A Rabbit Model of Aqueous-Deficient Dry Eye Disease Induced by Concanavalin A Injection into the Lacrimal Dlands: Application to Drug Efficacy Studies

Unsere Methode bietet das fehlende zuverlässige Tiermodell von trockenen Augenerkrankungen, die akut oder chronisch sein können, dank unserer Methode, alle Tränendrüsen zu injizieren und Injektionen zu wiederholen. Diese Technik liefert Concanavalin A zuverlässig an die minderwertige Tränendrüse mittels Ultraschallführung zu den Drüsen von sehr unterschiedlichen Größen und bis hin zu überlegener Tränendrüse, was diese Methode zu einem vollständigen Ansatz macht. Dieses Modell bietet eine einfache, optimierte, nicht-chirurgische Möglichkeit, wässrige-mangelhafte trockene Augenerkrankungen auszulösen.

Es ist gut geeignet, um die Wirksamkeit von Arzneimitteln und die Pathophysiologie von Krankheiten zu untersuchen. Die Identifizierung der hinteren Inziation und die Verwendung der Ultraschalllokalisierung kann zunächst eine Herausforderung darstellen. Das Entfernen des gesamten Fells ist entscheidend, um bei der Ultraschalllokalisierung für beide Schritte zu helfen.

Demonstriert wird das Verfahren von Wei Huang, einem Doktoranden aus meinem Labor. Nachdem Sie eine leichte Sedierung durch Beobachtung einer entspannten Kopfposition mit nicht mehr vollständig aufrechten Ohrläppchen bestätigt haben, verwenden Sie eine Mikropipette, um 25 Mikroliter konservierungsfreies Lidocain auf das erste Auge aufzutragen und ein flexibles Drahtdeckelspekulum zwischen die Augenlider zu legen. Mit 0,3 Zangen greifen Sie die nictating Membran an ihrer Spitze und verlängern Sie sie über die Hornhaut.

Mit einer 26 Gauge scharfen Nadel, injizieren Lidocain 1%mit 1:100, 000th Adrenalin subkonjuctivin in die Basis der nictating Membran. Über der Membran sollte sich eine moderate Blessur bilden. Entfernen Sie dann das Spekulum und machen Sie eine identische Injektion in die linke nictating Membran.

Legen Sie den Deckel nach etwa fünf Minuten wieder in das Andere Auge und ziehen Sie die nictating Membran an ihrer Spitze mit 0,3 Zangen zurück. Schneiden Sie mit der Westcott-Schere die nictating Membran an ihrer Basis ab und entfernen Sie das Spekulum. Dann topische Antibiotikasalbe auf das Auge legen.

Für die palpebrale Portionierung der überlegenen Tränendrüseninjektion, nach Bestätigung der Sedierung, das Fell im präorbitalen und Kopfhautbereich abscheren und Enthaarungscreme verwenden, um restlichefelle vollständig zu entfernen. Nach zwei Minuten die Creme entfernen und 25 Mikroliter 1%konservierungsfreier Lidocain auf das entsprechende Auge auftragen. Immer das obere Augenlid und wenden Sie sanften medialen Druck auf den hinteren Orbitalrand an, bis die Protuberanz, die den palpebralen Teil der Drüse markiert, zu sehen ist.

Mit feinverzahnten Zangen und einer Tuberkulinspritze, die mit einer 27-Spur-Nadel ausgestattet ist, dringen Sie direkt über einen transkonjunktivalen Ansatz in die Drüse ein, der die Nadel zwei Millimeter in das Gewebe vorträgt, und injizieren Sie 100 Mikroliter einer 500-Mikrogramm-Lösung von Concanavalin A oder Con A. Unmittelbar nach der Injektion medialen Druck auf den Globus anwenden, um die überlegene Orbital-Tränendrüde aus der Hinterhaut zu protruzieren. Mit geschlossenen gekrümmten Zangen, einrücken den Bereich, bis die knöcherne Öffnung im Schädel gefühlt wird und wenden Sie weiteren bescheidenen Druck mit Zange, um einen Einzug in der Haut zu verlassen, um als Meilenstein für die Nadelplatzierung dienen. Legen Sie eine Tuberkulinspritze mit einer 27-Grad-Nadel senkrecht zur Haut über der Einzugsmarke etwa einen Viertel Zoll in den Schnitt ein und leiten Sie die Nadel nach außen und nach außen in Richtung des seitlichen Canthus, der auf den Mittelpunkt zwischen der Injektionsstelle und dem knöchernen Orbitalrand abzielt.

Sobald die Nabe der Nadel erreicht ist, injizieren Sie langsam 0,2 Milliliter einer 1.000 Mikrogramm Lösung von Con A.Für iLG Injektion, sehen Sie das Tier von der Seite, um die Prominenz der ILG entlang des unteren vorderen Teils der Umlaufbahn zu lokalisieren. Verwenden Sie einen chirurgischen Markierungsstift, um eine vertikale Linie auf die Haut zu zeichnen, wo der oberflächliche Teil der ILG-Drüse von seiner oberflächlichen Ruhestätte auf dem zygomatischen Knochen zu seiner medialeren Position im Orbit übergeht. Sweep eine vertikal gehaltene Ultraschallsonde über die Linie auf der Haut, um das Ende des zygomatischen Knochens zu identifizieren.

Der ILG-Übergang tritt dort auf, wo sich das Bild der Drüse von einer umschriebenen hyperechoischen Linie zu einer Linie ohne erkennbare mediale Grenze ändert. Die relative Position des Handstücks zur Linie, die auf der Haut gezeichnet wird, wenn diese Veränderung beobachtet wird, wird die Injektionsstelle sein. Um Con A an einer Stelle, die nur medial zum zygomatischen Bogenknochen ist, in eine Drüse zu legen, legen Sie die gewünschte Injektionstiefe als tiefes zygomatisches Knochenhyperechosignal plus einen Millimeter abzüglich der bekannten Nadellänge fest.

Setzen Sie die Nadel etwa 12 Millimeter in die Drüse an der Injektionsstelle ein, bevor Sie sich langsam zurückziehen, bis die Länge der freiliegenden Nadel außerhalb des Körpers der berechneten Differenz entspricht. Dann injizieren 0,2 Milliliter einer 1.000 Mikrogramm Con A Lösung und bestätigen den Erfolg der Injektion durch Ultraschall. Die ILG sollte einen charakteristischen hyperechoischen Raum aufweisen.

Con-A-Injektionen induzieren eine starke Entzündungsreaktion in der Tränendrüse, die durch ein dichtes lymphozytäres Infiltrat gekennzeichnet ist, das von einer verminderten Tränenproduktion begleitet wird. Tränen Lactoferrin-Spiegel werden unterdrückt, was zu einem kompromittierten Hornhaut- und Bindehautepithel und einer erhöhten rosabengalen Färbung führt. Die Injektion der drei orbitalen LG Gewebe erzeugt einen konsistenten und gleichmäßigen trockenen Augenkrankheit Zustand.

Ein einziger Satz von Con A Injektionen produziert trockene Augenkrankheit, die etwa eine Woche dauert, wobei sich alle klinischen Parameter bis Tag 10 normalisieren. Sequenzielle Con-A-Injektionen im Abstand von etwa einer Woche verlängern die Dauer der Trockenaugenkrankheit entsprechend. Nach etwa fünf Injektionssätzen wird der Zustand der trockenen Augenkrankheit oft dauerhaft, ohne dass weitere Injektionen erforderlich sind.

Die optimale Lokalisierung der Tränendrüsenstrukturen ist am wichtigsten. Vertrautheit mit Derartanatomie und Liebe zum Feinen einschließlich Entfernung des Fells zusammen mit Geschicklichkeit mit dem Ultraschall alle verbessern die Ergebnisse. Da diese einfache Technik die Verwendung von Scharfen erfordert, sollte die Untersuchung angemessene Vorsichtsmaßnahmen treffen, um Nadelstichverletzungen zu verhindern.