Name: Nachweis der gemeinsamen Blutversorgung bei parabiotischen Mäusen durch Kaudalenvene Glucose Injection (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 27 s
Description: Erfahren Sie eine sichere Methode zur Überprüfung der Blutchimäre bei parabiotischen Mäusen durch Glukoseinjektion in die Schwanzvene. Diese Technik ermöglicht eine zuverlässige Verifizierung der gemeinsamen Blutzirkulation.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Diese Arbeit wurde von der National Nature Science Foundation of China (81570399 und 81773735), dem National Key Research and Development Program of China - Traditional Chinese Medicine Modernization Research Project (2017YFC1702003) und Hei Long Jiang unterstützt. Herausragender Jugendwissenschaftsfonds (JC2017020).

Alle Verfahren, an denen Tiere und ihre Pflege beteiligt waren, wurden vom Institutional Animal Care and Use Committee der Harbin Medical University genehmigt.
ANMERKUNG: Die für die Methode erforderlichen Werkzeuge und Ausrüstungen sind in der Materialtabelleaufgeführt.
1. Herstellung von Materialien und Tieren
<ol><li>Bestellen Sie C57BL/6 männliche Mäuse mit einem Gewicht zwischen 20 g-25 g bei einem Standard-Labortierlieferanten.</li>
	<li>Die Mäuse in einem Zyklus von 12 h Licht: 12 h Dunkelheit bei 24 bis 26 °C mit ad libitum Zugang zu Wasser und Nahrung.</li>
</ol>2. Parabiose
<ol><li>Anästhetisieren Sie die Mäuse durch intraperitoneale Injektion von 20 g/L 2,2,2-Tribromoethanol in einer Konzentration von 0,1 ml/10 g. Bestätigen Sie die richtige Anästhesisierung, wie durch Muskelentspannung, langsame und stetige Atmung, Verlust des Hautstimulationsreflexes und Das Verschwinden des Hornhautreflexes angezeigt wird.</li>
	<li>Ophthalmologische Salbe mit einer Q-Spitze auftragen, um trockene Augen zu verhindern.</li>
	<li>Führen Sie das Parabiose-Verfahren wie zuvor beschrieben5.<ol>
<li>Setzen Sie die Mäuse in die Supine-Position. Rasieren Sie die linke Seite einer Maus und die rechte Seite der anderen Maus ab ca. 1 cm über dem Ellenbogen bis 1 cm unterhalb des Knies mit einem elektrischen Rasierer. Verwenden Sie Enthaarungscreme, um das Fell auf der rasierten Haut vollständig zu löschen.</li>
		<li>Wischen Sie die rasierten Bereiche mit Iodophor ab. Legen Sie die Mäuse auf ein beheiztes Pad, das von einem sterilen Pad bedeckt ist.</li>
		<li>Erstellen Sie Längshauteinschnitte von 0,5 cm über dem Ellenbogen bis 0,5 cm unterhalb des Kniegelenks mit einer scharfen Schere auf der rasierten Seite jedes Tieres.</li>
		<li>Die Haut nach dem Schnitt sanft von der subkutanen Faszie lösen.</li>
		<li>Verbinden Sie das Olecranon und das Knie des Parabionts mit einer 3-0-Naht.</li>
		<li>Nahn die rasierte Haut mit einer kontinuierlichen 5-0 Naht.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Injizieren Sie 0,5 ml 0,9% NaCl subkutan in jede Maus, um Austrocknung zu verhindern.</li>
	<li>Injizieren Tramadol (10 mg/25 g/Tag) intramuskulär zu jeder Maus, um Schmerzen zu lindern.</li>
</ol>3. Validierung des Zirkulationschimmers
<ol><li>Glukose-Schwankungsmethode HINWEIS: Überprüfen Sie die erfolgreiche Konstruktion des Zirkulationschimimismus zwischen Parabionten mit der Glukosefluktuationsmethode (kein Fasten) am 10. Tag nach der Parabiose-Operation.<ol>
<li>Anästhetisieren Sie die Parabionten durch intraperitoneale Injektion von 20 g/L 2,2,2-Tribromethanol an jede Maus in einer Konzentration von 0,1 ml/10 g.</li>
		<li>Fixieren Sie die Spendermäuse in einem Venous Visual-Mouse Schwanzfixator.</li>
		<li>Reiben Sie die kaudalen Venen in der Flanke eines Schwanzes des Parabionts mit einer In 70-75% Alkohol getränkten Baumwollkugel, um den Schwanz zu reinigen und die Blutgefäße zu verdünnen.</li>
		<li>Halten Sie eine 1,0 ml Spritze mit Glukose in der rechten Hand und halten Sie die Nadel parallel zur Vene (weniger als 15°).</li>
		<li>Setzen Sie die Nadel an einer Position von ca. 2 x 4 cm von der Schwanzspitze ein.</li>
		<li>Injizieren Sie 100 l Glukose (1,2 g/kg) innerhalb von 10 s in den Spender. HINWEIS: Der Begriff Spender bezieht sich auf das Parabiont, das die Glukose-Injektion durch die Schwanzvene erhält. Der Empfänger ist der andere Parabiont, der Glukose nicht direkt erhält.</li>
		<li>Reinigen Sie die Zehen mit Iodophor. Schneiden Sie die Zehen der Spender- und Empfängermäuse mit einer Schere ab und sammeln Sie einen Tropfen Blut zu verschiedenen Zeitpunkten nach der Injektion von Glukose (1 min, 5 min, 10 min, 15 min, 20 min, 30 min, 40 min, 50 min und 60 min). Entfernen Sie das Blutgerinnsel an jedem Sammelzeitpunkt, um weitere Schäden zu vermeiden. HINWEIS: Das Volumen des gesammelten Blutes war 10-25 ul für einen Test, und 90-225 ul insgesamt.</li>
		<li>Tropfte das Blut in die Mitte der Glucometer-Teststreifen für den Nachweis des Glukosespiegels.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Verwenden Sie Evans blauen Counterstain als Positivkontrolle3.<ol>
<li>Injizieren Sie 200 l 0,5% Evans blaues Gegenfleck intraperitoneal in die Spendermaus.</li>
		<li>2 h später die Parabionten durch intraperitoneale Injektion von 20 g/L 2,2,2-Tribromoethanol an jede Maus in einer Konzentration von 0,2 ml/10 g einschläfern und Blut aus beiden Parabionten durch Herzpunktion sammeln.</li>
		<li>Zentrifuge die Blutproben bei 916 x g für 15 min.</li>
		<li>Serum vom Überstand sammeln.</li>
		<li>Das Serum mit 0,9% NaCl bei 1:50 verdünnen.</li>
		<li>Messen Sie die Absorption der verdünnten Serumproben bei 620 nm mit einem Spektralphotometer.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Baruch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging-induced+type+I+interferon+response+at+the+choroid+plexus+negatively+affects+brain+function%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Aging-induced type I interferon response at the choroid plexus negatively affects brain function.</a> Science. 346 (6205), 89-93 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positional+cloning+of+the+mouse+obese+gene+and+its+human+homologue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Positional cloning of the mouse obese gene and its human homologue.</a> Nature. 372 (6505), 425-432 (1994).</li>
<li>Torres, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parabiotic+model+for+differentiating+local+and+systemic+effects+of+continuous+and+intermittent+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology+%281985%29%22%5BJournal%5D)">Parabiotic model for differentiating local and systemic effects of continuous and intermittent hypoxia.</a> Journal of Applied Physiology (1985). 118 (1), 42-47 (2015).</li>
<li>Loffredo, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+differentiation+factor+11+is+a+circulating+factor+that+reverses+age-related+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Growth differentiation factor 11 is a circulating factor that reverses age-related cardiac hypertrophy.</a> Cell. 153 (4), 828-839 (2013).</li>
<li>Kamran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parabiosis+in+mice%3A+a+detailed+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Parabiosis in mice: a detailed protocol.</a> Journal of Visualized Experiments. (80), e50556(2013).</li>
<li>Conboy, M. J., Conboy, I. M., Rando, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterochronic+parabiosis%3A+historical+perspective+and+methodological+considerations+for+studies+of+aging+and+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Heterochronic parabiosis: historical perspective and methodological considerations for studies of aging and longevity.</a> Aging Cell. 12 (3), 525-530 (2013).</li>
<li>Eggel, A., Wyss-Coray, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+revival+of+parabiosis+in+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Swiss+Medical+Weekly%22%5BJournal%5D)">A revival of parabiosis in biomedical research.</a> Swiss Medical Weekly. 144, w13914(2014).</li>
<li>Brack, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ageing+of+the+heart+reversed+by+youthful+systemic+factors%21%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Ageing of the heart reversed by youthful systemic factors!</a> EMBO Journal. 32 (16), 2189-2190 (2013).</li>
<li>Wu, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+cells+contribute+to+cardiomyocyte+regeneration+after+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Circulating cells contribute to cardiomyocyte regeneration after injury.</a> Circulation Research. 116 (4), 633-641 (2015).</li>
<li>Kaiser, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27Rejuvenation+factor%27+in+blood+turns+back+the+clock+in+old+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">'Rejuvenation factor' in blood turns back the clock in old mice.</a> Science. 344 (6184), 570-571 (2014).</li>
<li>Rando, T. A., Finkel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+aging+and+rejuvenation--a+sense+of+humors%3F%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cardiac aging and rejuvenation--a sense of humors?</a> New England Journal of Medicine. 369 (6), 575-576 (2013).</li>
<li>Heidt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+contribution+of+monocytes+to+heart+macrophages+in+steady-state+and+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Differential contribution of monocytes to heart macrophages in steady-state and after myocardial infarction.</a> Circulation Research. 115 (2), 284-295 (2014).</li>
<li>McPherron, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Through+thick+and+thin%3A+a+circulating+growth+factor+inhibits+age-related+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Through thick and thin: a circulating growth factor inhibits age-related cardiac hypertrophy.</a> Circulation Research. 113 (5), 487-491 (2013).</li>
<li>Villeda, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Young+blood+reverses+age-related+impairments+in+cognitive+function+and+synaptic+plasticity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Young blood reverses age-related impairments in cognitive function and synaptic plasticity in mice.</a> Nature Medicine. 20 (6), 659-663 (2014).</li>
<li>Katsimpardi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+and+neurogenic+rejuvenation+of+the+aging+mouse+brain+by+young+systemic+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Vascular and neurogenic rejuvenation of the aging mouse brain by young systemic factors.</a> Science. 344 (6184), 630-634 (2014).</li>
<li>Starzl, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lost+chord%3A+microchimerism+and+allograft+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+Today%22%5BJournal%5D)">The lost chord: microchimerism and allograft survival.</a> Immunology Today. 17 (12), 577-584 (1996).</li>
<li>Coleman, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+historical+perspective+on+leptin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">A historical perspective on leptin.</a> Nature Medicine. 16 (10), 1097-1099 (2010).</li>
<li>Salpeter, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+regulation+of+the+age-related+decline+of+pancreatic+beta-cell+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Systemic regulation of the age-related decline of pancreatic beta-cell replication.</a> Diabetes. 62 (8), 2843-2848 (2013).</li>
<li>Sheldon, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gestational+exercise+protects+adult+male+offspring+from+high-fat+diet-induced+hepatic+steatosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Gestational exercise protects adult male offspring from high-fat diet-induced hepatic steatosis.</a> Journal of Hepatology. 64 (1), 171-178 (2016).</li>
<li>Martineau, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+metabolic+profile+of+intrahepatic+cholestasis+of+pregnancy+is+associated+with+impaired+glucose+tolerance%2C+dyslipidemia%2C+and+increased+fetal+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">The metabolic profile of intrahepatic cholestasis of pregnancy is associated with impaired glucose tolerance, dyslipidemia, and increased fetal growth.</a> Diabetes Care. 38 (2), 243-248 (2015).</li>
<li>Wang, F., Liu, Y., Yuan, J., Yang, W., Mo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compound+C+Protects+Mice+from+HFD-Induced+Obesity+and+Nonalcoholic+Fatty+Liver+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Compound C Protects Mice from HFD-Induced Obesity and Nonalcoholic Fatty Liver Disease.</a> International Journal of Endocrinology. 2019, 3206587(2019).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu verraten.

Parabiose bezieht sich auf die chirurgische Technik der Verbindung zweier lebender Tiere, um ein gemeinsames Gefäßsystem mit experimentellen Mitteln zu etablieren6,7,8. Der Vorteil dieses Modells ist, dass die von einem einzelnen Individuum produzierten Substanzen auf beide Tiere gleichzeitig wirken können. So kann das Parabiose-Modell verwendet werden, um die Rolle eines Stoffes oder Faktors bei einer verwandten Krankheit zu er...

Parabiose ist eine Modellierungsmethode, bei der zwei lebende Organismen chirurgisch miteinander verbunden sind und sich als ein einziges physiologisches System mit einem gemeinsamen Kreislaufsystem entwickeln1. Solche Modelle wurden häufig für das Studium der Physiologie verwendet, da der Vorteil besteht, dass die von einem einzelnen Individuum produzierten Substanzen über das gemeinsame Kreislaufsystem gleichzeitig auf beide Tiere wirken können. Seit Mitte des 18. Jahres, als parabiotische Experimente von Paul Bert2entwickelt wurden, sind die Methoden zur Konstruktion parabiotischer Modelle standardisiert. Es fehlt jedoch eine einfache und bequeme Methode, um die erfolgreiche Etablierung des Blutchimertums zu überprüfen. Es wurde berichtet, dass die Kreuzzirkulation erfolgreich durch intraperitoneally Injektion 0,5% Evans blauer Farbstoff in einem der Parabionten gefolgt von der Messung der Absorption von Evans blau im Blut der beiden Parabionten mit einem Mikroplattenleser3. Eine andere Methode erfordert eine bestimmte Mausrasse, die CD45.1+- und CD45.2+- markierte Monozyten in jedem Parabiont enthält. Die Zellzytometrie wird dann verwendet, um den Blutchimärerum zu bestimmen, indem die Häufigkeit der beiden Marker in Monozyten aus Milz oder Blut gemessen wird4. Jedoch, Diese Methoden sind oft tödlich oder umständlich für die Tiere, und eine sichere und einfache Methode für eine schnelle und zuverlässige Überprüfung von parabiotischen Modellen ist sehr wünschenswert. In dieser Studie haben wir eine neue Methode zu diesem Zweck etabliert, die in einem Mausmodell der Parabiose validiert wurde. Die Glukosekonzentration in Blutproben aus einer Schwanzvene wird mit einem Glukometer gemessen, und das Muster der Veränderungen des Glukosespiegels bei Spender- und Empfängermäusen gilt als Hinweis auf Zirkulationschimäre. Wir nannten diese Methode die "Glucose-Schwankungsmethode". Die Anwendung dieser Validierungsmethode ist nicht auf Mäuse beschränkt, sondern könnte auf verschiedene pathologische Modelle mit Ausnahme von Modellen mit schwerer Dysregulation des Glukosestoffwechsels ausgedehnt werden. Das Verfahren ist einfach, zeitsparend und sicher.

<table><tbody><tr><td>gebogene Pinzette</td><td>JZ surgical Instruments, China</td><td>J31340</td><td></td></tr><tr><td>feine Schere</td><td>JZ surgical Instruments, China</td><td>WA1030</td><td></td></tr><tr><td>Nadelzange</td><td>JZ surgical Instruments, China</td><td>60017961</td><td></td></tr><tr><td>2,5 mL Spritzen</td><td>Agilent, USA</td><td>5182-9642</td><td></td></tr><tr><td>Tribromoethano</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>T48402-5G</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin</td><td>Solarbio, China</td><td>IP0150</td><td></td></tr><tr><td>Tramadol</td><td>Yijishiye, China</td><td>YJT712520</td><td></td></tr><tr><td>Blutzuckermessgerät</td><td>Roche Diabetes Care, Indiana</td><td>Accu-Chek Active Teststreifen</td><td></td></tr><tr><td>Evan's blue Counterstain</td><td>Solarbio, China</td><td>G1810</td><td></td></tr><tr><td>Enthaarungscreme</td><td>Nair, USA</td><td>LL9161</td><td></td></tr><tr><td>Wärmedecke ( Heizkissen)</td><td>Kent Scientific Corp, USA</td><td>TP-22G</td><td></td></tr><tr><td>Elektrorasierer</td><td>Codos, China</td><td>CP-5000</td><td></td></tr><tr><td>3-0,5-0 chirurgisches Nahtmaterial</td><td>Shanghai Medical Nahtnadelfabrik, China</td><td>SYZ 3-0#, SYZ 5-0#</td><td></td></tr></tbody></table>

nachweis der gemeinsamen blutversorgung bei parabiotischen mäusen durch kaudalenvene glucose injection

Detecting Establishment of Shared Blood Supply in Parabiotic Mice by Caudal Vein Glucose Injection

Parabiose ist eine experimentelle Methode zur chirurgischen Kombination von zwei parallelen Tieren entlang der Längsachse des Körpers. Wir präsentieren ein Protokoll zum Nachweis der erfolgreichen Etablierung von Blutchimäremismus in Parabionten durch eine kaudale Veneninjektion von Glukose. Parabiotische Mäuse wurden konstruiert. Glukose wurde der Spendermaus durch die Schwanzvene injiziert, und die Fluktuation des Blutzuckerspiegels wurde bei beiden Mäusen mit einem Blutglukometer zu verschiedenen Zeitpunkten gemessen. Unsere Ergebnisse zeigten, dass der Blutzuckerspiegel bei Spendermäusen nach 1 min stark angestiegen ist und danach langsam abnahm. In der Zwischenzeit erreichte der Blutzuckerspiegel der Empfängermäuse 15 min nach der Injektion. Ähnliche Ergebnisse wurden mit Evans blue erzielt, der als Positivkontrolle für Glukose verwendet wird. Die synchrone Fluktuation des Blutzuckerspiegels zeigt an, dass der Blutfluss zwischen den beiden Mäusen erfolgreich nachgewiesen wurde.

Bei sechs Spendermäusen stieg der Blutzuckerspiegel bei durchschnittlich 1 min nach der Injektion von 100 l Glukose (1,2 g/kg) durch die Schwanzvene drastisch auf 26,5 mol/L (173% Anstieg) und sank dann nach und nach auf 13,3 'mol/L bei 60 min. Bei Empfängermäusen erhöhte sich der Blutzucker nach der Injektion langsam und erreichte den ersten Spitzenwert nach 15 min (47% Anstieg, 12,2 mol/L). Basierend auf den obigen Ergebnissen wurde der Standard für Zirkulationschimäre wie folgt festgel...

Hier beschreiben wir eine neue Methode, um die erfolgreiche Etablierung der gemeinsamen Durchblutung von zwei Parabionten durch eine kaudale Veneninjektion von Glukose zu erkennen, die minimale Schäden verursacht und für die Parabionten nicht tödlich ist.

Nachweis der gemeinsamen Blutversorgung bei parabiotischen Mäusen durch Kaudalenvene Glucose Injection

Parabiosis is an experimental method for surgically combining two parallel animals along the longitudinal axis of the body. We present a protocol for ...

Unser Protokoll bietet eine verbesserte Verifikationsmethode für Zirkulationschimäre und eine Methode für eine erfolgreiche Parabiose-Modelleinrichtung für die biomedizinische Forschung. Im Vergleich zu bestehenden Methoden zum Nachweis von Blutchimismus bei Parabiose, die oft tödlich oder umständlich sind, ist unser Protokoll sicher und einfach, was eine schnelle und zuverlässige Überprüfung ermöglicht. Obwohl diese Methode spezifisch für den Nachweis von Blutchimärein in Parabiose-Modellen ist, kann sie auf alle biomedizinischen Studien mit parabiotischen Verfahren angewendet werden.Der schwierigste Schritt ist die Glukoseinjektion. Daher achten Sie darauf, die Schwanzveneninjektion zu üben, bevor Sie ein experimentelles Verfahren durchführen, oder verwenden Sie einen venösen visuellen Mausschwanzfixator. Nach der Bestätigung eines Mangels an Reaktion auf Pedalreflex, platzieren Sie zwei 20 bis 25-Gramm-Beästhesoniert C57 schwarz 6 männliche Mäuse in der Rückenposition, und verwenden Sie einen elektrischen Rasierer gründlich rasieren die linke Seite einer Maus und die rechte Seite der zweiten Maus von etwa einem Zentimeter über dem Ellenbogen bis zu einem Zentimeter unter dem Knie.Entfernen Sie alle verbleibenden Haare mit Enthaarungscreme, bevor Sie Längshauteinschnitte in der gereinigten Haut jedes Tieres machen, beginnend von 0,5 Zentimetern über dem Ellenbogen bis 0,5 Zentimeter unter dem Kniegelenk, und lösen Sie die Haut sanft von der subkutanen Faszie. Verbinden Sie das Olecranon und das Knie des Parabionts mit 3-0 Naht, und verschließen Sie die rasierte Haut mit einer kontinuierlichen 5-0 Naht. Dann subkutan injizieren 0,5 Milliliter 0,9%Natriumchlorid, um Dehydrierung zu verhindern, und intramuskulär injizieren 10 Milligramm Tramadol pro 25 Gramm Maus, um Schmerzen zu lindern, in jede Maus pro Tag für drei Tage.Um den erfolgreichen Aufbau des Kreislaufs zwischen Denrimismus zwischen Parabionten durch Glukosefluktuation zu überprüfen, am 10. Tag nach der Parabiose-Operation, sichern Sie die Spendermäuse in einem venösen visuellen Mausschwanzfixator und verwenden Sie eine 70 bis 75% ethanolgetränkte Baumwollkugel, um die kaudalen Venen in der Flanke eines parabionten Schwanzes zu reiben. Legen Sie eine Ein-Milliliter-Spritzennadel zwei bis vier Zentimeter von der Schwanzspitze und so parallel zur Vene wie möglich in die kaudale Vene ein und injizieren Sie dem Spender bei einem Zeitraum von 10 Sekunden ein bis zwei Gramm pro Kilogramm Glukose in 100 Mikroliter Salinelösung. Als nächstes verwenden Sie scheren, um die Zehen von den Spender- und Empfängertieren zu entfernen, um die Entnahme eines Tropfens Blut zu verschiedenen Zeitpunkten von Interesse nach der Injektion zu ermöglichen.Fügen Sie dann einen Tropfen jeder Blutprobe in die Mitte eines Glucometer-Teststreifens für die Nachweisung des Glukosespiegels hinzu. Um die erfolgreiche Konstruktion der Zirkulation durch Evans Blaufarbstoffabsorption zu überprüfen, injizieren Sie 200 Mikroliter 0,5%Evans blauer Gegenfärbung intraperitoneally in die Spendermaus und sammeln Sie Blut von beiden Parabionten durch Herzpunktion nach zwei Stunden. Trennen Sie das Serum durch Zentrifugation, und übertragen Sie das Serum in ein konisches Rohr zur Verdünnung im Verhältnis eins zu 50 in 0,9% Natriumchlorid.Messen Sie dann die Absorption der verdünnten Serumproben mit 620 Nanometern auf einem Spektralphotometer. In dieser repräsentativen Analyse des Blutzuckerspiegels bei sechs Spendermäusen erhöhte sich der Blutzucker spiegelauf in durchschnittlich einer Minute nach der Injektion von 100 Mikroliter Glukose durch die Schwanzvene deutlich auf 26,5 Mikromolar pro Liter. Der Blutzuckerspiegel sank dann nach und nach auf 13,3 Mikroliter pro Liter bei 60 Minuten.Bei Empfängermäusen erhöhte sich der Blutzucker nach der Injektion langsam und erreichte den ersten Spitzenwert bei 15 Minuten. Die Konzentration von Evans Blaufarbstoff im Serum von Parabionten deutete auch auf eine erfolgreiche Konstruktion des Zirkulationschimmers hin, und subkutane Gefäßverbindungen zwischen den Parabionten konnten deutlich beobachtet werden. Bei Parabionten, die 15 Tage nach der Parabiose-Operation keinen Blutchimmelismus festgestellt haben, zeigten die Empfängermäuse innerhalb von 60 Minuten nach der Glukoseinjektion in das Spendertier keinen erhöhten Blutzuckerspiegel.Die Blutkonzentration von Evans blue bei den beiden Empfängern war ebenfalls nicht erhöht, was zeigt, dass die Glukosefluktuationsmethode so empfindlich ist wie die Evans Blue-Methode. Darüber hinaus wurde der Insulinspiegel im Blut eine Stunde nach der Glukoseinjektion aufgrund des schnell erhöhten Glukosespiegels deutlich gesenkt und um drei Stunden auf ein normales Niveau zurückgewonnen, was darauf hindeutet, dass die Auswirkungen der injizierten Glukose auf den Insulinstoffwechsel wiederherspräparierbar sind. Achten Sie darauf, dass die Nadel direkt in die Schwanzvene eingeführt wird.Nach der Bestätigung des Blutchimmers der Parabionten durch diese Methode können physiopathologische Veränderungen bei lebenden parabiotischen Tieren untersucht werden.

detecting-establishment-shared-blood-supply-parabiotic-mice-caudal

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Parabiose Verbinden von zwei Organismen führt zu der Entwicklung einer gemeinsamen Kreislauf. In diesem Protokoll beschreiben wir die OP-Schritte, um eine Verbindung zwischen einem Parabiose Wildtyp-Maus und einem konstitutiven GFP-exprimierenden Maus bilden.

Parabiose in Mäuse: Ein detailliertes Protokoll

Insulin-induzierte Vasodilatation regelt die Durchblutung der Muskeln und erhöht die mikrovaskuläre Fläche (mikrovaskuläre Rekrutierung) verfügbar für gelöste Austausch zwischen Blut und Gewebe Interstitium. Kombinierte intravitalen Mikroskopie und Kontrast-verstärkte Sonographie wird präsentiert, um gleichzeitig Insulinwirkung auf größere Schiffe und die Mikrozirkulation bewerten in-vivo.

Kombiniert intravitalen Mikroskopie und Kontrast-verstärkte Sonographie der Maus Megalosauridae Insulin-induzierte Vasodilatation und Muskel-Durchblutung zu untersuchen

Der aktuelle Artikel beschreibt die Erzeugung und metabolische Charakterisierung von fettreichen Diät gefütterten Mäusen als Modell für Diät-induzierten Insulinresistenz und Fettleibigkeit. Freuen Sie sich auf weitere detaillierte Protokolle, um die oralen Glukose-Toleranz-Test und die Insulin-Toleranz-Test, Ganzkörper-Veränderungen der Glukose Stoffwechsel in VivoÜberwachung durchführen.

Studie von In Vivo Metabolismus von Glukose in fettreichen Diät gefüttert Mäuse mit oralen Glukosetoleranztest (OGTT) und Insulin-Toleranz-Test (ITT)

Diese Studie beschreibt die direkte Messung der hepatischen Glukoseproduktion in einem Mausmodell mit polyzystischem Ovarialsyndrom unter Verwendung eines stabilen Isotopenglukose-Tracers über die Schwanzvene sowohl im nüchternen als auch im glukosereichen Zustand im Tandem.

Evaluierung der hepatischen Glukoseproduktion in einem Mausmodell mit polyzystischem Ovarialsyndrom

Hier beschreiben wir eine einfache Methode, um Mäusen ein kommerzielles kontinuierliches Glukosemessgerät zu implantieren, das für Patienten entwickelt wurde, und stellen die Skripte zur Analyse der Ergebnisse zur Verfügung.

Einfache kontinuierliche Glukosemessung bei frei beweglichen Mäusen

Dieses Protokoll beschreibt eine unkomplizierte und minimalinvasive Methode zur Transplantation und Bildgebung von NIT-1-Zellen in nicht-adipösen diabetischen (NOD)-schweren kombinierten immundefizienten Mäusen, die mit Splenozyten konfrontiert wurden, die von spontan diabetischen NOD-Mäusen gereinigt wurden.

Biolumineszentes Monitoring des Transplantatüberlebens in einem adoptiven Transfermodell des Autoimmundiabetes bei Mäusen

Eine hyperglykämische Klemme wird zur Messung der Insulinfreisetzung bei anhaltend höherer Blutzuckerkonzentration verwendet. Eine hypoglykämische Klemme dient zur Messung der Glukoseproduktion, die durch gegenregulatorische Reaktionen induziert wird. Beide Methoden verwenden das gleiche chirurgische Verfahren. Hier stellen wir eine Clamp-Technik zur Beurteilung des systemischen Glukosestoffwechsels vor.

Hyperglykämische Klemme und hypoglykämische Klemme bei bewussten Mäusen

In diesem Protokoll werden Methoden beschrieben, die für die BAT-optimierte arteriovenöse Metabolomik mittels GC-MS in einem Mausmodell relevant sind. Diese Methoden ermöglichen es, wertvolle Einblicke in den BAT-vermittelten Metabolitenaustausch auf organismischer Ebene zu gewinnen.

Arteriovenöse Metabolomik zur Messung des In-vivo-Metabolitenaustauschs in braunem Fettgewebe

Hier stellen wir ein Protokoll zur Etablierung eines Mausmodells für intrazytoplasmatische Spermieninjektion (ICSI) vor, das es uns ermöglicht, altersbedingte Veränderungen im Glukosestoffwechsel zu beobachten, die auf ICSI zurückzuführen sind, und Einblicke in ihre potenziellen langfristigen Auswirkungen auf die menschliche Entwicklung zu geben.

Überwachung des Blutzuckers bei Mäusenachkommen nach intrazytoplasmatischer Spermieninjektion

Das Protokoll demonstriert eine Methode zur sequentiellen Entnahme von Blut aus Pfortadern und unterer Hohlvene von Mäusen, um die Produktion und Absorption von mikrobiellen Metaboliten im Darm zu bewerten.

Sequentielle Blutentnahme aus der Vena cava inferior, gefolgt von einer Pfortader zur Bewertung der mikrobiellen Metaboliten des Darms bei Mäusen

Hier geben wir Details zur Durchführung der glukosestimulierten Insulinsekretion (GSIS) durch Perfusion durch das Gefäßsystem von Mäusen mit intakter Bauchspeicheldrüse als zusätzliche Technik zur Beurteilung der endokrinen Pankreasfunktion mit Reduktion möglicher Störfaktoren.

Glukosestimulierte Insulinsekretion über Perfusion durch das Gefäßsystem der Maus mit intakter Bauchspeicheldrüse

Erfahren Sie eine sichere Methode zur Überprüfung der Blutchimäre bei parabiotischen Mäusen durch Glukoseinjektion in die Schwanzvene. Diese Technik ermöglicht eine zuverlässige Verifizierung der gemeinsamen Blutzirkulation.

Nachweis der gemeinsamen Blutversorgung bei parabiotischen Mäusen durch Kaudalenvene Glucose Injection

Weitere Videos entdecken