Name: Identifizierung und Zerlegung von diversen Maus-Adipose-Depots (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-11T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 31 s
Description: Lernen Sie die standardisierte Dissektion verschiedener Maus-Adipose-Depots für metabolische Gesundheitsforschung. Diese Methode ermöglicht präzise histologische und molekularbiologische Analysen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

O.A.M. wird durch NIH-Zuschüsse DK062876 und DK092759 unterstützt; D.P.B. wird vom University of Michigan Medical Scientist Training Program (T32GM007863), dem University of Michigan Training Program in Organogenesis (T32HD007605), dem University of Michigan Rackham Merit Fellowship und dem Tylenol Future Care Fellowship unterstützt.

<ol><li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adipose+organ+at+a+glance%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">The adipose organ at a glance.</a> Disease Models & Mechanisms. 5 (5), 588-594 (2012).</li>
<li>Rosen, E. D., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+we+talk+about+when+we+talk+about+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">What we talk about when we talk about fat.</a> Cell. 156 (1-2), 20-44 (2014).</li>
<li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocyte+lineages%3A+tracing+back+the+origins+of+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Adipocyte lineages: tracing back the origins of fat.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1842 (3), 340-351 (2014).</li>
<li>Bagchi, D. P., Forss, I., Mandrup, S., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SnapShot%3A+Niche+Determines+Adipocyte+Character+I%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">SnapShot: Niche Determines Adipocyte Character I.</a> Cell Metabolism. 27 (1), 264-264 (2018).</li>
<li>Tchkonia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+and+metabolic+implications+of+regional+differences+among+fat+depots%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Mechanisms and metabolic implications of regional differences among fat depots.</a> Cell Metabolism. 17 (5), 644-656 (2013).</li>
<li>Kajimura, S., Spiegelman, B. M., Seale, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brown+and+Beige+Fat%3A+Physiological+Roles+beyond+Heat+Generation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Brown and Beige Fat: Physiological Roles beyond Heat Generation.</a> Cell Metabolism. 22 (4), 546-559 (2015).</li>
<li>Frontini, A., Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+and+development+of+brown+adipocytes+in+the+murine+and+human+adipose+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Distribution and development of brown adipocytes in the murine and human adipose organ.</a> Cell Metabolism. 11 (4), 253-256 (2010).</li>
<li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Adipose+Tissue+Atlas%3A+An+Image-Guided+Identification+of+Human-like+BAT+and+Beige+Depots+in+Rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">An Adipose Tissue Atlas: An Image-Guided Identification of Human-like BAT and Beige Depots in Rodents.</a> Cell Metabolism. 27, 252-262 (2018).</li>
<li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocytes+arise+from+multiple+lineages+that+are+heterogeneously+and+dynamically+distributed%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Adipocytes arise from multiple lineages that are heterogeneously and dynamically distributed.</a> Nature Communications. 5, 4099(2014).</li>
<li>Li, Z., Hardij, J., Bagchi, D. P., Scheller, E. L., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development%2C+regulation%2C+metabolism+and+function+of+bone+marrow+adipose+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Development, regulation, metabolism and function of bone marrow adipose tissues.</a> Bone. 110, 134-140 (2018).</li>
<li>Scheller, E. L., Cawthorn, W. P., Burr, A. A., Horowitz, M. C., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marrow+Adipose+Tissue%3A+Trimming+the+Fat%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Marrow Adipose Tissue: Trimming the Fat.</a> Trends in Endocrinology & Metabolism. 27 (6), 392-403 (2016).</li>
<li>Alexander, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dermal+white+adipose+tissue%3A+a+new+component+of+the+thermogenic+response%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Dermal white adipose tissue: a new component of the thermogenic response.</a> The Journal of Lipid Research. 56 (11), 2061-2069 (2015).</li>
<li>Kruglikov, I. L., Scherer, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dermal+Adipocytes%3A+From+Irrelevance+to+Metabolic+Targets%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Dermal Adipocytes: From Irrelevance to Metabolic Targets?</a> Trends in Endocrinology & Metabolism. 27 (1), 1-10 (2016).</li>
<li>Iacobellis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+and+systemic+effects+of+the+multifaceted+epicardial+adipose+tissue+depot%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Local and systemic effects of the multifaceted epicardial adipose tissue depot.</a> Nature Reviews Endocrinology. 11 (6), 363-371 (2015).</li>
<li>Addison, O., Marcus, R. L., LaStayo, P. C., Ryan, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermuscular+Fat%3A+A+Review+of+the+Consequences+and+Causes%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Intermuscular Fat: A Review of the Consequences and Causes.</a> International Journal of Endocrinology. 2014, 1-11 (2014).</li>
<li>Pond, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue+and+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins%2C+Leukotrienes%2C+and+Essential+Fatty+Acids%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue and the immune system.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 17-30 (2005).</li>
<li>Kloppenburg, A. I. -F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+emerging+player+in+knee+osteoarthritis%3A+the+infrapatellar+fat+pad%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">An emerging player in knee osteoarthritis: the infrapatellar fat pad.</a> Arthritis Research & Therapy. 15 (225), 1-9 (2013).</li>
<li>Mann, A., Thompson, A., Robbins, N., Blomkalns, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization%2C+Identification%2C+and+Excision+of+Murine+Adipose+Depots%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), e52174(2014).</li>
<li>Casteilla, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling%3A+factors+in+selection+and+depot+specificity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods in Molecular Biology. 155, 1-22 (2008).</li>
<li>de Jong, J. M., Larsson, O., Cannon, B., Nedergaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+stringent+validation+of+mouse+adipose+tissue+identity+markers%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Endocrinology+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">A stringent validation of mouse adipose tissue identity markers.</a> American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism. 308 (12), E1085-E1105 (2015).</li>
<li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adipose+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins%2C+Leukotrienes%2C+and+Essential+Fatty+Acids%22%5BJournal%5D)">The adipose organ.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 9-15 (2005).</li>
<li>Parlee, S. D., Lentz, S. I., Mori, H., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+size+and+number+of+adipocytes+in+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Quantifying size and number of adipocytes in adipose tissue.</a> Methods in Enzymology. 537, 93-122 (2014).</li>
<li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Region-specific+variation+in+the+properties+of+skeletal+adipocytes+reveals+regulated+and+constitutive+marrow+adipose+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Region-specific variation in the properties of skeletal adipocytes reveals regulated and constitutive marrow adipose tissues.</a> Nature Communications. 6, 7808(2015).</li>
<li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+osmium+tetroxide+staining+with+microcomputerized+tomography+to+visualize+and+quantify+bone+marrow+adipose+tissue+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Use of osmium tetroxide staining with microcomputerized tomography to visualize and quantify bone marrow adipose tissue in vivo.</a> Methods in Enzymology. 537, 123-139 (2014).</li>
<li>Lukjanenko, L., Brachat, S., Pierrel, E., Lach-Trifilieff, E., Feige, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+profiling+reveals+that+transient+adipogenic+activation+is+a+hallmark+of+mouse+models+of+skeletal+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Genomic profiling reveals that transient adipogenic activation is a hallmark of mouse models of skeletal muscle regeneration.</a> PLoS One. 8 (8), e71084(2013).</li>
<li>Pagano, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+Regeneration+with+Intermuscular+Adipose+Tissue+%28IMAT%29+Accumulation+Is+Modulated+by+Mechanical+Constraints%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Muscle Regeneration with Intermuscular Adipose Tissue (IMAT) Accumulation Is Modulated by Mechanical Constraints.</a> PLoS One. 10 (12), e0144230(2015).</li>
<li>Khan, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermuscular+and+perimuscular+fat+expansion+in+obesity+correlates+with+skeletal+muscle+T+cell+and+macrophage+infiltration+and+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Obesity%22%5BJournal%5D)">Intermuscular and perimuscular fat expansion in obesity correlates with skeletal muscle T cell and macrophage infiltration and insulin resistance.</a> International Journal of Obesity. 39 (11), 1607-1618 (2015).</li>
<li>Sulston, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+Circulating+Adiponectin+in+Response+to+Thiazolidinediones%3A+Investigating+the+Role+of+Bone+Marrow+Adipose+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Increased Circulating Adiponectin in Response to Thiazolidinediones: Investigating the Role of Bone Marrow Adipose Tissue.</a> Frontiers in Endocrinology. 7, 128(2016).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu verraten.

Da die Bedeutung der vielfältigen molekularen und funktionellen Eigenschaften diskreter Adipozytencluster zunehmend erkannt wird, ist es von entscheidender Bedeutung, dass die Forscher vor Ort für weitere Analysen Wertdepots einheitlich identifizieren und verbrauchen. Bis heute gibt es nur wenige Protokolle für die standardisierte Lokalisierung und Isolierung der breiten Palette von Maus-Fettdepots. Zuvor veröffentlichte Methoden konzentrieren sich in erster Linie auf ein oder zwei Depots und fehlen die Details für eine ...

Adipose Gewebe spielen eine entscheidende Rolle in ganzer Körper Homöostase, einschließlich Speicherung und Freisetzung von Energie als Reaktion auf lokale und globale Bedürfnisse, Thermoregulation, und Sekretion von Adipokinen Energiebilanz, Stoffwechsel und Immunantworten regulieren1 , 2. Adipozyten werden im ganzen Körper in diskreten Depots verteilt und dienen in einigen Fällen spezialisierten Rollen innerhalb ihrer Mikroumgebungen3,4,5. Historisch gesehen konzentrierte sich die Untersuchung des Fettgewebes auf weißes Fettgewebe (WAT) und seine Rolle bei der Aufrechterhaltung der Energiehomöostase. Die meisten Adipozyten werden im ganzen Körper in subkutanen und viszeralen WAT-Depots verteilt. Die Eigenschaften dieser Depots sind wichtig für die differenzielle Anfälligkeit für Stoffwechselerkrankungen. Subkutane Adipozyten, die sich unter der Haut befinden, wurden mit schützenden metabolischen Effekten in Verbindung gebracht5. Viszerale Adipozyten, die die lebenswichtigen Organe umgeben und in den Depots für Gonaden, Perirenale, Retroperitoneale, Omentale und Perikardsaugen enthalten sind, sind häufig mit Stoffwechselstörungen verbunden, einschließlich Typ-2-Diabetes und Herz-Kreislauf-Erkrankungen2 . Braunes Fettgewebe (BAT) wurde ebenfalls ausgiebig untersucht. Braune und braune Adipozyten drücken entkoppelndes Protein 1 (UCP1) aus und spielen eine wichtige Rolle bei der adaptiven Thermogenese und Glukosehomöostase6,7. Klassische braune Adipozyten sind im interscapularen BAT-Depot8enthalten. Cluster von braunen Adipozyten sind auch an anderen Orten zu finden, einschließlich supklavikuläre, infra/subscapular, zervikale, paravertebrale und periaortische Depots8,9.
Zusätzlich zu ihrer Lage in großen WAT- und BAT-Depots gibt es Adipozyten in diskreten Nischen im gesamten Körper4, wo sie spezielle Funktionen innerhalb ihrer jeweiligen Mikroumgebungen ausführen können. Zum Beispiel, Knochenmark Fettgewebe (BMAT) dient als Lipid-Reservoir, ist eine Hauptquelle des zirkulierenden Adiponectin, und interagiert eng mit Osteoblasten, Osteoklasten, und hämatopoetischen Zellen10,11. Dermale Adipozyten tragen zu weit verbreiteten Prozessen bei, einschließlich Wundheilung, Immunantwort, Thermoregulation und Haarfollikelwachstum12,13. Darüber hinaus können epikardiale Adipozyten mehrere Adipokine und Chemokine produzieren, die lokale und systemische Auswirkungen auf die Entwicklung und das Fortschreiten der koronaren Herzkrankheit ausüben14. Die Ausweitung der inter-/intramuskulären WAT wurde positiv mit erhöhter Fettleibigkeit,systemischer Insulinresistenz und verminderter Muskelkraft und Beweglichkeit 15 korreliert. Darüber hinaus dienen popliteale Adipozyten als Lipidreservoir für lymphatische Expansion während der Infektion16. Während die spezifischen Rollen der verschiedenen Gelenkdepots im Allgemeinen unbekannt sind, wird das Hoffa-Depot (Infrapatellar) innerhalb des Knies nun gedacht, um zu Pathologien beizutragen, einschließlich vorderer Knieschmerzen und Arthrose17.
Während regionale Unterschiede in Adipozytencharakter und Funktion intensiv untersucht werden, wird das Feld derzeit durch das Fehlen eines standardisierten Protokolls zur Identifizierung und Zerlegung verschiedener Mausdepots eingeschränkt. Zuvor veröffentlichte Methoden haben in der Regel die Isolierung von einem oder zwei spezifischen Depots beschrieben und es fehlt die Detailgenauigkeit, die für eine gleichmäßige Exzision erforderlich ist18,19. Das in diesem Manuskript beschriebene Protokoll bietet eine umfassende Anleitung für die spezifischen anatomischen Standorte und Isolationsschritte vieler verschiedener Mausfettdepots. Obwohl WAT-Depots im Mittelpunkt dieses Manuskripts stehen, wird auch die Exzision der interskapulierten BVT ausführlich beschrieben. Adipose Gewebe, die mit diesem Protokoll ausgeschnitten werden, kann für eine Vielzahl von experimentellen Endpunkten verwendet werden, einschließlich Explant-Studien, Histologie und Genexpressionsanalysen.
Das Ziel dieses Manuskripts ist es, den Ermittlern ein detailliertes Protokoll zur eindeutigen und präzisen Identifizierung und Isolierung sowohl prominenter als auch weniger untersuchter Mausfettdepots zur Verfügung zu stellen (Abbildung 1). Diese Ressource wird eine umfassendere Untersuchung der Entwicklungs-, molekularen und funktionellen Eigenschaften von Adipozyten in verschiedenen Nischen ermöglichen.
<img alt="Anatomiediagramm der Nagetiere, das die Lage des Fettgewebes zeigt; Zu den Details gehören Perikard, Omental, WAT." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59499/59499fig1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> Abbildung 1: Schematische Darstellung von Mausfettdepots, die in diesem Protokoll seziert werden. Dieses Bild wurde von Bagchi et al., 20184adaptiert. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59499/59499fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

<table><tbody><tr><td>10 % neutral gepuffertes Formalin</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-110-869</td><td></td></tr><tr><td>24-Well-Platten, unbehandelt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS3738</td><td></td></tr><tr><td>70 % Ethanol (von 95 % verdünnt)</td><td>Fisher Scientific</td><td>04-355-226</td><td></td></tr><tr><td>Präparierzange mit gebogenen Spitzen</td><td>VWR</td><td>89259-946</td><td></td></tr><tr><td>Präparierpfanne</td><td>Carolina Biological Supply Company</td><td></td><td></td>629004</tr><tr><td>Präparierschere (scharfe/stumpfe Spitze)</td><td>VWR</td><td>82027-588</td><td></td></tr><tr><td>Mullschwämme</td><td>Vitality Medical</td><td>2634</td><td>Curity 4 Zoll x 4 Zoll Mullschwamm, 12 Lagen</td></tr><tr><td>Handi-Pins zum Sezieren</td><td>Carolina Biological Supply Company</td><td>629132</td><td></td></tr><tr><td>Irisschere (gerade)</td><td>VWR</td><td>470018-890</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>VetOne</td><td></td><td></td>501017</tr><tr><td>Skalpell</td><td>VWR</td><td>100499-578</td><td>Federskalpellgriff mit Klinge, Einweg</td></tr></tbody></table>

identifizierung und zerlegung von diversen maus-adipose-depots

Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots

Adipose Gewebe sind komplexe Organe mit einer breiten Palette von Funktionen, einschließlich Speicherung und Mobilisierung von Energie als Reaktion auf lokale und globale Bedürfnisse, Entkopplung des Stoffwechsels, um Wärme zu erzeugen, und Sekretion von Adipokinen, um Ganzkörperhomöostase zu regulieren und Immunantworten. Neue Forschung identifiziert wichtige regionale Unterschiede in den Entwicklungs-, molekularen und funktionellen Profilen von Adipozyten, die sich in diskreten Depots im ganzen Körper befinden. Unterschiedliche Eigenschaften der Depots sind medizinisch relevant, da Stoffwechselerkrankungen oft depotspezifische Effekte aufweisen. Dieses Protokoll wird den Forschern einen detaillierten anatomischen Atlas und eine Dissektionsanleitung für die reproduzierbare und genaue Identifizierung und Exzision verschiedener Mausfettgewebe zur Verfügung stellen. Die standardisierte Zerlegung diskreter Fettdepots ermöglicht detaillierte Vergleiche ihrer molekularen und metabolischen Eigenschaften und Beiträge zu lokalen und systemischen pathologischen Zuständen unter verschiedenen Ernährungs- und Umweltbedingungen.

Mit dem oben beschriebenen Protokoll kann eine erfolgreiche Identifizierung und Isolierung verschiedener Mausfettdepots erreicht werden. Die brutto anatomischen Positionen der subkutanen (A, E-F), braunen (B), viszeralen (C, D, G-J) und poplitealen (K) Depots sind in Abbildung 2dargestellt.
<img alt="Anatomie-Präparierbilder; Markierung interner Organe, Studie zur Bildungsbiologie, vergleichende Mor...

Adipozyten gibt es in diskreten Depots und haben unterschiedliche Rollen in ihren einzigartigen Mikroumgebungen. Da regionale Unterschiede in Adipozytencharakter und Funktion aufgedeckt werden, ist eine standardisierte Identifizierung und Isolierung von Depots entscheidend für die Weiterentwicklung des Feldes. Hierin stellen wir ein detailliertes Protokoll zur Exzision verschiedener Mausfettdepots vor.

Identifizierung und Zerlegung von diversen Maus-Adipose-Depots

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, ...

Eine standardisierte Methodik zur Identifizierung und Zerlegen von Fettdepots im ganzen Körper ist entscheidend für die Untersuchung von Unterschieden im Charakter und der Funktion von Adipozyten in diskreten anatomischen Nischen. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass es sich um eine zuverlässige und genaue Methode zur Identifizierung und Exzisierung sowohl gemeinsamer als auch weniger untersuchter Nagetier-Fettdepots handelt. Für die Identifizierung und Isolierung der interskaporären BAT verwenden Sie Irisschere horizontal entlang der unteren Kante des vorderen Unterhautgewebes einer eingeschläferten Maus nach dem natürlichen Rand des Depots zu schneiden.Machen Sie zwei vertikale Einschnitte entlang der seitlichen Ränder des Depots nach den natürlichen Grenzen des Gewebes. Verwenden Sie Zangen, um das Depot vorsichtig aufzuklappen, um das schmetterlingsförmige interscapuläre braune Fettgewebe zu enthüllen, das in das weiße Fettgewebe eingebettet ist. Dann sezieren Sie die BVT vorsichtig weg vom umliegenden WAT.Bewahren Sie Fettgewebe in geeigneten Behältern für die nachgelagerte Analyse auf. Zur Identifizierung und Isolierung von posterior subkutanen WAT, legen Sie die Maus in die Supine-Position und sichern Sie die Gliedmaßen des Tieres. Verwenden Sie Zangen, um die Haut an der Basis des Brustbeins zu heben und einen ein Millimeter Hautschnitt zu machen.Legen Sie eine Klinge der Irisschere in den Schnitt und machen Sie einen vier bis fünf Zentimeter großen Mittellinien-Hautschnitt, der an der Basis des Brustbeins beginnt und zur Basis des Schwanzes aufsteigt. Als nächstes machen Sie zwei einen Zentimeter horizontale Einschnitte an der Oberseite des anfänglichen vertikalen Schnitts, der sich seitlich von der Mittellinie erstreckt. Verwenden Sie die Zange, um die Haut vorsichtig von der Peritonealhöhle zurückzuziehen, verwenden Sie das Bein, um die nachträgene subkutane WAT zu lokalisieren, die mit der Haut assoziiert bleiben sollte.Pin die ausgestreckte Haut und vollständig verbrauchen die dreieckige Leisten WAT Depot von der Basis des Hinterglieds ventral über die Leistengegend. Für die viszerale WAT-Depot-Identifikation und -Isolierung verwenden Sie Zangen, um die dünne Peritonealhohlraumwand an der Basis des Brustbeins zu heben und einen ein Millimeter Schnitt im Zeltgewebe zu machen. Legen Sie eine Klinge der Irisschere in den Schnitt ein und machen Sie einen vier bis fünf Zentimeter hohen vertikalen Schnitt von der Oberseite der Peritonealhöhle zum Rektum.Machen Sie zwei ein Zentimeter horizontale Einschnitte an der Ober- und Unterseite des vertikalen Schnitts, der sich seitlich von der Mittellinie erstreckt, und verwenden Sie die Zange, um das Peritoneum zurückzuschälen, um den Bauchhöhleninhalt freizulegen. Stecken Sie dann das ausgestreckte Peritoneum an die Sezierpfanne, um die WAT-Depots in der Peritonealhöhle zu ernten. Für die Identifizierung und Isolierung von viszeralen Gonaden WAT, lokalisieren Sie die Gonaden und verwenden Zangen, um den zugehörigen Gonaden WAT zu heben, und verwenden Sie dann iris Schere, um die WAT sorgfältig aus den Gonaden zu verbrauchen.Um das Perirenaldepot zu verbrauchen, lokalisieren Sie die Niere und verwenden Sie Zangen, um das Nierengewebe zu heben. Ziehen Sie die Niere an die Mittellinie, um eine klare Trennung zwischen den perirenalen und retroperitonealen Depots zu sehen und verbrauchen Sie die WAT, die direkt mit den Nieren verbunden ist. Entfernen Sie dann die Nebennieren oberhalb der Nieren aus dem WAT.Zur retroperitonealen WAT-Identifikation und -Isolierung heben Sie die Niere wieder an die Mittellinie und sezieren Sie die retroperitoneale WAT sorgfältig von der hinteren Peritonealwand. Um den poplitealen WAT zu isolieren, legen Sie die Patella gegen die Sezierpfanne und achten Sie darauf, dass die popliteale Fossa am Hinterrücken des Knies nach oben zeigt. Verwenden Sie die Irisschere, um die Haut vorsichtig von der Basis des Hinterglieds zum Fuß zu entfernen.Verwenden Sie die Irisschere, um einen Schnitt an der unteren Grenze der medialen und seitlichen Köpfe des Magen-Darm-Muskels zu machen, verwenden Sie die Zange, um den Muskel zu heben, um das dreieckige popliteale Depot zu offenbaren. Verwenden Sie dann eine Irisschere, um das Depot entlang der natürlichen Gewebegrenzen zu verbrauchen. Hier werden die groben anatomischen Positionen von maussubkutanen, braunen, viszeralen und poplitealen Depots dargestellt.Die histologischen Eigenschaften der subkutanen, braunen, viszeralen, poplitealen, konstitutiven und regulierten Markfett-, intramuskulären und infrapatellaren Fettdeponien können mit Standard-Hematoxylin- und Eosin-Färbeprotokollen bewertet werden. Die mit diesem Protokoll isolierten Fettgewebe können für eine Vielzahl experimenteller Endpunkte verwendet werden, einschließlich histologischer Analysen, molekularer Studien sowie Gen- und Proteinexpressionsanalyse. Die feldweite Standardisierung der Identifizierung verschiedener Fettdepots wird uns zweifellos dabei helfen, ihre molekularen und metabolischen Eigenschaften und ihre unterschiedlichen Beiträge zu lokalen und systematischen pathologischen Zuständen besser zu verstehen.

identification-and-dissection-of-diverse-mouse-adipose-depots

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

In diesem Video demonstrieren wir das chirurgische Verfahren zur Isolierung des subkutanen weißen Fettgewebes und des interscapularen braunen Fettgewebes einer neugeborenen Maus.

Entnahme von weißem und braunem Fettdepot von Mäusewelpen: Ein chirurgischer Eingriff zur Entnahme von weißem Fettgewebe und braunem Fettgewebe von Mäusewelpen

Durch die drastische und negative Zusammenhang zwischen Fettleibigkeit und andere Begleiterkrankungen, Forschung über die Rolle Fettgewebe spielt in Krankheit und die allgemeine Gesundheit gerechtfertigt ist. Wir stellen ein Protokoll für die Isolierung und Entfernung von Fettgewebe Depots ermöglicht die Untersuchung von Fettgewebe unter Verwendung von in situ und in vitro-Verfahren.

Lokalisierung, Identifizierung und Exzision Murine Fettgewebe Depots

Fettgewebe (AT) kann die Homöostase des ganzen Körpers beeinflussen, daher ist es wichtig, die molekularen Mechanismen der Adipozytendifferenzierung und -funktion zu verstehen. Wir stellen ein Protokoll zur Verfügung, um neue Einblicke in diese Prozesse zu gewinnen, indem wir die Homöostase, die Differenzierung und die Hypoxie-Exposition der Adipozyten als Modell für die induzierte Apoptose der Adipozyten analysieren.

Mechanismus der Regulierung der Adipocyte Zahlen in adulten Organismen durch Differenzierung und Apoptosis Homöostase

Dieses Papier soll eine schrittweise Anleitung zu sammeln verschiedene weißen Fettgewebe von Mäusen, die Fett Proben zu verarbeiten und RNA extrahieren zu präsentieren.

Maus Fettgewebe Erhebung und Verarbeitung für die RNA-Analyse

Dieses Protokoll beschreibt den technischen Ansatz zur Isolierung von adipogenen und fibro-inflammatorischen Stromazell-Subpopulationen aus murinen intraabdominalen Depots aus weißem Fettgewebe (WAT) durch fluoreszenzaktivierte Zellsortierung oder immunomagnetische Kügelchentrennung.

Isolierung von adipogenen und fibro-inflammatorischen Stromazell-Subpopulationen aus murinen intraabdominalen Fettdepots

Hier beschreiben wir eine einfache, kostengünstige und schnelle Clearing-Methode, um die 3D-Struktur von Maus- und menschlichem weiß-fettgewebe mithilfe einer Kombination von Markern zu lösen, um Vaskulatur, Kerne, Immunzellen, Neuronen und Lipid-Tröpfchen-Beschichtungsproteine durch fluoreszierende Bildgebung zu visualisieren.

Untersuchung der Adipose-Gewebestruktur durch Methylsalicylat-Clearing und 3D-Bildgebung

Dieser Bericht beschreibt ein Protokoll zur gleichzeitigen Isolierung von primären braunen und weißen Präadipozyten von neugeborenen Mäusen. Isolierte Zellen können in Kultur gezüchtet und dazu gebracht werden, sich in voll ausgereifte weiße und braune Adipozyten zu differenzieren. Die Methode ermöglicht die genetische, molekulare und funktionelle Charakterisierung primärer Fettzellen in Kultur.

Isolierung und Differenzierung primärer weißer und brauner Präadipozyten von neugeborenen Mäusen

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Dissektion von Maus-Fettdepots und zur Isolierung und Verdauung entsprechender Arterien, um die Endothelzellpopulation freizusetzen und dann zu identifizieren. Frisch isolierte Zellen, die in nachgeschalteten Anwendungen eingesetzt werden, werden das Verständnis der vaskulären Zellbiologie und der Mechanismen vaskulärer Dysfunktion voranbringen.

Isolierung und Identifizierung vaskulärer Endothelzellen aus unterschiedlichen Fettdepots für Downstream-Anwendungen

Präadipozyten werden aus der stromalen Gefäßfraktion des interskapularen braunen Fettgewebes von neugeborenen Mäusen isoliert und zu Zellen differenziert, die Lipidtröpfchen akkumulieren, molekulare Marker exprimieren und die mitochondriale Morphologie reifer brauner Adipozyten zeigen. Diese Zellen werden weiter mittels Immunfluoreszenz und Transmissionselektronenmikroskopie analysiert.

Differenzierung und Bildgebung von braunen Adipozyten aus der stromalen vaskulären Fraktion des interscapularen Fettgewebes von neugeborenen Mäusen

Hier bieten wir ein praktisches Verfahren zur Präparierung und Durchführung histologischer und Genexpressionsanalysen von murinem supraklavikulärem braunem Fettgewebe.

Dissektion, histologische Verarbeitung und Genexpressionsanalyse von murinem supraklavikulärem braunem Fettgewebe

Die Größe und Zerbrechlichkeit reifer Adipozyten haben die Techniken und Werkzeuge, die für ihre Untersuchung und Isolierung zur Verfügung stehen, eingeschränkt. Hier wird ein Protokoll für die Isolierung reifer muriner Adipozyten beschrieben, das leicht an verschiedene Fettdepots und Mausdiäten angepasst werden kann.

Isolierung und Kultivierung von primären murinen Adipozyten aus mageren und adipösen Mäusen

Lernen Sie die standardisierte Dissektion verschiedener Maus-Adipose-Depots für metabolische Gesundheitsforschung. Diese Methode ermöglicht präzise histologische und molekularbiologische Analysen.

Identifizierung und Zerlegung von diversen Maus-Adipose-Depots

Weitere Videos entdecken