Induktion und Bewertung der Graft-Versus-Host-Krankheit in einem xenogenen Murine-Modell und Quantifizierung menschlicher T-Zellen in Mausgeweben mit digitaler PCR

Dieses Protokoll beschreibt, wie Xenograft-versus-Host-Krankheit oder XenoGVHD induzieren kann, und wie man blind ist und klinische Saat standardisiert, um konsistente Ergebnisse zu gewährleisten. Das xenoGVHD-Modell bietet eine In-vivo-Methode zum Testen immunsuppressiver Therapien gegen menschliche statt murine T-Zellen, wodurch die Übersetzung dieser Studien in die Klinik verbessert wird. Demonstriert wird das Verfahren von Amara Seng, einer Doktorandin aus meinem Labor.

Einen Tag vor der Injektion acht bis zwölf Wochen alte, nicht fettleibige diabetische Sziden-Gamma- oder NSG-Mäuse in einen sterilisierten Tortenkäfig legen und die Mäuse in einer Cäsium-137-Quelle mit einer Gesamtdosis von 150 Centigrays bestrahlen, mit einer langsamen Rotation, um eine gleichmäßige Bestrahlung zu gewährleisten. Dann legen Sie die Mäuse über Nacht in saubere Käfige in einem sterilen Biosicherheitsschrank. Am nächsten Morgen sammeln Sie genügend gesundes menschliches Blut, um 1,1 mal 10 zu den sieben peripheren mononukleären Blutzellen oder PBMCs pro Maus zu isolieren und das heparinisierte Blut in einem gleichen Volumen von 2% fetalem Rinderserum oder FBS in PBS zu verdünnen.