Name: Isolierung von adipös abgeleiteten regenerativen Zellen zur Behandlung der erektilen Dysfunktion nach radikaler Prostatektomie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Erfahren Sie die Isolierung adipös abgeleiteter regenerativer Zellen zur Behandlung der erektilen Dysfunktion nach radikaler Prostatektomie. Diese Methode ermöglicht Forschern, Stammzelltherapien in der Urologie zu untersuchen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Diese Arbeit wurde vom Universitätskrankenhaus Odense (11/31936), dem Dänischen Zentrum für Regenerative Medizin (14/50427) und der Dänischen Krebsgesellschaft gegründet.

Alle im Protokoll beschriebenen Methoden wurden von der dänischen Nationalen Ethikkommission (Nr. 37054), der dänischen Gesundheits- und Arzneimittelbehörde (EUDRA-CT-Nummer 2013-004220-11) und der dänischen Datenschutzbehörde (2008-58-0035) genehmigt. Die Studie wurde bei ClinicalTrials.gov (NCT02240823) registriert. Die Studie wurde in Übereinstimmung mit der Deklaration von Helsinki durchgeführt, die von der Abteilung für gute klinische Praxis (GCP) am Universitätskrankenhaus Odense überwacht wurde. Die ADRC-Präparation wurde in einer zugelassenen Gewebeeinrichtung für den Umgang mit menschlichen Geweben und Zellen am Universitätskrankenhaus Odense (Dänische Gesundheits- und Arzneimittelbehörde, Zulassungsnummer 29035) durchgeführt.
1. Rekrutierung von Patienten/Teilnehmern
<ol><li>Um an der Studie teilzunehmen, rekrutieren Sie Patienten, die die folgenden Aufnahmekriterien erfüllen.<ol>
<li>Rekrutieren Sie Patienten, die über 18 Jahre alt sind, vor RP sexuell aktiv sind und nicht mit den sexuell übertragbaren Krankheiten infiziert sind, z. B. Infektion mit dem menschlichen Immunschwächevirus, Syphilis oder Hepatitis.</li>
		<li>Stellen Sie sicher, dass sie nach einer RP, die aufgrund von Prostatakrebs durchgeführt wurde, an erektiler Dysfunktion leiden. HINWEIS: In dieser Studie wurden die Patienten 5-18 Monate nach der RP in die Studie aufgenommen und unabhängig von der Operationsmethode eingeschlossen: offen / robotergestützt oder nervenschonend / nicht nervenschonend.</li>
		<li>Stellen Sie sicher, dass der Wert des prostataspezifischen Antigens (PSA) bei der klinischen Nachuntersuchung nach der RP nicht nachweisbar sein musste.</li>
		<li>Stellen Sie sicher, dass die Patienten vor der RP sexuell aktiv waren und immer noch den Wunsch äußerten, nach der RP sexuell aktiv zu bleiben. Stellen Sie sicher, dass eine pharmakologische Intervention mit einem Phosphodiesterase-Typ-5-Inhibitor (PDE5-Hemmer ) oder einem synthetischen Analogon von Prostaglandin E1 (PGE1) vor der Teilnahme versucht und als unzureichend erachtet wurde.</li>
		<li>Achten Sie außerdem darauf, dass die Patienten genügend Unterhautfett am Bauch oder Oberschenkel haben.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Schließen Sie Patienten von der Studie aus, wenn während der RP schwere Ereignisse unter der Narkose auftraten oder wenn sie mit Antikoagulanzien behandelt wurden.</li>
</ol>2. Fettabsaugung
HINWEIS: Fettabsaugung ist eine Operation, die Fett oder Lipozyten aus dem subkutanen Bereich entfernt. Dieser Teil des Protokolls wird als Standard-Fettabsaugung durchgeführt und der Eingriff wird unter sterilen Bedingungen in einem Operationssaal durchgeführt. Alle Instrumente, die im Rahmen des Verfahrens verwendet werden, müssen steril sein und der Chirurg muss Peelings, sterile OP-Kittel, sterile Handschuhe, chirurgische Maske und Hut tragen.
<ol><li>Anästhesien Sie den Patienten.<ol>
<li>Stellen Sie sicher, dass der Patient während des Eingriffs unter Vollnarkose steht und dieser Teil von einem Anästhesisten durchgeführt wird.</li>
		<li>Desinfizieren Sie die Haut des Abdomens und des Hodensacks mit Chlorhexidin 0,5% (Clorhexid-Spiritus, 96% Ethanol medizinisches Chlorhexidin-Digluconat 77% W / W = 83% v / v). Verwenden Sie einen chirurgischen Marker, um die Bereiche am Bauch zu zeichnen, in denen die Fettabsaugung durchgeführt wird. Der Bereich wird normalerweise der Bereich zwischen der Symphyse und dem Nabel sein.</li>
	</ol></li>
	<li>Machen Sie zwei 6 mm breite Einschnitte in die Haut des Abdomens mit einem Skalpell (Nummer 11). Platzieren Sie die Schnitte symmetrisch und seitlich aus dem hochgezogenen Bereich der Fettabsaugung.<ol>
<li>Geben Sie ein wenig Gleitmittel wie Vaseline auf die Einschnitte, um sicherzustellen, dass die Infiltrationskanüle während der Fettabsaugung leicht in die Einschnitte hinein- und herausgleitet.</li>
	</ol></li>
	<li>Führen Sie eine Infiltrationskanüle der Größe 14 G durch die Einschnitte in der Haut ein. Injizieren Sie modifizierte Kleins-Lösung subkutan in die markierten Bereiche parallel zur Hautoberfläche. Injizieren Sie so viel von der Lösung, dass das Zielgewebe geschwollen und fest oder tumeszierend wird. HINWEIS: Die modifizierte Kleins-Lösung besteht aus einer Lösung von 1.000 ml Ringers-Laktat und 1 mg Adrenalin (Adrenalin (1:1.000.000)). Behandeln Sie die Lösung nicht mit Lokalanästhesie, da dies negative Auswirkungen auf die ADRCs haben kann.<ol>
<li>Injizieren Sie ein Volumen modifizierter Kleins-Lösung, das dem Verhältnis 1:1 zu Fettgewebe entspricht.</li>
		<li>Warten Sie 10 Minuten, um die Wirkung von Adrenalin zu maximieren und die Blutmenge im geernteten Fettgewebe zu reduzieren.</li>
	</ol></li>
	<li>Führen Sie eine Standard-Fettabsaugung mit einer Jet-Infusions-Fettabsaugung durch, um 200-300 ml Fettgewebe zu ernten. Verwenden Sie stumpfe Kanülen, die hohl sind, in die ein Infusionsschlauch und eine Düse integriert sind. Befestigen Sie die Kanüle zur Fettabsaugung an einem Absauggerät. HINWEIS: Eine kontinuierliche fächerförmige Wasserinfusion löst das Fettgewebe in Fragmente, die leicht durch die Öffnung in der Kanüle abgesaugt werden können.<ol>
<li>Führen Sie eine 3-mm-Spritze mit stumpfer Spitze durch die Schnitte am Bauch ein</li>
	</ol></li>
	<li>Sammeln Sie das Fettgewebe in einem Lipo-Kollektor, um das Lipoaspirate in einer sterilen Umgebung zu erhalten. Das Lipoaspirate beginnt sich von der Wasserphase zu trennen.</li>
	<li>Verwenden Sie sterile 50-ml-Spritzen, um das Lipoaspirate aus dem Lipokollektor aufzusaugen.<ol>
<li>Minimieren Sie das in den Spritzen aufgesaugte Wasservolumen und schrauben Sie einen Stecker an der Spitze der Spritzen auf, um das Fettgewebe steril zu halten.</li>
	</ol></li>
	<li>Legen Sie Spritzen mit der Spitze nach unten in einen sterilen Plastikbeutel, um die Trennung von Lipoaspirate aus der Wasserphase zu starten. Legen Sie den Beutel in einen sterilen Behälter mit den Spitzen nach unten, um die Trennung fortzusetzen.<ol>
<li>Decken Sie den Behälter mit einem sterilen Tuch ab, um die sterile Umgebung während des Transports zu sichern. HINWEIS: Gemäß der Bedienungsanleitung der für die Isolierung verwendeten Maschine kann das Lipoaspirate bis zu maximal 4 h vor der Isolierung der ADRCs gelagert werden, wir verarbeiten es jedoch immer sofort.</li>
	</ol></li>
	<li>Schließen Sie die Hautschnitte mit dem bevorzugten Nahtmaterial des Chirurgen ab. Legen Sie eine Kompressionsstütze, ein Bauchbindemittel, um den Bauch herum, um das postoperative Ödem zu reduzieren.</li>
	<li>Machen Sie einen Penisblock, indem Sie 20 ml Bupivacain 5 mg / ml mit 5 μg Adrenalin injizieren.<ol>
<li>Verwenden Sie eine 20-ml-Spritze und tragen Sie sie mit einer 23-G-Nadel auf, die 1 1/4 Zoll lang ist.</li>
		<li>Tragen Sie 5 ml Bupivacain in jeden Quadranten in der Unterhaut auf.</li>
		<li>Injizieren Sie das Bupivacain an zwei Stellen, von denen eine ventral und die andere dorsal platziert wird. Führen Sie die Nadel in ihrer gesamten Länge in das Unterhautgewebe ein und zeigen Sie die Nadel seitlich nach rechts und injizieren Sie die Anästhesie, wenn die Nadel zurückgezogen wird. Wiederholen Sie die Injektion und richten Sie die Nadel nach links. HINWEIS: Der Patient kann nun vom Anästhesisten aus der Vollnarkose geweckt werden.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Isolierung von ADRCs
HINWEIS: Der Isolationsprozess von ADRCs wird wie im Benutzerhandbuch nach dem Gerät beschrieben durchgeführt (siehe Materialverzeichnis). Es ist wichtig, dass das Verfahren unter sterilen Bedingungen durchgeführt wird, um sicherzustellen, dass das Lipoaspirate während der Reinigung der ADRCs keinen Verunreinigungen ausgesetzt ist. Die Zeit, die für die Isolierung von ADRCs benötigt wird, hängt vom Volumen des Lipoaspirats ab, aber das gesamte Verfahren dauert ungefähr 2,5 Stunden mit dem halbautomatischen Gerät, wie hier beschrieben.
<ol><li>Legen Sie alle Verbrauchsmaterialien und Enzyme aseptisch auf einen Tisch, der von einem sterilen Einweg-OP-Handtuch bedeckt ist. HINWEIS: Ein Verfahrenskit enthält alle notwendigen Verbrauchsmaterialien und Enzyme, die für die Isolierung von ADRCs von einem Patienten benötigt werden. Darüber hinaus müssen drei 37-39 ° C, Ein-Liter-Infusionsbeutel mit Lactated Ringers zusammen mit steriler Kleidung, Handschuhen und Handtüchern und Ethanol zur Desinfektion zur Verfügung stehen. Notieren Sie sich alle Chargennummern von Verbrauchsmaterialien und Enzymen sowie die Temperatur der Lactated Ringer, wenn sie an das System angeschlossen sind.<ol>
<li>Wischen Sie das Gerät mit Ethanol ab und befolgen Sie die Anweisungen des Herstellers.</li>
		<li>Laden Sie das Verbrauchsmaterialset auf das Gerät und schließen Sie eine Tüte Lactated Ringers an das System an.</li>
		<li>Führen Sie die Reihe der halbautomatischen Tests (Systemprüfung und Dichtheitstest) durch, bevor Sie das Lipoaspirate hinzufügen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Lassen Sie das Lipoaspirate in 50-ml-Röhrchen stehen, während die Schritte in 3.1 ausgeführt werden. Dadurch kann sich das Fett von der flüssigen Phase trennen. Notieren Sie sich die Gesamtmenge (in ml) des Fettgewebes und verwenden Sie diese, um sicherzustellen, dass die Menge an geladenem Fett im Bereich der Gerätekapazität liegt.</li>
	<li>Laden Sie das Gewebe ein, wenn Sie vom Gerät dazu aufgefordert werden. Die Maschine leitet nun überschüssige Flüssigkeit ab und wiegt die Menge des geladenen Fettgewebes, bevor es mit Lactated Ringers gewaschen wird.<ol>
<li>Wenn das Gewebe gewaschen und wieder entleert wurde, schließen Sie einen neuen Infusionsbeutel mit 37-39 ° C Lactated Ringers an, wenn dies von der Maschine verlangt wird.</li>
		<li>Rekonstituieren Sie das kommerziell erhältliche Enzym, das Kollagenase und Protease enthält, in 5 ml Lactated Ringers (eine Durchstechflasche mit Enzym reicht für Fettmengen bis zu 270 ml).</li>
		<li>Stellen Sie sicher, dass das Gerät die Menge an Enzym (basierend auf dem Gewebegewicht) anzeigt, die mit dem Fettgewebe in den Kanister injiziert werden soll. Nach der Injektion dauert die enzymatische Verdauung, die unter Bewegung durchgeführt wird, etwa 20 Minuten.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Lassen Sie nach der Gewebeverdauung das Rührwerk anhalten und überprüfen, ob der Inhalt in zwei Phasen unterteilt ist: eine obere lipidhaltige, gelbe Phase und eine untere rosa Schicht, die die ADRCs enthält. Lassen Sie die letztere Schicht in die Zellverarbeitungskammer (die in die eingebaute Zentrifuge des Geräts geht) des Verbrauchsmaterialsatzes abfließen, während die Lipidschicht zurückbleibt.</li>
	<li>Lassen Sie ADRCs während mehrerer Zentrifugationsrunden in der Zellverarbeitungskammer konzentrieren. Fügen Sie nun 10 ml Intravase hinzu (enthält DNase, das hilft, ein Verklumpen in der endgültigen ADRC-Suspension zu vermeiden), das in Lactated Ringers rekonstituiert ist. Die enzymatische Reaktion dauert 10 Minuten, danach werden die ADRCs gewaschen. HINWEIS: Dieser Schritt erfolgt vollautomatisch und die Maschine informiert, wenn der Vorgang abgeschlossen ist.</li>
	<li>Wenn die Isolierung von ADRCs abgeschlossen ist, suspendieren Sie die Zellen in 5 ml Ringerlaktat. Saugen Sie die Lösung in eine 5-ml-Spritze ab.</li>
	<li>Montieren Sie eine 3-Wege-Absperrhahn-Buchse Luer-Lock auf der 5-ml-Spritze, die die ADRCs enthält, und saugen Sie 4 ml ADRCs in eine weitere sterile 5-ml-Spritze ein.</li>
	<li>Übertragen Sie die letzten 1 ml in eine 1 ml Spritze. Verwenden Sie diese 1 ml für die ADRC-Charakterisierung, z. B. Zellzahl, Zelllebensfähigkeit, Analyse von Oberflächenmarkern durch Durchflusszytometrie und ADRC-Differenzierungsfähigkeit.</li>
	<li>Setzen Sie eine 25-G-Nadel auf die 5-ml-Spritze auf, die die 4 ml ADRCs enthält, bevor sie in einen sterilen Vorhang verpackt wird. Verwenden Sie die ADRCs für die Injektion in den Empfänger. In diesem Fall enthält die Lösung von ADRCs im Durchschnitt 8,4-32,7 Millionen Zellen.</li>
</ol>4. Implantation der ADRCs in Corpora cavernosum
HINWEIS: Dies ist ein steriles Verfahren. Alle Instrumente müssen steril sein, und die Person, die die Lösung mit den Stammzellen in die Corpora cavernosum injiziert, muss sterile Handschuhe tragen. Der Patient ist während dieses Eingriffs wach und erhält seine eigenen Stammzellen. Die ADRCs werden injiziert, ohne die Zellen vor der Injektion zu zählen.
<ol><li>Halten Sie die Lösung von ADRCs homogen, indem Sie die Spritze vorsichtig kippen, bis sie in die Corpora cavernosum injiziert wird.</li>
	<li>Legen Sie einen Blendenvorhang über den Penis. Platzieren Sie ein Tourniquet an der Wurzel des Penis, indem Sie eine Silikongefäßschleife verwenden. Ziehen Sie die Schlaufe fest und sichern Sie sie mit einer Pinzette mit gebogener Erbse. Machen Sie das Tourniquet fest genug, um den Blutfluss aus dem Penis zu stoppen.</li>
	<li>Verwenden Sie zwei antiseptische Swaps, um die Penishaut an der Injektionsstelle (laterale Stelle der Corpora cavernosum) zu desinfizieren. Injizieren Sie 1 ml der lösung, die ADRCs enthält, in einem direkten Winkel in die Corpora cavernosum auf der rechten Seite an zwei verschiedenen Stellen, wiederholen Sie diesen Schritt anschließend in der linken Corpora cavernosum. Das Gesamtvolumen der injizierten ADRCs beträgt 4 ml.</li>
	<li>Warten Sie 30 Minuten und entfernen Sie dann das Tourniquet.</li>
	<li>Entlassung des Patienten nach 2 Stunden Beobachtung nach der Injektion von ADRCs, um sicherzustellen, dass der Patient nach der Anästhesie gut genesen ist.</li>
</ol>5. Nachsorge
<ol><li>Empfehlen Sie dem Patienten, innerhalb der ersten Woche keine körperliche Leistung zu erbringen, die den Blutdruck erhöhen kann, um die Entwicklung von Hämatomen zu verhindern.</li>
	<li>Empfehlen Sie dem Patienten, das Bauchbindemittel in den ersten 14 Tagen nach der Operation für 24 Stunden und danach für 14 Tage tagsüber zu tragen.</li>
	<li>Behandeln Sie postoperative Schmerzen mit oralem Paracetamol (z. B. Paracetamol; 1.000 mg, 4 mal täglich) und oralem entzündungshemmenden (z. B. Ibuprofen; 400 mg 3 mal täglich).</li>
</ol>

<ol><li>Baraniak, P. R., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+paracrine+actions+and+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Stem cell paracrine actions and tissue regeneration.</a> Regenerative Medicine. 5 (1), 121-143 (2010).</li>
<li>Albersen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injections+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+and+stem+cell+lysate+improve+recovery+of+erectile+function+in+a+rat+model+of+cavernous+nerve+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Sexual+Medicine%22%5BJournal%5D)">Injections of adipose tissue-derived stem cells and stem cell lysate improve recovery of erectile function in a rat model of cavernous nerve injury.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (10), 3331-3340 (2010).</li>
<li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Molecular Biology of the Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+stem+cells+improve+erectile+function+partially+through+the+secretion+of+IGF-1%2C+bFGF+and+VEGF+in+aged+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Andrology%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived stem cells improve erectile function partially through the secretion of IGF-1, bFGF and VEGF in aged rats.</a> Andrology. 6, 498-509 (2018).</li>
<li>Phillippou, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Penile+rehabilitation+for+postprostatectomy+erectile+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Cochrane+Database+Systematic+Review+Issue+10%22%5BJournal%5D)">Penile rehabilitation for postprostatectomy erectile dysfunction.</a> Cochrane Database Systematic Review Issue 10. 012414, (2018).</li>
<li>Nelson, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Back+to+baseline%3A+erectile+function+recovery+after+radical+prostatectomy+from+the+patients%27+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Sex+Medicine%22%5BJournal%5D)">Back to baseline: erectile function recovery after radical prostatectomy from the patients' perspective.</a> Journal of Sex Medicine. 10, 1636-1643 (2013).</li>
<li>Fode, M., Ohl, D. A., Ralph, D., Sonksen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Penile+rehabilitation+after+radical+prostatectomy%3A+what+the+evidence+really+says%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Urology+International%22%5BJournal%5D)">Penile rehabilitation after radical prostatectomy: what the evidence really says.</a> British Journal of Urology International. 112 (7), 998-1008 (2013).</li>
<li>Johansson, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+quality-of-life+outcomes+after+radical+prostatectomy+or+watchfull+waiting%3A+the+Scandinavian+Prostate+Cancer+Group-4+randomised+trail%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Oncology%22%5BJournal%5D)">Long-term quality-of-life outcomes after radical prostatectomy or watchfull waiting: the Scandinavian Prostate Cancer Group-4 randomised trail.</a> Lancet Oncology. 12, 891-899 (2011).</li>
<li>Huang, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+intracavernous+injection+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+on+hyperlipidemia-associated+erectile+dysfunction+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Sexual+Medicine%22%5BJournal%5D)">The effect of intracavernous injection of adipose tissue-derived stem cells on hyperlipidemia-associated erectile dysfunction in a rat model.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (4), Pt 1 1391-1400 (2010).</li>
<li>Garcia, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+erectile+dysfunction+in+the+obese+type+2+diabetic+ZDF+rat+with+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Sexual+Medicine%22%5BJournal%5D)">Treatment of erectile dysfunction in the obese type 2 diabetic ZDF rat with adipose tissue-derived stem cells.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (1), Pt 1 89-98 (2010).</li>
<li>Lin, C. S., Xin, Z., Dai, J., Huang, Y. C., Lue, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem-cell+therapy+for+erectile+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Biological+Therapy%22%5BJournal%5D)">Stem-cell therapy for erectile dysfunction.</a> Expert Opinion on Biological Therapy. 13 (11), 1585-1597 (2013).</li>
<li>Haahr, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+Potential+Effect+of+a+Single+Intracavernous+Injection+of+Autologous+Adipose-Derived+Regenerative+Cells+in+Patients+with+Erectile+Dysfunction+Following+Radical+Prostatectomy%3A+An+Open-Label+Phase+I+Clinical+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Safety and Potential Effect of a Single Intracavernous Injection of Autologous Adipose-Derived Regenerative Cells in Patients with Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy: An Open-Label Phase I Clinical Trial.</a> EBioMedicine. 5, 204-210 (2016).</li>
<li>Mirotsou, M., Jayawardena, T. M., Schmeckpebper, J., Gnecchi, M., Dzau, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paracrine+mechanisms+of+stem+cell+reparative+and+regenerative+actions+in+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Paracrine mechanisms of stem cell reparative and regenerative actions in the heart.</a> Journal of Molecular Cellular Cardiology. 50 (2), 280-289 (2011).</li>
<li>Baraniak, P. R., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+paracrine+actions+and+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Stem cell paracrine actions and tissue regeneration.</a> Regenerative Medicine. 5 (1), 121-143 (2010).</li>
<li>Albersen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injections+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+and+stem+cell+lysate+improve+recovery+of+erectile+function+in+a+rat+model+of+cavernous+nerve+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Sexual+Medicine%22%5BJournal%5D)">Injections of adipose tissue-derived stem cells and stem cell lysate improve recovery of erectile function in a rat model of cavernous nerve injury.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (10), 3331-3340 (2010).</li>
<li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Molecular Biology of the Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).</li>
<li>Gokce, A., Peak, T. C., Abdel-Mageed, A. B., Hellstrom, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+Tissue-Derived+Stem+Cells+for+the+Treatment+of+Erectile+Dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Urology+Reports%22%5BJournal%5D)">Adipose Tissue-Derived Stem Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction.</a> Current Urology Reports. 17, 14(2016).</li>
<li>Bourin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromal+cells+from+the+adipose+tissue-derived+stromal+vascular+fraction+and+cultured+expanded+adipose+tissue-derived+stromal%2Fstem+cells%3A+a+joint+statement+of+the+International+Frederation+for+Adipose+Therapeutics+and+Science+%28IFATS%29+and+the+International+Society+for+Cellular+Therapy+%28ISCT%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherpy%22%5BJournal%5D)">Stromal cells from the adipose tissue-derived stromal vascular fraction and cultured expanded adipose tissue-derived stromal/stem cells: a joint statement of the International Frederation for Adipose Therapeutics and Science (IFATS) and the International Society for Cellular Therapy (ISCT).</a> Cytotherpy. 15 (6), 641-648 (2013).</li>
<li>Haahr, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+12-month+Follow-up+after+a+Single+Intracavernous+Injection+of+Autologous+Adipose-derived+Regenerative+Cells+in+Patients+with+Erectile+Dysfunction+following+Radical+Prostatectomy%3A+An+Open-label+Phase+1+Clinical+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">A 12-month Follow-up after a Single Intracavernous Injection of Autologous Adipose-derived Regenerative Cells in Patients with Erectile Dysfunction following Radical Prostatectomy: An Open-label Phase 1 Clinical Trial.</a> Urology. 121, 203(2018).</li>
<li>Fedder, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+exposure+of+human+fibroblasts+to+local+anesthetics+impairs+cell+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Immunology%22%5BJournal%5D)">In vitro exposure of human fibroblasts to local anesthetics impairs cell growth.</a> Clinical & Experimental Immunology. 162 (2), 280-288 (2010).</li>
<li>D'Andrea, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+production+of+human+adipose+tissue+from+stem+cells%3A+a+new+tool+for+regenerative+medicine+ad+tissue+banking%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+C%3A+Methods%22%5BJournal%5D)">Large-scale production of human adipose tissue from stem cells: a new tool for regenerative medicine ad tissue banking.</a> Tissue Engineering Part C: Methods. 14 (3), 233-242 (2008).</li>
<li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+therapeutic+effects+of+human+and+mouse+adipose-derived+stem+cells+in+a+murine+model+of+lipopolysaccharide-induced+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Comparison of the therapeutic effects of human and mouse adipose-derived stem cells in a murine model of lipopolysaccharide-induced acute lung injury.</a> Stem Cell Research and Therapy. 4 (1), 13(2013).</li>
<li>Yusuke, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+freshly+isolated+adipose+tissue-derived+regenerative+cells+enhances+angiogenesis+in+a+murine+model+of+hind+limb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Research%22%5BJournal%5D)">Transplantation of freshly isolated adipose tissue-derived regenerative cells enhances angiogenesis in a murine model of hind limb ischemia.</a> Biomedical Research. 34 (1), 23-29 (2013).</li>
</ol>

Der Autor Søren P. Sheikh ist CEO bei Blue Cell Therapeutics, Kopenhagen, Dänemark.

Das vorgestellte Verfahren zur Isolierung von ADRCs ist nicht darauf beschränkt, nur für die ED-Therapie verwendet zu werden, sondern kann in mehreren anderen Behandlungsformen und Experimenten verwendet werden. Unsere Studie zeigte, dass autologe, frisch isolierte ADRCs sicher zu verwenden sind und die Behandlung in einem 12-monatigen Follow-up gut verträglich ist.
Bevor das Verfahren angewendet wird, müssen einige Überlegungen angestellt werden. Ein Nachteil dieses Verfahrens ist, dass der Patient während der Fettabsaugung unter Vollnarkose stehen muss. Eine Fettabsaugung kann unter örtlicher Betäubung durchgeführt werden, aber eine frühere Studie hat gezeigt, dass eine Kombination aus Lokalanästhetika und Adrenalin einen negativen Einfluss auf das Zellwachstum der Fibroblasten20 haben kann. Das Risiko, unter Vollnarkose zu stehen, ist im Allgemeinen gering, aber ein negatives Ergebnis ist immer noch zu sehen. Dieses Risiko muss berücksichtigt werden, wenn Patienten für die Behandlung ausgewählt werden. Die Fettabsaugung ist ein chirurgischer Eingriff und birgt daher immer das Risiko von Komplikationen. Wie bei allen anderen chirurgischen Eingriffen besteht das Risiko einer postoperativen Blutung, die zur Bildung von Hämatomen und zu einem Infektionsrisiko führt. Einige unserer Patienten berichteten auch von einer vorübergehenden verminderten Empfindlichkeit der Bauchhaut. Eine unmittelbare Komplikation der Fettabsaugung sind Blutungen. Es ist bekannt, dass Patienten Gefahr laufen, systemische Komplikationen zu bekommen, wenn große Mengen an Gewebe entfernt werden. Die Fettabsaugung bei diesem Verfahren war relativ gering und wurde daher nicht als Risikofaktor angesehen.
Komplikationen bei der Injektion von Zellen werden als vorübergehende Rötung, Zärtlichkeit und Hämatome berichtet.
Das Gerät, das für die Isolierung der ADRCs verwendet wird, wurde ausgewählt, da das System CE-zertifiziert ist. In Dänemark ist es obligatorisch, CE-zugelassene Geräte zu verwenden, da die Behörden die Behandlung mit Stammzellen als Arzneimittelteststudie kategorisieren, wenn das ADRC zur Injektion bei Menschen verwendet wird.
Das Gerät hat Vorteile, wie z.B. dass das gesamte Verfahren standardisiert und in einer geschlossenen sterilen Umgebung durchgeführt wird, ohne dass ein streng klassifiziertes Labor erforderlich ist. Das Risiko einer Kontamination wird dadurch reduziert. Dies stellt sicher, dass das Verfahren einheitlich und reproduzierbar ist und dass die Qualität des Endprodukts jedes Mal gleich ist (es hängt jedoch auch von der Qualität des Eingangsgewebes ab). Die Durchführung der Isolierung am Gerät ist einfach und erfordert keine speziell geschulten Bediener.
Eine Einschränkung des Geräts besteht darin, dass der minimale Input in die Maschine 100 g entleertes Lipoaspirate beträgt. Da die Fettabsaugung vor Beginn der Zellverarbeitung vollständig abgeschlossen ist (und in unserem Fall nach an einem anderen Ort, nicht im OP), erfordert dies, dass die Menge an Lipoaspirate mindestens 125 ml beträgt, wenn man das grobe Maß der 50 ml-Spritzen verwendet. Andernfalls besteht die Gefahr, dass nicht genügend Material für die Maschine vorhanden ist. Auch die Verwendung der oberen Endgrenze (maximaler Eingang beträgt 425 ml) würde zu einem sehr langen Isolationsverfahren führen.
Adulte Stammzellen sowohl aus dem Fettgewebe als auch aus dem Knochenmark scheinen wie embryonale Stammzellen eine Fähigkeit zur Selbsterneuerung und Differenzierung zu haben. Einer der Vorteile von ADRCs gegenüber hämopoetischen Stammzellen ist eine 100-500-mal höhere Ausbeute pro Gewebevolumen im Vergleich zu Knochenmark21,22, und daher müssen ADRCs nicht kultiviert werden. Darüber hinaus sind hämopoetische Stammzellen schwieriger und schmerzhafter vom Patienten zu entnehmen als Fettgewebe. In vielen Situationen ist Fettgewebe nach der Operation nur ein Abfallprodukt. Es ist möglich, Stammzellen zu kultivieren, um eine höhere Ausbeute zu erzielen, die für die Angiogenese geeignet ist, jedoch können frisch isolierte ADRCs ein höheres angiogenes Potenzial haben als kultivierte23.

Stammzellen haben die Fähigkeit, sich in verschiedene Zelltypen zu differenzieren, und sie sezernieren parakrine Faktoren, von denen angenommen wird, dass sie den Heilungsprozess in geschädigtem Gewebe fördern 1,2,3,4. Sie sind daher im Bereich der regenerativen Medizin attraktiv, da sie eine mögliche kurative Behandlung darstellen können.
Die radikale Prostatektomie (RP) ist die goldene kurative Behandlung für Patienten mit lokalisiertem Prostatakrebs mit niedrigem / mittlerem Risiko und einer Lebenserwartung > 10 Jahren. Das Ziel der Operation ist die Ausrottung des Krebses, aber es hat mehrere Nebenwirkungen. Die Prävalenz von Inkontinenz nach Prostatektomie liegt zwischen 2-60% und erektile Dysfunktion (ED) wird von 20-90% der Patienten5. Nervenschonende Technik ist bei einigen Patienten eine Option (Gleason-Score < 7, geringes Risiko für extrakapsuläre Erkrankungen)5. Diese Technik schont die Nerven, die für die Erektion verantwortlich sind, aber obwohl dies möglich ist, berichten viele Patienten immer noch postoperativ über ED.
Behandlungsmöglichkeiten für die Penisrehabilitation nach RP bestehen hauptsächlich aus der Behandlung mit PDE-5-Hemmern, einer Injektions- oder Instillationstherapie und Vakuumpumpen. Medikamente, die für die Rehabilitation des Penis verwendet werden, unterscheiden sich pharmakologisch, aber ihr Wirkmechanismus umfasst die Entspannung der glatten Muskelzellen im Corpus cavernosum. Viele Patienten erleben jedoch ein Behandlungsversagen und erreichen nie eine Wirkung des Arzneimittels, die den Geschlechtsverkehr ermöglicht6.
Es wird angenommen, dass die ED, die nach RP auftritt, auf strukturell irreversible Änderungenzurückzuführen ist 7. Diese Veränderungen treten im Schwellkörper auf und umfassen die Apoptose der glatten Muskel- und Endothelzellen und die Fibrose. Der veno-okklusive Mechanismus, der für einen zentralen Teil der Erektion verantwortlich ist, wird durch die Veränderungen beeinträchtigt, was zu einer schlechteren Füllung und Härte des Penisführt 7.
Viele der Patienten berichten, dass die ED, die sie erleben, einen negativen Einfluss auf ihre Lebensqualität hat8. Sie sind nicht bereit, ihre sexuelle Aktivität nach der Operation aufzugeben, und daher ist eine kurative Therapie für ED attraktiv, wenn die anderen verfügbaren Behandlungen für die Penisrehabilitation versagen.
In früheren Studien, einschließlich tierischer und kleiner Phase-1-Studien am Menschen, haben Stammzellen vielversprechende Ergebnisse als alternative Behandlung für ED 2,9,10,11,12 gezeigt. Die Ergebnisse zeigen, dass es sicher ist, ADRCs zu verwenden, und dass die erektile Funktion nach einer einzigen Injektion in die Corpora cavernosum 2,9,10,11,12 signifikant verbessert wird. Es wird angenommen, dass aus Fett gewonnene regenerative Zellen (ADRCs) die Geweberegeneration durch parakrine Mechanismen durch die Freisetzung mehrerer Hormone, neurotropher und anderer Wachstumsfaktoren, Zytokine und möglicherweise Mikro-RNAsunterstützen 13. Darüber hinaus sind ADRCs in der Lage, sich in mehrere reife Zelltypen zu differenzieren, darunter Endothel- und Gefäßmuskelzellen, Knorpelzellen, Osteozyten und Neuronen14,15. Diese Eigenschaften machen Stammzellen interessant für die Entwicklung einer dauerhaften neuen Behandlung für ED.
Stammzellen werden in mehrere Gruppen unterteilt, im Wesentlichen diejenigen, die aus dem frühen Embryo (embryonale Stammzellen) und aus adultem Gewebe (adulte Stammzellen) gewonnen werden. Zu den adulten Stammzellen gehören mesenchymale Stammzellen (MSC), die multipotent sind und im Knochenmark, im Fettgewebe, im Nabelschnurblut, in der Plazenta und in der Zahnpulpagefunden werden können 17.
Stammzellen aus dem Fettgewebe sind im Gegensatz zu Stammzellen aus dem Knochenmark leicht zugänglich. Die Gewinnung von Stammzellen aus dem Knochenmark ist im Vergleich zur Fettabsaugung ein riskantes und schmerzhaftes Verfahren. Die Anzahl der Zellen, die aus dem Knochenmark geerntet werden können, wird begrenzt sein, während nur die Depots des Patienten mit Fettgewebe die Grenze für die Anzahl der Zellen festlegen, die geerntet werden können. Es ist daher möglich, eine große Menge Stammzellen aus dem Fettgewebe zu isolieren, ohne dass die Zellen anschließend kultiviert werden müssen, um eine zufriedenstellende Menge zu erhalten. Die aus Fett gewonnenen regenerativen Zellen, auch oft als stromale Gefäßfraktion (SFV) bezeichnet, bestehen aus vielen Zelltypen, einschließlich MSCs, Endothelzellen, Perizyten, Immunzellen und Vorläufern davon18. Diese können alle eine Rolle im regenerativen Prozess spielen.
Ziel der vorliegenden Studie ist es, die Wirkung von Stammzellen auf ED nach RP unter Verwendung von 4 ml autologen ADRCs zu untersuchen, die nach der Injektion in die Corpora cavernosum aus frisch geerntetem Fettgewebe isoliert wurden.

<table><tbody><tr><td>Liposuction</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Abdominal Binder</td><td>Dale</td><td></td><td>Größe abhängig vom Patienten</td></tr><tr><td>Adhessive OP-Handtuch</td><td>M&ouml; lnlycke Health Care</td><td>906677</td><td>90x75</td></tr><tr><td>cm Adrenalin 1 mg/ml</td><td>Amgros I/s</td><td>74 44 23</td><td>1 ml</td></tr><tr><td>Basic OP Zubehör</td><td>M&ouml; lnlycke Health Care</td><td>97010873-07</td><td></td></tr><tr><td>Klinge aus Kohlenstoffstahl 11</td><td>Swann-Morton</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chlorhixidin Ethanol</td><td>Faarborg Pharma</td><td>5% farbig</td><td></td></tr><tr><td>Einweg-Set Lipokollektor 3</td><td>Human Med</td><td>670200</td><td></td></tr><tr><td>Verlängerungsschläuche</td><td>Extrudan</td><td></td><td>5,8/8,3 mm, Ch 25, 3,5 M lang</td></tr><tr><td>Gaze Rags</td><td>Barrier</td><td>175201</td><td>30x45 cm</td></tr><tr><td>Jelonet</td><td>Smith and Nephew Medical Ltd</td><td>90509225</td><td>10 x 10 cm</td></tr><tr><td>Marcain 5 mg/ml + Adrenalin 5 Mikrogramm</td><td>Astra Zeneca</td><td></td><td>20 mL</td></tr><tr><td>Mesorb Bandage</td><td>M&ouml; lnlycke Health Care</td><td>677001</td><td>10x13 cm</td></tr><tr><td>Microlance</td><td>Becton Dickinson</td><td>304622</td><td>18 G + 23 G</td></tr><tr><td>Monocryl Naht</td><td>Ethicon</td><td></td><td>04:00</td></tr><tr><td>Ringer-lactat</td><td>Fresinus Kabi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterile Handschuhe</td><td>Gammex</td><td>330052065</td><td></td></tr><tr><td>OP-Kleid</td><td>M&ouml; lnlycke Health Care</td><td>690103-01</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Marker</td><td>Richard-Allan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Surgical Mask</td><td>3M</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Spritze Codan Medical</td><td>6,28,402</td><td>50/60 ml Katheterspitze</td></tr><tr><td>Spritze</td><td>Becton Dickinson</td><td>700016181</td><td>1 ml</td></tr><tr><td>WAL- Applikator für Kanülen 25/30 cm</td><td>Human Med</td><td>REF 500001</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isolierung von ADRC's</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 ml Spritze</td><td>Becton Dickinson</td><td>REF 303172</td><td></td></tr><tr><td>3-Wege-Absperrhahn</td><td>One Med</td><td>REF 10554-01</td><td></td></tr><tr><td>Adhesive OP-Handtuch</td><td>M&ouml; lnlycke Health Care AB</td><td>REF 906677</td><td>90x75 cm</td></tr><tr><td>Cytori Celution 800IV Gerät</td><td>Cytori</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Desinfection swaps</td><td>Mediq Danmark</td><td>3340010</td><td></td></tr><tr><td>Microlance</td><td>Becton Dickinson</td><td></td><td>25G (0,5*25 mm)</td></tr><tr><td>Nitril Handschuhe</td><td>Abena</td><td></td><td>Puderfrei</td></tr><tr><td>ODER Abdecktuch, 2 Schichten</td><td>Lohmann & Rauscher</td><td>REF 33005</td><td></td></tr><tr><td>Ringers Lactate</td><td>Fresinus Kabi</td><td>06756 (DK)</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Handschuhe</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steriler Kittel</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ergänzungsset für Cytori Celution 800IV Devise</td><td>Cytori</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Termometer</td><td>Thomas Scientific</td><td></td><td>rückverfolgbar</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Injektion von ADRC's</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aperture Abdecktuch</td><td>One Med</td><td>REF1565-01</td><td>75*90 cm</td></tr><tr><td>Desinfektionstausch</td><td>Mediq Danmark</td><td>3340010</td><td></td></tr><tr><td>Pean Leibinger</td><td></td><td>32-01257</td><td></td></tr><tr><td>Silikon Gefäßschlaufe</td><td>Lila Chirurgisch</td><td>REF PS3203</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Handschuhe</td><td>Sempermed</td><td></td><td>Oder verwenden Sie Ihren Favoriten</td></tr></tbody></table>

isolierung von adipös abgeleiteten regenerativen zellen zur behandlung der erektilen dysfunktion nach radikaler prostatektomie

Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy

Stammzellen werden in vielen Forschungsbereichen der regenerativen Medizin eingesetzt, zum Teil, weil diese Behandlungen eher kurativ als symptomatisch sein können. Stammzellen können aus verschiedenen Geweben gewonnen werden und es wurden verschiedene Methoden zur Isolierung beschrieben. Die vorgestellte Methode zur Isolierung von aus Fett gewonnenen regenerativen Zellen (ADRCs) kann in vielen therapeutischen Bereichen eingesetzt werden, da es sich bei der Methode um ein allgemeines Verfahren handelt und daher nicht auf die Therapie der erektilen Dysfunktion (ED) beschränkt ist. ED ist eine häufige und schwerwiegende Nebenwirkung der radikalen Prostatektomie (RP), da ED oft nicht gut mit konventioneller Therapie behandelt wird. Die Verwendung von ADRCs zur Behandlung von ED hat aufgrund der ersten positiven Ergebnisse nach einer einzigen Injektion von Zellen in die Corpora cavernosum großes Interesse geweckt. Die Methode zur Isolierung von ADRCs ist ein einfacher, automatisierter Prozess, der reproduzierbar ist und ein einheitliches Produkt gewährleistet. Darüber hinaus ist die Sterilität des isolierten Produkts gewährleistet, da der gesamte Prozess in einem geschlossenen System stattfindet. Es ist wichtig, das Risiko einer Kontamination und Infektion zu minimieren, da die Stammzellen zur Injektion beim Menschen verwendet werden. Das gesamte Verfahren kann innerhalb von 2,5-3,5 Stunden durchgeführt werden und erfordert kein klassifiziertes Labor, wodurch der Versand von Gewebe an einen externen Standort entfällt. Das Verfahren hat jedoch einige Einschränkungen, da die Mindestmenge an drainiertem Lipoaspirate für das Funktionieren des Isolationsgeräts 100 g beträgt.

Das vorgestellte Verfahren wurde für eine offene klinische Phase-1-Studie mit 21 Patienten19 angewendet. Der primäre Endpunkt der Studie war die Sicherheit der Anwendung von ADRCs beim Menschen und der sekundäre Endpunkt war die Wirkung von ADRCs auf die erektile Funktion.
Einundzwanzig Männer wurden in die Studie mit einem Durchschnittsalter von 60 Jahren (Bereich 46-69) und einer normalen Erektion und einem aktiven Sexualleben vor dem RP aufgrund von Prostatakrebs eingeschlossen. Sie alle litten nach der RP an ED, ohne Anzeichen einer Genesung von Medikamenten, die für die Rehabilitation des Penis zur Verfügung standen. Sechs Männer litten an Inkontinenz als Nebenwirkung des RP. Alle Männer erhielten eine einzige intrakavernöse Injektion von ADRCs, die mit der vorgestellten Methode isoliert wurden.
Alle 21 Männer wurden mit 4 Besuchen in der Ambulanz um 1,3,6 und 12 Monate nach der Injektion nachverfolgt. Die sexuelle Funktion wurde mit validierten Fragebögen bewertet – dem International Index of Erectile Function-5 (IIEF-5) und dem Erection Hardness Score (EHS) (als Anhänge beigefügt).
Während der Beobachtungszeit traten keine schwerwiegenden Ereignisse auf. Acht Männer berichteten von vorübergehenden Rötungen und Schwellungen an den Injektionsstellen, drei berichteten von einer Reaktion im Penisbereich. Acht erlebte reversible kleinere Ereignisse im Zusammenhang mit der Fettabsaugung wurden berichtet, wie leichte Bauchbeschwerden und kleinere Bauchhämatome. Keine Patienten berichteten über Beschwerden bei der 1-monatigen Nachuntersuchung. Acht von fünfzehn (53%) in der Kontinentgruppe berichteten, dass die erektile Funktion nach 12 Monaten für den Geschlechtsverkehr ausreichte. Die Gruppe von 6 inkontinenten Männern zeigte keine Verbesserung der erektilen Funktion.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>Kontinent</td>
			<td>Inkontinent</td>
		</tr>
<tr>
<td>Eingeschlossene Patienten</td>
			<td>15</td>
			<td>6</td>
		</tr>
<tr>
<td>Signifikante Wirkung</td>
			<td>8</td>
			<td>0</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabelle 1: Die Tabelle zeigt die Unterschiede in der signifikanten Wirkung der Behandlung zwischen kontinentalen und inkontinenten Patienten.

Die genaue Offenlegung von Methoden und Protokollen ist entscheidend für die großflächige Aufnahme von Stammzelltherapien. Hier stellen wir ein Protokoll zur Isolierung von aus Fett gewonnenen regenerativen Zellen vor, das für eine einzige intrakavernöse Injektion zur Behandlung der erektilen Dysfunktion (ED) nach radikaler Prostatektomie (RP) verwendet wird.

Isolierung von adipös abgeleiteten regenerativen Zellen zur Behandlung der erektilen Dysfunktion nach radikaler Prostatektomie

Stem cells are used in many research areas within regenerative medicine in part because these treatments can be curative rather than symptomatic. Stem ...

Diese Isolationstechnik kann verwendet werden, um zu untersuchen, ob Fettstammzellen Patienten helfen können, die erektile Funktion nach radikaler Prostatektomie zu regenerieren. Diese Methode ist nicht auf eine bestimmte Krankheit beschränkt. Es könnte in allen Bereichen der Fettstammzellforschung eingesetzt werden.Die isolierten Stammzellen werden zur Behandlung der erektilen Dysfunktion verwendet, aber die Isolationstechnik ist ein allgemeines Verfahren und die Stammzellen können in anderen Bereichen der Stammzellforschung nützlich sein. Beginnen Sie mit der Desinfektion der Haut des Abdomens und des Hodensacks mit 0,5% Chlorhexidin. Verwenden Sie einen chirurgischen Marker, um die Bereiche am Bauch zu zeichnen, in denen die Fettabsaugung durchgeführt werden soll, normalerweise der Bereich zwischen der Synthese und dem Nabel.Machen Sie zwei sechs Millimeter breite Einschnitte in die Haut des Abdomens mit einem Skalpell Nummer 11. Platzieren Sie die Schnitte symmetrisch und seitlich aus dem nach oben gezogenen Bereich der Fettabsaugung. Legen Sie ein wenig Gleitmittel auf die Einschnitte, um sicherzustellen, dass die Infiltrationskanüle während der Fettabsaugung leicht in die Einschnitte hinein- und herausgleitet.Dann führen Sie eine Infiltrationskanüle der Größe 14 durch die Einschnitte in der Haut ein. Injizieren Sie modifizierte Klein-Lösung subkutan in die markierten Bereiche parallel zur Hautoberfläche, bis das Zielgewebe geschwollen und fest oder tumeszierend wird. Injizieren Sie ein Volumen modifizierter Klein-Lösung in einem Verhältnis von eins zu eins zum Fettgewebe.Warten Sie 10 Minuten, um die Wirkung von Adrenalin zu maximieren und die Blutmenge im geernteten Fettgewebe zu reduzieren. Führen Sie eine Standard-Jet-Infusions-Fettabsaugung durch, um 200 bis 300 Millimeter Fettgewebe zu ernten. Verwenden Sie stumpfe Kanülen, die hohl sind, mit integriertem Infusionsschlauch und Düse.Befestigen Sie die Kanüle zur Fettabsaugung an einem Absauggerät. Führen Sie eine Drei-Millimeter-Spritze mit stumpfer Spitze durch die Einschnitte am Bauch ein und sammeln Sie das Fettgewebe im Lipo Collector, um das Lipoaspirate in einer sterilen Umgebung zu erhalten. Das Lipoaspirate beginnt sich von der Wasserphase zu trennen.Verwenden Sie sterile 50-Milliliter-Spritzen, um das Lipoaspirate aus dem LipoCollector aufzusaugen, wodurch das in den Spritzen aufgesaugte Wasservolumen minimiert wird. Schrauben Sie einen Stecker an die Spitze der Spritzen, um das Fettgewebe steril zu halten. Legen Sie Spritzen mit der Spitze nach unten in einen sterilen Plastikbeutel, um die Trennung von Lipoaspirate aus der Wasserphase zu starten.Dann legen Sie den Beutel in einen sterilen Behälter. Decken Sie den Behälter mit einem sterilen Tuch ab, um die sterile Umgebung während des Transports zu sichern. Schließen Sie die Hautschnitte mit dem bevorzugten Nahtmaterial des Chirurgen.Legen Sie eine Kompressionsstütze um den Bauch, um das postoperative Ödem zu reduzieren. Um einen Penisblock herzustellen, injizieren Sie das Bupivacain an zwei Stellen, eine ventral und die andere dorsal. Führen Sie die gesamte Nadel in das Unterhautgewebe ein, richten Sie sie seitlich nach rechts und injizieren Sie die Anästhesie, wenn die Nadel zurückgezogen wird.Wiederholen Sie die Injektion und richten Sie die Nadel nach links. Legen Sie alle Verbrauchsmaterialien und Enzyme aseptisch auf den Tisch, der von einem sterilen Einweg-OP-Handtuch bedeckt ist. Wischen Sie das Gerät mit Ethanol ab und laden Sie das Verbrauchsmaterial-Set.Schließen Sie dann eine Tüte mit laktierten Ringern an das System an. Führen Sie die Reihe der halbautomatischen Tests durch, bevor Sie das Lipoaspirate hinzufügen. Lassen Sie das Lipoaspirate während der Vorbereitung in einem 50-Milliliter-Schlauch stehen, damit sich das Fett von der flüssigen Phase trennen kann.Beachten Sie die Gesamtmenge an Fettgewebe und verwenden Sie diese, um sicherzustellen, dass die Gesamtmenge an geladenem Fett im Bereich der Gerätekapazität liegt. Laden Sie das Gewebe ein, wenn Sie vom Gerät dazu aufgefordert werden. Die Maschine leitet überschüssige Flüssigkeit ab.Wiegen Sie die Menge an Fettgewebe und waschen Sie es mit laktierten Ringern. Wenn das Gewebe gewaschen und entleert wurde, schließen Sie einen neuen Infusionsbeutel mit 37 bis 39 Grad Celsius Lactat-Ringern an. Rekonstituieren Sie das kommerziell erhältliche Enzym, das Kollagenase und Protease enthält, in fünf Milliliter laktierten Ringern.Stellen Sie sicher, dass das Gerät die Menge an Enzym anzeigt, die mit dem Fettgewebe in den Kanister injiziert werden soll. Nach der Injektion dauert die enzymatische Verdauung etwa 20 Minuten. Überprüfen Sie nach der Gewebeverdauung, ob der Inhalt in ein oberes Lipid mit gelber Phase und eine untere rosa Schicht getrennt ist, die die aus Fett gewonnenen regenerativen Zellen oder ADRCs enthält.Lassen Sie die rosa Schicht in die Zellverarbeitungskammer des Verbrauchsstoffsets abfließen und lassen Sie die Lipidschicht zurück. Lassen Sie die ADRCs während mehrerer Zentrifugationsrunden in der Zellverarbeitungskammer konzentrieren. Dann fügen Sie 10 Milliliter Intrabase hinzu, die in den laktierten Ringern rekonstituiert sind.Die enzymatische Reaktion dauert 10 Minuten und die ADRCs werden anschließend gewaschen. Wenn die Isolierung von ADRCs abgeschlossen ist, suspendieren Sie die Zellen in fünf Millilitern Ringer-Laktat wieder und saugen Sie die Lösung in eine Fünf-Milliliter-Spritze ab. Montieren Sie eine Drei-Wege-Absperrhahn-Buchse Luer an der Spritze und saugen Sie vier Milliliter ADRCs in eine weitere sterile Fünf-Milliliter-Spritze ab.Übertragen Sie den letzten einen Milliliter ADRCs in eine Ein-Milliliter-Spritze. Verwenden Sie dieses Aliquot für ADRC-Charakterisierungsanalysen, wie z. B. Zellzahl, Zelllebensfähigkeit, Analyse von Oberflächenmarkern durch Durchflusszytometrie und ADRC-Differenzierungsfähigkeit. Setzen Sie eine 25-Gauge-Nadel auf die Fünf-Milliliter-Spritze, die die vier Milliliter ADRCs enthält.Dann verpacken Sie es in einem sterilen Vorhang. Diese Lösung von ADRCs wird in den Empfänger injiziert und sollte im Durchschnitt 8,4 bis 32,7 Millionen Zellen enthalten. Stellen Sie sicher, dass die Lösung von ADRCs homogen bleibt, indem Sie die Spritze vorsichtig kippen, bis sie in die Corpora cavernosum injiziert wird.Legen Sie einen Blendenvorhang über den Penis. Und ein Tourniquet an der Wurzel des Penis mit einer Silikongefäßschlaufe. Ziehen Sie die Schlaufe fest und sichern Sie sie mit einer Pinzette, wodurch das Tourniquet fest genug ist, um den Blutfluss aus dem Penis zu stoppen.Verwenden Sie zwei antiseptische Tupfer, um die Penishaut an der Injektionsstelle zu desinfizieren. Dann injizieren Sie einen Milliliter der ADRC-Lösung in einem direkten Winkel in die Corpora cavernosum, auf der rechten Seite an zwei verschiedenen Stellen. Wiederholen Sie diesen Schritt in der linken Korpora cavernosum und injizieren Sie ein Gesamtvolumen von vier Millilitern.Diese Methode wurde in einer offenen klinischen Phase-Eins-Studie an 21 Männern mit einem Durchschnittsalter von 60 Jahren und einer normalen Erektion und einem aktiven Sexualleben vor einer radikalen Prostatektomie getestet. Sechs der Männer litten auch an Inkontinenz. Alle Männer erhielten eine einzige interkavernöse Injektion von isolierten ADRCs und wurden 1, 3, 6 und 12 Monate nach der Injektion mit vier Besuchen in der Ambulanz verfolgt.Während der Beobachtungszeit traten keine schwerwiegenden Ereignisse auf. Acht Männer berichteten von vorübergehenden Rötungen und Schwellungen an den Injektionsstellen und drei berichteten von Reaktionen im Penisbereich. Acht Männer erlebten reversible kleinere Ereignisse im Zusammenhang mit der Fettabsaugung, wie leichte Bauchbeschwerden und kleinere Bauchhämatome.Keine Patienten berichteten von Beschwerden bei der einmonatigen Nachuntersuchung. Ihre sexuelle Funktion wurde mit dem International Index of Erectile Function Five und dem Erection Hardness Score bewertet. Acht von 15 Männern in der Kontinentgruppe berichteten, dass ihre erektile Funktion nach 12 Monaten für den Geschlechtsverkehr ausreichte.Die Gruppe von sechs inkontinenten Männern zeigte keine Verbesserung der erektilen Funktion Wenn Sie dieses Protokoll versuchen, denken Sie daran, dass die Enzyme, die während des Isolationsverfahrens verwendet werden, zwei Stunden vor Beginn des Verfahrens aus dem Gefrierschrank oder Kühlschrank genommen werden müssen. Die Ergebnisse dieser Technik haben den Weg für eine RCT geebnet, bei der die Auswirkungen von Fettstammzellen in größerem Maßstab erforscht werden.

isolation-adipose-derived-regenerative-cells-for-treatment-erectile

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Dieses Video demonstriert eine Technik zur Isolierung und Kultivierung von fluoreszenzmarkierten Stammzellen (ADSCs) aus Fettzellen (ADSCs) aus dem periaortalen Bogenfettgewebe von Mäusen. Nach der Isolierung werden die NCADSCs nachgewiesen, mittels fluoreszenzaktivierter Zellsortierung sortiert und anschließend auf einer Platte kultiviert, wodurch die Zellproliferation gefördert wird.

Isolierung von aus Fettgewebe gewonnenen Stammzellen aus periaortalem Fettgewebe der Maus

Im Jahr 2001 beschrieben Forscher an der UCLA die Isolierung einer Population von adulten Stammzellen, sogenannte Fettgewebe gewonnene Stammzellen oder ASC, aus dem Fettgewebe. Dieser Artikel beschreibt die Isolierung des ASC aus lipoaspirates mit einem manuellen, enzymatische Verdauung mit Kollagenase-Protokoll.

Manuelle Isolierung von Fettgewebe gewonnene Stammzellen aus menschlichen Lipoaspirates

Die transkriptionelle Heterogenität innerhalb menschlicher Fettgewebe-abgeleiteter Stromazellen kann auf Einzelzellebene mit Hilfe von Zelloberflächenmarkern und osteogenen Genen definiert werden.  Wir beschreiben ein Protokoll, das die Durchflusszytometrie zur Isolierung von Zellsubpopulationen mit erhöhtem osteogenem Potenzial verwendet, das zur Verbesserung der kraniofazialen Skelettrekonstruktion verwendet werden kann.

Isolierung und Anreicherung von menschlichen Fettgewebe gewonnene Stromazellen für verbesserte Osteogenesis

Die Vorbereitung und die Transplantation von abgeleitet Fettgewebe Stammzellen (ASC) Blätter auf unzureichend genähten kolorektalen Anastomosen in einem Rattenmodell wird vorgestellt. Diese neuartige Anwendung zeigt, dass ASC Blätter kolorektalen Anastomose Leckage reduziert werden können.

Transplantation von Fettgewebe-Derived Stem Cell Blatt, Leckage nach teilweiser Colectomy in einem Rattenmodell zu reduzieren

Dieses Protokoll beschreibt den technischen Ansatz zur Isolierung von adipogenen und fibro-inflammatorischen Stromazell-Subpopulationen aus murinen intraabdominalen Depots aus weißem Fettgewebe (WAT) durch fluoreszenzaktivierte Zellsortierung oder immunomagnetische Kügelchentrennung.

Isolierung von adipogenen und fibro-inflammatorischen Stromazell-Subpopulationen aus murinen intraabdominalen Fettdepots

Das vorliegende Protokoll beschreibt eine verbesserte Methodik zur ADSC-Isolierung, die im Vergleich zur Literatur zu einer enormen zellulären Ausbeute mit Zeitgewinn führt. Diese Studie bietet auch eine einfache Methode, um eine relativ große Anzahl lebensfähiger Zellen nach langfristiger Kryokonservierung zu erhalten.

Technik zur Gewinnung mesenchymaler Stammzellen aus Fettgewebe und stromaler vaskulärer Fraktion Charakterisierung in der Langzeitkryokonservierung

Wir stellen eine Methode der Zellinjektion mittels nadelfreier Wasserstrahltechnologie vor, die mit einer Folge von Untersuchungen nach der Entbindung in Bezug auf Zelllebensfähigkeit, Proliferation und Elastizitätsmessungen verbunden ist.

Injektion von aus Schweinefettgewebe gewonnenen Stromazellen mittels Wasserstrahltechnologie

Xenogene (chemische oder tierische) Produkte, die in den Vorbereitungs-/Manipulationsschritten der Zelltherapie eingeführt werden, sind mit einem erhöhten Risiko für Immunreaktivität und pathogene Übertragung bei Wirtspatienten verbunden. Hier wird eine vollständige xenogenfreie Methode zur Isolierung und in vitro Expansion von humanen adipösen Stammzellen beschrieben.

Isolierung und Kultivierung von humanen Fettstammzellen mit einer innovativen xenogenfreien Methode für die Humantherapie

Dieses Protokoll beschreibt eine Methodik zur Isolierung und Identifizierung von mesenchymalen Stammzellen (MSCs) aus Fettgewebe aus Sprague-Dawley-Ratten.

Isolierung und Identifizierung von mesenchymalen Stammzellen aus dem Fettgewebe von Sprague-Dawley-Ratten

Hier präsentieren wir eine Standardmethode zur effizienten Isolierung von fettabgeleiteten Stammzellen und Adipozyten, gekennzeichnet durch &gt;90 % Verkürzung der Verarbeitungszeit, hohe Zelllebensfähigkeit und breite Kompatibilität.

Effiziente Isolierung von fett-abgeleiteten Stammzellen und Adipozyten aus schweine-fetthaltigem Gewebe

Erfahren Sie die Isolierung adipös abgeleiteter regenerativer Zellen zur Behandlung der erektilen Dysfunktion nach radikaler Prostatektomie. Diese Methode ermöglicht Forschern, Stammzelltherapien in der Urologie zu untersuchen.

Isolierung von adipös abgeleiteten regenerativen Zellen zur Behandlung der erektilen Dysfunktion nach radikaler Prostatektomie

Weitere Videos entdecken