Ein In Vivo Östrogen-Mangel-Maus-Modell zum Screening exogener Östrogen-Behandlungen von Kardiovaskulärer Dysfunktion nach den Wechseljahren

Labormodelle mit Östrogen-Mangel Mäusen, die eine Arteriosklerose Pons Daten präsentieren fehlen. Dieses Verfahren ist besonders hilfreich für das Screening exogener Östrogen-Behandlungen von herzkarherzischer Dysfunktion nach den Wechseljahren. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass die Ovariektomie ohne doppelten dorsolateralen Schnitt eine einfachere, weniger zeitaufwändige Methode ist, die schwere Bauchhöhlenhaftung und Entzündungen vermeidet.

Demonstriert wird das Verfahren von Yue-Zhang Yin, einem Doktoranden aus meinem Labor. Um eine bilaterale Ovariektomie bei APOE-Knockout-Mäusen durchzuführen, bestätigen Sie zunächst eine mangelnde Reaktion auf den Pedalreflex und legen Sie das Tier in die anfällige Position auf einem Heizkissen. Tragen Sie Salbe auf die Augen des Tieres auf und bedecken Sie das Tier mit einem chirurgischen Vorhang.

Machen Sie einen ein Zentimeter Schnitt seitlich zur Mittellinie und einen Zentimeter seitlich zu den Costalrippen, und verwenden Sie Zangen, um das subkutane Gewebe unverblümt zu sezieren. Identifizieren Sie mit einer SezierenderBrille das weiße Fettgewebe in der Bauchhöhle. Mit Mikroschere und Mikrozange, machen Sie einen 0,5-zu-ein-Zentimeter-Schnitt durch die Faszie, bis die Bauchhöhle erreicht ist, und verwenden Sie die Mikrozange, um das weiße Fettgewebe sanft zurückzuziehen.

Ein rosa, maulbeerförmiger Eierstock, eingewickelt in Fettgewebe, sollte in der Bauchhöhle beobachtet werden. Verwenden Sie eine Monofilament-Nähte, um das 0,5- bis ein Zentimeter große proximale Gefäß und Das Gebärmutterhorn zu ligieren, und verwenden Sie die Mikroschere, um den Eierstock zu ernten. Bringen Sie das restliche Gewebe in die Bauchhöhle zurück und verwenden Sie einzelne Monofilament-Nähte, um die Muskel- und Hautschichten getrennt zu schließen.

Dann ernten Sie den Eierstock auf der kontralateralen Seite des Tieres, wie gerade gezeigt, und lassen Sie die Maus auf einem Heizkissen mit Überwachung zu erholen, bis volle Recumbency. Einmal pro Woche, von der Woche vor bis 12 Wochen nach der Operation, messen Sie das Körpergewicht jedes Schein- und Versuchstiers auf einem Gleichgewicht. Für die Plasma-Gesamtcholesterin- und Triglyceridmessung bereiten Sie in Woche 12 den ventralen Brustbereich mit 70% Ethanol vor und legen Sie eine 25-Spur-Nadel in den rechten Ventrikel ein.

Langsam aspirieren, bis ein Milliliter Blut in die Spritze fließt, und geben Sie die Probe in ein 1,5-Milliliter-Sammelrohr mit zehn Mikrolitern 0,5 Molaren EDTA. Invertieren Sie die Röhre mehrmals gründlich, um die EDTA in das Blut zu mischen, und legen Sie die Röhre sofort auf Eis. Innerhalb von 30 Minuten nach der Sammlung zentrieren Sie die Probe für 20 Minuten bei 400 mal G und vier Grad Celsius.

Sammeln Sie den Plasmaüberstand vorsichtig für die Lagerung bei minus 80 Grad Celsius. Um die Aorta zu isolieren, befestigen Sie in Woche 12 eine 25-Spur-Nadel an einer mit PBS gefüllten 50-Milliliter-Spritze und legen Sie die Nadel in den linken Ventrikel des Versuchstiers ein. Schneiden Sie das rechte Atrium, um einen hohen Druck aus der Perfusion zu vermeiden, und durchdringen Sie das Herzgewebe mit einem PBS pro Minute Durchfluss von 05 bis 08 Millilitern.

Absorbieren Sie die Perfusionsflüssigkeit mit Laborgewebe und verwenden Sie Scheren und Zangen, um die Rippen und Lungen zu entfernen. Öffnen Sie die Bauchhöhle, um die inneren Organe zu entfernen, für eine bessere Sicht auf die Aorta. Greifen Sie das Herz mit Mikrozange, um die Trennung der Aorta dorsal, von der Wirbelsäule, bis zur iliac Bifurkation zu ermöglichen.

Dann fixieren Sie das Herz und die Aorta für 48 Stunden in 4% Paraformaldehyd, bevor Sie die Gewebeprobe bei Raumtemperatur oder bei zwei bis acht Grad Celsius für ein paar Stunden in Derinline lagern. Nach zwölf Wochen einer cholesterinreichen Ernährung zeigen ovariectomisierte Mäuse einen bemerkenswerten Anstieg der Plasma-Gesamtcholesterin- und Triglyceridkonzentrationen. Ovariectomisierte Mäuse, pro oral verabreicht mit 17-Beta-Östradiol, oder PPD über Haselnuss-Spread, weisen signifikant niedrigere Plasma-Gesamtcholesterinkonzentrationen auf als scheinbetriebene Mäuse.

Plasmatriglyceridspiegel verringern sich bei eialisierten Mäusen, pro oral verabreicht mit 17-Beta-Östradiol, jedoch nicht mit PPD. Während bei eialisierten Mäusen eine Tendenz zu einem erhöhten Körpergewicht beobachtet wird, werden im Vergleich zu scheinbetriebenen Mäusen insgesamt keine signifikanten Veränderungen des Körpergewichts zwischen den vier Tiergruppen beobachtet. Die maximale Plaque der aufsteigenden Aorta ist bei ovarieztomisierten Mäusen erhöht, im Vergleich zu allen anderen Gruppen, in Verbindung mit einer allgemeinen Abnahme der Herzfunktion, die bei diesen Tieren beobachtet wurde.

Darüber hinaus ist der durchschnittliche Prozentsatz der Aortenläsionsfläche im Verhältnis zum gesamten Aortenbereich bei eialisierenden Mäusen signifikant erhöht. Wie erwartet, wird das Vorhandensein dieser Läsionen mit 17-Beta-Östradiol, oder PPD-Behandlung verringert. Das Hauptrisiko für die Ovariektomie-Operation ist die Ureteralligation, die zu einer hohen Sterblichkeit führt.

Denken Sie auch daran, tief in der Nähe der Nierenarterie Zweige zu schneiden, um Aortenschäden zu vermeiden.