Name: Design von Cecal Ligation und Punktion und Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 30 s
Description: Erfahren Sie die Herstellung eines Zäkal-Ligatur-/Punktionsmodells mit intranasaler Infektion bei Mäusen zur Untersuchung sepsisbedingter Immunsuppression und sekundärer Infektionen.

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Diese Arbeit wurde von den National Institutes of Health Grants R01 AI138203-01, AI109317-04, AI101973-01 und AI097532-01A1 an M. W. unterstützt. Die Kerneinrichtungen der University of North Dakota wurden durch NIH-Stipendien (INBRE P20GM103442 und COBRE P20GM113123) unterstützt. Diese Arbeit wurde auch vom Key Program of National Nature Science Foundation of China (81530063) an Jianxin Jiang unterstützt. Die Geldgeber spielten keine Rolle bei der Studiengestaltung, Datenerhebung und -analyse, der Entscheidung zur Veröffentlichung oder der Vorbereitung des Manuskripts. Wir danken Marvin Leier (Center for Rural Health, University of North Dakota) für das Video.

Alle hier beschriebenen Methoden wurden in Übereinstimmung mit dem National Institute of Health Guide for Care and Use of Laboratory Animals durchgeführt und vom Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) der University of North Dakota zugelassen.
1. Cecal Ligation und Punktion
HINWEIS: Weibliche C57BL/6-Mäuse (Gewicht, 18-22 g; Alter, 6-8 Wochen) werden nach dem Zufallsprinzip in sechs Gruppen eingeteilt: Kontrollgruppe (Strg), Infektionsgruppe (SA für S. aureus), zwei Scheingruppen und zwei CLP-Gruppen. Strgtiere bleiben ohne Operation und sekundäre Infektionsverletzungen. SA-Tiere werden ohne Die Operation einer Lungeninfektion von S. aureus ausgesetzt. Scheinbetriebene Tiere unterziehen sich der gleichen Laparotomie mit einer Exposition des Cecums (außer das Cecum ist weder ligted noch punktiert). Acht Mäuse pro Gruppe werden für die Überlebensanalyse und drei bis fünf Mäuse zur Beurteilung von Entzündungen zu verschiedenen Zeitpunkten verwendet.
<ol><li>Sterilisieren Sie vor der Operation alle chirurgischen Instrumente und Materialien durch Autoklavieren für 20 min. Reinigen und desinfizieren Sie den Operationstisch mit Desinfektionstüchern. Um sterile Bedingungen während der Operation zu etablieren, decken Sie die gesamten operativen Felder mit richtigen sterilen chirurgischen Vorhängen ab und tragen Sie eine Haarabdeckung, eine chirurgische Maske, eine Schutzbrille, ein chirurgisches Kleid und sterile Handschuhe.</li>
	<li>Wiegen und anästhesieren Sie die Maus mit 0,1 ml/Maus Ketamin (80 mg/kg), Xylazin (10 mg/kg) Mischung intraperitoneal verabreicht. Mit Daumen und Zeigefinger der linken Hand, die eine U-förmige Position bilden, nähern Sie sich dem Hals der Maus von hinten sanft und sanft, dann halten Sie den Hals direkt hinter den Ohren, so dass der Mauskopf sehr zurückhaltend ist. Verwenden Sie ein Pinky, um das rechte Hinterbein der Maus zu halten und verwenden Sie die Mittleren und Ringfinger (alle Finger von der linken Hand), um den Körper zu halten.</li>
	<li>Überprüfen Sie die Intensität der Anästhesie durch Zehenkneifen, bis keine Flexion der Extremität.</li>
	<li>Rasieren Sie die unteren Quadranten des Bauches mit einem elektrischen Rasiermesser und desinfizieren Sie den Bereich mit Jod.</li>
	<li>Legen Sie die Maus auf die sterile Oberfläche in einer Supine-Position, mit dem Kopf weg vom Bediener ausgerichtet. Die Maus mit sterilem Handtuch mit Loch über den geplanten chirurgischen Schnitt zu drapieren, um sterile Felder zu erhalten.</li>
	<li>Machen Sie einen Längshautschnitt (ca. 0,5 cm lang) mit einem Skalpell im linken Unterbauch. Verwenden Sie eine kleine Schere, um den Schnitt (1-2 cm) zu verlängern. VORSICHT: Achten Sie darauf, nicht in die Peritonealhöhle einzudringen.</li>
	<li>Machen Sie den intramuskulären Schnitt, um Zugang in die Peritonealhöhle zu erhalten und ermöglichen Exposition des Cecums mit dem angrenzenden Darm.</li>
	<li>Isolieren Sie das Cecum auf der linken Seite des Bauches (in den meisten Fällen geschieht dies mit stumpfen anatomischen Zangen) und entfernen Sie es auf einem sterilen Vorhang, so dass der kleine und große Darm in der Peritonealhöhle. VORSICHT: Vermeiden Sie es, die mesenterischen Blutgefäße zu beschädigen.</li>
	<li>Ligate das Cecum in der distalen 25% Position, um eine längere Infektion mit relativ niedriger Sterblichkeit zu schaffen. VORSICHT: Achten Sie darauf, das Ileocecal-Ventil nicht zu ligte.</li>
	<li>Perforieren Sie das Cecum mit einer 21 G 1 1/2 Nadel durch einzelne Durchgangs- und Durchgangspunktion (zwei Löcher) auf halbem Weg zwischen Ligation und Spitze des Cecums im am wenigsten vaskularisierten Bereich. VORSICHT: Achten Sie darauf, die Blutgefäße nicht zu durchstechen.</li>
	<li>Entfernen Sie die Nadel. Extrudieren Sie vorsichtig eine kleine Menge Kot aus den Penetrationslöchern, um eine volle Dicke Perforation zu gewährleisten. VORSICHT: Achten Sie darauf, die Darmkontinuität während des Eingriffs nicht zu behindern.</li>
	<li>Ersetzen Sie das Cecum in die Bauchhöhle.</li>
	<li>Schließen Sie den Bauch in zwei Schichten mit 4-0 Nylon chirurgische Nähte. Schließen Sie die Bauchmuskulatur, indem Sie einfache laufende Nähte anwenden und schließen Sie die Haut, indem Sie einfache unterbrochene Nähte auftragen. Reinigen Sie die Haut mit Jod.</li>
	<li>1 ml vorgewärmte (37 °C) 0,9% sterile Normal-Saline-Lösung (NS) subkutan auf die Rückseite injizieren, um den dritten Platzverlust zu ersetzen und auf ein warmes Pad zu legen, um sich zu erholen.</li>
	<li>Bringen Sie die Mäuse im Käfig in einem temperaturgeregelten Raum (22 °C) mit 12 h Licht/Dunkel-Zyklen und freiem Zugang zu Nahrung und Wasser zurück. Überwachen Sie die Mäuse alle 0,5 Stunden für mindestens 2 h, dann alle 6 h für mindestens 2 d, dann alle 12 h für 3 Tage, oder einschläfern Sie sie, wenn sie für die Überlebensanalyse verkümmert werden. HINWEIS: Vor- und nachoperative analgesie (Buprenorphin, 50 g/kg subkutan alle 12 h) werden für 24 h vor der Operation bis 48 h nach der Operation9,10empfohlen.</li>
</ol>2. Sekundäre Lungeninfektion mit S. aureus
HINWEIS: Mit Ausnahme der Strg- und SA-Gruppen sollten überlebende Mäuse nach 3 Tagen nach DER CLP-Gruppe intranasal mit 30 L einer bakteriellen Suspension bzw. NS verabreicht werden. Die überlebenden Mäuse in der SA-Gruppe sollten intranasal mit der bakteriellen Suspension eingeflößt werden.
<ol><li>Anästhesisieren Sie die Maus durch intraperitoneal injizieren 100 L Lösung von Ketamin (45mg/kg) und Xylazin (10 mg/kg) und warten, bis die Maus langsam atmet. Der Punktionswinkel zwischen Nadel und Bauchwand beträgt weniger als 30° für eine langsame Injektion.</li>
	<li>Mit Hilfe einer Mikropipette, langsam und intranasal instillieren mit 30 l von 1 x 107 Kolonie bildende Einheit (CFU) von S. aureus bei der Inhalation angesaugt werden. Halten Sie die Maus an den Ohren in einer aufrechten Position, fallen Sie langsam 2-3 l bakterielle Suspension in beide Nasenlöcher jedes Mal. Passen Sie die Entriegelungsrate an, damit die Maus einatmen kann, ohne Blasen zu bilden und abzufallen.</li>
	<li>Heben Sie die Maus nach oben und unten, mit dem Kopf nach oben und Schwanz nach unten, um den Bakterien zu helfen, in die Luftröhre einzutreten. Bewegen Sie die Maus schnell und stark nach oben, während Sie sie sanft und langsam nach unten bewegen, um die Schwerkraft zu erhöhen. Wiederholen Sie die Instillation etwa 15x, bis alle Bakterien eingeatmet werden, was 10-15 min für jede Maus dauern sollte.</li>
	<li>Legen Sie die Maus auf den Rücken und kopfauf auf die abgewinkelte Bettwäsche (ca. 35°) und beobachten Sie die Maus, bis ihre Atmung wieder normal ist und sie vollständig von der Anästhesie und den Eingriffen erholt ist.</li>
	<li>Legen Sie die Maus wieder in den Käfig in einem temperaturgeregelten Raum (22 °C) mit 12 h Licht/Dunkel-Zyklen und unbegrenztem Zugang zu Nahrung und Wasser.</li>
	<li>Überprüfen Sie die Mausbedingungen alle 2 h für den ersten Tag und alle 12 h danach für 4 Tage nach der Operation. Euthanisieren Sie sie, wenn sie für die Überlebensanalyse oder 24 h nach der Infektion zur Beurteilung der Entzündung verkümmert werden.</li>
</ol>3. Analysierte Parameter
<ol><li>Überleben von Mäusen<ol>
<li>Überwachen Sie die Mäuse 7 Tage lang. Euthanisieren, wenn moribund und erzeugen Überlebenskurven mit Kaplan-Meier-Methoden11.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bakterielle Zählungen<ol>
<li>24 h nach SA-Injektion, Ernten Sie das Blut, Bronchoalveolar-Spülflüssigkeit (BALF) und Peritoneal-Lavage-Flüssigkeit (PLF) von den Mäusen. Anschließend 100 l der Verdünnungsmittel zu Nährstoff-Agar-Platten hinzufügen und sie bei 37 °C für 24 h kulturieren, um die Bakterienkoloniezahlen11,12,13zu bestimmen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Zytokine HINWEIS: Pro-inflammatorische Zytokinkonzentrationen von IL-1, IL-6 und TNF im Serum und BALF von Mäusen sollten mit ELISA-Kits gemäß den Anweisungen des Herstellers bewertet werden.<ol>
<li>Beschichten Sie die 96-Well-ELISA-Platte mit 100 L/Well aus unterschiedlicher Capture-Antikörper-Arbeitslösung, um die Standards in Doppelta und Proben in dreifacher Ausführung auszuführen. Versiegeln Sie die Platte und lassen Sie sie über Nacht bei 4 °C.</li>
		<li>Waschen Sie die Platte dreimal mit 255 L/Well-Waschpuffer (1x PBS, 0,05% Tween-20).</li>
		<li>Um die unspezifische Bindung zu blockieren, fügen Sie 200 l/Well-Verdünnungsmittel hinzu. Versiegeln Sie die Platte und brüten Bei Raumtemperatur (RT) für 1 h.</li>
		<li>Standardlösung vorbereiten: Acht zweifache serielle Verdünnungen ab 1000 pg/ml.</li>
		<li>Fügen Sie 100 L/Well von Standards oder Proben zu den entsprechenden Brunnen und 100 l/Well von Verdünnungsgut zu den Rohbrunnen hinzu. Die Platte versiegeln und bei RT 2 h oder über Nacht bei 4 °C inkubieren.</li>
		<li>Waschen Sie die Platte 5x mit 255 l/gut Waschpuffer.</li>
		<li>Fügen Sie den entsprechenden Bohrkörpern 100 L/Well verschiedener Detektionsantikörper-Arbeitslösung hinzu. Versiegeln Sie die Platte und brüten Sie bei RT für 1 h.</li>
		<li>Waschen Sie die Platte 5x mit 255 l/gut Waschpuffer.</li>
		<li>Fügen Sie 100 L/Well der verdünnten HRP-Lösung in alle Brunnen ein. Versiegeln Sie die Platte und brüten Sie bei RT für 30 min.</li>
		<li>Waschen Sie die Platte 5x mit 255 l/gut Waschpuffer.</li>
		<li>Fügen Sie 100 L/gut verdünnte TMB-Lösung hinzu. Inkubieren Sie die Platte 15 min vom Licht bei RT weg.</li>
		<li>Fügen Sie 50 L/Well Stop-Lösung (1 M H3PO4) hinzu. Leseabsorption bei 450 nm mit einem Plattenleser.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Durchflusszytometrie<ol>
<li>Rufen Sie die Gesamtzahl der Zellen von BALF ab. Lyse die Erythrozyten mit ACK Lysing Puffer und waschen 2x mit PBS.</li>
		<li>Analysieren Sie dann die einzelzelligen Suspensionen durch Durchflusszytometrie, wie zuvor beschrieben11. Für Oberflächenfärbung, Flecken neutrophile (CD11b+GR-1+) mit APC Anti-Maus CD11b und Anti-Maus Gr-1 (Ly-6G/Ly-6C) Antikörper. Sammeln Sie mindestens 3 x 104 lebende, nicht-Trümmern-Zellen für die Analyse.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Singer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Third+International+Consensus+Definitions+for+Sepsis+and+Septic+Shock+%28Sepsis-3%29%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock (Sepsis-3).</a> JAMA. 315 (8), 801-810 (2016).</li>
<li>Delano, M. J., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immune+system%27s+role+in+sepsis+progression%2C+resolution%2C+and+long-term+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+Reviews%22%5BJournal%5D)">The immune system's role in sepsis progression, resolution, and long-term outcome.</a> Immunological Reviews. 274 (1), 330-353 (2016).</li>
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<li>Hugunin, K. M. S., Fry, C., Shuster, K., Nemzek, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+tramadol+and+buprenorphine+on+select+immunologic+factors+in+a+cecal+ligation+and+puncture+model%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Effects of tramadol and buprenorphine on select immunologic factors in a cecal ligation and puncture model.</a> Shock. 34 (3), 250-260 (2010).</li>
<li>He, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Annexin+A2+Modulates+ROS+and+Impacts+Inflammatory+Response+via+IL-17+Signaling+in+Polymicrobial+Sepsis+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Annexin A2 Modulates ROS and Impacts Inflammatory Response via IL-17 Signaling in Polymicrobial Sepsis Mice.</a> PLoS Pathogens. 12 (7), 23(2016).</li>
<li>Pu, Q. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atg7+Deficiency+Intensifies+Inflammasome+Activation+and+Pyroptosis+in+Pseudomonas+Sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Atg7 Deficiency Intensifies Inflammasome Activation and Pyroptosis in Pseudomonas Sepsis.</a> Journal of Immunology. 198 (8), 3205-3213 (2017).</li>
<li>Zanotti-Cavazzoni, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+resuscitation+influences+cardiovascular+performance+and+mortality+in+a+murine+model+of+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Fluid resuscitation influences cardiovascular performance and mortality in a murine model of sepsis.</a> Intensive Care Medicine. 35 (4), 748-754 (2009).</li>
<li>Chin, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+macromolecular+approach+to+eradicate+multidrug+resistant+bacterial+infections+while+mitigating+drug+resistance+onset%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">A macromolecular approach to eradicate multidrug resistant bacterial infections while mitigating drug resistance onset.</a> Nature Communications. 9 (1), 917(2018).</li>
<li>Nascimento, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-33+contributes+to+sepsis-induced+long-term+immunosuppression+by+expanding+the+regulatory+T+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">IL-33 contributes to sepsis-induced long-term immunosuppression by expanding the regulatory T cell population.</a> Nature Communications. 8, 14919(2017).</li>
<li>Deng, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+investigation+on+the+turning+point+of+over-inflammation+to+immunosuppression+in+CLP+mice+model+and+their+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Systematic investigation on the turning point of over-inflammation to immunosuppression in CLP mice model and their characteristics.</a> International Immunopharmacology. 42, 49-58 (2017).</li>
</ol>

Die Autoren haben keine finanziellen Interessenkonflikte.

Als Goldstandardmodell für die Sepsisforschung hat CLP eine Kombination aus drei Beleidigungen, darunter Gewebetrauma, das durch die Laparotomie verursacht wird, Nekrose aufgrund der Ligatur des Cecums und Infektionen als Folge einer mikrobiellen Leckage, die Peritonitis mit Translokation verursacht. von Bakterienin blut8 . Daher imitiert CLP die Komplexität menschlicher Sepsis besser als viele andere Modelle. Eine wesentliche Einschränkung des aktuellen CLP-Modells ist jedoch die Unfähigkeit, die...

Sepsis initiiert ein komplexes Zusammenspiel von wirt pro-inflammatorischen und entzündungshemmenden Prozessen und zeichnet sich durch eine hyperinflammatorische Reaktion und nachfolgende Immunfunktionsstörung1,2aus. Sepsis stellt eine globale Gesundheitspriorität dar und verursacht eine hohe Zahl von Todesfällen auf Intensivstationen (IKUs)3. Die Inzidenz von Sepsis wird auf über 30 Millionen Fälle weltweit pro Jahr geschätzt, mit Sterblichkeitsraten von bis zu 30% trotz Fortschritten im ICU-Management4,5. Im Jahr 2017 verabschiedete die Weltgesundheitsorganisation eine Resolution zur Verbesserung der Prävention, Diagnose und Desmanagement dieser tödlichen Krankheit5. Jüngste Studien haben jedoch gezeigt, dass der Tod nicht auf eine primäre Infektion bei schweren septischen Patienten zurückzuführen ist, sondern auf eine sekundäre nosokomiale Infektion (insbesondere Lungenentzündung), die durch Immunsuppression verursacht wird6,7 . Daher ist es dringend erforderlich, die Mechanismen zu verstehen, warum septische Patienten sekundäre Infektionen entwickeln und effektivere Behandlungen entdecken. Hierin wird ein duales Modell beschrieben, das auch als Double-Hit-Modell bekannt ist, um das immunsuppressive Phänomen bei Patienten mit langwieriger Sepsis zu untersuchen.
Als Goldstandard-Experimentalmodell in der Forschung an polymikrobiellen Sepsis ist Cecal Ligation und Punktion (CLP) eine Operation, die sich durch Cecumligation und Perforation auszeichnet, die zu polymikrobieller Peritonitis und Sepsisbeiträgt 8,9 . Der pathophysiologische Prozess und die Zytokinprofile sowie die Kinetik und Die Größe ähneln der klinischen Sepsis. Die Position der Ligation, die Nadelgröße, die für die Punktion verwendet wird, und die Anzahl der Cecal-Punktionen sind wichtige Faktoren, die die Sterblichkeit nach CLP beeinflussen.
Die nosokomiale Lungenentzündung ist die Hauptursache für die Sterblichkeit bei schwerkranken Patienten mit Sepsis. Die wichtigsten Arten von Organismen, die schwere Sepsis verursachen, sind Staphylococcus aureus (20,5%), Pseudomonas-Arten (19,9%), Enterobacteriacae (hauptsächlich E. coli, 16,0%) und Pilze (19%). In der Zwischenzeit deuten neuere Studien auf eine zunehmende Inzidenz von grampositiven Organismen hin, die heute fast so häufig sind wie gramnegative Infektionen3.
Die in diesem Protokoll beschriebene Methode beinhaltet CLP, das als "erster Treffer" durchgeführt wird, um subleelle polymikrobielle Peritonitis zu induzieren, die eine Immunsuppressionsbedingung manifestiert. Das Verfahren beinhaltet auch die nachfolgende intranasale Instillation von S. aureus als "zweiten Treffer", um eine klinisch relevante Forschungsplattform zur Verfügung zu stellen.

<table><tbody><tr><td>21 G 1 und frac12; Nadel</td><td>BD</td><td>BD305167</td><td></td></tr><tr><td>ACK Lysing Puffer</td><td>Gibco</td><td>A10492-01</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus CD11b Antikörper</td><td>Biolegend</td><td>101201</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Maus Ly-6G/Ly-6C (Gr-1) Antikörper</td><td>Biolegend</td><td>108401</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 Mäuse&nbsp;</td><td>Harlan (Indianapolis)</td><td>C57BL/6NHsd</td><td></td></tr><tr><td>Schreibtischleuchte</td><td>Allgemeine Versorgung</td><td>Allgemeine</td><td></td></tr><tr><td>Versorgung Desinfektionstücher</td><td>Clorox</td><td>B07NV5JMCS</td><td></td></tr><tr><td>Elektrorasierer</td><td>Allgemeine Versorgung</td> Allgemeine <td>Versorgung</td><td></td></tr><tr><td>ELISA-Kits (Maus IL-1&beta;, IL-6 und TNF&alpha;)</td><td>Invitrogen</td><td>88-7013, 88-7064 und 88-7324</td><td></td></tr><tr><td>Jod</td><td>Dynarex</td><td>B003U463PY</td><td>PVP Jodtücher</td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>FORT DODGE</td><td>NDC 0856-2013-01</td><td>Aminhydrochlorid-Injektion</td></tr><tr><td>Labormaßstab</td><td>Allgemeine Versorgung</td><td>Allgemeine Versorgung</td><td></td></tr><tr><td>LB Agar, Miller</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1425-500</td><td>Molekulargenetik, Pulver</td></tr><tr><td>Mikropipette</td><td>ErgoOne</td><td>7100-1100</td><td></td></tr><tr><td>Normale Kochsalzlösung</td><td>Allgemeiner Nachschub</td><td>Allgemeiner Nachschub</td><td></td></tr><tr><td>Polyliniertes Handtuch</td><td>CardinalHealth, Convertors</td><td>3520</td><td>OP-Tuch, steril, nur zum einmaligen Gebrauch</td></tr><tr><td>Seidennaht, 4-0</td><td>DAVIS & GECK</td><td>1123-31</td><td></td></tr><tr><td>Nadelhalter für Kleintiere</td><td>Allgemeiner Nachschub</td><td>Allgemeiner Nachschub</td><td></td></tr> für <tr><td>die Chirurgie für Kleintiere</td><td>Allgemeiner Nachschub</td> Allgemeiner <td>Nachschub</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische Zange für Kleintiere</td><td>Allgemeiner Vorrat</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus</td><td>ATCC</td><td>13301</td><td></td></tr><tr><td>Warmes Polster</td><td>Allgemeine Versorgung</td><td>Allgemeine Versorgung</td><td></td></tr><tr><td>Xylazin</td><td>Alfa Aesar</td><td>7361-61-7</td><td></td></tr></tbody></table>

design von cecal ligation und punktion und intranasal infection dual model of sepsis-induced immunosuppression

Design of Cecal Ligation and Puncture and Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression

Sepsis, eine schwere und komplizierte lebensbedrohliche Infektion, ist durch ein Ungleichgewicht zwischen pro- und entzündungshemmenden Reaktionen in mehreren Organen gekennzeichnet. Mit der Entwicklung von Therapien überleben die meisten Patienten die hyperinflammatorische Phase, kommen aber zu einer immunsuppressiven Phase, die das Auftreten von Sekundärinfektionen erhöht. Daher ist ein verbessertes Verständnis der pathogenese zugrunde liegenden sekundären Krankenhaus-erworbenen Infektionen in der immunsuppressiven Phase während der Sepsis von enormer Bedeutung. Hier wird berichtet, dass ein Modell, um infektiöse Ergebnisse zu testen, indem Sie Doppelschlag-Infektionen bei Mäusen. Ein Standard-Chirurgisches Verfahren wird verwendet, um polymikrobielle Peritonitis durch Cecal Ligation und Punktion (CLP) zu induzieren, gefolgt von einer intranasalen Infektion von Staphylococcus aureus, um Einelungenentzündung zu simulieren, die bei der Immunsuppression auftritt, die häufig beobachtet wird bei septischen Patienten. Dieses duale Modell kann den immunsuppressiven Zustand widerspiegeln, der bei Patienten mit langwieriger Sepsis und Anfälligkeit für sekundäre Infektionen durch nosokomiale Lungenentzündung auftritt. Daher bietet dieses Modell einen einfachen experimentellen Ansatz zur Untersuchung der Pathophysiologie der Sepsis-induzierten sekundären bakteriellen Lungenentzündung, die für die Entdeckung neuartiger Behandlungen für Sepsis und ihre Komplikationen verwendet werden kann.

Je nach experimentellem Design und Verfahren wurden C57BL/6-Mäuse CLP unterzogen, und nach 3 Tagen wurden ihnen intranasal Bakterien verabreicht (Abbildung 1). Wie in Abbildung 2dargestellt, begannen die Mäuse nach der Induktion der Peritonitis bei 12 h zu sterben. Zwei Mäuse in der CLP+SA-Gruppe und drei Mäuse in der CLP+NS-Gruppe starben vor der intranasalen S. aureus-Instillation. Bei nicht infizierten nicht oder sche...

Dieses Protokoll beschreibt Techniken zur Messung von infektiösen Ergebnissen, die sekundären Krankenhausinfektionen im immunsuppressiven Zustand zugrunde liegen, indem sie zunächst Cecal-Ligations-/Punktionsmäuse einrichten und sie mit intranasalen Infektionen herausfordern, um ein klinisch relevantes Modell der Immunsuppressionssepsis zu erstellen.

Design von Cecal Ligation und Punktion und Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression

Sepsis, a severe and complicated life-threatening infection, is characterized by an imbalance between pro- and anti-inflammatory responses in multiple ...

Bereiten Sie die Maus für eine Operation vor. Rasieren Sie die unteren Quadranten des Bauches mit einem Rasiermesser und desinfizieren Sie den Bereich mit Jod. Legen Sie die Maus auf eine saubere Arbeitsfläche auf dem Rücken, wobei der Kopf vom Bediener weg zeigt.Machen Sie einen längsigen Hautschnitt etwa einen halben Zentimeter lang im linken Unterbauch. Achten Sie darauf, nicht in die Peritonealhöhle einzudringen. Verwenden Sie eine kleine Schere, um den Schnitt um etwa ein bis zwei Zentimeter zu verlängern.Machen Sie einen intramuskulären Schnitt, um Zugang in die Peritonealhöhle zu erhalten. In den meisten Fällen befindet sich das Cecum auf der linken Seite des Bauches. Isolieren Sie das Cecum.Mit stumpfen, anatomischen Zangen, sanft und sorgfältig aussetzen das Cecum durch den Schnitt. Schritt vier ist die Ligation. Die Position der Ligation auf dem Cecum bestimmt den Schweregrad der Sepsis.Etwa 75 % des Cecums verursachen eine schwere Sepsis. Die Liganierung von 50% des Cecums induziert eine Sepsis auf mittlerer Ebene. Während die Liganzierung von 25 % oder weniger des Cecums zu einer geringfügigen Sepsis führen wird.Ligate das Cecum an der angegebenen Position. Achten Sie d

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Das Mausmodell der Blinddarm Ligatur und Punktion als ein wertvolles Instrument für das Studium der menschlichen Sepsis.

Blinddarm Ligation Punktion

Sepsis bezieht sich auf eine systemische inflammatorische Reaktion, die sich aus einer mikrobiellen Infektion, und simuliert werden können durch eine Blinddarm-OP-Technik bezeichnet Ligatur und Punktion (CLP). Hier beschreiben wir eine Methode zur CLP-induzierte Tiermodell zu verwenden, um Heilkräuter für therapeutische Wirkstoffe zu screenen.

Die Verwendung Tiermodell für Sepsis zu neuartigen Therapien zu beurteilen Herbal

Experimentelle Sepsis in Mäusen mit der Blinddarm-Ligation und Punktion (CLP)-Methode ausgelöst werden. Aktuelle Protokolle Autophagozytose in vivo im Rahmen des CLP-induzierten Sepsis beurteilt werden hier vorgestellt: Ein Protokoll für die Messung unter Verwendung Autophagozytose (GFP)-LC3 Mäuse und ein Protokoll für die Messung Autophagosom Bildung durch Elektronenmikroskopie.

Blinddarm-Ligation und Punktion-induzierten Sepsis als Modell zur Autophagie in Mäusen untersucht

Dieses Protokoll bietet die notwendigen Schritte zu etablieren und neonatale Sepsis bei 7 Tage alten Mäusen zu bewerten.

Eine kontrollierte Mausmodell für neonatale Sepsis Biofilm

Die Infektion von neonatalen Mäusen mit biolumineszierendem E. coli O1:K1:H7 führt zu einer septischen Infektion mit signifikanter Lungenentzündung und Lungenpathologie. Hier beschreiben wir Verfahren zur Modellierung und weiteren Untersuchung der neonatalen Sepsis unter Verwendung von längsinaler intravitaler Bildgebung parallel zur Aufzählung systemischer bakterieller Belastungen, entzündlicher Profilierung und Lungenhistopathologie.

Ein neonatales Bildgebungsmodell der gramnegativen bakteriellen Sepsis

Hier stellen wir eine effektive und effiziente Methode für Nagetier-Schwanzvenen-Injektionen mit einem einzigartig entwickelten Erwärmungs- / Rückhaltegerät vor. Durch die Rationalisierung der Einleitung von Vasodilatations- und Zurückhaltungsprozessen ermöglicht dieses Protokoll genaue und rechtzeitige intravenöse Injektionen großer Gruppen von Tieren mit minimaler Belastung.

Ein modernes Erwärmungs-/Rückhaltegerät für effiziente Injektionen von Schwanzvenen in einem murinen Pilz-Sepsis-Modell

Dieses Protokoll stellt die operativen Details der Stuhlligatur und -punktion (CLP) in einem Mausmodell der Sepsis dar. CLP ist eine der am weitesten verbreiteten Techniken, um ein Tiermodell für Sepsis zu erstellen. Daher ist ein standardisiertes CLP-Protokoll erforderlich, um zuverlässige Forschungsergebnisse zu erzielen.

Bewertung eines zuverlässigen Biomarkers in einem Stuhlligatur- und Punktions-induzierten Mausmodell der Sepsis

Diese Arbeit beschreibt ein neuartiges Mausmodell für den Übergang von Pneumokokken von einem asymptomatischen Kolonisator zu einem krankheitsverursachenden Erreger während einer Virusinfektion. Dieses Modell kann leicht angepasst werden, um polymikrobielle und Wirt-Pathogen-Interaktionen während der verschiedenen Phasen des Krankheitsverlaufs und über verschiedene Wirte hinweg zu untersuchen.

Ein Mausmodell für den Übergang von Streptococcus pneumoniae vom Kolonisator zum Krankheitserreger nach viraler Koinfektion rekapituliert altersbedingte Erkrankung

Hier stellen wir ein Protokoll zur Etablierung eines Maus-Sepsis-Immunsuppressionsmodells mittels intranasaler Instillation von Klebsiella pneumoniae vor und validieren das Modell anhand verschiedener Indikatoren.

Etablierung eines von Maus-Sepsis induzierten Immunsuppressionsmodells durch intranasale Instillation von Bakterien

Eine kürzlich entwickelte neuartige Partikelagglutinations (PA)-Assay unter Verwendung von Virus-Rezeptor-Molekül erlaubt eine schnelle und einfache Identifizierung des Poliovirus (PV). In diesem Artikel werden wir das Verfahren für die PA-Assay für PV ausweisen.

Partikelagglutinations Methode für Poliovirus Identification

Erfahren Sie die Herstellung eines Zäkal-Ligatur-/Punktionsmodells mit intranasaler Infektion bei Mäusen zur Untersuchung sepsisbedingter Immunsuppression und sekundärer Infektionen.

Design von Cecal Ligation und Punktion und Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression

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