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DOI: 10.3791/60536-v
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Wir beschreiben eine Plattform, die eine Bibliothek von isogenen antibiotikaresistenten Escherichia coli für die Dereplikation von Antibiotika nutzt. Die Identität eines von Bakterien oder Pilzen produzierten Antibiotikums kann durch das Wachstum von E. coli abgeleitet werden, das sein jeweiliges Resistenzgen ausdrückt. Diese Plattform ist wirtschaftlich effektiv und zeiteffizient.
Unser Protokoll ist von Bedeutung, da es sowohl die kostengünstige als auch die rechtzeitige Dereplikation bekannter Antibiotika ohne den Einsatz spezieller Geräte ermöglicht. Der Hauptvorteil dieser Technik ist die Vorlagenanpassung. Dies bedeutet, dass eine Person auf der Grundlage ihrer gewünschten breiten oder schmalen Substratspezifität die Resistenzgene, die sie in ihre Bibliotheksvorlage aufnehmen möchten, individuell anpassen kann.
Zum Beispiel kann eine Beta-Lactam-Exemittierung E.coli-Vorlage vorbereitet werden, um die hochspezifische Dereplikation von Beta-Lactamen und ihren verschiedenen Unterklassen zu ermöglichen. Mit einer septischen Technik, Pipette 500 Mikroliter Kation angepasst MHB aus einem sterilen Reservoir in jeden Brunnen einer sterilen, 96 tiefen Brunnenplatte. Verwenden Sie mit den vorbereiteten ARP- oder MARP-Dehnungsplatten einen Applikatorstab, um die 96-Tiefe-Bohrplatte gemäß der ARP- oder MARP-Karte zu impfen.
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