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DOI: 10.3791/60113-v
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This study presents a protocol for evaluating the balance between glutamate release and clearance at single corticostriatal glutamatergic synapses using acute slices from adult mice. By employing the fluorescent sensor iGlu u for glutamate detection, researchers can identify local mismatches in transmitter dynamics, aiding in the investigation of dysfunctional synapses in disease contexts.
Wir präsentieren ein Protokoll zur Bewertung des Gleichgewichts zwischen Glutamatfreisetzung und Clearance bei einzelnen kortikostriatalen glutamatergen Synapsen in akuten Scheiben von erwachsenen Mäusen. Dieses Protokoll verwendet den Fluoreszenzsensor iGluu zur Glutamaterkennung, eine sCMOS-Kamera zur Signalerfassung und ein Gerät zur fokalen Laserbeleuchtung.
Die hochauflösende Bildgebung einzelner Synapsen, die einen schnellen Glutamatsensor ausdrücken, ermöglicht die Erkennung lokaler Diskrepanzen zwischen Senderfreigabe und Aufnahme. Im Falle einer Krankheit kann diese Methode verwendet werden, um dysfunktionale Synapsen zu identifizieren. Zur Autofluoreszenzkorrektur legen Sie zunächst eine Gehirnscheibe aus der Maus von Interesse in die Aufnahmekammer eines Ein-Photonenmikroskops.
Tauchen Sie die Scheibe in sauerstoffhaltige, künstliche Zerebrospinalflüssigkeit und verwenden Sie das 20x Wasser-Immersion-Objektiv, um das dorsale Striatum zu lokalisieren. Befestigen Sie die Scheiben mit einem Nylongitter auf einer Platinharfe, um die Gewebebewegung zu minimieren, und wechseln Sie zum 63-fachen Wasser-Immersion-Objektiv. Mit einem Hochpassfilter bei 510 Nanometern können Sie ein Bild der autofluoreszierenden und glutamatsensorpositiven positiven Strukturen zusammen erfassen.
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