Name: VirWaTest, eine Point-of-Use-Methode zum Nachweis von Viren in Wasserproben (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 32 s
Description: Erfahren Sie die VirWaTest-Methode zum Nachweis von Enteroviren in Wasserproben für den Point-of-Use-Einsatz. Diese kostengünstige Technik ermöglicht eine zuverlässige Virendetektion vor Ort und verbessert die Wassersicherheit in humanitären Kontexten erheblich.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

VirWaTest war ein Forschungsprojekt, das vom HIF (Humanitarian Innovation Funds) Programm der ELHRA (Enhancing Learning & Research for Humanitarian Assistance) finanziert wurde. Die Autoren würdigen die WASH-Teams, die freundlicherweise an dieser Studie mitgearbeitet haben. Die Analyse von Proben in Ecuador wurde von Oxfam Ecuador und Direccién de Investigaciones de la Universidad de las Americas (AMB. BRT.17.01). S. Bofill-Mas ist Serra-Hunter Fellow an der Universität Barcelona.

<ol><li>The Sphere Project. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22The+Sphere+Project%3A+Humanitarian+Charter+and+Minimum+Standards+in+Humanitarian+Response%22">The Sphere Project: Humanitarian Charter and Minimum Standards in Humanitarian Response</a>. , Practical Action Publishing. Rugby, UK. https://www.spherestandards.org/wp-content/uploads/2018/06/Sphere_Handbook_2011_English.pdf (2011).</li>
<li>Bartram, J., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBartram%2C+J+%22Water+Safety+Plan+Manual%3AStep-by-step+risk+management+for+drinking-water+suppliers%22">Water Safety Plan Manual:Step-by-step risk management for drinking-water suppliers</a>. , WHO Press. Geneva, Switzerland. http://apps.who.int/iris/handle/10665/75141 (2009).</li>
<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guidelines+for+Drinking-water+Quality%22">Guidelines for Drinking-water Quality</a>. , WHO Press. Geneva, Switzerland. http://whqlibdoc.who.int/publications/2011/9789241548151_eng.pdf?ua=1 (2011).</li>
<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%2225+Years+Progress+on+Sanitation+and+Drinking+Water%22">25 Years Progress on Sanitation and Drinking Water</a>. , WHO Press. Geneva, Switzerland. http://apps.who.int/iris/bitstream/10665/177752/1/9789241509145_eng.pdf?ua=1 (2015).</li>
<li>Girones, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+detection+of+pathogens+in+water+-+The+pros+and+cons+of+molecular+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Research%22%5BJournal%5D)">Molecular detection of pathogens in water - The pros and cons of molecular techniques.</a> Water Research. 44 (15), 4325-4339 (2010).</li>
<li>Rodriguez-Manzano, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+and+new+fecal+indicators+and+pathogens+in+sewage+treatment+plants%2C+microbiological+parameters+for+improving+the+control+of+reclaimed+water%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Standard and new fecal indicators and pathogens in sewage treatment plants, microbiological parameters for improving the control of reclaimed water.</a> Water Science and Technology. 66 (12), 2517-2523 (2012).</li>
<li>Puig, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+adenoviruses+and+enteroviruses+in+polluted+waters+by+nested+PCR+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Detection of adenoviruses and enteroviruses in polluted waters by nested PCR amplification.</a> Applied and Environmental Microbiology. 60 (8), 2963-2970 (1994).</li>
<li>Carter, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enterically+infecting+viruses%3A+Pathogenicity%2C+transmission+and+significance+for+food+and+waterborne+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Enterically infecting viruses: Pathogenicity, transmission and significance for food and waterborne infection.</a> Journal of Applied Microbiology. 98 (6), 1354-1380 (2005).</li>
<li>Bofill-Mas, S., Pina, S., Girones, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Documenting+the+epidemiologic+patterns+of+polyomaviruses+in+human+populations+by+studying+their+presence+in+urban+sewage%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Documenting the epidemiologic patterns of polyomaviruses in human populations by studying their presence in urban sewage.</a> Applied and Environmental Microbiology. 66 (1), 238-245 (2000).</li>
<li>Bofill-Mas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+and+stability+of+human+adenoviruses+and+polyomavirus+JCPyV+in+wastewater+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Quantification and stability of human adenoviruses and polyomavirus JCPyV in wastewater matrices.</a> Applied and Environmental Microbiology. 72 (12), 7894-7896 (2006).</li>
<li>Rames, E., Roiko, A., Stratton, H., Macdonald, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+aspects+of+using+human+adenovirus+as+a+viral+water+quality+indicator%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Research%22%5BJournal%5D)">Technical aspects of using human adenovirus as a viral water quality indicator.</a> Water Research. 96, 308-326 (2016).</li>
<li>Calgua, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+application+of+a+one-step+low+cost+procedure+to+concentrate+viruses+from+seawater+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virological+Methods%22%5BJournal%5D)">Development and application of a one-step low cost procedure to concentrate viruses from seawater samples.</a> Journal of Virological Methods. 153 (2), 79-83 (2008).</li>
<li>Bofill-Mas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cost-effective+method+for+microbial+source+tracking+using+specific+human+and+animal+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Cost-effective method for microbial source tracking using specific human and animal viruses.</a> Journal of Visualized Experiments. 58, 5-9 (2011).</li>
<li>International Organization for Standardization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22ISO+10705-1%3A1995%3A+Water+quality+-+Detection+and+enumeration+of+bacteriophages+-+Part+1%3A+Enumeration+of+F-specific+RNA+bacteriophages%22">ISO 10705-1:1995: Water quality - Detection and enumeration of bacteriophages - Part 1: Enumeration of F-specific RNA bacteriophages</a>. , https://www.iso.org/standard/18794.html (1995).</li>
<li>Hernroth, B. E., Conden-Hansson, A. C., Rehnstam-Holm, A. S., Girones, R., Allard, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+factors+influencing+human+viral+pathogens+and+their+potential+indicator+organisms+in+the+blue+mussel%2C+Mytilus+edulis%3A+the+first+Scandinavian+report%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Environmental factors influencing human viral pathogens and their potential indicator organisms in the blue mussel, Mytilus edulis: the first Scandinavian report.</a> Applied and Environmental Microbiology. 68 (9), 4523-4533 (2002).</li>
<li>Pecson, B. M., Martin, L. V., Kohn, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+PCR+for+determining+the+infectivity+of+bacteriophage+MS2+upon+inactivation+by+heat%2C+UV-B+radiation%2C+and+singlet+oxygen%3A+Advantages+and+limitations+of+an+enzymatic+treatment+to+reduce+false-positive+results%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Quantitative PCR for determining the infectivity of bacteriophage MS2 upon inactivation by heat, UV-B radiation, and singlet oxygen: Advantages and limitations of an enzymatic treatment to reduce false-positive results.</a> Applied and Environmental Microbiology. 75 (17), 5544-5554 (2009).</li>
<li>Calgua, B., Barardi, C. R. M., Bofill-Mas, S., Rodriguez-Manzano, J., Girones, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+quantitation+of+infectious+human+adenoviruses+and+JC+polyomaviruses+in+water+by+immunofluorescence+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virological+Methods%22%5BJournal%5D)">Detection and quantitation of infectious human adenoviruses and JC polyomaviruses in water by immunofluorescence assay.</a> Journal of Virological Methods. 171 (1), 1-7 (2011).</li>
<li>Bofill-Mas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cost-effective+method+for+microbial+source+tracking+using+specific+human+and+animal+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Cost-effective method for microbial source tracking using specific human and animal viruses.</a> Journal of Visualized Experiments. (58), e2820(2011).</li>
<li>Gonzales-Gustavson, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+efficiency+and+uncertainty+of+skimmed+milk+flocculation+for+the+simultaneous+concentration+and+quantification+of+water-borne+viruses%2C+bacteria+and+protozoa%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microbiological+Methods%22%5BJournal%5D)">Characterization of the efficiency and uncertainty of skimmed milk flocculation for the simultaneous concentration and quantification of water-borne viruses, bacteria and protozoa.</a> Journal of Microbiological Methods. 134, 46-53 (2017).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu verraten.

Die VirWaTest-Methode ermöglicht die Konzentration von Viren und Nukleinsäureextraktion aus Wasserproben am Einsatzort von unerfahrenen Anwendern. Es ist ein erschwingliches, schnelles und einfaches Protokoll. Die Konzentration basiert auf dem Prinzip der organischen Flockung mit Magermilch, wodurch sich Magermilchproteine aufgrund des niedrigen pH- und hohen Leitfähigkeitswertes zu Flocken aggregieren lassen, die die Viren adsorbieren. Wenn die Flocken Sediment, ist es einfach, sie zu sammeln, so dass es möglich ist, 10...

In den ersten Phasen humanitärer Notfälle sind der Zugang zu sauberer Wasserversorgung, sanitären Einrichtungen und Hygiene für das Überleben der Betroffenen von entscheidender Bedeutung. Daher ist die Überwachung der Wasserqualität eine Priorität, um Ausbrüche auf dem Wasser zu verhindern. Es ist allgemein bekannt, dass kontaminiertes Wasser häufig der Ursprung von Krankheiten ist, aber es ist oft schwierig, die Quellen von Virusausbrüchen wie dem Hepatitis-E-Virus (HEV) zu bestimmen, selbst wenn herkömmliche Labormethoden zur Verfügung stehen. Die Kontrolle der Wasserqualität basiert auf der Quantifizierung von FIB1,2,3,4. Es wurde jedoch ausführlich dokumentiert, dass es keinen Zusammenhang zwischen dem Fehlen von FIB und dem Vorhandensein von viralen, wasserübertragenen Krankheitserregern wie Rotavirus (RoV), Norovirus (NoV) oder HEV5,6gibt. Daher kann die Verwendung der auf FIB basierenden Wasserqualitätskriterien zu einer Unterschätzung der Risiken führen, die mit dem Vorhandensein von wasserbasierten Viruserregern verbunden sind. Die Überwachung von Indikatorviren wie humanen Adenoviren (HAdV) oder spezifischen Krankheitserregern wäre hilfreich bei der Definition der Exposition gegenüber virusviralen Krankheitserregern und der Identifizierung der potenziellen Quelle einer infektion beim Menschen7,8, 9,10 und bei der Validierung der Wirksamkeit von sanitären Maßnahmen11.
Bisher beruhte der Nachweis von Viren in diesen Szenarien auf qualifiziertes Personal und komplexe Logistik. VirWaTest (virwatest.org) zielt auf die Entwicklung einer einfachen, erschwinglichen und tragbaren Methode zur Konzentration und anschließenden Detektion von Viren aus Wasserproben am Einsatzort ab.
Die Viruskonzentration basiert auf dem Prinzip der organischen Flockung von 10 L Wasserproben, durch die Viren in kleineren Bänden12,13zurückgewonnen werden. Die Flocken werden gesammelt und einem Puffer hinzugefügt, der die Viren liert und verhindert, dass die Nukleinsäuren abgebaut werden, wenn sie nicht mehr als 2 Wochen bei Raumtemperatur gelagert werden.
Die Nukleinsäureextraktionsmethode basiert auf der Verwendung von magnetischen Partikeln, an die die Nukleinsäuren adsorbiert werden. Sie können mit einer magnetischen Pipette, an die sich die Partikel anheften, von einem Waschpuffer in einen anderen und schließlich in den Elutionspuffer übertragen werden. Die erhaltenen viralen Nukleinsäuresuspensionen können an ein Referenzlabor geliefert werden, wo der Nachweis mit molekularen Methoden auf PCR-Basis durchgeführt werden kann. Für jede Nukleinsäureextraktion werden zwei verschiedene Mengen getestet, um eine enzymatische Hemmung, die von der Probe ausgeht, auszuschließen. Alternativ können bei minimaler Geräteverfügbarkeit PCR-Tests am Einsatzort durchgeführt werden. Der gesamte Prozess ist so konzipiert, dass er unabhängig von einem Netzteil durchgeführt wird (Abbildung 1).
Ein quantitativer PCR-Test zum Nachweis von HAdV, der vom Menschen ausgeschieden und in Abwasserproben in hohen Konzentrationen gefunden wurde, wurde angepasst, um am Einsatzort ausgeführt zu werden. HAdV werden als menschliche fäkalvirale Indikatoren verwendet. Eine PCR zur Quantifizierung von MS2-Bakteriophagen wurde ebenfalls angepasst, da MS2 in VirWaTest als Prozesskontrolle eingesetzt wird. Die Methode kann für die Erkennung von Viren von Interesse angepasst werden.
Nach der Entwicklung wurde die VirWaTest-Methode von den Anwendern in zwei verschiedenen Einstellungen in der Republik Zentralafrika (RCA) und Ecuador angewendet und gibt Feedback zur Anwendung des Protokolls in realen Situationen.
Unserer Kenntnis nach ist dies das erste Verfahren, das die Konzentration und Detektion von Viren am Einsatzort ermöglicht, unabhängig von stromversorgung, großen Geräten und Gefrier-/Kühlbedingungen. Es wird empfohlen, zwei Wiederholungen jeder Wasserprobe zu sammeln, um robuste Ergebnisse zu erzielen.

<table><tbody><tr><td>5x HOT FIREPol Sonde qPCR Mix Plus (ROX)</td><td>Solis BioDyne</td><td>08-14-00001</td><td>Enthält Solis Biodynes 5x HOT FIREPol Sonde qPCR Mix Plus (qPCR Mix), 50 Reaktionen</td></tr><tr><td>8-Mikroröhrchen-Streifen mit Kappen</td><td>dD Biolab</td><td>840637</td><td>flaches, dünnwandiges Profil, geeignet für quantitative und qualitative PCR-Batterien</td></tr><tr><td>und Netzteile für magnetische Rührer</td><td>GenIUL</td><td>900011674</td><td>Enthält 12V Autostrom Adapter</td></tr><tr><td>Eimerhalterung</td><td>GenIUL</td><td>900011648</td><td>Aluminium-Stützeimer</td></tr><tr><td>, 10 l</td><td>Cater4You</td><td>10LTR</td><td>Polypropylen, manipulationssicher, klare Farbe</td></tr><tr><td>Zentrifugenröhrchen, 50 mL</td><td>LabBox</td><td>CTSP-E50-050</td><td>Polypropylen, steril, graduiert, mit Rand</td></tr><tr><td>Zitronensäure 1-Hydrat, 500 g</td><td>PanReac AppliChem</td><td>1410181211</td><td>Pure, Pharma Grade, 1 Kilogramm</td></tr><tr><td>Durchsichtige PET-Flasche</td><td>LabBox</td><td>FPET-500-088</td><td>Klarfarbe, PET, Kappe nicht im Lieferumfang enthalten</td></tr><tr><td>Difco Magermilch, 500 g</td><td>Becton Dickinson</td><td>232100</td><td>Dehydriertes</td></tr><tr><td>DNA/RNA-Schutzschild, 250 mL</td><td>Zymo Research</td><td>R1100-250</td><td>DNA/RNA-Konservierungsmedium, 250 mL</td></tr><tr><td>Easy9 Pipettensteuerung</td><td></td><td>LabBox EAS9-001-001</td><td>0,3 &mu; m Filter, Pipetten von 0,1 bis 100 mL, Autoklavierbarer Silikon-Pipettenhalter</td></tr><tr><td>Eppendorf Tube, 0,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>0030121023</td><td>Polypropylen, Safe-Lock</td></tr><tr><td>Eppendorf Tube, 2 mL</td><td>Eppendorf</td><td>0030120094</td><td>Polypropylen, Safe-Lock</td></tr><tr><td>Eppendorf Tube, 5</td><td>mL dD Biolab</td><td>999542</td><td>Polypropylen, steril, graduiertes</td></tr><tr><td>Ethanol 96% V/V, 1 L</td><td>Panreac AppliChem</td><td>361085-1611</td><td>Für UV-, IR&nbsp- und</td>HPLC-Laborpinzetten</tr><tr><td></td><td>LabBox</td><td>FORS-007-002</td><td>Dünnes, gebogenes Ende, L= 120 mm</td></tr><tr><td>Magnetrührer</td><td>GenIUL</td><td>900017000</td><td>Batteriebetriebener</td></tr><tr><td>Marker</td><td>dD Biolab</td><td>929203</td><td>Schwarz, extra feine Spitze, wasserfest, schnell trocknend, für Kunststoff- und Glaswaren</td></tr><tr><td>Micro Rota-Rack für Mikroröhrchen</td><td>dD Biolab</td><td>37782</td><td>4 Module, L x B x H= 208 x 100 x 100 mm</td></tr><tr><td>Mini8 Real-Time PCR Cycler</td><td>Coyote Biosciences, China</td><td>Mini-8</td><td>Portable, funktioniert mit 12V Netzteilen oder externen Batterien, zwei Kanäle, Kapazität für 8 Röhrchen</td></tr><tr><td>NucliSens Lysis Buffer</td><td>Biomerieux</td><td>200292</td><td>Reagenzien für bis zu 48 Isolierungen, Lagerung bei Umgebungstemperatur</td></tr><tr><td>Serologische Pipette mit offener Spitze, 10 mL</td><td>Deltalab</td><td>900136N</td><td>Steril, einzeln verpackt (Papier/Kunststoff)</td></tr><tr><td>PE-Schraubverschluss PP28</td><td>LabBox</td><td>TP28-004-020</td><td>für PET-Flaschen</td></tr><tr><td>pH-Indikatorstreifen</td><td>LabBox</td><td>WSPH-001-001</td><td>Bereich pH 2,8 bis pH 4,4, 50 Streifen pro Packung</td></tr><tr><td>Kunststoff-Reagenzglas</td><td>Quimikals</td><td>300913</td><td>Enthält Kappe</td></tr><tr><td>Polyethylen-Pasteur-Pipette</td><td>LabBox</td><td>PIPP-003-500</td><td>graduiert, 7 mL Gesamtvolumen, Unsteriler</td></tr><tr><td>Polypropylen-Schraubkolben mit Schraubverschluss, 150 mL</td><td>Deltalab</td><td>409726</td><td>Schraubverschluss, steril, graduiert bis 100 mL</td></tr><tr><td>Polypropylen-Schraubkolben mit Schraubverschluss, 60 mL</td><td>Deltalab</td><td>409526G</td><td>Schraubverschluss, steril, graduiert bis 50 mL</td></tr><tr><td>Pulverpulverwaschmittel</td><td></td> <td>-</td> <td>Normale Pulverseife zum Waschen von Kleidung</td></tr><tr><td>Stromkabel für Magnetrührer</td><td>GenIUL</td><td>900011692</td><td>Verbindung zwischen Batterien und Magnetrührern</td></tr><tr><td>QuickPick Magnetwerkzeug</td><td>BioNobile</td><td>24001</td><td>Handwerkzeug für magnetische Partikel</td></tr><tr><td>QuickPick Tips in Box</td><td>BioNobile</td><td>24296</td><td>RNase-frei, autoklaviert, 96 Stück</td></tr><tr><td>QuickPick XL gDNA Magnetische Partikel</td><td>BioNobile</td><td>SN51100</td><td>3,2 mL</td></tr><tr><td>Meersalze</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9883-500G</td><td>Eine künstliche Salzmischung, die der Zusammensetzung der gelösten Salze des Meerwassers sehr ähnlich</td></tr> ist <tr><td>Silikonschlauch</td><td>LabBox</td><td>SILT-006-005</td><td>Rolle von 5 Metern, innen &nbsp; x außen&nbsp; &oslash;= 6 x 10 mm</td></tr><tr><td>Natriumhydroxid-Pellets, 98,5 - 100,5</td>%<td>VWR Chemicals</td><td>28244295</td><td>Pellets, 1 kg</td></tr><tr><td>Solar-Drehplattform</td><td>SOL-EXPERT Group</td><td>70020</td><td>Acrylplatte, 10 U/min, unterstützt bis zu 300 Gramm</td></tr><tr><td>SOLIScript 1-Stufen-Sonden-Kit</td><td>Solis BioDyne</td><td>08-57-00250</td><td>Enthält den 5x One-Step Probe Mix (qPCR Mix) und 40x One-Step SOLIScript Mix (Reverse Transkriptase Enzym), 250 Reaktionen</td></tr><tr><td>SPEEDTOOLS RNA-Virus-Extraktionskit</td><td>BioTools</td><td>21.141-4197</td><td>Enthält den BAW-Puffer (Waschpuffer 1), den BAV3-Puffer (Waschpuffer 2 und 3) und den BRE-Puffer (Elutionspuffer) von BioTools.</td></tr><tr><td>SpinBar Oktaedrischer Rührmagnet</td><td>dD Biolab</td><td>045926</td><td>Drehring, L x x & oslash; = 38 x 8 mm, blaue</td></tr><tr><td>serologische Pipette mit Klebeband, 10 mL</td><td>Deltalab</td><td>PN10E1</td><td>steril, einzeln verpackt (Papier/Kunststoff)</td></tr><tr><td>Serologische Pipette mit Klebeband, 50 mL</td><td></td><td>Deltalab 900043</td><td>steril, einzeln verpackt (Papier/Kunststoff)</td></tr><tr><td>Termi-DNA-Tor - Nukleinsäure-Entferner</td><td>BioTools</td><td>22001-4291</td><td>Entferner von Nukleinsäuren, Bakterien, Pilzen und Mykoplasmen von Materialien und Oberflächen, 450 mL</td></tr><tr><td>Reagenz für die Molekularbiologie in Wasser, 1 l</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W4502-1L</td><td>Nuklease- und Proteasefrei, 0,1 μ; m Gefilterter</td></tr><tr><td>Whirl-Pak Beutel, 540 mL</td><td>Deltalab</td><td>200361</td><td>Stabiler Boden</td></tr><tr><td>Zip Lock Plain Bag</td><td>LabBox</td><td>BZIP-080-100</td><td>Polyethylen, L x B= 120 x 80 mm</td></tr></tbody></table>

virwatest, eine point-of-use-methode zum nachweis von viren in wasserproben

VirWaTest, A Point-of-Use Method for the Detection of Viruses in Water Samples

Viren, die von Menschen und Tieren ausgeschieden werden, können Wasserquellen kontaminieren und eine Gefahr für die menschliche Gesundheit darstellen, wenn dieses Wasser zum Trinken, zur Bewässerung von Lebensmitteln, zum Waschen usw. verwendet wird. Der klassische Fäkalbakterienindikator überprüft nicht immer das Vorhandensein viraler Krankheitserreger, so dass der Nachweis viraler Krankheitserreger und Viralindikatoren relevant ist, um Maßnahmen zur Risikominderung zu ergreifen, insbesondere in humanitären Szenarien und in Gebieten. wo wasserübertragene Virusausbrüche häufig auftreten.
Derzeit stehen mehrere kommerzielle Tests zur Quantifizierung von Fäkalindikatorbakterien (FIB) zur Prüfung am Einsatzort zur Verfügung. Solche kommerziellen Tests sind jedoch nicht für den Nachweis von Viren verfügbar. Der Nachweis von Viren in Umweltwasserproben erfordert die Konzentration mehrerer Liter auf kleinere Volumina. Darüber hinaus beruht der Nachweis von Viren, sobald es konzentriert ist, auf Methoden wie nukleinsäureextraktion und molekularer Detektion (z. B. Polymerase-Kettenreaktion [PCR]-basierte Assays) der viralen Genome.
Die hier beschriebene Methode ermöglicht die Konzentration von Viren aus 10 L Wasserproben sowie die Extraktion von viralen Nukleinsäuren am Einsatzort mit einfachen und tragbaren Geräten. Dies ermöglicht die Prüfung von Wasserproben am Einsatzort für mehrere Viren und ist in humanitären Szenarien sowie in jedem Kontext nützlich, in dem kein ausgestattetes Labor zur Verfügung steht. Alternativ ermöglicht die Methode die Konzentration von Viren in Wasserproben und den Versand des Konzentrats an ein Labor bei Raumtemperatur zur weiteren Analyse.

Methodenentwicklung
Dieses Verfahren wurde im Labor für Viren Kontaminanten von Wasser und Lebensmitteln in Zusammenarbeit mit GenIUL und Oxfam Intermin entwickelt. Es besteht aus drei verschiedenen Schritten. Die erste, die virale Partikelkonzentration, ist eine Anpassung einer Magermilchflockungsmethode, die zuvor beschrieben wurde12,17,<sup...

Hier stellen wir VirWaTest vor, eine einfache, erschwingliche und tragbare Methode zur Konzentration und Detektion von Viren aus Wasserproben am Einsatzort.

VirWaTest, eine Point-of-Use-Methode zum Nachweis von Viren in Wasserproben

Viruses excreted by humans and animals may contaminate water sources and pose a risk to human health when this water is used for drinking, food ...

Enterische Viren finden sich meist in verschiedenen Wasserreservoirs, einschließlich Grundwasser, Stillwasser, Bächen, Flüssen und r Wasser. Sie sind mit Gesundheitsrisiken verbunden und sind für Infektionen beim Menschen verantwortlich. Enterische Viren verursachen häufig Gastroenteritis und werden meist über den fäkal-oralen Weg übertragen.Andere durch Wasser übertragene Krankheiten verursachen akute Hepatitis durch Hepatitis-A-Viren und Hepatitis-E-Viren, mit signifikanter Sterblichkeit, insbesondere in Bezug auf Hepatitis E bei Schwangeren. Die für humanitäre Kontexte vorgeschlagenen aktuellen Protokolle zur Überwachung der Wasserqualität wurden entwickelt, um Bakterien wie E.Coli als Indikator für die Fäkalienkontamination zu erhalten. Aber es ist bereits bekannt, dass es keine Korrelation mit anderen Mikroorganismen wie Viren gibt, die resistenter gegen viele Aktivierungsprozesse sind.Bisher wurde der Nachweis von Viren in humanitären Krisensituationen durchgeführt, indem bestehende Protokolle an die Bedingungen dieser Kontexte angepasst und Proben an Referenzlaboratorien zur molekularen Erkennung von Viren versandt wurden. Es bedarf methodenweisen, um virale Krankheitserrege

virwatest-point-use-method-for-detection-viruses-water

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Die Fluktuationsrate von Viren in Meer-und Süßwasser-Systeme können durch eine Reduktion und Wiederholung Technik geschätzt werden. Die Daten können die Forscher Raten von Virus-vermittelte mikrobielle Sterblichkeit in aquatischen Systemen zu schließen.

Die Schätzung Virus Produktionsraten in aquatischen Systemen

Die Studie beschreibt eine kostengünstige Methode für die Identifizierung der Quelle der fäkale / Urin Kontamination oder Verunreinigung durch Nitrat in Wasser mittels qPCR für die spezifische Quantifizierung von Mensch / Schwein / Rind DNA-Viren, Adenoviren und Polyomaviren als MST-Tools vorgeschlagen.

Kostengünstige Methode für Mikrobielle Source Tracking mit spezifischen menschlichen und tierischen Viren

Dieses Protokoll beschreibt die Verwendung einer Tangentialströmungs-Hohlfaser-Ultrafiltration Probenkonzentration und eine Wärme Dissoziation als alternative Schritte zum Nachweis von...

Eine Änderung, die EPA-Methode 1623 Tangential Flow Hohlfaser-Ultrafiltration und Wärme Dissoziationsstufen nutzt, um auf Wasserbasis Detect<em&gt; Cryptosporidium</em&gt; Und<em&gt; Giardia spp.</em

Source: Fout, G. S., Cashdollar, J. L. EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. II. Total Culturable Virus Assay. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the use of a total culturable virus assay to quantify infectious viruses in water samples. It outlines host cell inoculation, observation of cytopathic effect, and statistical quantification of infectious virus concentration.

Quantifying Infectious Viruses in Water Samples Using an In Vitro Total Culturable Virus Assay

Es wurde ein Ansatz entwickelt, um optimale Viruskonzentrationsbedingungen für Wasserproben mit kleinem Volumen unter Verwendung von Spikes des humanen Adenovirus zu identifizieren. Die hier beschriebenen Techniken werden verwendet, um Konzentrationsparameter für andere virale Ziele zu identifizieren, und werden auf groß angelegte Experimente zur Viruskonzentration angewendet.

Ein kleines Volumen Verfahren für Viral Konzentration von Wasser

EPA-Methode 1615 verwendet einen elektropositiven Filter, um Enteroviren und Noroviren in Umwelt- und Trinkwasser zu konzentrieren. Dieses Manuskript beschreibt das Verfahren zur Entnahme von Proben für Analysen nach Methode 1615.

EPA-Methode 1615 Messung der Enterovirus und Norovirus Vorkommen in Wasser von Kultur und RT-qPCR. I. Sammlung von Virenproben

Hier stellen wir ein Verfahren zur Messung der gesamten kultivierbaren Viren anhand der Buffalo Green Monkey Nierenzelllinie vor. Das Verfahren stellt ein standardisiertes Instrument zur Messung des Vorkommens infektiöser Viren in Umwelt- und Trinkwassern zur Verfügung.

EPA-Methode 1615 Messung von Enterovirus und Norovirus Vorkommen in Wasser durch Kultur und RT-qPCR. II. Insgesamt kultivierbaren Virus Assay

Hier stellen wir ein Verfahren zur Quantifizierung von Enteroviren und Noroviren in Umwelt- und Trinkwassern mittels reverser Transkriptions-quantitativer PCR vor. Die mittlere Virusrückgewinnung aus dem Grundwasser mit diesem standardisierten Verfahren der EPA-Methode 1615 betrug 20 % für Polioviren und 30 % für murine Noroviren.

EPA-Methode 1615 Messung der Enterovirus und Norovirus Vorkommen in Wasser, Kultur und RT-qPCR. Teil III. Virenerkennung durch RT-qPCR

Wir beschreiben hier die neuesten Fortschritte in der Virusisolierung zur Charakterisierung neuer Genotypen des Faustovirus, einer neuen Asfarvirus-verwandten Linie von Riesenviren. Dieses Protokoll kann auf die Hochdurchsatzisolierung von Viren angewendet werden, insbesondere von Riesenviren, die Amöben infizieren.

Eine schnelle Strategie für die Isolierung neuer Faustoviruses von Umweltproben unter Verwendung von<em&gt; Vermamoeba vermiformis</em

Ein Anion Austausch Harz-basierte Methode, angepasst an Flüssigkeit, die Impingement-basierte Bioaerosol Probenahme von Viren nachgewiesen wird. Kombination mit nachgeschalteter molekulare Erkennung ermöglicht die Methode facile und empfindlichen Nachweis von Viren von bioaerosolen.

Erkennung von Viren von Bioaerosolen Anion Austausch Harz

Die Viruskonzentration aus Wasser- und Abwasserproben aus der Umwelt ist eine anspruchsvolle Aufgabe, die vor allem zur Identifizierung und Quantifizierung von Viren durchgeführt wird. Während mehrere Methoden zur Viruskonzentration entwickelt und getestet wurden, demonstrieren wir hier die Wirksamkeit der Ultrafiltration und der Magermilchflockung für RNA-Viren mit verschiedenen Probentypen.

Konzentration von Viruspartikeln aus Wasser- und Abwasserproben aus der Umwelt mittels Magermilchflockung und Ultrafiltration

Erfahren Sie die VirWaTest-Methode zum Nachweis von Enteroviren in Wasserproben für den Point-of-Use-Einsatz. Diese kostengünstige Technik ermöglicht eine zuverlässige Virendetektion vor Ort und verbessert die Wassersicherheit in humanitären Kontexten erheblich.

VirWaTest, eine Point-of-Use-Methode zum Nachweis von Viren in Wasserproben

Weitere Videos entdecken