Name: Murine Modell der metastasierenden Lebertumoren in der Einstellung der Ischämie Reperfusionsverletzung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 s
Description: Lernen Sie ein murines Modell zur Untersuchung von Lebermetastasen bei kolorektalem Karzinom unter Ischämie-Reperfusionsbedingungen. Diese Methode ermöglicht die Analyse chirurgischer Einflüsse auf Tumorwachstum.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Die Autoren danken Sara Minemyer und Alexander Comerci für die sprachliche Überarbeitung.

Alle Tierprotokolle werden vom Institutional Animal Care and Use Committee genehmigt und den Leitlinien der National Institutes of Health (NIH) nachgehalten. Instrumente, die für jeden chirurgischen Eingriff verwendet wurden, wurden gründlich sterilisiert.
1. Erstvorbereitung
<ol><li>Vor der Injektion von Krebszellen in die Mausmilen, Autoklav und sterilisieren alle Instrumente während des Verfahrens verwendet werden.</li>
	<li>Sterilisieren und/oder Autoklaven eines Heizkissens, chirurgischer Handschuhe, Gaze, Scherenpaaren, kleinen Klemmen, Gefäßdilatators, chirurgischen Zangen und einem Nadelhalter.</li>
	<li>Bereiten Sie postoperatives Analgetikum (0,1 mg/kg Buprenorphin) vor, das nach einer Splenektomie verabreicht wird und alle 12 Stunden für 2 Tage.</li>
</ol>2. Zellkultur
<ol><li>Stellen Sie sicher, dass Krebszellen mit einem Mykoplasmen-ELISA-Kit frei von Mykoplasmen-Kontamination sind.</li>
	<li>Bereiten Sie eine 500 ml Lösung des Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) Kultivierungsmediums bei 4 °C für die Kultur der murinen Darmkrebszellen (MC38) vor. Die Kultivierungsmedien sollten durch 10% hitzeinaktiviertes fetales Rinderserum (FBS), 100 U/ml Penicillin, 100 g/ml Streptomycin, 15 mM HEPES und 200 mM L-Glutamin ergänzt werden.</li>
	<li>Kulturkrebszellen in einem DNAse- und RNAse-freien Kolben (75 cm2). Inkubieren Sie die Zellkultur in einem zell/Gewebe befeuchteten Inkubator mit 5%CO2. Halten Sie die Temperatur bei 37 °C.</li>
	<li>Sobald die proliferierenden Zellen 90–100% Koninfluenza erreichen, die alten Medien ansaugen, Zellen mit 1x phosphatgepufferter Saline (PBS) waschen und sie dann mit 1x Trypsin (0,25%) behandeln , um Zellen aus dem Kolben zu lösen.</li>
	<li>Sammeln Sie Zellen in einem 15 ml konischen Rohr und Zentrifuge für 5 min bei 700 x g.</li>
	<li>Die Medien ansaugen und zweimal durch wiederholte Zentrifugation mit 1x PBS waschen.</li>
	<li>Fahren Sie fort, die Zelllebensfähigkeit zu bestätigen, indem Sie Zellen mit Trypanblaufleck (0,4 %) färben.</li>
	<li>ResuspendZellen auf eine Konzentration von 1 x 106 Zellen / 100 l in 1x PBS. Pipettenzellen gründlich, um Klumpen zu vermeiden. Halten Sie Krebszellen vor der Injektion auf Eis.</li>
</ol>3. Injektion von Tumorzellen
<ol><li>Anästhetisieren Sie 8–12 Wochen alte männliche (C57BL6) Mäuse durch Verabreichung von Ketamin (150 mg/kg) und Xylazin (12 mg/kg) intraperitoneal mit einer 1 ml 25 G (0,5 mm x 16 mm) Nadel.</li>
	<li>Rasieren Sie die Bauchhaut der Mäuse mit Clippers, um postoperative Infektionen zu vermeiden.</li>
	<li>Platzieren Sie Mäuse auf dem magnetischen Fixator-Rückzugssystem. Bestätigen Sie, dass die Mäuse vollständig unter dem Effekt der Anästhesie stehen, indem Sie eine Zeh oder den Schwanz kneifen.</li>
	<li>Fügen Sie Saline-Tropfen in die Augen, um Trockenheit während des Eingriffs zu vermeiden.</li>
	<li>Peeling Povidon-Jod-Lösung (7,5%) an die rasierte Bauchwand, um die Haut vor einem chirurgischen Schnitt zu desinfizieren.</li>
	<li>Heben Sie zunächst die Haut mit der Zahnzange an und machen Sie mit Hilfe einer chirurgischen Schere einen Mittellinienschnitt. Dann heben Sie den Bauchmuskel und Peritoneum, um einen Mittellinienschnitt von ca. 3 cm Länge zu erstellen (mittelabdominaler bis xiphoider Prozess, um den Bauchinhalt freizulegen. Seien Sie vorsichtig, den Einschnitt nicht über den xiphoiden Prozess hinaus auszudehnen, um umfangreiche Blutungen zu vermeiden.</li>
	<li>Platzieren Sie das Hämostat auf beiden Seiten des Einschnitts und unter den xiphoiden Prozess. Erweitern Sie den Bauch, indem Sie den Schwanz nach unten ziehen und ihn kleben. Verwenden Sie den 6-Zoll sterilen Baumwollspitzenapplikator, um die Milz vom Bauchspeicheldrüsenfettgewebe zu trennen und auszusetzen.</li>
	<li>Vor der Injektion in die Milz, Wirbel die Krebszellen, um alle Zellklumpen zu vermeiden.</li>
	<li>Verwenden Sie eine 0,5 ml 28 G (0,36 mm x 13 mm) Insulinspritze zur Injektion. Vermeiden Sie Luftblasen.</li>
	<li>Injizieren Sie langsam und vorsichtig 100 l Zellen in die Spitze der Milz. Legen Sie eine Baumwollspitze und fügen Sie sanften Druck hinzu, um einen Rückfluss in den Bauchbereich zu vermeiden. Eine erfolgreiche Injektion kann beobachtet werden, indem die Veränderung der Farbe der Leber während der Injektion identifiziert wird.</li>
	<li>Befeuchten Sie eine sterile Gaze mit 1x PBS und legen Sie sie über den sezierten Bereich.</li>
	<li>Übertragen Sie die Mäuse für 15 Min. auf ein Heizkissen, damit Krebszellen innerhalb des Systems zirkulieren können.</li>
	<li>Um mit chirurgischen Ischämie und Reperfusionsverletzungen fortzufahren, folgen Sie den Schritten 5.3-5.10. HINWEIS: Bei diesem Verfahren wird die Wirkung der I/R-induzierten Etablierung von metastasierenden Brennpunkten untersucht.</li>
</ol>4. Splenektomie
<ol><li>Um eine Splenektomie durchzuführen, verwenden Sie ein handgehaltenes Kauteriegerät. Heben Sie die Milz vorsichtig mit glatten Zangen an und kauterisieren Sie die Milzblutgefäße, um übermäßige Blutungen zu vermeiden. Entfernen Sie die Milz, indem Sie die Gefäße am kauterisierten Abschnitt transsektieren.</li>
	<li>Unmittelbar nach dem Eingriff schließen Sie den Schnitt in einem Doppelschichtmuster, indem Sie zuerst die Muskelschicht und dann die Haut nähen. Verwenden Sie 4-0 Polypropylen Nähte für die Bauchwand und die Haut.</li>
	<li>Bevor Sie das Verfahren an einem anderen Tier wiederholen, desinfizieren Sie alle Instrumente, indem Sie sie entweder mit 70% Isopropanol besprühen oder in ein Perlenbad einsetzen.</li>
	<li>Legen Sie Mäuse wieder in originale Käfige und suchen Sie nach Anzeichen von Not und postoperativen Schmerzen.</li>
	<li>Injizieren Sie postoperatives Analgetikum (Buprenorphin 0,1 mg/kg) alle 12 Stunden für 2 Tage, um postoperative Schmerzen zu vermeiden.</li>
</ol>5. Ischmia-Reperfusionsverletzung
<ol><li>Nach 5 Tagen nach der ersten Laparotomie Mäuse durch Verabreichung von Ketamin (150 mg/kg) und Xylazin (12 mg/kg) intraperitoneal mit einer 1 ml 25 G (0,5 mm x 16 mm) Nadel ansiedeln. Befolgen Sie die Schritte 3.3–3.4.</li>
	<li>Peeling Povidon-Jod-Lösung (7,5%) auf dem rasierten Bauch der Maus, um die Haut zu desinfizieren und eine Mittellinienlaparotomie durchzuführen, wie oben in Schritt 3.6 beschrieben.</li>
	<li>Bewegen Sie den Darm mit zwei befeuchteten Baumwollspitzen vorsichtig aus der Höhle, um die zugehörigen Strukturen, einschließlich der Portalvene, freizulegen. Sezieren Sie die Leber hilum frei von dem umgebenden Gewebe.</li>
	<li>Heben Sie den Median und linke seitliche Lappen gegen das Zwerchfell. Trennen Sie den quadratischen Lappen vom linken Seitenlappen, indem Sie den Leberhilum mit der Federschere mit einem Operationsmikroskop sezieren, um eine klare Sicht auf die Portal-Triadenstruktur zu ermöglichen.</li>
	<li>Legen Sie einen kleinen feuchten Wattestäbchen zwischen den Medianlappen und den rechten Seitenlappen, um ausreichend Platz zum Spannen zu schaffen. Mit dem Gefäßdilatator Zange, vorsichtig übergeben Sie die 10 cm Gewinde (4,0 Polypropylen Naht), um die Portal Triade zu heben. Alle Strukturen in der Portaltriade (Hepatische Arterie, Portalvene und Gallengang) nach links und mediane Leberlappen verschließen, indem Sie eine mikrovaskuläre Klemme mit einem mikroserrefine Klemmenapplikator mit Schloss platzieren.</li>
	<li>Wenn die Lappen keine signifikante Blanchierung aufweisen, justieren Sie die Klemme durch Entfernen und erneutes Auftragen. HINWEIS: Wenn das sofortige Blanchieren der Leber auch nach dem Nachjustieren der Klemme nicht auftritt, sollten Sie sorgfältig überlegen, ob sie mit dem I/R fortfahren möchten oder nicht.</li>
	<li>Entfernen Sie den kleinen Wattestäbchen zwischen dem Median und rechten seitlichen Lappen. Ersetzen Sie den Darm vorsichtig in die Bauchhöhle. Bedecken Sie die Bauchwand mit einer feuchten Gaze (getränkt mit 1x PBS) und decken Sie sie mit einer Plastikfolie, um den Verdunstungsverlust zu minimieren.</li>
	<li>Legen Sie die Maus auf das Heizkissen und wenden Sie die Klemme für einen Zeitraum von 60 min an.</li>
	<li>Während des ischämischen Intervalls suchen Sie nach Beweisen für Ischämieverletzungen, indem Sie das blasse Blanchieren der rechten medialen und linken medialen und seitlichen Lappen visualisieren.</li>
	<li>Initiieren Sie die Reperfusion, indem Sie die Klemmen nach der 60-min-Periode entfernen. HINWEIS: Der Nachweis einer Reperfusion kann durch eine sofortige Farbänderung des Medians und der linken Seitenlappen beobachtet werden.</li>
	<li>Unmittelbar nach der Reperfusion den Schnitt mit einem doppellagigen Nahtmuster schließen, indem Sie zuerst die Muskelschicht und dann die Haut nähen. Verwenden Sie die 4-0 Polypropylen-Nähte mit Hilfe eines Nadelhalters, um die Bauchwand und die Haut zu schließen.</li>
	<li>Bevor Sie das Verfahren an einem anderen Tier wiederholen, desinfizieren Sie alle Instrumente, indem Sie sie entweder mit 70% Isopropanol besprühen oder in ein beheiztes Perlenbad einsetzen.</li>
	<li>Legen Sie Mäuse wieder in originale Käfige und suchen Sie nach Anzeichen von Not und postoperativen Schmerzen.</li>
	<li>Injizieren Sie postoperatives Analgetikum (0,1 mg/kg Buprenorphin) alle 12 stunden für 2 Tage, um postoperative Schmerzen zu vermeiden.</li>
	<li>Für Leber-I/R-Scheinmäuse, führen Laparotomie, Hilum-Sektion und Bauchnähte. HINWEIS: Die Rolle des chirurgischen Stresses, der die Etablierung von Lebermetastasen beeinflusst, kann durch zwei verschiedene experimentelle Designs untersucht werden. Das obige Protokoll (Modell-1) wird verwendet, um mikrometastasierende Lebererkrankungen zu etablieren und die Wirkung von Leber-I/R auf ihr Wachstum zu untersuchen (Abbildung 1A). Alternativ können Leber-I/R- und Tumorinjektionen gleichzeitig durchgeführt werden (Modell-2), um die Wirkung von I/R-Verletzungen bei der Etablierung neuer metastasierender Brennpunkte zu untersuchen (Abbildung 1B). Um dies zu tun, injizieren Krebszellen in die Milz wie oben beschrieben und lassen Sie sie für 15 min zirkulieren. Führen Sie Leber I/R oder Scheinchirurgie nach der Zirkulierungsphase für 60 min. Führen Sie seitliche Splenektomie 60 min später, und schließen Sie dann die Laparotomie Inzision.</li>
</ol>6. Bewertung von operierten Mäusen
<ol><li>Während des chirurgischen Eingriffs stellen Sie sicher, dass die Mäuse unter dem Einfluss der Anästhesie des Stadiums III stehen, indem Sie einen palpebralen und hornhautartigen Reflextest durchführen. Zusätzliche Anästhesiedosis muss auf die Anzeichen von Reflexen gegeben werden.</li>
	<li>Geben Sie postoperatives Analgetikum (Buprenorphin 0,1mg/kg) direkt nach der Operation und alle 12Stunden für 2 Tage an, um postoperative Schmerzen zu vermeiden.</li>
	<li>Erlauben Sie Mäusen 30–60 min Erholungszeit von der Anästhesie. Überwachen Sie ständig Mäuse und lassen Sie sie nicht unbeaufsichtigt, bis sie vollständig erholt sind.</li>
	<li>Achten Sie auf Notzeichen wie zurückgebeugte, geschlossene Augen, langsame Bewegung und Versagen zu pflegen. Behandeln Sie entsprechend, bis Mäuse zu ihrer normalen Aktivität zurückkehren.</li>
	<li>Supplimentale Pflege einschließlich Flüssigkeiten, Hitze, Yohimbin-Umkehrmittel für Xylazin, weiches Papier Handtuch Bettwäsche (zur Vermeidung von Aspiration) sollte nach der Operation zur Verbesserung der Erholungsphase zur Verfügung gestellt werden.</li>
</ol>7. Beurteilung der Leberischämie-Reperfusionsverletzung
<ol><li>Stellen Sie unmittelbar nach dem Auftragen der Klemme sicher, dass die blasse Blanchierung der medianen und linken seitenlappen im Vergleich zu den Caudate- und Quadratlappen auftritt.</li>
	<li>Beurteilung der Leberischämie-Verletzung durch Messung der Serum-Alanin-Transaminase (sALT), der Serum-Aspartat-Transaminase (sAST) und der Serumlactat-Dehydrogenase (sLDH).- Das Blut kann aus der Gesichtsvene entnommen werden, um Serum 3-6 h nach Beginn der Reperfusion zu extrahieren. Führen Sie Leberhistologie durch, um den prozentualen Tumorbereich innerhalb des ischämischen Lappens zu analysieren.</li>
</ol>

<ol><li>Riihimäki, M., Hemminki, A., Sundquist, J., Hemminki, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+of+metastasis+in+colon+and+rectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Patterns of metastasis in colon and rectal cancer.</a> Scientific Reports. 6 (1), 29765(2016).</li>
<li>Oki, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+treatment+for+colorectal+liver+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+gastroenterological+surgery%22%5BJournal%5D)">Recent advances in treatment for colorectal liver metastasis.</a> Annals of gastroenterological surgery. 2 (3), 167-175 (2018).</li>
<li>Wolpin, B. M., Mayer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+treatment+of+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Systemic treatment of colorectal cancer.</a> Gastroenterology. 134 (5), 1296-1310 (2008).</li>
<li>van Golen, R. F., Reiniers, M. J., Olthof, P. B., van Gulik, T. M., Heger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sterile+inflammation+in+hepatic+ischemia%2Freperfusion+injury%3A+present+concepts+and+potential+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Sterile inflammation in hepatic ischemia/reperfusion injury: present concepts and potential therapeutics.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 28 (3), 394-400 (2013).</li>
<li>Demicheli, R., Retsky, M. W., Hrushesky, W. J. M., Baum, M., Gukas, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+surgery+on+tumor+growth%3A+a+century+of+investigations%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">The effects of surgery on tumor growth: a century of investigations.</a> Annals of Oncology. 19 (11), 1821-1828 (2008).</li>
<li>Tohme, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+Extracellular+Traps+Promote+the+Development+and+Progression+of+Liver+Metastases+after+Surgical+Stress%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Neutrophil Extracellular Traps Promote the Development and Progression of Liver Metastases after Surgical Stress.</a> Cancer Research. 76 (6), 1367-1380 (2016).</li>
<li>Tseng, W., Leong, X., Engleman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+mouse+model+of+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Orthotopic mouse model of colorectal cancer.</a> Journal of Visualized Experiments. (10), 484(2007).</li>
<li>Elkin, M., Vlodavsky, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tail+vein+assay+of+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Tail vein assay of cancer metastasis.</a> Current Protocols in Cell Biology. 19 (19.2), (2001).</li>
<li>Thalheimer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intraportal+injection+model%3A+A+practical+animal+model+for+hepatic+metastases+and+tumor+cell+dissemination+in+human+colon+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">The intraportal injection model: A practical animal model for hepatic metastases and tumor cell dissemination in human colon cancer.</a> BMC Cancer. 9 (1), 29(2009).</li>
<li>Frampas, E., Maurel, C., Thedrez, P., Le Saëc, P. R. emaud-, Faivre-Chauvet, A., Barbet, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intraportal+injection+model+for+liver+metastasis%3A+Advantages+of+associated+bioluminescence+to+assess+tumor+growth+and+influences+on+tumor+uptake+of+radiolabeled+anti-carcinoembryonic+antigen+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+Communications%22%5BJournal%5D)">The intraportal injection model for liver metastasis: Advantages of associated bioluminescence to assess tumor growth and influences on tumor uptake of radiolabeled anti-carcinoembryonic antigen antibody.</a> Nuclear Medicine Communications. 32 (2), 147-154 (2011).</li>
<li>Goddard, E. T., Fischer, J., Schedin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Portal+Vein+Injection+Model+to+Study+Liver+Metastasis+of+Breast+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer.</a> Journal of Visualized Experiments. (118), (2016).</li>
<li>Limani, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+portal+vein+injection+for+the+design+of+syngeneic+models+of+liver+malignancy%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Selective portal vein injection for the design of syngeneic models of liver malignancy.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 310 (9), G682-G688 (2016).</li>
</ol>

Die Autoren geben keine Interessenkonflikte offen, die mit diesem Werk zu tun haben.

Das in diesem Manuskript beschriebene Tiermodell basiert auf zwei Hauptansätzen. Die erste besteht darin, die Fähigkeit von Krebszellen zu erkennen, sich in den Leberlappen zu lokalisieren und zu vermehren. Die zweite besteht darin, die Wirkung einer Leber-Ischämie-Reperfusionsverletzung zu untersuchen, die das Tumorwachstum und metastases beeinflusst. Dieses Modell ermöglicht die relevante Untersuchung von Lebermetastasen in Ermangelung von sekundären Metastasen in einer immunkompetenten Maus. Das Modell ist nützlich, u...

Die Leber ist eine der häufigsten Stellen für die Entwicklung von metastasierenden Erkrankungen1. Die Sterblichkeit ist fast ausnahmslos auf Komplikationen im Zusammenhang mit Tumorwachstum in der Leber zurückzuführen. Bei Patienten mit metastasierenden soliden Tumoren in der Leber bleibt die Chirurgie ein entscheidender Eingriff zur Krankheitskontrolle und ein möglicher heilativer Ansatz. Jedoch, die überwiegende Mehrheit der Patienten schließlich mit wiederkehrenden Erkrankungen, vor allem in der Leber2,3. Während der Leberoperation ist intraoperative Blutung häufig, oft erfordern Bluttransfusion und verschiedene technische Ansätze zur Kontrolle von Blutungen, einschließlich vaskulärer Spannmethoden. Solche Maßnahmen verursachen jedoch hepatische Ischämie/Reperfusion (I/R) im Lebergewebe. Die nebenwirkungen von I/R auf die hepatozelluläre Funktion sind gut dokumentiert. Die Leber I/R Beleidigung entzündet entzündliche Kaskaden während der Wiederherstellung des Blutflusses über entzündliche Bahnen4. Nicht nur Leber-I/R-Verletzung trägt zum Leberversagen bei, aber aktuelle Beweise zeigen auch, dass I/R-Verletzung die Adhäsion der Tumorzellen stimuliert und die Inzidenz der Metastasenbildung und das Wachstum der bestehenden mikrometastasieren Erkrankung fördert5. Wir haben bereits berichtet, dass chirurgischer Stress die Aktivierung von Immunzellen induziert, was nicht nur beim Wachstum des Primärtumors hilft, sondern auch Metastasen erleichtert, indem Krebszellen im Kreislauf erfasst werden6.
Hier beschreiben wir detailliert eine Technik, um ein Lebermetastasen-Maus-Tumor-Modell zu etablieren. In diesem Modell präsentieren wir auch eine Methode, um leberische Ischämie-Reperfusionsverletzungen zu induzieren, die als Ersatz für den chirurgischen Stress wirkt, der klinisch während Hepatektomien vorhanden ist. Die kombinierten Methoden der Krebsinjektion und Leber-I/R können die Entwicklung von CRLM bei Patienten, die sich einer primären Tumorresektion unterzogen haben, erfolgreich interpretieren.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium</td><td>Lonza</td><td>12-614F</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>Lonza</td><td>900-108</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Gibco</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>Penicilin</td><td>Fisher scientific</td><td>15-140-122</td><td></td></tr><tr><td>Stretomysin</td><td>Fisher scientific</td><td>15-140-122</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td>SH3023701</tr><tr><td>Trypsin Hyclone</td><td></td><td>sh30042.02</td><td></td></tr><tr><td>Zellkulturflasche 75cm</td><td>5 Zellen Star</td><td>658170</td><td></td></tr><tr><td>15ml PP Konische Röhrchen</td><td>BioExcell</td><td>41021037</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue Stain</td><td>Giibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>Gaze</td><td>Fisherbrand</td><td>1376152</td><td></td></tr><tr><td>Cautry</td><td>Bovie</td><td>AA01</td><td></td></tr><tr><td>Mikrogefäßklemme</td><td>Finescience tools</td><td>18055-03</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Serrefine Klemmapplikator mit Schloss</td><td>Fine science toosl</td><td>FST-18056-14</td><td></td></tr><tr><td>Federschere</td><td>Fine science toosl</td><td>FST-15021-15</td><td></td></tr><tr><td>Gefäßdilatator</td><td>Fine science</td><td>toosl FST-00276-13</td><td></td></tr><tr><td>Magnetischer Fixateur Retraktionssystem</td><td>Fein science toosl</td><td>FST-18200020</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Adson Pinzette</td><td>Fine science toosl</td><td>FST-11019-12</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Adson Pinzette</td><td>Fine science toosl</td><td>FST-11018-12</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Polypropylen Naht</td><td>Ethicon</td><td>K881H</td><td></td></tr><tr><td>Nadelhalter</td><td>Harvard Apparatus</td><td>72-8826</td><td></td></tr><tr><td>Heizkissen</td><td>Fisher scientific</td><td></td><td></td>1443915</tr><tr><td>Clipper</td><td>Oster</td><td>559A</td><td></td></tr><tr><td>Povidon-Jod-Lösung</td><td>Medline</td><td>MDS093945</td><td></td></tr><tr><td>Spritze 1ml 25G</td><td>BD Sicherheit Glide</td><td>305903</td><td></td></tr><tr><td>Insulinspritze 0,5 ml</td><td>BD Insulinspritzen</td><td>32946</td><td></td></tr><tr><td>Applikator aus Baumwolle mit Spitze</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-101</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgisch Mikroskop</td><td>Leica</td><td>LR92240</td><td></td></tr><tr><td>Mycoplasma Elisa Kit</td><td>Roche</td><td>11663925910</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Putney</td><td>#056344</td><td></td></tr><tr><td>Xylazin</td><td>NADA</td><td>#139-236</td><td></td></tr><tr><td>ALT Streifen</td><td>Heska</td><td>15809554</td><td></td></tr><tr><td>AST Streifen</td><td>Heska</td><td>15809542</td><td></td></tr><tr><td>LDH Streifen</td><td>Heska</td><td>15809607</td><td></td></tr></tbody></table>

murine modell der metastasierenden lebertumoren in der einstellung der ischämie reperfusionsverletzung

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

Leberischämie und Reperfusion (I/R) Verletzung, eine häufige klinische Herausforderung, bleibt ein unvermeidlicher pathophysiologischer Prozess, der nachweislich mehrere Gewebe- und Organschäden induziert. Trotz der jüngsten Fortschritte und therapeutischen Ansätze ist die allgemeine Morbidität unbefriedigend geblieben, insbesondere bei Patienten mit zugrunde liegenden parenchymalen Anomalien. Im Zusammenhang mit aggressivem Krebswachstum und Metastasierung wird vermutet, dass chirurgische I/R der Promotor ist, der das Tumorrezidiv reguliert. Dieser Artikel zielt darauf ab, ein klinisch relevantes murines Modell der Leber-I/R und kolorektalen Lebermetastasen zu beschreiben. Dabei wollen wir anderen Forschern helfen, dieses Modell für ihre routinemäßige Forschungspraxis zu etablieren und zu perfektionieren, um die Auswirkungen von Leber-I/R auf die Förderung von Lebermetastasen besser zu verstehen.

Alle Wildtyp-Mäuse (C57BL6) (n = 20) wurden dem Lebermetastasenmodell mit dem oben beschriebenen Protokoll unterzogen. Alle injizierten Mäuse mit oder ohne Ischämie-Reperfusionsverletzung überlebten bis zum Opferdatum. Das schematische Diagramm Abbildung 1A einer krebsinjizierten Leber veranschaulicht die Klemmung der Portaltriade (Hepatische Arterie, Portalvene und Gallengang), die eine partielle Leberischämische induziert (70%) Beleidigung in Richtung des Medians und der linken Seitenlappe...

Wir beschreiben detailliert ein klinisch relevantes Tumormodell der Darmkrebslebermetastasen (CRLM) und den Einfluss der Leberischämie-Reperfusion (I/R) auf Tumorwachstum und Metastasierung. Dieses Modell kann helfen, die Mechanismen, die der chirurgieinduzierten Förderung des metastasierenden Wachstums der Leber zugrunde liegen, besser zu verstehen.

Murine Modell der metastasierenden Lebertumoren in der Einstellung der Ischämie Reperfusionsverletzung

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

Experimentelle und klinische Beweise zeigen, dass Leberischämie-Reperfusion die Bildung von metastasierenden Brennpunkten durch zirkulierende Krebszellen und das Wachstum von mikrometastasierenden Erkrankungen erhöhen kann. Dieses reproduzierbare Murinmodell ermöglicht die relevante Untersuchung sowohl der Etablierung von Metastasen als auch des Wachstums von bereits existierenden Tumoren in der Leber. Leberoperationen, Blutungen und septischer Schock sind alle mit Leber-Ischämie-Reperfusion verbunden und können das Wachstum von metastasierenden Erkrankungen beeinflussen.Diese Techniken ermöglichen die Untersuchung dieser Phänomene in dem Bemühen, die schädliche Wirkung der Ischämie-Reperfusion auf das Tumorwachstum in einem klinischen Umfeld besser zu diagnostizieren und zu verhindern. Nach der Bestätigung eines Mangels an Reaktion auf Zehenkneifen in einer anästhesierten acht bis 12 Wochen alten männlichen C57 schwarz 6 Maus, desinfizieren Sie die exponierte Bauchwandhaut mit einem Povidon-Jod-Peeling und verwenden Zahnzange, um die Haut zu heben. Mit einem chirurgischen Skalpell, machen Sie einen Mittellinienschnitt in der Haut und heben Sie den Bauchmuskel und Peritoneum, um die Schaffung eines drei Zentimeter großen Mittellinienschnitts zu erleichtern, um den Bauchinhalt freizulegen.Nach der Platzierung eines Hämostats an beiden Seiten des Einschnitts und unter dem xiphoiden Prozess ziehen und banden Sie den Schwanz nach unten, um den Bauch zu verlängern und verwenden Sie einen sechs Zoll sterilen Baumwollspitzenapplikator, um die Milz vom Bauchspeicheldrüsenfettgewebe zu trennen und auszusetzen. Als nächstes wirbeln Sie die Krebszellsuspension von Interesse, um alle Zellklumpen zu dissoziieren und laden Sie die Zellen in eine 0,5-Milliliter-Insulinspritze mit einer 28-Spur-Nadel ausgestattet. Injizieren Sie langsam und vorsichtig 100 Mikroliter Zellen in die Spitze der Milz, indem Sie eine Baumwollspitze neben der Seite der Nadelpunktion platzieren, um mögliche Tumoraustritte in die Peritonealhöhle zu absorbieren und gleichzeitig sanften Druck hinzuzufügen, um die Milz während der Injektion zu stabilisieren.Eine erfolgreiche Injektion wird durch eine Änderung der Farbe der Leber offensichtlich sein. Wenn alle Zellen geliefert sind, legen Sie ein Stück PBS-getränkte sterile Gaze über den sezierten Bereich und legen Sie die Maus für 15 Minuten auf ein Heizkissen, damit die Krebszellen innerhalb des Systems zirkulieren können. Um eine Ischämie- und Reperfusionsverletzung auszulösen, verwenden Sie zwei befeuchtete Baumwollspitzen, um den Darm sanft aus der Höhle zu bewegen, um die Portalvene freizulegen und die Maus unter ein sezierendes Mikroskop zu stellen.Heben Sie den Median und linke seitliche Leberlappen gegen das Zwerchfell. Legen Sie einen kleinen feuchten Wattestäbchen zwischen den Medianlappen und den rechten Seitenlappen, um genügend Platz zum Spannen zu schaffen, und passieren Sie vorsichtig einen Gefäßdilatator, der hinter der Portaltriade drückt, und verwenden Sie mit dem Gefäßdilatator die Zange, indem Sie eine 10-Zentimeter-Stück 4-0-Polypropylen-Nähte verwenden, um hinter der Portaltriade vorbeizugehen und sie anzuheben. Verwenden Sie einen mikroserfeinen Klemmenapplikator mit einem Schloss, um eine mikrovaskuläre Klemme auf die linke seite zu legen, und mediane Leberlappen, um alle Strukturen in der Portaltriade zu verschließen.Beim Blanchieren entfernen Sie die 4-0 Polypropylen-Nähte und den kleinen Wattestäbchen und geben Sie den Darm vorsichtig in die Bauchhöhle zurück. Bedecken Sie die Bauchwand mit einem neuen Stück PBS-getränkter Gaze und bedecken Sie die Gaze mit Plastikfolie, um den Verdunstungsverlust zu minimieren. Legen Sie die Maus dann 60 Minuten lang wieder auf das Heizkissen.Visualisieren Sie während des ischämischen Intervalls das blasse Blanchieren des rechten medialen, linken Medial- und Seitenlappens, um Beweise für die Ischämieverletzung zu bestätigen. Entfernen Sie am Ende der Verletzungszeit die Klemme. Um eine Splenektomie durchzuführen, heben Sie vorsichtig die Milz mit glatten Zangen und verwenden Sie ein Hand-Kautery-Gerät, um die milden Blutgefäße zu kauterisieren, um übermäßige Blutungen zu vermeiden.Transsektieren Sie die Gefäße am kauterisierten Abschnitt, um die Milz zu entfernen und verwenden Sie sofort 4-0 Polypropylen-Nähte, um die Muskel- und Hautschnitte in einem doppellagigen Nahtmuster zu schließen. Legen Sie die Maus dann wieder in ihren Heimischen Käfig mit Überwachung bis zur vollständigen Genesung. Chirurgischer Stress erhöht die Menge an vorab etablierten Mikrometastasen in der Leber signifikant.Dieser Unterschied wird auch zwei Wochen nach der Ischämie-Reperfusion im Vergleich zu nicht-ischmiareperfused Mäuse beobachtet. Die LeberIschämie-Reperfusion und Tumorzellinjektion kann durch Raumtemperatur und Zelllebensfähigkeit beeinflusst werden, also achten Sie darauf, diese Variablen zu kontrollieren. Diese Technik erleichtert die Untersuchung der Auswirkungen von chirurgischem Stress und Leberschäden auf das Wachstum von metastasierenden Erkrankungen.Dies wird Forschern helfen, das Phänomen des chirurgisch induzierten Tumorwachstums besser zu verstehen.

murine-model-metastatic-liver-tumors-setting-ischemia-reperfusion

Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

Dieser Artikel beschreibt ein Verfahren zur Induktion der orthotopen Biolumineszenz Lebertumore bei Mäusen, und die anschließende Analyse des Tumorwachstums beschränkt sich auf die Leber mit Live-Ganzkörper-Lumineszenz-Imaging.

Murine Bioluminescent Leber Tumor-Modell

Chirurgisches Trauma eine entzündliche Reaktion induziert. Zytokine und endogene Liganden bekannt zu modulieren Myokardinfarkt Größe nach Ischämie und Reperfusion. Wir präsentieren eine modifizierte geschlossener Brust Modell der murinen Ischämie und Reperfusion mit hängenden Gewichte zu Auswirkungen der Thorakotomie zu minimieren.

Ein Maus-Closed-Brust-Modell von Myokardischämie und Reperfusion

Wir beschreiben Modelle der mittelschweren und schweren Ischämie-Reperfusion-induzierte Nierenschädigung, in denen die Mäuse unterziehen einseitige renale Stiel Klemm gefolgt durch gleichzeitige oder verzögerte kontralaterale Nephrektomie sind. Diese Modelle konsequent führen zu Nierenfunktionsstörungen und posttraumatische Fibrose, aber Verletzungsschwere und Überleben sind abhängig von Maus Hintergrund, Alter und chirurgischen Einrichtungen.

Ischämie-Reperfusion-Modell des akuten Nierenschädigung und nach der Verletzung Fibrose bei Mäusen

Wir stellen ein chirurgisches Verfahren, experimentelle Ischämie / Reperfusions (I / R) Schädigung induzieren Myokardinfarkt (MI) in Mausmodellen, die für mehr Klarheit in der Positionierung der Ligation an der linken vorderen absteigenden Arterie (LAD) simulieren können, um die Reproduzierbarkeit zu erhöhen MI Experimente in Mäusen.

Einem Mausmodell der myokardialen Ischämie-Reperfusion Injury durch Ligation des linken vorderen absteigenden Arterie

Eine präklinische, Mausmodell der Lebermetastasen über eine hemispleen Injektionstechnik durchgeführt.

Einer präklinischen Mausmodell der Lebermetastasen

Das hier beschriebene Mausmodell der renalen Ischämie-Reperfusionsverletzung besteht aus einer rechten Nephrektomie, die Kontrollgewebe bereitstellt, und einer Klemmung des linken Nierenstiels, um eine Ischämie zu induzieren, die zu einem akuten Nierenversagen führt. Dieses Modell verwendet einen Mittellinien-Laparotomie-Ansatz, bei dem alle Schritte über einen Schnitt ausgeführt werden.

Renale Ischämie Reperfusionsschaden: Ein Maus-Modell der Schädigung und Regeneration

Hier beschreiben wir die Einzelheiten des Verfahrens der intestinalen Ischämie-Reperfusion bei Mäusen, die ohne Mortalität in reproduzierbarer Verletzungen führt die Standardisierung dieser Technik auf dem Gebiet zu fördern. Dieses Modell der intestinalen Ischämie-Reperfusions-Verletzung kann die zellulären und molekularen Mechanismen der Schädigung und Regeneration zu studieren verwendet werden.

Murine Modell der intestinalen Ischämie-Reperfusionsschaden

Es wurde ein chirurgisches Verfahren entwickelt, um Brusttumorzellen über eine Pfortaderinjektion in die Mausleber zu bringen. Dieses Modell ermöglicht die Untersuchung der späten Stadien der Lebermetastasierung in einem vollständig immunkompetenten Wirt, einschließlich der Extravasation von Tumorzellen, der Aussaat, des Überlebens und des Metastasierungsauswuchses in der Leber.

Ein Portal Veneninjektion Modell zur Untersuchung der Leber Metastasierung von Brustkrebs

Ein Maus-Modell der zerebralen Ischämie-Reperfusion wird gegründet, um die Pathophysiologie des Schlaganfalls zu untersuchen. Wir nach distal verbinden rechts mittlere zerebrale Arterie und rechts gemeinsame Halsschlagader und Blutfluss nach 10 oder 40 min der Ischämie wiederherstellen.

Zwei-Schiff Okklusion Mausmodell der zerebralen Ischämie-reperfusion

Das Protokoll skizziert eine praktikable, zuverlässige und reproduzierbare Methode des linken pulmonalen hilären Klemmens, die zur Untersuchung von Ischämie-Reperfusionsschäden bei der Lunge in Mausmodellen verwendet werden kann.

Maus-Modell der linken pulmonalen hilaren Klemme der Lungenischämie-Reperfusionsverletzung

Lernen Sie ein murines Modell zur Untersuchung von Lebermetastasen bei kolorektalem Karzinom unter Ischämie-Reperfusionsbedingungen. Diese Methode ermöglicht die Analyse chirurgischer Einflüsse auf Tumorwachstum.

Murine Modell der metastasierenden Lebertumoren in der Einstellung der Ischämie Reperfusionsverletzung

Weitere Videos entdecken