Ex Vivo-Methode zur Beurteilung der spontanen Motilität des Mausreproduktivtrakts und eines MATLAB-basierten Uterus Motion Tracking Algorithmus für die Datenanalyse

Unser Protokoll ist wichtig, weil es die erste quantitative Ex-vivo-Methode zur Beurteilung der spontanen Beweglichkeit einer intakten Gebärmutter bietet. Dieser neuartige Ansatz bietet eine einfache und kostengünstige alternative Alternative zum Testen des Entspannungspotenzials natürlich vorkommender Heilmittel in synthetischen Verbindungen. Ein großer Vorteil dieser Technik ist, dass alle intra-uterinzellulären Wechselwirkungen während des gesamten Experiments intakt bleiben.

Über Kontraktilität der Gebärmutter ist mit Dysmenorrhoe verbunden, für die Uterus Relaxants für die Behandlung nützlich sein können. Diese Methode bietet eine einfache Möglichkeit, neue Entspannungsmittel zu testen. Nach der Bestätigung der estrous Zyklus-Stufe, legen Sie die Maus in die Supine-Position, und verbreiten Sie die Extremitäten, um den Bauchbeckenbereich auszusetzen.

Befeuchten Sie den Bauch mit 70% Ethanol, und verwenden Sie Zangen, um die Haut sorgfältig der Klitoris überlegen zu heben. Machen Sie kleine Querschnitte auf den seitlichen Aspekten des unteren Bauchbereichs bis zu den oberen Extremitäten, um das Peritoneum freizulegen. Schneiden Sie vorsichtig durch das Peritoneum, um den Magen-Darm-Trakt freizulegen, ohne die Gebärmutterhörner zu beschädigen, und verwenden Sie Zangen, um die Faszien und Fettgewebe zu entfernen, das den Magen-Darm-Trakt bedeckt.

Entfernen Sie das Zwölffingerdarm, Jejunum, Ileum, Cecum und den aufsteigenden und transversalen Doppelpunkt. Suchen Sie die Harnblase, um die Vagina zu lokalisieren, die direkt unter der Harnblase gefunden wird. Suchen Sie die Schamsymphyse am Zusammenfluss der Schamknochen, kaudal zur Blase, und verwenden Sie eine Schere, um vorsichtig einen Schnitt an den Seitenseiten der Schamsymphyse durch das interpubische Fibrocartilagingewebe zu machen, um Zugang zu erhalten und einen Weg für die vaginale Extraktion zu bieten.

Schneiden Sie durch das Perineum zwischen dem Anus und dem unteren Teil der Vulva, und verwenden Sie Zangen, um die Vagina zu heben, um eine langsame Exzision des Rektums zu ermöglichen. Identifizieren Sie die beiden Gebärmutterhörner, die sich in eine Gabel zu der Vagina verzweiten, und lokalisieren Sie ein verworrenes Eileiter und Eierstock am Ende jedes Horns. Die korrekte Identifizierung der Uterushörner ist entscheidend für das Verfahren, um sicherzustellen, dass das Gewebe nicht beschädigt wird.

Verwenden Sie kleine Sezieren Schere, um alle Bänder zu entfernen, die mit verbinden und unterstützen die Hörner, Eileiter und Eierstöcke in der Bauchhöhle, und entfernen Sie die Vagina, Gebärmutter, Eileiter und Eierstöcke. Übertragen Sie den gesamten isolierten Fortpflanzungstrakt in eine 100-Millimeter-Petrischale mit 10 Millilitern von Dulbeccos PBS. Verwenden Sie Zangen und chirurgische Scheren, um jedes Binde- und Fettgewebe zu entfernen, das die Gebärmutterhörner und Vagina sowie jedes Fell im Schambereich umgibt, das die Bildqualität behindern könnte.

Entfernen Sie das breite Band, um die Beweglichkeit der Gebärmutterhörner zu ermöglichen, und waschen Sie das Gewebe zweimal mit frischen Dulbecco s PBS pro Waschgang, bevor Sie den isolierten Fortpflanzungstrakt in eine 35-Millimeter-Petrischale mit drei Millilitern sauerstoffhaltiger Krebslösung übertragen. Für die spontane Motilitäts-Bildgebung, legen Sie die Petrischale auf eine schwarze Oberfläche bei Raumtemperatur, und lassen Sie 15 bis 30 Minuten für spontane Kontraktionen beginnen. Wenn Bewegung beobachtet werden kann, erfassen Sie die spontane Gebärmutterbeweglichkeit für 10 Minuten von einer axialen Ebene mit jeder Art von digitalen Videogeräten.

Als nächstes übertragen Sie die Zubereitung in eine Petrischale mit sauerstoffhaltigem Krebspuffer, ergänzt mit der Testverbindung, und notieren Sie die spontane Gebärmutterbeweglichkeit für weitere 10 Minuten auf die gleiche Weise. Am Ende des Aufzeichnungszeitraums den gesamten Fortpflanzungstrakt in 10 Milliliter n.G. Dulbeccos PBS in einer 100-Millimeter-Petrischale waschen und die Probe in eine neue Petrischale mit frisch sauerstoffhaltigem Krebspuffer geben, um die Reversibilität der Behandlung zu beurteilen. Nehmen Sie die spontane Gebärmutterbeweglichkeit für etwa 10 Minuten auf die gleiche Weise auf, wie bei den letzten beiden Aufnahmen.

Dann übertragen Sie die Zubereitung auf eine weitere 35 Millimeter Petrischale gefüllt mit sauerstoffhaltigen Krebs Puffer mit dem Fahrzeug für die Testverbindung ergänzt, um sicherzustellen, dass es keine mechanisch induzierten Veränderungen in der spontanen Gebärmuttermotilität. Die Präparation des Fortpflanzungstraktes zeigte eine hohe Beweglichkeit in den Platten A und C in Abwesenheit von Adrenalin. Aber dieser Phänotyp schlummert in Panel B mit der Anwesenheit eines Mikromullepinephrins.

Hier wird eine Stichprobendatenanalyse der Epinephrin-Verabreichung und spontane Motilitätserholung gezeigt, die veranschaulicht, wie die Auswirkungen des Hormons auf den Fortpflanzungstrakt spontane Motilität aus den Aufzeichnungen des Gewebes vor, während und nach der Behandlung mit Testverbindung quantifiziert werden können. Es ist wichtig, zu vermeiden, die Gebärmutterhörner zu komprimieren oder zu überdehnen, da sonst keine spontane Kontraktilität beobachtet wird. Unsere Methode kann auch für die Prüfung von Verbindungen verwendet werden, die die Kontraktilität der Gebärmutter erhöhen können.

Dieses Verfahren kann auf schwangere Maus uteri in den frühen Stadien der Schwangerschaft angewendet werden. Dieses Experiment hat das Potenzial, auf ein Sechs-Well-Platten-Format für das Durchsatz-Drogenscreening aufgerüstet zu werden.