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DOI: 10.3791/60288-v
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This study presents a protocol for visualizing pre- and postsynaptic calcium in Drosophila to investigate learning and memory. Employing in vivo calcium imaging with synaptically localized sensors, the research combines this with classical olfactory conditioning to explore synaptic plasticity associated with associative learning.
Hier stellen wir ein Protokoll vor, mit dem vor- und/oder postsynaptisches Kalzium im Kontext des Drosophila-Lernens und -Gedächtnisses visualisiert werden kann. In vivo Kalzium-Bildgebung mit synaptisch lokalisierten Kalziumsensoren wird mit einem klassischen olfaktorischen Konditionierungsparadigma kombiniert, so dass die synaptische Plastizität, die dieser Art des assoziativen Lernens zugrunde liegt, bestimmt werden kann.
Diese Technik erleichtert die Beobachtung synaptischer Kalziumaktivität in Echtzeit als physiologischer Parameter für die zellulären Prozesse, die dem Lernen und der Gedächtnisbildung bei Drosophila melanogaster zugrunde liegen. Durch den Vergleich neuronaler Reaktionen auf Gerüche vor und nach dem assoziativen Training können wir direkte Korrelationen zwischen synaptischer Aktivität und der Bildung der Gedächtnisspur in einzelnen Fruchtfliegen ziehen. Zur Herstellung transgener Fruchtfliegen, bei denen bestimmte Neuronen von Interesse einen genetisch kodierten Kalziumindikator über weiblich-jungfräuliche und männliche Fliegen ausdrücken, die die gewünschten GAL4- und UAS-Konstrukte tragen, und die weibliche Nachkommenschaft bis drei bis sechs Tage nach der Eklat altern.
Um eine Fliege für die Bildgebung vorzubereiten, verwenden Sie feine Zangen, um eine eisbeäsierte Fliege in eine individuell vorbereitete Bildgebungskammer zu legen. Mit einem Sezieren Mikroskop, um den Thorax und Beine in Kontakt mit den elektrischen Drähten an der Unterseite der Kammer zu positionieren, und mit dem Kopf flach liegen. Fixieren Sie die Fliege an Ort und Stelle mit klarem Klebeband, und verwenden Sie eine chirurgische Skalpellklinge, um ein Fenster im Band um den Kopf zu schneiden, so dass die Antenne bedeckt und nur der vordere Teil des Thorax ausgesetzt.
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