Name: Adult Mouse Digit Amputation and Regeneration: A Simple Model to Investigate Mammalian Blastema Formation and Intramembranous Ossification (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 17 s
Description: Lernen Sie die Amputation der terminalen Phalanx bei erwachsenen Mäusen zur Untersuchung der Blastema-Bildung und intramembranösen Ossifikation. Dieses Protokoll nutzt fluoreszierende Immunhistochemie und Mikro-CT.

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Wir danken Mitgliedern des Muneoka Lab und des Texas Institute for Genomic Medicine (TIGM). Diese Arbeit wurde von der Texas A&M University unterstützt.

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Die Autoren haben nichts zu verraten.

Dieses Protokoll beschreibt ein standardisiertes Verfahren der distalen P3-Amputation von Erwachsenenmäusen, fluoreszierende immunhistochemische Färbung zur Visualisierung und Untersuchung der Blastembildung und intramembranösen Verknöcherung sowie Knochenmorphologie, Volumen und Längenänderungen nach der Amputation zu identifizieren. P3-Amputation ist ein einzigartiges, prozedural einfaches und reproduzierbares Modell zur Analyse einer pro-regenerativen Wundumgebung, die die Blastemabildung auslöst. Darüber hinaus biete...

Säugetiere, einschließlich Menschen und Mäuse, haben die Fähigkeit, die Spitzen ihrer Ziffern nach distaler Amputation der Terminalphalanx (P3)1,2,3zu regenerieren. Bei Mäusen ist die Regenerationsreaktion amputationsniveauabhängig; zunehmend proximale Ziffernamputationen zeigen eine zunehmend abgeschwächte regenerative Reaktion bis zum vollständigen regenerativen Versagen bei Amputationen, die sich überschneiden, und proximal zur P3-Nagelmatrix4,5,6 , 7 , 8. Die P3-Regeneration wird durch die Bildung eines Blastema vermittelt, definiert als eine Population von sich ausbreitenden Zellen, die einer Morphogenese unterzogen werden, um die amputierten Strukturen zu regenerieren9. Die Bildung eines Blastema zur Regeneration der durch Amputation verlorenen Strukturen, ein Prozess, der als epimorphe Regeneration bezeichnet wird, unterscheidet die Multi-Gewebe-Level-P3-Regenerationsreaktion von der traditionellen Gewebereparatur nach Verletzung6, 10. P3 Regeneration ist ein reproduzierbares und verfahrenstechnisch einfaches Modell zur Untersuchung komplexer regenerativer Prozesse einschließlich Wundheilung11,12, Knochenhistolyse11,12, Revaskularisation13, periphere Nervenregeneration14, und blastemale Umwandlung in Knochen über intramembranöse Ossifikation15.
Frühere Studien mit Immunhistochemie haben gezeigt, dass das Blastema heterogen, avaskulär, hypoxisch und hoch proliferativ11,13,15,16ist. Nach distaler P3-Amputation wird das frühe Blastema zunächst mit dem P3-Periost und Endosteum assoziiert und zeichnet sich durch eine robuste Proliferation und aufkeimende Osteogenese neben der Knochenoberfläche15aus. Nach Knochenabbau und Wundverschluss wird das heterogene Blastema durch die Verschmelzung von periostealen und endostealassoziierten Zellen gebildet, gefolgt von der Differenzierung von blastemalen Komponenten einschließlich Knochen durch intramembranöse Verknöcherung 15.
Knochenreparatur als Reaktion auf Verletzungen tritt typischerweise durch endochondrale Verknöcherung auf, d.h. über einen ersten knorpelförmigen Callus, der eine Vorlage für die nachfolgende Knochenbildung bildet17,18. Die intramembranöse Verknöcherung des langen Knochens, d.h. die Knochenbildung ohne knorpelförmiges Zwischenprodukt, wird häufig mit komplexen Ablenkungsvorrichtungen oder chirurgischer Fixierunginduziert 19,20. Das Ziffernregenerationsverhalten ist ein präklinisches Modell, das Vorteile gegenüber herkömmlichen intramembranösen Verknöcherungsmodellen bietet: 1) es erfordert keine externe oder interne Fixierung nach verletzungen, um die intramembranöse Ossifikation zu stimulieren, 2) mit 4 Ziffern von jedem Tier durchgeführt, wodurch Proben bei gleichzeitiger Minimierung des Einsatzes von Tieren maximiert werden, und 3) sequentielle In-vivo-Mikrocomputertomographie-Analysen (CT) können mit Leichtigkeit und Geschwindigkeit durchgeführt werden.
In der vorliegenden Studie zeigen wir die standardisierte P3-Amputationsebene, um eine reproduzierbare und robuste Regenerationsreaktion zu erreichen. Zusätzlich zeigen wir ein optimiertes Fluoreszenz-Immunhistochemieprotokoll mit Paraffinabschnitten zur Visualisierung der Blastemabildung, Revaskularisation im Kontext der Regeneration und blastemalen Umwandlung in Knochen über intramembranöse Ossifikation. Wir zeigen auch die Verwendung von sequenziellem In-vivo-CT, um Veränderungen in der Knochenmorphologie, Volumen und Länge in der gleichen Ziffer im Laufe der Regeneration zu identifizieren. Ziel dieses Protokolls ist es, die Explosion bildung von Säugetieren nach der Amputation zu untersuchen und zwei Techniken, die Fluoreszenzimmunhistochemie und die sequenzielle in vivo-CT, zur Untersuchung der intramembranösen Knochenregeneration zu demonstrieren.

<table><tbody><tr><td>Protein Block Serum Free</td><td>DAKO</td><td>X0909</td><td>Gebrauchsfertiger</td></tr><tr><td>Maus Anti-PCNA Antikörper</td><td>Abcam</td><td>ab29</td><td>1:2000 Verdünnung</td></tr><tr><td>Ratte Anti-CXCR4 Antikörper</td><td>R & D Systems</td><td>MAB21651</td><td>1:500 Verdünnung</td></tr><tr><td>Kaninchen Anti-Human-vWF XIII Antikörper</td><td>DAKO</td><td>A0082</td><td>1:800 Verdünnung</td></tr><tr><td>Kaninchen Anti-Osterix, SP7 Antikörper</td><td>Abcam</td><td>ab22552</td><td>1:400 Verdünnung</td></tr><tr><td>Kaninchen Anti-Runx2 Antikörper</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>HPA022040</td><td>1:250 Verdünnung</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647-konjugiertes Ziegen-Anti-Maus-IgG (H+L)</td><td>Invitrogen</td><td>A21235</td><td>1:500 Verdünnung</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488-konjugiertes Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG (H+L)</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td>1:500 Verdünnung</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568-konjugiertes Ziegen-Anti-Ratten-IgG (H+L)</td><td>Invitrogen</td><td>A11077</td><td>1:500 Verdünnung</td></tr><tr><td>Prolong Gold Antifading-Reagenz</td><td>Invitrogen</td><td>P36930</td><td>Gebrauchsfertiger</td></tr><tr><td>Surgipath Dekalikator 1</td><td>Leica Biosystems</td><td>3800400</td><td>Gebrauchsbereit</td></tr><tr><td>Z-Fix, wässriges gepuffertes Zink-Formalin-Fixiermittel</td><td>Anatech LTD</td><td>174</td><td>Gebrauchsfertig</td></tr><tr><td>CD-1 Weibliche Maus</td><td>Envigo</td><td>ICR(CD-1)</td><td>8-12 Wochen alt</td></tr><tr><td>vivaCT 40</td><td>SCANCO Medical</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

adult mouse digit amputation and regeneration: a simple model to investigate mammalian blastema formation and intramembranous ossification

Adult Mouse Digit Amputation and Regeneration: A Simple Model to Investigate Mammalian Blastema Formation and Intramembranous Ossification

Hier stellen wir ein Protokoll der distalen Terminalphalanx (P3) amputation für Erwachsene vor, ein verfahrenstechnisch einfaches und reproduzierbares Säugetiermodell der epimorphen Regeneration, das die Blastemabildung und die intramembranöse Ossifikation umfasst, die von Fluoreszenz-Immunhistochemie und sequenzielle In-vivo-Mikrocomputertomographie (CT). Die Regeneration der Säugetiere beschränkt sich auf Amputationen, die den distalen Bereich der Terminalphalanx (P3) transsektieren; Ziffern, die auf proximaleren Ebenen amputiert werden, können sich nicht regenerieren und werden fibrotisch geheilt und narbt gebildet. Die Regenerationsreaktion wird durch die Bildung eines proliferativen Blastema summiert, gefolgt von knochenregeneration durch intramembranöse Verknöcherung, um die amputierte Skelettlänge wiederherzustellen. P3-Amputation ist ein präklinisches Modell zur Untersuchung der epimorphen Regeneration bei Säugetieren und ist ein leistungsfähiges Werkzeug für die Entwicklung therapeutischer Strategien, um fibrotische Heilung durch eine erfolgreiche regenerative Reaktion zu ersetzen. Unser Protokoll verwendet Fluoreszenz-Immunhistochemie, um 1) früh- und späte Blastemzellpopulationen zu identifizieren, 2) Revaskularisation im Zusammenhang mit der Regeneration zu untersuchen und 3) die intramembranöse Verknöcherung ohne komplexe Knochen zu untersuchen Stabilisierungsvorrichtungen. Wir zeigen auch die Verwendung von sequenziellem in vivo -CT, um hochauflösende Bilder zu erstellen, um morphologische Veränderungen nach der Amputation zu untersuchen sowie Volumen- und Längenänderungen in derselben Ziffer im Verlauf der Regeneration zu quantifizieren. Wir glauben, dass dieses Protokoll einen enormen Nutzen bietet, um sowohl epimorphe als auch geweberegenerierende Reaktionen bei Säugetieren zu untersuchen.

Adult mouse regenerating P3 digits at 6/7 DPA (Figure 2A-D), 9 DPA (Abbildung 2E-H) und 10 DPA (Abbildung 2I-L) wurden mit Antikörpern gegen Runx2, OSX und PCNA immunstainiert, um intramembranöse Knochen zu visualisieren und immunstainiert mit Antikörpern gegen CXCR4 und vWF, um die Blastemabildung zu visualisieren. Repräsentative 'CT-Renderings von Ziffern, die vor der Amputation u...

Hier stellen wir ein Protokoll der erwachsenen Maus-Terminal-Phalanx-Amputation vor, um die Explosion von Säugetieren und die intramembranöse Ossifikation zu untersuchen, die durch fluoreszierende Immunhistochemie und sequenzielle In-vivo-Mikrocomputertomographie analysiert wird.

Here, we present a protocol of adult mouse distal terminal phalanx (P3) amputation, a procedurally simple and reproducible mammalian model of epimorphic ...

Die P3-Amputation ist ein präklinisches Modell zur Untersuchung der epimorphen Regeneration von Säugetieren und ein leistungsfähiges Werkzeug zur Identifizierung kritischer Zellpopulationen und Mechanismen zur Kontrolle der endogene Regeneration. Das P3-Modell ermöglicht die Identifizierung von frühen und späten blastemalen Zellpopulationen, die Untersuchung der Revaskularisation während der Regeneration und die Untersuchung der intramembranösen Verknöcherung ohne komplexe Anforderungen an Knochenstabilisierungsgeräte. Mit mir werden Osama Qureshi, Alyssa Falck und Katherine Zimmel, Technikerin, und Regina Brunaeur, eine wissenschaftliche Assistenzprofessorin aus unserem Labor, das Verfahren demonstrieren.Nachdem Sie eine fehlende Reaktion auf Zehenkniff in einer acht bis 12 Wochen alten CD-1-Maus bestätigt haben, tragen Sie die Salbe auf die Augen des Tieres auf und legen Sie die Maus unter ein 10-faches Seziermikroskop. Verwenden Sie chirurgisches Povidon-Jod und 70%Ethanol, um die Ziffern jeder Hinterbeine zu sterilisieren und Mikroschere zu verwenden, um Haare von der chirurgischen Stelle weg zu trimmen. Tragen Sie einen Mikroliter topischen Bupivacaine lokal auf, um die chirurgische Stelle zu beäschden, und spielen Sie vorsichtig eine Hinterpfote, um die mediale ZifferOberfläche freizulegen.Halten Sie dann das Skalpell in einem Winkel parallel zum Fettpolster, verwenden Sie eine sterile Zahl 10 Skalpell, um die distale Spitze der Terminalphalanx der Ziffern zwei und vier zu amputieren. Tragen Sie einen zusätzlichen Mikroliter Bupivacaine lokal auf jede amputierte Ziffer auf und geben Sie die Maus in einen sauberen Käfig zurück, damit die Wunden ohne Wundverband und mit Überwachung bis zur vollständigen Resumbenität heilen können. Um eine erfolgreiche P3-Amputationsebene zu gewährleisten, halten Sie das Skalpell während der Amputation parallel zum Fettpolster und führen Sie Mikro-CT-Scans durch, um die korrekte Amputationslänge zu bestätigen.Verwenden Sie am entsprechenden experimentellen Endpunkt ein Skalpell, um die Ziffer in der Mitte des mittleren Phalanxknochens bei etwa dem zweiten ventralen Fettpolstereinzug zu trennen. Übertragen Sie das Gewebe in eine 20-Milliliter-Szintillationsflasche mit 10 Milliliter frisch gepuffertem Zinkformalin fixativ für 24 bis 48 Stunden. Und verwenden Sie ein Mikrotome, um vier bis fünf Mikrometer dicke Abschnitte jeder Ziffer zu erwerben, indem Sie die Scheiben in ein 38 bis 41 Grad Celsius Wasserbad legen, das mit einer histologischen Klebstofflösung ergänzt wird, wie sie erhalten werden.Dann erfassen Sie die Scheiben auf Klebeschlitten und legen Sie die Dias auf einem 37-Grad-Celsius-Diawärmer zum Trocknen. Wenn die Dias deparaffinisiert wurden, tauchen Sie die Proben in ein Färbeglas einer geeigneten Antigen-Retrieval-Lösung ein und erhitzen Sie die Dias 25 Minuten lang auf 95 Grad Celsius, um sicherzustellen, dass das Kochen nicht stattfindet. Lassen Sie das Glas am Ende der Inkubation auf Raumtemperatur kommen und legen Sie die Dias flach in eine ein Zoll tiefe, bedeckte Kunststoff-Diabox mit befeuchteten Tissuepapier an der Basis.Fügen Sie 100 Mikroliter vorgewärmte Proteinase K zu jeder Probe hinzu. Bedecken Sie jede Folie mit einem kleinen Streifen Parafilm, um sicherzustellen, dass die Abschnitte nicht trocken werden. Nach 12 Minuten bei 37 Grad Celsius den Paraffinfilm vorsichtig entfernen und die Dias vorsichtig auf Tissuepapier abtropfen lassen, um eine überschüssige Blockierlösung zu entfernen.Als Nächstes fügen Sie 100 bis 200 Mikroliter der primären Antikörperlösung hinzu, die für jedes Dia von Interesse ist. Bringen Sie die Standorte in die mit Paraffinfolie bedeckte Befeuchtungskammer zurück, um eine nächtliche Inkubation bei vier Grad Celsius zu erhalten. Am nächsten Morgen nach dem Waschen der Dias in TRIS-gepufferter Kochnische plus TWEEN oder TBST beschriften Sie die Dias mit einer geeigneten Sekundärantikörperlösung für eine 45-minütige Inkubation bei lichtgeschützter Raumtemperatur.Am Ende der Inkubation die Dias in TBST waschen und trocknen lassen. Verwenden Sie dann 100 Mikroliter Anti-Fade-Montagemedium, um Die Deckel sorgfältig auf die getrockneten Dias zu legen und die Dias flach bei Raumtemperatur über Nacht vor Licht geschützt zu lagern, damit das Montagemedium trocknen kann. Für die sequenzielle In-vivo-Mikrocomputertomographie oder das Mikro-CT-Outfit wird der Micro-CT-Imager mit Schläuchen, um den Sauerstofffluss in und aus der Mikro-CT-Tierkammer zu ermöglichen, sichergestellt, dass der ausströmende Sauerstoff mit einem Aktivkohlefilter ausgestattet ist, um das Isofluran zu fangen.Stellen Sie die Voxelsize auf 10,5 Mikrometer bei 55 Spitzen-Kilovoltund und 145 Mikroampere mit 1.000 Projektionen pro 180 Grad und kontinuierlicher Rotation mit einer Integrationszeit von 200 Millisekunden ein, was zu maximal 213 Slices pro Scan führt. Wenn der Scanner bereit ist, legen Sie die anästhesierte Maus vorsichtig in die Mikro-CT-Tierkammer mit den hinteren Gliedmaßenziffern, die in flachen, engen, venralen Seiten mit der linken Pfote auf der linken Seite und der rechten Seite auf der rechten Seite der Scanplattform angeordnet sind. Dann chirurgisches Klebeband auftragen, um die Ziffern vorsichtig an Ort und Stelle zu sichern.Tragen Sie die ophthalmologische Salbe auf die Augen des Tieres auf, bevor Sie den Scan einleiten. Nach dem Scannen, kehren Sie das Tier in einen sauberen Käfig mit Überwachung bis zur vollständigen Rekonbergung zurück und lassen Sie bis zu mehreren Stunden für die Mikro-CT-Bildrekonstruktion. Zur Analyse des rekonstruierten 3D-Knochenbildes, mit der Software mit dem micro-CT, konvertieren Sie die Bilddateien in eine Reihe von DICOM-Dateien.Wenn alle Dateien konvertiert wurden, laden Sie die DICOM-Serie in einem einzigen Ordner mit einem Batchdatei-Downloader in einem Webbrowser herunter. Laden Sie das BoneJ-Plug-In in den ImageJ-Plug-In-Ordner. Ziehen Sie den Ordner der DICOM-Dateiserie in die ImageJ-Leiste, um die Dateien zu öffnen.Ein 16-Bit-Bildstapel, der alle Grauwerte anzeigt, wird geöffnet. Um nur Bone anzuzeigen, klicken Sie auf Bildanpassung und Schwellenwert. Schieben Sie den oberen Schwellenbalken nach ganz rechts, und passen Sie den unteren Schwellenwertbalken an, bis nur der Knochen rot hervorgehoben ist.Der untere Schwellenwert wird etwa 10.000 bis 13.000 bei einer maximalen Signalintensität von 32, 767 betragen. Klicken Sie auf Übernehmen, und klicken Sie im neuen Dialogfeld auf Schwarzhintergrund. Klicken Sie als Nächstes auf OK. Es wird ein Acht-Bit-Bild mit Schwarzweißwerten generiert.Mit dem Weiß, das dem Knochen entspricht. Zeichnen Sie ein Rechteck um den P3-Bone, um ihn auszuwählen und den Stapel zu duplizieren. Um ein 3D-Bild zu generieren, klicken Sie auf Plugins und 3D Viewer und verwenden Sie das Freihandauswahl-Tool, um den zu löschenden Knochen einzukreisen.Klicken Sie dann mit der rechten Maustaste, und wählen Sie Auswahl ausfüllen aus, um unnötigen Bone aus dem Bild zuzuschneiden. Um das Knochenvolumen aus dem 3D-Rendering zu quantifizieren, öffnen Sie das BoneJ-Plug-In, und wählen Sie Volume Fraction aus. Ein Ergebnisfenster wird angezeigt und das Knochenvolumen in Millimetern gewürfelt.Um die Knochenlänge aus dem 3D-Rendering zu quantifizieren, verwenden Sie das ImageJ-Multipoint-Werkzeug. Um ein Bild des 3D-Renderings zu erfassen, klicken Sie auf Anzeigen, und erstellen Sie einen Snapshot. Speichern Sie dann das Bild als TIF- oder JPEG-Datei.In diesen Bildern wurden Abschnitte einer erwachsenen Maus regenerierenden P3-Ziffer mit Antikörpern immungefärbt, um die intramembranöse Knochenregeneration und Blastemabildung an Tag sechs bis sieben, neun und zehn nach der Amputation zu visualisieren. Hier werden repräsentative Mikro-CT-Renderings von Ziffern angezeigt, die vor der Amputation gescannt wurden, und zu verschiedenen Zeitpunkten im Laufe der Regeneration mit Landmarken, die zur Identifizierung von Längenmessungen verwendet werden. Das Mausziffernmodell ist ein leistungsfähiges System zur Analyse einer pro-regenerativen Wundumgebung, die Blastemabildung auslöst, wenn sie auf distaler Ebene amputiert wird.Umgekehrt dient die proximale Amputation der Ziffern als Modellsystem zur Untersuchung von regenerativem Versagen sowie als Standort für Teststrategien zur Verbesserung der Regeneration.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Developmental Biology

Entwicklungsbiologie

Tiermodelle werden häufig verwendet, um schwere Knochenschäden in der biomedizinischen Forschung nachzuahmen. Aufgrund ihrer geringen Größe übersteigt die Etablierung stabilisierter Knochenläsionen bei Mäusen die Möglichkeiten der meisten Forschungsgruppen. Darin beschreiben wir eine einfache Methode zur Feststellung und Analyse experimenteller Femurdefekte bei Mäusen.

Eine einfache Kritische große Femoral Defect Modell an der Maus

Wir präsentieren ein Protokoll zur Erfassung der Dynamik der Regeneration von Schwanzflossen von Zebrafischlarven auf einer Ganzgewebeskala mit Hilfe von Hellfeld-basierter Stereomikroskopie. Diese Technik ermöglicht es, die Regenerationsdynamik mit einer Einzelzellauflösung zu erfassen. Diese Methodik kann an jedes Stereomikroskop angepasst werden, das mit einer CCD-Kamera und einer Zeitraffer-Software ausgestattet ist.

Erfassen von Gewebereparatur in Zebrafisch-Larven mit Zeitrafferhellstereomikroskopie

Ein Achilles-Tenotomie- und Verbrennungsverletzungsmodell der heterotopen Ossifikation ermöglicht die zuverlässige Untersuchung der traumainduzierten ektopischen Knochenbildung ohne die Anwendung exogener Faktoren.

Direkter Maus Trauma / Brennen Modell heterotoper Ossifikationen

Obwohl Mausmodelle unschätzbare Werkzeuge für die Knochengewebezüchtung sind, sind Modelle von Defekten langer Knochen spärlich. Dies erforderte die Entwicklung des vorliegenden Protokolls, das eine Verriegelungsplatte mit vier Schrauben und einer speziellen Vorrichtung verwendet, um einen reproduzierbaren, femoralen Defekt kritischer Größe mit geringer Morbidität durchzuführen und zu stabilisieren.

Einrichtung eines segmentalen Femoral Critical-size Defektmodell in Mäusen durch Plattenosteosynthese Stabilisierte

Dieser Artikel beschreibt, wie man eine chirurgische Methode durchführt, um die Bildung von Wundepidermis während der Regeneration der Axolotlgliedmaßen zu hemmen, indem sofort die Haut in voller Dicke über die Amputationsebene näht wird. Diese Methode ermöglicht es den Forschern, die funktionellen Rollen der Wundepidermis in den frühen Stadien der Regeneration der Gliedmaßen zu untersuchen.

Hemmung der Wundepidermisbildung durch vollständige Hautlappenchirurgie während der Regeneration der Axolotl-Gliedmaßen

Dieses Protokoll beschreibt ein chirurgisches Verfahren zur Etablierung einer diaphysären Fraktur im Oberschenkelknochen von Mäusen, die mit einem Markdraht stabilisiert wird, für Frakturheilungsuntersuchungen.

Etablierung eines diaphysären Femurfrakturmodells bei Mäusen

Dieses Protokoll zeigt Schritt für Schritt, wie der erste Backenzahn des Unterkiefers in der Maus extrahiert wird. Es bietet eine alternative Methode für Forscher, die sich auf die Heilung und Regeneration von Kieferknochen konzentrieren.

Die Etablierung eines murinen murinen molaren Extraktionsalveolen-Heilungsmodells

Es wird ein Protokoll für die femorale Osteotomie unter Verwendung der internen Plattenfixation bei reifen Axolotln vorgestellt. Mit dem Verfahren können vergleichende Studien zur Regeneration und Frakturheilung von Gliedmaßen bei aquatischen Amphibien durchgeführt werden.

Stabilisierung einer Femurosteotomie mit einer Plattenfixation bei Ambystoma mexicanum

In diesem Protokoll zeigen wir, wie Axolotl-Gewebe für die Rasterkraftmikroskopie (AFM) vorbereitet und Indentationsmessungen in intaktem und regenerierendem Gliedmaßenknorpel durchgeführt werden können.

Rasterkraftmikroskopische Messungen von Knorpel in intakten und regenerierenden Axolotl-Gliedmaßen

Das murine Knochenmarkverletzungsmodell ist ein nützliches Werkzeug zur Untersuchung der postnatalen Osteogenese durch intramembranöse Ossifikation. Dieses vereinfachte chirurgische Protokoll beschreibt das Verfahren der Knochenmarkablation zur nachgelagerten Beurteilung der Knochenneubildung und der zellulären Reaktionen nach einer Verletzung.

Verbesserte Methodik zur Untersuchung der postnatalen Osteogenese durch intramembranöse Ossifikation in einem murinen Knochenmarkverletzungsmodell

Ziel dieser Studie war es, einen sicheren und reproduzierbaren chirurgischen Ansatz für eine vollständige transversale Amputation des Unterkiefers in Ambystoma mexicanum für die Untersuchung der kraniofazialen Geweberegeneration zu standardisieren.

Entwurf und Standardisierung eines Mandibular-Verletzungsmodells zur Untersuchung der kraniofacialen Geweberegeneration im Ambystoma mexicanum-Modell

Lernen Sie die Amputation der terminalen Phalanx bei erwachsenen Mäusen zur Untersuchung der Blastema-Bildung und intramembranösen Ossifikation. Dieses Protokoll nutzt fluoreszierende Immunhistochemie und Mikro-CT.

Adult Mouse Digit Amputation and Regeneration: A Simple Model to Investigate Mammalian Blastema Formation and Intramembranous Ossification (Video) | JoVE Journal

Adult Mouse Digit Amputation and Regeneration: A Simple Model to Investigate Mammalian Blastema Formation and Intramembranous Ossification

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