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In Vitro Einrichtung einer gentechnisch veränderten Murine Kopf- und Halskrebszelllinie mit einem...
In Vitro Einrichtung einer gentechnisch veränderten Murine Kopf- und Halskrebszelllinie mit einem...
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Cancer Research
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JoVE Journal Cancer Research
In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System

In Vitro Einrichtung einer gentechnisch veränderten Murine Kopf- und Halskrebszelllinie mit einem Adeno-assoziierten Virus-Cas9-System

Full Text
8,438 Views
05:45 min
January 9, 2020

DOI: 10.3791/60410-v

Manu Prasad*1,2, Sankar Jagadeeshan*1,2, Maurizio Scaltriti3, Irit Allon2,4, Moshe Elkabets1,2

1The Shraga Segal Department of Microbiology, Immunology and Genetics,Ben-Gurion University of the Negev, 2Faculty of Health Sciences,Ben-Gurion University of the Negev, 3Human Oncology & Pathogenesis Program (HOPP),Memorial Sloan Kettering Cancer Center, 4Institute of Pathology,Barzilai University Medical Center

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol enables the development of head and neck cancer models with specific genomic alterations, enhancing our understanding of gene mutations in neoplasia. The technique allows for the easy generation of cell lines from various organs.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Oncology
  • Genetics

Background

  • Murine models are essential for studying head and neck cancer.
  • Specific gene mutations play a critical role in neoplasia.
  • Current methods for developing cancer models can be complex.
  • This protocol simplifies the process of creating cell lines.

Purpose of Study

  • To develop murine head and neck cancer cell lines.
  • To investigate the impact of specific genomic alterations.
  • To provide a straightforward protocol for researchers.

Methods Used

  • Harvesting tongue tissue from B6 transgenic mice.
  • Mincing tissue into small fragments.
  • Using a triple enzyme mix for enzymatic dissociation.
  • Incubating samples at 37 degrees Celsius.

Main Results

  • Successful transformation of primary murine tongue cells.
  • Generation of cell lines with specific genomic alterations.
  • Enhanced understanding of gene mutations in neoplasia.
  • Demonstrated ease of use for researchers.

Conclusions

  • The protocol provides a reliable method for creating cancer models.
  • It facilitates research on the role of gene mutations in cancer.
  • This approach can be adapted for various organ tissues.

Frequently Asked Questions

What is the main advantage of this protocol?
The main advantage is the ease of developing cell lines from various organs.
What type of mouse is used in this study?
B6 transgenic mice are used for harvesting tongue tissue.
How long should the tissue be incubated with the enzyme mix?
The tissue should be incubated at 37 degrees Celsius for 30 minutes.
What is the purpose of mincing the tissue?
Mincing the tissue helps to enhance the enzymatic dissociation process.
Who demonstrates the procedure in the video?
Manu Prasad, a graduate student, demonstrates the procedure.
What is the significance of this research?
It significantly impacts our understanding of specific gene mutations in neoplasia.

Für das Verständnis von Neoplasie ist die Entwicklung von murinen Modellen mit spezifischen Genen erforderlich, die bei Kopf- und Nackenkrebspatienten mutiert sind. Hier stellen wir ein Protokoll zur In-vitro-Transformation von primären murinen Zungenzellen unter Verwendung eines adeno-assoziierten Virus-Cas9-Systems vor, um murine HNC-Zelllinien mit spezifischen genomischen Veränderungen zu erzeugen.

Dieses Protokoll ermöglichte die Entwicklung von Kopf- und Halskrebsmodellen mit spezifischer genomischer Operation, was unser Verständnis der Rolle spezifischer Genmutationen im Prozess der Neoplasie erheblich beeinflusste. Der Hauptvorteil dieser Technik ist die Leichtigkeit, mit der die Zelllinie aus praktisch jedem Organ entwickelt werden kann. Demonstrieren das Verfahren wird Manu Prasad ein Grad Student aus meinem Labor sein.

Beginnen Sie mit einer chirurgischen Schere, um die Zunge von einer sechs Wochen alten männlichen oder weiblichen B6-Transgenmaus zu ernten. Verwenden Sie ein Skalpell, um das Gewebe in sehr kleine Fragmente zu zerkleinern und die Stücke in ein 15-Milliliter-Rohr mit 4,5 Milliliter n.R. RUM ohne Serum zu sammeln. Fügen Sie 200 Mikroliter dreifachen Enzymmix in die Röhre und inkubieren Sie die Probe bei 37 Grad Celsius für 30 Minuten tippen Sie auf die Röhre alle 10 Minuten, um die enzymatische Dissoziation des Gewebes zu verbessern.

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