Name: Isolation und Kultur der primären Aorten-Endothelzellen von Miniaturschweinen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Erfahren Sie eine effektive enzymatische Methode zur Isolation primärer aortaler Endothelzellen von Miniaturschweinen. Diese Technik liefert über 97% reine Zellen für Xenotransplantationsforschung.

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Die Arbeit wurde durch Stipendien der Natural Science Foundation der Provinz Guangdong, Grant/Award Nummer: 2016A030313028; Medical Scientific Research Foundation of Guangdong Province, Grant/Award Number: B2018003; Shenzhen Foundation of Science and Technology, Grant/Award-Nummer: JCYJ20180306172449376, JCYJ20180306172459580, JCJY20160229204849975, GJHZ20170314171357556, JCYJ20160425103000011 und JCYJ201604281420404945; Shenzhen Longhua District Foundation of Science and Technology, Grant/Award Number: 2017013; National Key R&D Programm von China, Grant/Award-Nummer: 2017YFC1103704; Sanming Project of Medicine in Shenzhen, Grant/Award Number: SZSM201412020; Sonderfonds für den Bau hochrangiger Krankenhäuser in der Provinz Guangdong (2019); Fund for High Level Medical Discipline Construction of Shenzhen, Grant/Award Number: 2016031638; Shenzhen Foundation of Health and Family Planning Commission, Grant/Award Number: SZXJ2017021 und SZXJ2018059. Wir danken Hancheng Zhang und Zhicheng Zou von der Universität Shenzhen für die Unterstützung bei der Erstellung des Manuskripts.

Die Verwendung von Tieren wurde von der Ethik-Überprüfungskommission des Shenzhen Second People es Hospital in Übereinstimmung mit den Grundsätzen des Tierschutzes genehmigt.
1. Vorbereitung von Tieren, Medien und Puffern
<ol><li>Bereiten Sie das Miniaturschwein vor. HINWEIS: Alle Miniaturschweine waren chinesische Wuzhishan- oder Bama-Schweine (männlich). Das Alter und das Gewicht der Schweine betrugen 100 Tage bei 8 Tagen bzw. 5,7 kg bei 1,0 kg (Mittelwert sD, n = 3).</li>
	<li>Bereiten Sie das Kulturmedium vor: Endothelzellmedium (ECM) ergänzt durch 10% (v/v) hitzeinaktiviertes fetales Rinderserum (FBS), 1% (v/v) Penicillin/Streptomycin (P/S) und 1% (v/v) endotheliale Zellwachstumsergänzung (ECGS).</li>
	<li>Bereiten Sie den Waschpuffer vor: 1x PBS-Lösung (pH 7.4) mit 1% (v/v) P/S.</li>
	<li>Bereiten Sie eine 0,005% Kollagennase IV Verdauungslösung: 1 mg Kollagenase IV Pulver in 20 ml PBS-Lösung. Die Kollagenase-Verdauungslösung vor der Verdauung bei 37 °C vorwärmen.</li>
	<li>Bereiten Sie den Stopppuffer vor: Dulbeccos modifiziertes Eagle-Medium (DMEM) ergänzt durch 10% hitzeinaktivierte FBS und 1% P/S.</li>
</ol>2. Chirurgie und Vorbereitung zur Isolierung von Porenaorten-Endothelzellen
<ol><li>Desinfizieren des Operationssaals mit UV-Licht für 1 h und medizinischem Desinfektionsmittel 84 Flüssigkeit (verfügbarer Chlorgehalt beträgt 4,0% - 5,0%, Materialtabelle) vor der Durchführung der Operation.</li>
	<li>Nachdem das Miniaturschwein eine intramuskuläre Injektion aus 15 mg/kg Ketamin, 15 mg/kg Xylazinhydrochlorid und 0,05 mg/kg Phenacetinhydrochlorid erhalten hatte ( Volumen: 100 l/kg, Materialtabelle) (Abbildung 1A), bestätigen die Anästhesiestatus mit Überprüfung des schmerzhaften Stimulus von Schweinen (z. B. Kneifen eines Ohres oder Schütteln eines Vorderbeins) und physiologischen Index (z. B. Blutdruck, Herz- und Atemfrequenz). HINWEIS: Eine weitere halbe Dosis Injektion könnte dem Schwein gegeben werden, wenn es die Anzeichen des Aufwachens zeigt.</li>
	<li>Den Bauch mit einem Skalpell schneiden, die unterlegene Vena cava aussetzen und folglich Heparin-Natrium (5.000 U, Materialtabelle)mit 5 ml Spritze in die untere Vena cava injizieren.</li>
	<li>Fünf Minuten später einen Katheter in die Bauchaorta zu Blut geben, die Brusthaut schneiden und das Zwier mit einem Skalpell zerschneiden und anschließend den linken Ventrikel abschneiden. HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass Das Schwein eingeschläfert wird, indem Sie den Aortenpuls nach dem Bluten und Schneiden des Herzens überprüfen.</li>
	<li>Verbrauchen Sie die Rippen mit Knochenzangen (Tabelle der Materialien), und belichten Sie das Herz und die Lunge. Finden Sie die Aorta posterior zu Herz und Lunge und klemmen Sie die beiden Enden. Waschen Sie die Aorta einmal mit vorgekühlten Waschpuffer (Abbildung 1B,C).</li>
	<li>Schneiden Sie die Aorta mit der Schere aus und halten Sie die Aorta an jedem Ende geklemmt. Verbrauchen überschüssiges Gewebe um die Aorta mit sterilen Zangen und Schere. Die Aorta in ein 50 ml Zentrifugenrohr geben, die Aorta mit vorgekühltem Waschpuffer 3x (30 ml pro Waschgang) waschen und die Aorta ins Labor geben (Abbildung 1D).</li>
</ol>3. Isolierung von Porcine Aorten-Endothelzellen
<ol><li>Unter aseptischen Bedingungen die Schweineaorta aus dem Waschpuffer entfernen und auf eine 150 mm Petrischale legen (Abbildung 2A).</li>
	<li>Schneiden Sie die beiden Enden der Aorta vorsichtig ab und verbrauchen Sie überschüssiges Gewebe um Aorta herum mit sterilen Zangen und Scheren wieder (Abbildung2B). Waschen Sie die Außen- und Innenseite der Aorta (über die Kulturschale bei Raumtemperatur) mit 20 bis 50 ml Waschpuffer. HINWEIS: Versuchen Sie, nur den Bereich zu schneiden, in dem die Klemmen während der Operation platziert wurden, da einige ECs in diesem Bereich beschädigt wurden, und entfernen Sie überschüssiges Gewebe und arterielle Seitenzweige.</li>
	<li>Passieren Sie eine chirurgische Naht durch die Aorta und binden Sie dann ein Ende der Aorta mit der chirurgischen Naht (5-0, 90cm, Tisch aus Materialien). Bewahren Sie die chirurgische Naht im Inneren der Aorta auf (Abbildung 2C,D).</li>
	<li>Fixieren Sie die Aorta vorsichtig in der Nähe des gebundenen Endes mit Zangen, und ziehen Sie dann die chirurgische Naht langsam, um die Aorta umzukehren, bis die endotheliale Oberfläche der Aorta freigelegt wird (Abbildung 2E-G). HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass die Aorta in der Nähe des gebundenen Endes fixiert wird und fixieren Sie die Aorta nicht fest, sonst kann die Aorta nicht durch Ziehen der chirurgischen Naht umgekehrt werden.</li>
	<li>Die endotheliale Oberfläche der Aorta mit einem Waschpuffer 3x (10 ml pro Waschgang) waschen und diese Lösung entsorgen. Legen Sie die Aorta in ein 15 ml Zentrifugenrohr und bedecken Sie die Aorta mit 10 ml 0,005% Kollagennase IV Verdauungslösung in das Rohr (Abbildung 2H). HINWEIS: Die 0,005% Kollagennase IV Verdauungslösung bei 37 °C vor der Verdauung vorwärmen.</li>
	<li>Inkubieren Sie bei 37 °C für 15 min. Legen Sie die verdaute Aorta und Verdauungslösung in eine 100 mm Kulturschale und stoppen Sie die Wirkung von 0,005% Kollagennase IV, indem Sie 10 x 15 ml vorgekühlten Stopppuffer hinzufügen. HINWEIS: Die empfohlene Verdauungszeit liegt zwischen 10 und 20 Minuten. Stellen Sie sicher, dass die Endotheloberfläche der Aorta durch den Stopppuffer abgedeckt ist.</li>
	<li>Mit einem Zellschaber (Abbildung2I) kratzen Sie pAECs vorsichtig von der Innenfläche der Aorta ab . Waschen Sie die abgekratzte Aorta 3x mit Waschpuffer (5 ml pro Zeit). Die Lösung aus der Kulturschale in ein 50 ml Zentrifugenrohr geben. Waschen Sie den Boden der Kulturschale 2x mit Waschpuffer (5 ml pro Zeit), und legen Sie die Lösung wieder in ein 50 ml Zentrifugenrohr. HINWEIS: In eine Richtung vorsichtig kratzen und nicht komprimieren. Berühren Sie das Gewebe nicht in der Nähe der Ränder und Löcher. Es wird empfohlen, 5 x 8x zu verschrotten.</li>
	<li>Zentrifugieren Sie das Rohr bei 600 x g für 6 min bei 4 °C. Entsorgen Sie den Überstand und lassen Sie 10 ml Lösung an der Unterseite eines 50 ml Zentrifugenrohrs. 20 ml Waschpuffer in das 50 ml Zentrifugenrohr geben und die Pellets wieder aufhängen. Vermeiden Sie Blasen während dieses Schritts.</li>
	<li>Zentrifuge bei 600 x g für 6 min bei 4 °C. Entsorgen Sie den Überstand langsam. Die Zellpellets mit 1 ml Kulturmedium aussetzen und gut vermischen. ANMERKUNG: Die erhaltene durchschnittliche Anzahl von ECs pro cm Aorta beträgt 1,9 x 105 x 1,4 x 104 (mittelwert ig, sD, n = 3).</li>
	<li>Zählen Sie die Zellen mit einem Zellenzähler. Die Zellen in einem Gefäß verankern und kulturieren, ohne Materialien entsprechend der Zellzahl zu beschichten. Wenn die Zellenzahl kleiner oder gleich 1,0 x 106ist, kulturieren Zellen in einem 25 cm2 Kolben. Wenn die Zellenzahl größer als 1,0 x 106ist, kulturieren Zellen in mehreren 25 cm2 Kolben (1,0 x 106 Zellen pro Kolben). Den Kolben in einen Inkubator (ohne Schütteln) bei 37 °C mit 5% CO2 stellen und das Medium alle 2 bis 3 Tage austauschen. HINWEIS: Einige Zellen werden durch den Zellschaber beschädigt. Ein Zelllebensfähigkeitstest ergab, dass der Anteil der lebenden Zellen 95,7 % bis 1,7 % betrug (Mittelwert sD, n = 3). Die Verdoppelungszeit der isolierten Zellen beträgt ca. 1 bis 2 Tage.</li>
</ol>4. Ernte und Charakterisierung reiner Endothelzellen
<ol><li>Lassen Sie die Zellen für etwa 4-5 Tage wachsen. Wenn die Zellen 80% Zusammenfluss erreichen (Abbildung 3A), verdauen Sie die Zellen mit 0,25% Trypsin und durchgehen die Zellen. Dann sammeln Sie einige der isolierten Zellen (Tag 3, Passage 1 und Passage 2) und identifizieren Sie durch Durchflusszytometrie (mit einem Anti-CD31-Antikörper).</li>
	<li>Etikettisolierte pAECs (Zellnummer: 1 x 105) (Tag 3, Passage 1 und Passage 2) mit Anti-Porin CD31-Fluorescein isothiocyanat (FITC) konjugierter Antikörper (10 L Antikörper für pro 100 L-Zellen, gebeizt für 30 min bei 4 °C) für die Durchflusszytometrie-Analyse.</li>
	<li>Gate gesamt lebende Zellpopulation mit einem vorwärts verstreuten Plot, unbefleckte Probe als negativer Kontrolle. Dann präsentieren Sie die CD31-positiven Zellen der Gated-Zellen mit Histogramm. HINWEIS: Die Wirksamkeit von CD31-positiven Zellen beträgt 97,4 % bei 1,2 % (Tag 3), 94,4 % bis 1,1 % (P1) bzw. 92,4 % 1,7 % (P2) (Mittelwert SD) (Abbildung3B).</li>
</ol>

<ol><li>Zhang, G. Y., Liao, T., Fu, X. B., Li, Q. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+transplantation+in+China%3A+concerns+remain%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Organ transplantation in China: concerns remain.</a> Lancet. 385 (9971), 854-855 (2015).</li>
<li>Ekser, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+xenotransplantation%3A+the+next+medical+revolution%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Clinical xenotransplantation: the next medical revolution?</a> Lancet. 379 (9816), 672-683 (2012).</li>
<li>Cooper, D. K., Ekser, B., Ramsoondar, J., Phelps, C., Ayares, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+genetically+engineered+pigs+in+xenotransplantation+research%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">The role of genetically engineered pigs in xenotransplantation research.</a> The Journal of Pathology. 238 (2), 288-299 (2016).</li>
<li>Pober, J. S., Sessa, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolving+functions+of+endothelial+cells+in+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Evolving functions of endothelial cells in inflammation.</a> Nature Reviews Immunology. 7 (10), 803-815 (2007).</li>
<li>McGill, S. N., Ahmed, N. A., Christou, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cells%3A+role+in+infection+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Endothelial cells: role in infection and inflammation.</a> World Journal of Surgery. 22 (2), 171-178 (1998).</li>
<li>Ekser, B., Cooper, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overcoming+the+barriers+to+xenotransplantation%3A+prospects+for+the+future%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Overcoming the barriers to xenotransplantation: prospects for the future.</a> Expert Review of Clinical Immunology. 6 (2), 219-230 (2010).</li>
<li>Yeom, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+aortic+endothelial+cell+genes+responsive+to+selected+inflammatory+stimulators%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Veterinary+Medical+Science%22%5BJournal%5D)">Porcine aortic endothelial cell genes responsive to selected inflammatory stimulators.</a> The Journal of Veterinary Medical Science. 71 (11), 1499-1508 (2009).</li>
<li>Beigi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+method+for+isolating+highly+purified+and+functional+porcine+aortic+endothelial+and+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Optimized method for isolating highly purified and functional porcine aortic endothelial and smooth muscle cells.</a> Journal of Cellular Physiology. 232 (11), 3139-3145 (2017).</li>
<li>Jansen of Lorkeers, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenotransplantation+of+Human+Cardiomyocyte+Progenitor+Cells+Does+Not+Improve+Cardiac+Function+in+a+Porcine+Model+of+Chronic+Ischemic+Heart+Failure.+Results+from+a+Randomized%2C+Blinded%2C+Placebo+Controlled+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+One%22%5BJournal%5D)">Xenotransplantation of Human Cardiomyocyte Progenitor Cells Does Not Improve Cardiac Function in a Porcine Model of Chronic Ischemic Heart Failure. Results from a Randomized, Blinded, Placebo Controlled Trial.</a> PLOS One. 10 (12), e0143953(2015).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+Antigens+Involved+in+Delayed+Xenograft+Rejection+in+a+Ggta1%2FCmah+Dko+Pig-to-Monkey+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Potential Antigens Involved in Delayed Xenograft Rejection in a Ggta1/Cmah Dko Pig-to-Monkey Model.</a> Scientific Reports. 7 (1), 10024(2017).</li>
<li>Paris, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ASGR1+expressed+by+porcine+enriched+liver+sinusoidal+endothelial+cells+mediates+human+platelet+phagocytosis+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">ASGR1 expressed by porcine enriched liver sinusoidal endothelial cells mediates human platelet phagocytosis in vitro.</a> Xenotransplantation. 18 (4), 245-251 (2011).</li>
<li>Paris, L. L., Chihara, R. K., Sidner, R. A., Tector, A. J., Burlak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+human+and+porcine+platelet+oligosaccharides+may+influence+phagocytosis+by+liver+sinusoidal+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">Differences in human and porcine platelet oligosaccharides may influence phagocytosis by liver sinusoidal cells in vitro.</a> Xenotransplantation. 19 (1), 31-39 (2012).</li>
<li>Bernardini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+shock+protein+70%2C+heat+shock+protein+32%2C+and+vascular+endothelial+growth+factor+production+and+their+effects+on+lipopolysaccharide-induced+apoptosis+in+porcine+aortic+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stress+%26+Chaperones%22%5BJournal%5D)">Heat shock protein 70, heat shock protein 32, and vascular endothelial growth factor production and their effects on lipopolysaccharide-induced apoptosis in porcine aortic endothelial cells.</a> Cell Stress & Chaperones. 10 (4), 340-348 (2005).</li>
<li>Endemann, D. H., Schiffrin, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%3A+JASN%22%5BJournal%5D)">Endothelial dysfunction.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 15 (8), 1983-1992 (2004).</li>
<li>Graupera, M., Claret, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+Cells%3A+New+Players+in+Obesity+and+Related+Metabolic+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+and+Metabolism%3A+TEM%22%5BJournal%5D)">Endothelial Cells: New Players in Obesity and Related Metabolic Disorders.</a> Trends in Endocrinology and Metabolism: TEM. 29 (11), 781-794 (2018).</li>
<li>Kawamoto, A., Asahara, T., Losordo, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+endothelial+progenitor+cells+for+therapeutic+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Radiation+Medicine%22%5BJournal%5D)">Transplantation of endothelial progenitor cells for therapeutic neovascularization.</a> Cardiovascular Radiation Medicine. 3 (3-4), 221-225 (2002).</li>
<li>Rafii, S., Lyden, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+stem+and+progenitor+cell+transplantation+for+organ+vascularization+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Therapeutic stem and progenitor cell transplantation for organ vascularization and regeneration.</a> Nature Medicine. 9 (6), 702-712 (2003).</li>
<li>Jain, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+death%2C+angiogenesis%2C+and+microvascular+function+after+castration+in+an+androgen-dependent+tumor%3A+role+of+vascular+endothelial+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell death, angiogenesis, and microvascular function after castration in an androgen-dependent tumor: role of vascular endothelial growth factor.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (18), 10820-10825 (1998).</li>
<li>Pratumvinit, B., Reesukumal, K., Janebodin, K., Ieronimakis, N., Reyes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+characterization%2C+and+transplantation+of+cardiac+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Isolation, characterization, and transplantation of cardiac endothelial cells.</a> BioMed Research International. 2013, 359412(2013).</li>
<li>Crouch, E. E., Doetsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS+isolation+of+endothelial+cells+and+pericytes+from+mouse+brain+microregions%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">FACS isolation of endothelial cells and pericytes from mouse brain microregions.</a> Nature Protocols. 13 (4), 738-751 (2018).</li>
<li>Nakano, H., Nakano, K., Cook, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Purification+of+Epithelial+and+Endothelial+Cells+from+Mouse+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Isolation and Purification of Epithelial and Endothelial Cells from Mouse Lung.</a> Methods in Molecular Biology. 1799, 59-69 (2018).</li>
<li>Naschberger, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Human+Endothelial+Cells+from+Normal+Colon+and+Colorectal+Carcinoma+-+An+Improved+Protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation of Human Endothelial Cells from Normal Colon and Colorectal Carcinoma - An Improved Protocol.</a> Journal of Visualized Experiments. (134), e57400(2018).</li>
<li>Yu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+endothelial+colony-forming+cells+from+mononuclear+cells+of+rat+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of endothelial colony-forming cells from mononuclear cells of rat bone marrow.</a> Experimental Cell Research. 370 (1), 116-126 (2018).</li>
<li>Chi, L., Delgado-Olguin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Culture+of+Mouse+Placental+Endothelial+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Isolation and Culture of Mouse Placental Endothelial Cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1752, 101-109 (2018).</li>
<li>Hawthorne, W. J., Lew, A. M., Thomas, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+strategies+to+bring+islet+xenotransplantation+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Organ+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Genetic strategies to bring islet xenotransplantation to the clinic.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 21 (5), 476-483 (2016).</li>
<li>Yi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+Forces+Accelerate+Collagen+Digestion+by+Bacterial+Collagenase+in+Lung+Tissue+Strips%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mechanical Forces Accelerate Collagen Digestion by Bacterial Collagenase in Lung Tissue Strips.</a> Frontiers in Physiology. 7, 287(2016).</li>
<li>Masson-Pevet, M., Jongsma, H. J., De Bruijne, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagenase-+and+trypsin-dissociated+heart+cells%3A+a+comparative+ultrastructural+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Collagenase- and trypsin-dissociated heart cells: a comparative ultrastructural study.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 8 (10), 747-757 (1976).</li>
<li>Yonenaga, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+conditions+of+collagenase+treatment+for+isolation+of+articular+chondrocytes+from+aged+human+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Regenerative+Therapy%22%5BJournal%5D)">Optimal conditions of collagenase treatment for isolation of articular chondrocytes from aged human tissues.</a> Regenerative Therapy. 6, 9-14 (2017).</li>
<li>French, M. F., Mookhtiar, K. A., Van Wart, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limited+proteolysis+of+type+I+collagen+at+hyperreactive+sites+by+class+I+and+II+Clostridium+histolyticum+collagenases%3A+complementary+digestion+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Limited proteolysis of type I collagen at hyperreactive sites by class I and II Clostridium histolyticum collagenases: complementary digestion patterns.</a> Biochemistry. 26 (3), 681-687 (1987).</li>
<li>Hara, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+investigation+of+pig+cells+for+resistance+to+human+antibody-mediated+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+International%3A+Official+Journal+of+the+European+Society+for+Organ+Transplantation%22%5BJournal%5D)">In vitro investigation of pig cells for resistance to human antibody-mediated rejection.</a> Transplant International: Official Journal of the European Society for Organ Transplantation. 21 (12), 1163-1174 (2008).</li>
<li>Takashima, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+fibroblast+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Establishment of fibroblast cultures.</a> Current Protocols in Cell Biology. Chapter 2, 2.1.1-2.1.12 (2001).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu verraten.

Endothelzellen werden häufig in der Forschung von vaskulären Dysfunktion, Diabetes, Geweberegeneration, Transplantation, und Krebs14,15,16,17,18verwendet. Um die Biologie und Funktion von ECs bei diesen Krankheiten zu verstehen und zu charakterisieren, wurden zahlreiche Methoden zur Isolierung der ECs verschiedener erkrankter Organe oder Gewebe berichtet<sup c...

Der Mangel an verfügbaren Organen für die Transplantation ist weltweit ein offenes Problem1. Nach Angaben der Rotkreuz-Gesellschaft Chinas erhielt 2018 nur eine kleine Anzahl von Patienten mit Organversagen im Endstadium ein geeignetes Organ in China.
Xenotransplantation ist ein vielversprechender Weg, um das Problem des Organmangels zu lösen. Schweineorgane gelten aufgrund anatomischer und physiologischer Ähnlichkeiten als die am besten geeigneten Organe für den Menschen2,3. Das Versagen eines Schweinexenografts hängt weitgehend mit der Immunabstoßung und Gerinnungsreaktionen des Primaten zusammen. Porcine Endothelzellen (ECs) sind kritisch, da diese Zellen die ersten sind, die mit dem Primaten-Immunsystem interagieren, das Antikörper, Komplement, Zytokine und Immunzellen (z. B. T-Zellen, B-Zellen und Makrophagen)4,5umfasst. Schweine-ECs spielen eine wichtige Rolle in Schweineorgan und Islet Xenotransplantation6,7. Daher sind ECs wichtige Zellen für die Untersuchung der Abstoßungs- und Gerinnungsreaktionen auf ein Schweinetransplantat. Für die Xenotransplantationsforschung ist die Isolierung hochwertiger Schweine-ECs erforderlich.
Bei Versuchen, ECs aus verschiedenen Organen (z.B. Herz, Niere, Leber und Aorta) zu isolieren, wurden mehrere Protokolle in einer Xenotransplantateinstellung8,9,10,11,12berichtet. Die Beibehaltung einer ultrareinen Kultur isolierter ECs ist jedoch ein herausragendes Problem in Standardprotokollen. Die erhöhte Konzentration der verdauten Lösung, ungeeignete Verdauungszeit und Kratzintensität können zur erhöhten Fibroblastenkontamination in aktuellen Studien8,10,13beitragen. Außerdem wird die Methode der isolierten pAECs von Miniaturschweinen weniger untersucht. Hier beschreiben wir eine optimierte enzymatische Methode zur Isolierung hochgereinigter pAECs von Miniaturschweinen (Wuzhishan oder Bama). Mehrere Schritte des Protokolls wurden entwickelt, um die Fibroblastenkontamination zu reduzieren und hochreine ECs zu erhalten.

<table><tbody><tr><td>BD FACSAria II</td><td>BD Bioscience</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Boneforceps</td><td>Beijing HeLi KeChuang Technology Development CO., Ltd. China</td><td>HL-YGQ&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>BOON Einwegspritze (10ml)</td><td>Jiangsu Yile medical Article Co., Ltd. China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD31-FITC Antikörper</td><td>Bio-Rad</td><td>MCA1746F</td><td></td></tr><tr><td>Zellschaber</td><td>Corning&nbsp;</td><td>3010#</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenase IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138#-1G</td><td></td></tr><tr><td>Verbindung Ketamin Injektion&nbsp;</td><td>Veterinärpharmazeutische Fabrik von Shenyang, China</td><td></td><td>Ketaminhydrochlorid 0,3 g / 2 ml, Xylazinhydrochlorid : 0,3 g / 2 ml, Phenacetinhydrochlorid 1 mg / 2 ml</td></tr><tr><td>DAPI (4 ', 6-Diamidino-2-phenylindol, Dihydrochlorid)</td> <td>Life Technologies</td><td>D1306 #</td><td></td></tr> <tr><td>DMEM</td><td>Life Technologies</td><td>11965118 #</td><td></td></tr> <tr><td>ECM</td><td>Sciencell</td><td>1001 #</td><td></td></tr> <tr><td>EKG</td><td>Sciencell</td><td>1052#</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Mikroröhrchen mit Schnappverschluss (1,5 ml)</td><td>AXYGEN</td><td>MCT-150-C#</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 100mm Zellkulturschale</td><td>Corning</td><td>353003#</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>GIBCO</td><td>10270-106#</td><td></td></tr><tr><td>Flowjo v10.0</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinzette&nbsp;</td><td>ShangHai medizinische Instrumente Co., Ltd.China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heparin Natrium</td><td>Jiangsu WanBang biopharmazeutische Co., Ltd.China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Jodtinktur</td><td>Guilin LiFeng Medical Supplies Co., Ltd.China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Miniaturschwein (Bama oder Wuzhishan)</td><td>Kang Yi Ökologische Landwirtschaft Co., Ltd, China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mshot Mikroskop &nbsp;</td><td>Verifizierter Lieferant - Guangzhou Micro-shot Technology Co., Ltd.</td><td>M152</td><td></td></tr><tr><td>Petrischalen (150 x 15 mm)</td><td>Biologixgroup</td><td>66-1515#</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Life Technologies</td><td>15070063#</td><td></td></tr><tr><td>Rechteckige Zellkulturflasche mit schrägem Hals und Entlüftungskappe ? T25?</td><td>Corning&nbsp;</td><td>3289#</td><td></td></tr><tr><td>Schere</td><td>ShangHai medizinische Instrumente Co., Ltd.China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Serologische Transferpipetten (10ml)</td><td>JET Biofil</td><td>GSP010010#&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Pasteurpipette</td><td>GeneBrick</td><td>GY0025#</td><td></td></tr><tr><td>Steriler Spritzenvorsatzfilter (0,22 Mikro; m)</td><td>Millipore</td><td>SLGV033RS#</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgisches Skalpell</td><td>ShangHai medizinische Instrumente Co.,Ltd.China</td><td>22#</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgisches Nahtmaterial</td><td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., Ltd</td><td>5-0#</td><td></td></tr><tr><td>Spritze?5mL?</td><td>Shengguang Medical Instrument Co., Ltd.China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0,25%), Phenolrot</td><td>GIBCO</td><td>25200056#</td><td></td></tr><tr><td>75% Medizinischer Alkohol</td><td>Guilin LiFeng Medical Supplies Co., Ltd.China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>20 x PBS Lösung (pH 7,4, Nukleasefrei)</td><td>Sangon Biotech</td><td>B540627#</td><td></td></tr><tr><td>Medizinisches Desinfektionsmittel 84 flüssig</td><td>Sichuan Provinz Yijieshi Medical Technology Co., Ltd</td><td>450ml/Flasche</td><td></td></tr></tbody></table>

isolation und kultur der primären aorten-endothelzellen von miniaturschweinen

Isolation and Culture of Primary Aortic Endothelial Cells from Miniature Pigs

Xenotransplantation ist ein vielversprechender Weg, um den Mangel an menschlichen Organen für Patienten mit Organversagen im Endstadium zu beheben, und das Schwein gilt als geeignete Organquelle. Immunabstoßung und Gerinnung sind zwei große Hürden für den Erfolg der Xenotransplantation. Vaskuläre Endothelzell (EC) Verletzungen und Dysfunktion sind wichtig für die Entwicklung der Entzündung und Gerinnungsreaktionen bei Xenotransplantation. Daher ist die Isolierung von Porenaorten-Endothelzellen (pAECs) notwendig, um die Immunabstoßung und Gerinnungsreaktionen zu untersuchen. Hier haben wir einen einfachen enzymatischen Ansatz für die Isolierung, Charakterisierung und Erweiterung hochgereinigter pAECs von Miniaturschweinen entwickelt. Zuerst wurde das Miniaturschwein mit Ketamin beästheisiert, und eine Länge von Aorta wurde ausgeschnitten. Zweitens wurde die endotheliale Oberfläche der Aorta 15 min der Kollagenase IV-Verdauungslösung ausgesetzt. Drittens wurde die endotheliale Oberfläche der Aorta in nur einer Richtung mit einem Zellschaber (<10-mal) abgekratzt und während des Prozesses der Kratzen. Schließlich wurden die isolierten pAECs von Tag 3 und nach Durchgang 1 und Durchgang 2 durch Durchflusszytometrie mit einem Anti-CD31-Antikörper identifiziert. Die Prozentsätze der CD31-positiven Zellen betrugen 97,4 % bei 1,2 %, 94,4 % bei 1,1 % bzw. 92,4 % bei 1,7 % (mittlere SD). Die Konzentration von Kollagenase IV, die Verdauungszeit, die Richtung, die Häufigkeit und Intensität des Abkratzens sind entscheidend für die Verringerung der Fibroblastenkontamination und die Erlangung einer hohen Reinheit und einer großen Anzahl von ECs. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass unsere enzymatische Methode eine hochwirksame Methode zur Isolierung von ECs aus der Miniatur-Schweineaorta ist, und die Zellen können in vitro erweitert werden, um die Immun- und Gerinnungsreaktionen bei der Xenotransplantation zu untersuchen.

Unsere Methode zielt darauf ab, eine effektive Möglichkeit zu bieten, hochgereinigte ECs von den Aortas von Miniaturschweinen zu isolieren. Der Prozess der Aorta-Operation ist in Abbildung 1dargestellt. Der erste Schritt ist, dass die ganze Aorta vom Schwein entfernt wird. Die Verhinderung anderer Zell- oder Bakterienkontaminationen ist sehr wichtig. So verletzen Sie nicht andere Organe oder Gewebe, falls ungezielte Zellen oder Bakterien die Aorta kontaminieren, und waschen Sie die Aorta mit...

Beschrieben wird eine wirksame enzymatische Methode zur Isolierung von primären porcineaortischen Endothelzellen (pAECs) von Miniaturschweinen. Die isolierten primären pAECs können verwendet werden, um die Immun- und Gerinnungsreaktion bei Xenotransplantation zu untersuchen.

Isolation und Kultur der primären Aorten-Endothelzellen von Miniaturschweinen

Xenotransplantation is a promising way to resolve the shortage of human organs for patients with end-stage organ failure, and the pig is considered as a ...

Die Methode ist eine hochwirksame Methode zur Isolierung von Endothelzellen von Miniaturschweinen. Und die Zellen können auch erweitert werden, untersuchen die Immun- und Gerinnungsreaktion bei Xenotransplantation. Der Hauptvorteil der Technik ist, dass es nicht nur einfach, hochwirksam ist, hoch gereinigte Endothelzellen vom Schwein zu isolieren, sondern auch besser, um andere pAECs zu halten, wenn sie durchgehen.Nach der Bestätigung einer mangelnden Reaktion auf Schmerzreflex bei der anästhesierten Schwein, waschen Sie die Schweinebauchwand dreimal mit 75%medizinischem Alkohol, und eine Tinktur Jod. Nach der letzten Wäsche, verwenden Sie ein Skalpell, um einen Bauchschnitt zu machen, um die minderwertige Vena cava zu belichten, und verwenden Sie eine Fünf-Milliliter-Spritze, um 5000 Einheiten Heparin-Natrium in die untere Vena cava zu injizieren. Nach fünf Minuten einen Katheter in die Bauchaorta einlegen und mit einem Skalpell das Zwerchfell einschneiden.Mit Hilfe eines zweiten Ermittlers entfernen Sie den linken Ventrikel und verwenden Sie Knochenzangen, um die Rippen zu verbrauchen, um das Herz und die Lunge zu entblößen. Suchen Sie die Aorta posterior zu Herz und Lunge, und klemmen Sie die Enden. Verwenden Sie die Schere, um die Aorta zu verbrauchen, und waschen Sie sie einmal mit vorgekühlten Waschpuffer.Entfernen Sie überschüssiges Gewebe um die Aorta mit sterilen Zangen und Scheren, und legen Sie das Gefäß in ein 50 Milliliter Zentrifugenrohr mit frischem vorgekühltem Waschpuffer für den Transfer ins Labor. Zur Isolierung der porcine aortenen Endothelzellen die Schweineaorta unter aseptischen Bedingungen in eine 150-Millimeter-Petrischale geben und vorsichtig beide Enden des Gefäßes entfernen. Schneiden Sie zusätzliches überschüssiges Gewebe, wo das Gefäß geklemmt worden war, mit sterilen Zangen und Scheren, und verwenden Sie 20 bis 50 Milliliter frischen Waschpuffer, um die Außen- und Innenseite der Aorta zu spülen.Als nächstes, passieren Sie eine chirurgische Naht durch die Aorta, und lose binden ein Ende des Gefäßes, die Naht innerhalb des Lumens zu halten. Fixieren Sie die Aorta in der Nähe des gebundenen Endes vorsichtig mit Zangen und ziehen Sie dann die chirurgische Naht langsam, um die Aorta umzukehren, bis die endotheliale Oberfläche der Aorta freigelegt wird. Die endotheliale Oberfläche der Aorta dreimal mit 10 Millilitern frischer Waschpuffer pro Wäsche waschen und die Aorta in ein 15 Milliliter Zentrifugenrohr geben.Bedecken Sie die Probe mit 10 Millilitern 37 Grad Celsius erwärmt 0,005%Kollagenase IV Verdauungslösung, und bebrüten das Gewebe bei 37 Grad Celsius für 15 Minuten. Am Ende der Inkubation den gesamten Rohrinhalt in eine 100-Millimeter-Kulturschale übertragen und die Verdauung mit 10 bis 15 Millilitern vorgekühltem Stopppuffer stoppen. Mit einem Zellschaber entfernen Sie vorsichtig die Aorten-Endothelzellen von der Inneren Oberfläche des Gefäßes und waschen Sie das Gefäß dreimal mit fünf Milliliter Waschpuffer pro Wäsche.Nach der letzten Wäsche den Überstand in ein 50-Milliliter-Zenififugenrohr geben und den Boden der Kulturschale zwei Mal mit fünf Millilitern frischer Waschpuffer pro Waschgang waschen und die Wäsche in das 50-Milliliter-Rohr ziehen. Sammeln Sie die Zellen durch Zentrifugation, und entsorgen Sie alle bis auf die letzten 10 Milliliter Überstand. Fügen Sie 20 Milliliter Waschpuffer hinzu, um das Pellet wieder aufzuhängen, wobei Sie darauf achten, Blasen zu vermeiden, und die Zellen mit einer anderen Zentrifugation sammeln.Setzen Sie das Pellet in einem Milliliter Zellkulturmedium zum Zählen wieder auf und verkleben Sie die Zellen mit einer zwischenzehn bis sechs Zellen pro 25 Zentimeter quadratischer Kolbenkonzentration. Dann legen Sie die Zellen im Zellkultur-Inkubator bei 37 Grad Celsius in 5% Kohlendioxid und erfrischen das Medium alle zwei bis drei Tage. Nach der Isolierung werden die Endothelzellen am Tag Null, eins und zwei und nach den Passagen eins und zwei auf Kontamination und deren morphologische Bewertung untersucht.Die zytometrische Analyse durch die Durchflussmenge mit einem Anti-CD31-FITC-Antikörper weist auf eine typischerweise über 97% endotheliale Zellmarker-positive Population am dritten Tag der Kultur hin, die auch nach zwei Passagen bei einer Reinheit von über 90 % gehalten wird. Die endotheliale Oberfläche der Aorta wurde weniger als 10 Mal in nur einer Richtung, mit einem Zellschaber, abgekratzt und während des Abkratzvorgangs nicht verdichtet. Beste Antwort, optimierte Methode der pAECs-Isolierung, können wir gereinigte pAECs verwenden, um einzelne Experimente durchzuführen und die Immunabstoßung und Gerinnungsreaktion bei Xenotransplantation zu untersuchen.

isolation-culture-primary-aortic-endothelial-cells-from-miniature

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Wir stellen eine Methode zur Isolierung und Kultivierung von reinen Populationen von Herzklappen-Endothelzellen (VEC). VEC von beiden Seiten der Höcker oder Prospekt isoliert werden können und unmittelbar nach ist zugrundeliegenden interstitiellen Zellen (VIC) Isolierung einfach.

Isolierung von Valvular Endothelzellen

Ein Verfahren zur Aussaat Titan mit Blut in Kontakt Biomaterialien mit autologen Zellen und Prüfung Biokompatibilität beschrieben. Diese Methode verwendet endothelialen Vorläuferzellen und Titan Rohre, innerhalb von Minuten von chirurgischen Implantation in porcine Hohlvenen ausgesät. Diese Technik ist geeignet für viele andere implantierbare biomedizinische Geräte.

Autologe endotheliale Vorläuferzellen Cell-Sätechnik und Biokompatibilitätstestung Für Herz-Kreislauf-Geräte in Großtiermodell

In diesem Video demonstrieren wir ein Verfahren zur chirurgischen Entfernung der Aorta von Miniaturschweinen. Endothelzellen, die aus diesen isolierten Aorten entnommen werden, können unter In-vitro-Bedingungen weiter kultiviert werden, um die Gerinnung und Immunreaktionen zu untersuchen.

Isolierung der porzinen Aorta: Ein chirurgischer Eingriff zur Entfernung der thorakalen Aorta von Miniaturschweinen für die nachgelagerte Analyse

In diesem Video demonstrieren wir die Isolierung von Endothelzellen aus der Bauchaorta eines Schweinemodells mit Hilfe eines einstufigen Kollagenaseverdaus. Die Endothelzellen können für weitere nachgelagerte Anwendungen kultiviert werden.

Isolierung von porzinen Aortenadothelzellen (pAEC): Eine enzymbasierte Methode zur Isolierung von Endothelzellen aus geernteten Bauchaorten von Schweinen

Die Fähigkeit, Herzklappen-Endothelzellen (VECs) zu isolieren, ist entscheidend für das Verständnis der Mechanismen der Klappenentwicklung, -erhaltung und -erkrankung.  Hier beschreiben wir die Isolierung von VECs aus embryonalen und adulten Tie2-GFP-Mäusen mittels FACS, die Studien zur Bestimmung des Beitrags von VECs zu Entwicklungs- und Krankheitsprozessen ermöglichen wird.

Isolierung von murinen Ventil Endothelzellen

Die vaskulären Endothelzellen spielen eine bedeutende Rolle bei vielen wichtigen Herz-Kreislauf-Erkrankungen. Dieser Artikel beschreibt eine einfache Methode, um Endothelzellen aus der Aorta der Maus zu isolieren und zu erweitern, ohne spezielle Geräte zu verwenden. Unser Protokoll bietet ein wirksames Mittel zur Identifizierung von Mechanismen in der Physiopathologie von Endothelzellen.

Isolation und Primärkultur von Maus Aortic Endothelial Cells

Neuartige Isolierungsmethoden von primären Endothelzellen aus Blutgefäßen werden benötigt. Dieses Protokoll beschreibt eine neue Technik, die die interessierenden Blutgefäße vollständig invertiert und nur die endotheliale Seite der enzymatischen Verdauung aussetzt. Die resultierende reine Endothelzellkultur kann zur Untersuchung von Herz-Kreislauf-Erkrankungen, zur Modellierung von Krankheiten und zur Angiogenese verwendet werden.

Isolierung und Kultur von primären Endothelzellen von Canine Arterien und der

Mehrere Protokolle wurden entwickelt und beschrieben für die Isolierung von verschiedenen Herzzelltypen von einem Rattenherz. Hier wird ein optimiertes Protokoll beschrieben, das die Isolierung von hochwertigen Hauptkardiometertypen (Kardiomyozyten, Endothelzellen und Fibroblasten) aus einer einzigen Präparation ermöglicht, wodurch die experimentellen Kosten reduziert werden.

Gleichzeitige Isolierung von hochwertigen Kardiomyozyten, Endothelzellen und Fibroblasten aus einem erwachsenen Rattenherz

Wir präsentieren ein in Vitro -Modell ermöglicht die Untersuchung und Analyse der Koagulation im ganzen, nicht-Anticoagulated Blut. Antikoagulation im System hängt die natürliche antikoagulierende Wirkung des gesunden Endothelzellen und endothelialer Zellaktivierung führt zu gerinnen.

Bewertung der gerinnungshemmenden und entzündungshemmenden Eigenschaften von Endothelzellen mit 3D Zellkultur und nicht-Antikoagulanzien Vollblut

Dieses Protokoll beschreibt die Entnahme menschlicher Aortenklappen, die während chirurgischer Aortenklappenersatzverfahren oder aus Leichengewebe extrahiert werden, und die anschließende Isolierung, Expansion und Charakterisierung patientenspezifischer primärer Klappenendothel- und interstitieller Zellen. Enthalten sind wichtige Details zu den Prozessen, die erforderlich sind, um die Zelllebensfähigkeit und Phänotypspezifität sicherzustellen.

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In diesem Artikel wurden primäre Lungenendothelzellen aus neonatalen Mäusen isoliert und kultiviert.

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