter Verwendung von körperlichem Restrain-Stress bei Mäusen und Ratten. Weitere Überlegungen, die bei der Auswahl und Verwendung von Restraint in Nagetiermodellen zu beachten sind, werden diskutiert.

Fixierung, um Stress bei Mäusen und Ratten zu induzieren

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Low-Cost-Protokoll der Footprint Analysen und hängen-Box-Test für Mäuse angewendet die chronische Zurückhaltung Stress

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