Konfokale Abbildung von Double-Stranded RNA und Muster Anerkennung Rezeptoren im negativen Sinn-RNA-Virusinfektion

Doppelsträngige RNA produziert während der RNA-Virus-Replikation man Muster Anerkennung Rezeptoren erkennt an eine angeborene Immunantwort zu induzieren. Für negativ-Sense-RNA-Viren bleibt die Interaktion zwischen dem Low-Level-DsRNA und PRRs unklar. Wir haben eine Methode konfokalen Mikroskopie Arenavirus DsRNA und PRR in einzelnen Zellen visualisieren entwickelt.

Herkömmliche Doppelstrang-RNA-Detektionstest ist in der Regel nicht empfindlich genug, um Doppelstrang-RNA zu erkennen, die in einer negativ-sinnlichen RNA-Virusinfektion gebildet wird. Daher ist die Wechselwirkung zwischen doppelsträngiger RNA und Hostmustererkennungsrezeptoren für diese Viren weitgehend schwer fassbar. Mit diesem Protokoll sind wir in der Lage, die Wechselwirkung zwischen viralem Kernprotein, Doppelstrang-RNA zu visualisieren und zu charakterisieren und eine PRRs auf einzelliger Ebene für negativ-sinnliche RNA-Viren zu hosten. Dies ist ein Multiplex-Assay, der die gleichzeitige Färbung von doppelsträngiger RNA und zwei viralen oder Hostprotein-Targets in einzelnen Zellen ermöglicht. Im Gegensatz zum RNA-FISH-Assay ist diese Technik RNA-sequenzunabhängig und in der Regel mit dem Antikörpernachweis von Proteinzielen kompatibel. Beginnen Sie 24 Stunden vor der Infektion, indem Sie 200. 000 menschliche Lungenepithel-A549-Zellen auf poly-D-Lysin beschichtete Glasabdeckungen in 12-Well-Platten aussäen und mit 37 anbauen.