Name: Chronisches Post-Ischemia Schmerzmodell für komplexes regionales Schmerzsyndrom Typ-I bei Ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-21T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 12 s
Description: Erfahren Sie die Etablierung eines chronischen post-ischämischen Schmerzmodells bei Ratten zur Untersuchung komplexer regionaler Schmerzsyndrome. Dieses Protokoll ermöglicht die Evaluation mechanischer und thermischer Hypersensitivitäten.

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Dieses Projekt wurde von der National Natural Science Foundation of China (81873365 und 81603676), Zhejiang Provincial Natural Science Funds for Distinguished Young Scholars (LR17H270001) und Forschungsgeldern der Zhejiang Chinese Medical University ( Q2019J01, 2018ZY37, 2018ZY19).

Die Tierprotokolle wurden von der Zhejiang Chinese Medical University Animal Ethics Committee genehmigt.
1. Tiere
<ol><li>Erhalten Sie männliche Sprague-Dawley (SD) Ratten (280–320 g, 8-10 Wochen alt) vom Shanghai Laboratory Animal Center. Beherbergen Sie die Tiere in Zhejiang Chinese Medical University Laboratory Animal Center. Beachten Sie, dass die Brutbedingungen 12 h / 2h Licht/Dunkel-Zyklen umfassen und die Temperatur konstant bei 24 °C halten sollten. Geben Sie Wasser und Lebensmittel ad libitum. Beachten Sie, dass in dieser Studie insgesamt 48 Ratten verwendet werden. Eine Anmerkung, in diesem Modell müssen wir die Schmerzreaktion während des gesamten Prozesses beobachten. Wenn Schmerzmittel angewendet werden, können wir das Schmerzmodell nicht erfolgreich etablieren. Nach den Experimenten werden die Ratten geopfert.</li>
</ol>2. CPIP-Modelleinrichtung
<ol><li>Anästhetisieren Sie alle Ratten (einschließlich Schein- und CPIP-Modellgruppen) mit Natriumphenobarbital (50 mg/kg, intraperitoneale Injektion [i.p.]). Halten Sie die Anästhesie mit bis zu 20 mg/kg/h Phenobarbital [i.p.], falls erforderlich. Überprüfen Sie die Reflexe jedes Tieres, indem Sie ihre Hinterpfote oder Schwanzspitze mit Zangen kneifen. Stellen Sie sicher, dass die Ratten nicht vor der Modelleinrichtung reagieren. Legen Sie Tierarzt Salbe auf die Augen, um Trockenheit während des Eingriffs zu vermeiden. Legen Sie die anästhesierten Ratten auf ein beheiztes Pad, das für das folgende Verfahren bei 37 °C gehalten wird.</li>
	<li>
Ischämie und Reperfusion der Hinterpfote
	<ol>
<li>Schmieren Sie die rechte Hinterpfote und den Knöchel mit Glycerin, sobald die Ratte bezähmt wird.</li>
		<li>Schieben Sie einen Nitrile 70 Durometer O-Ring mit einem Innendurchmesser von 7/32" (5,5 mm) in die größere Seite eines 1,5 mL Eppendorf-Rohrs (mit vor Gebrauch abgeschnittener Fangkappe). Legen Sie die Hinterpfote vorsichtig in das hohle Eppendorfrohr ein, bis sie den Boden erreicht.</li>
		<li>Nach und nach schieben Sie den O-Ring von der Röhre in die rechte Hintergliedsa in der Nähe des Sprunggelenks und legen Sie für 3 h. Wenden Sie die gleiche Behandlung auf eine Scheingruppe von Ratten an, mit der Ausnahme, dass ein gebrochener O-Ring, der abgeschnitten ist und keine Ischämie auslösen sollte, um den Knöchel gelegt werden sollte.</li>
		<li>Den O-Ring 3 h nach dem Ischämieschritt abschneiden. Beobachten Sie die Ratte sorgfältig, bis sie genug Bewusstsein zurückgewinnt, um die Brustbeschisse aufrechtzuerhalten. Beachten Sie, dass die Ratte, die Anästhesie erhalten hat, nicht an die Gesellschaft anderer Ratten zurückgebracht werden sollte, bis sie sich vollständig erholt hat.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Nocifensive Verhaltenstests
<ol><li>Legen Sie die Ratte in eine transparente Plexiglaskammer, die auf einem Mesh-Boden sitzt. Habituate die Ratte für 0,5 h vor jeder Verhaltensprüfung.</li>
	<li>
Mechanische Allodynie
	<ol>
<li>Verwenden Sie von Frey Filamente (0.4, 0.6, 1.0, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 15.0 und 26.0 g Filamente) für den Test. Beginnen Sie den Test aus dem mittleren Filament (4,0 g). Die Filamente vertikal auf die mittlere Plantaroberfläche der Hinterpfote auftragen. Etwas geeignete Kraft anwenden, um das Filament für bis zu 5 s zu biegen. Ein plötzliches Zurückziehen der Hinterpfote als Reaktion auf die Reize gilt als nocifensives Verhalten. Führen Sie den mechanischen Allodynie-Test an Tagen -3, -2, -1 und jeden zweiten Tag bis zum 13. Tag durch.</li>
		<li>Wenden Sie die Up-Down-Testmethode an, um den Schwellenwert zu testen. Wenden Sie die Dixon-Methode zur Berechnung der Schwelle für den Entzug der Pfote (PWT)13,14,15an.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Thermische Hyperalgesie
	<ol>
<li>Verwenden Sie die Hargreaves-Methode, um die thermische Hyperalgesie zu untersuchen. Richten Sie den Lichtstrahl, der von einer Glühbirne (50 W) auf die Hinterpfote emittiert wird, direkt an, um die Pfotenentzugslatenz (PWL) zu messen. Stellen Sie 20 s als Cut-off-Schwelle ein, um übermäßige Verletzungen durch die Heizung zu vermeiden.</li>
		<li>Wiederholen Sie jeden Test 3x in 5 min Intervallen für jede Hinterpfote. Nehmen Sie den Durchschnitt dieser drei Tests als PWL jeder Ratte16. Führen Sie den thermischen Hyperalgesie-Test an Tagen -3, -2, -1 und jeden zweiten Tag bis zum 13. Tag durch.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Capsaicin-induziertes akutes nocifensives Verhalten
	<ol>
<li>Capsaicin-Stammlösung (200 mM) mit Dimethylsulfoxid (DMSO) vorbereiten und in steriler phosphatgepufferter Saline (PBS) zur Hinterpfoteninjektion weiter auf 1:1000 verdünnen. Die endgültige DMSO-Konzentration in PBS beträgt 0,1% (Fahrzeug enthält 0,1% DMSO nur in PBS). Injizieren Sie Capsaicin oder Fahrzeug in die Hinterpfote (Intraplantar-Injektion) mit einem Volumen von 50 l mit einer 30 G-Nadel, die an einer 1 ml Spritze befestigt ist.</li>
		<li>Zeichnen Sie das nocifensive Verhalten (d. h. Lecken, Beißen oder Zucken der injizierten Pfote) mit einer Videokamera für 10 min direkt nach der Injektion auf und quantifiziert anschließend wie zuvor beschrieben17,18,19.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Nachd Pfotenödemauswertung: Bewerten Sie das Hinterpfotenödem, indem Sie die Erhöhung des Pfotendurchmessers messen. Messen Sie mit einem digitalen Bremssattel und berechnen Sie die Differenz zwischen dem Basalwert und dem Zust. Bewerten Sie die Veränderungen der Pfotendicke bei 15 min, 24 h, 48 h und 72 h nach dem Modellaufbau.</li>
</ol>

<ol><li>Goh, E. L., Chidambaram, S., Ma, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+regional+pain+syndrome%3A+a+recent+update%5BTitle%5D)+AND+%22Burns%2C+Trauma%22%5BJournal%5D)">Complex regional pain syndrome: a recent update.</a> Burns, Trauma. 5 (1), 2(2017).</li>
<li>Birklein, F., Ajit, S. K., Goebel, A., Rsgm, P., Sommer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+regional+pain+syndrome+-+phenotypic+characteristics+and+potential+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neurology%22%5BJournal%5D)">Complex regional pain syndrome - phenotypic characteristics and potential biomarkers.</a> Nature Reviews Neurology. 14 (5), (2018).</li>
<li>Shim, H., Rose, J., Halle, S., Shekane, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+regional+pain+syndrome%3A+a+narrative+review+for+the+practising+clinician%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">Complex regional pain syndrome: a narrative review for the practising clinician.</a> British Journal of Anaesthesia. , (2019).</li>
<li>Urits, I., Shen, A. H., Jones, M. R., Viswanath, O., Kaye, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+Regional+Pain+Syndrome%2C+Current+Concepts+and+Treatment+Options%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pain%2C+Headache+Reports%22%5BJournal%5D)">Complex Regional Pain Syndrome, Current Concepts and Treatment Options.</a> Current Pain, Headache Reports. 22 (2), 10(2018).</li>
<li>Helyes, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfer+of+complex+regional+pain+syndrome+to+mice+via+human+autoantibodies+is+mediated+by+interleukin-1-induced+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+National+Academy+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Transfer of complex regional pain syndrome to mice via human autoantibodies is mediated by interleukin-1-induced mechanisms.</a> Proceedings of National Academy Sciences of the United States of America. 116 (26), 13067-13076 (2019).</li>
<li>Coderre, T. J., Xanthos, D. N., Francis, L., Bennett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+post-ischemia+pain+%28CPIP%29%3A+a+novel+animal+model+of+complex+regional+pain+syndrome-Type+I+%28CRPS-I%3B+reflex+sympathetic+dystrophy%29+produced+by+prolonged+hindpaw+ischemia+and+reperfusion+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Chronic post-ischemia pain (CPIP): a novel animal model of complex regional pain syndrome-Type I (CRPS-I; reflex sympathetic dystrophy) produced by prolonged hindpaw ischemia and reperfusion in the rat.</a> Pain. 112 (1), 94-105 (2004).</li>
<li>Coderre, T. J., Bennett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hypothesis+for+the+cause+of+complex+regional+pain+syndrome-type+I+%28reflex+sympathetic+dystrophy%29%3A+pain+due+to+deep-tissue+microvascular+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Pain+Medicine%22%5BJournal%5D)">A hypothesis for the cause of complex regional pain syndrome-type I (reflex sympathetic dystrophy): pain due to deep-tissue microvascular pathology.</a> Pain Medicine. 11 (8), 1224-1238 (2010).</li>
<li>Klafke, J. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+and+chronic+nociceptive+phases+observed+in+a+rat+hind+paw+ischemia%2Freperfusion+model+depend+on+different+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Archiv+European+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Acute and chronic nociceptive phases observed in a rat hind paw ischemia/reperfusion model depend on different mechanisms.</a> Pflugers Archiv European Journal of Physiology. 468 (2), 229-241 (2015).</li>
<li>Tang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+between+astrocytic+colony+stimulating+factor+and+its+receptor+on+microglia+mediates+central+sensitization+and+behavioral+hypersensitivity+in+chronic+post+ischemic+pain+model%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behavioral+Immunology%22%5BJournal%5D)">Interaction between astrocytic colony stimulating factor and its receptor on microglia mediates central sensitization and behavioral hypersensitivity in chronic post ischemic pain model.</a> Brain Behavioral Immunology. 68, 248-260 (2018).</li>
<li>Kim, J. H., Kim, Y. C., Nahm, F. S., Lee, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Therapeutic+Effect+of+Vitamin+C+in+an+Animal+Model+of+Complex+Regional+Pain+Syndrome+Produced+by+Prolonged+Hindpaw+Ischemia-Reperfusion+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">The Therapeutic Effect of Vitamin C in an Animal Model of Complex Regional Pain Syndrome Produced by Prolonged Hindpaw Ischemia-Reperfusion in Rats.</a> International Journal of Medical Sciences. 14 (1), 97-101 (2017).</li>
<li>Yin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome+profiling+of+dorsal+root+ganglia+in+a+rat+model+of+complex+regional+pain+syndrome+type-I+reveals+potential+mechanisms+involved+in+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pain+Research%22%5BJournal%5D)">Transcriptome profiling of dorsal root ganglia in a rat model of complex regional pain syndrome type-I reveals potential mechanisms involved in pain.</a> Journal of Pain Research. 12, 1201-1216 (2019).</li>
<li>Hu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPV1+Channel+Contributes+to+the+Behavioral+Hypersensitivity+in+a+Rat+Model+of+Complex+Regional+Pain+Syndrome+Type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">TRPV1 Channel Contributes to the Behavioral Hypersensitivity in a Rat Model of Complex Regional Pain Syndrome Type 1.</a> Frontiers in Pharmacology. 10, 453(2019).</li>
<li>Dixon, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+analysis+of+experimental+observations%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pharmacology+and+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Efficient analysis of experimental observations.</a> Annual Review of Pharmacology and Toxicology. 20, 441-462 (1980).</li>
<li>Chai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroacupuncture+Alleviates+Pain+Responses+and+Inflammation+in+a+Rat+Model+of+Acute+Gout+Arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Electroacupuncture Alleviates Pain Responses and Inflammation in a Rat Model of Acute Gout Arthritis.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2018, 2598975(2018).</li>
<li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li>
<li>Fang, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parameter-specific+analgesic+effects+of+electroacupuncture+mediated+by+degree+of+regulation+TRPV1+and+P2X3+in+inflammatory+pain+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Parameter-specific analgesic effects of electroacupuncture mediated by degree of regulation TRPV1 and P2X3 in inflammatory pain in rats.</a> Life Sciences. 200, 69-80 (2018).</li>
<li>Tai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+Transient+Receptor+Potential+Cation+Channel+Member+A1+activation+in+the+irritation+and+pain+response+elicited+by+skin-lightening+reagent+hydroquinone%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Involvement of Transient Receptor Potential Cation Channel Member A1 activation in the irritation and pain response elicited by skin-lightening reagent hydroquinone.</a> Scientific Reports. 7 (1), 7532(2017).</li>
<li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPM8+is+the+principal+mediator+of+menthol-induced+analgesia+of+acute+and+inflammatory+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">TRPM8 is the principal mediator of menthol-induced analgesia of acute and inflammatory pain.</a> Pain. 154 (10), 2169-2177 (2013).</li>
<li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidized+Phospholipid+OxPAPC+Activates+TRPA1+and+Contributes+to+Chronic+Inflammatory+Pain+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Oxidized Phospholipid OxPAPC Activates TRPA1 and Contributes to Chronic Inflammatory Pain in Mice.</a> PLoS One. 11 (11), 0165200(2016).</li>
<li>Terkelsen, A. J., Gierthmuhlen, J., Finnerup, N. B., Hojlund, A. P., Jensen, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bilateral+hypersensitivity+to+capsaicin%2C+thermal%2C+and+mechanical+stimuli+in+unilateral+complex+regional+pain+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Bilateral hypersensitivity to capsaicin, thermal, and mechanical stimuli in unilateral complex regional pain syndrome.</a> Anesthesiology. 120 (5), 1225-1236 (2014).</li>
<li>Drummond, P. D., Morellini, N., Finch, P. M., Birklein, F., Knudsen, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+regional+pain+syndrome%3A+intradermal+injection+of+phenylephrine+evokes+pain+and+hyperalgesia+in+a+subgroup+of+patients+with+upregulated+alpha1-adrenoceptors+on+dermal+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Complex regional pain syndrome: intradermal injection of phenylephrine evokes pain and hyperalgesia in a subgroup of patients with upregulated alpha1-adrenoceptors on dermal nerves.</a> Pain. 159 (11), 2296-2305 (2018).</li>
<li>Minert, A., Gabay, E., Dominguez, C., Wiesenfeld-Hallin, Z., Devor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+pain+following+spinal+nerve+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Spontaneous pain following spinal nerve injury in mice.</a> Experimental Neurology. 206 (2), 220-230 (2007).</li>
<li>Kingery, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capsaicin+sensitive+afferents+mediate+the+development+of+heat+hyperalgesia+and+hindpaw+edema+after+sciatic+section+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Capsaicin sensitive afferents mediate the development of heat hyperalgesia and hindpaw edema after sciatic section in rats.</a> Neuroscience Letters. 318 (1), 39-43 (2002).</li>
<li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+cannabinoid+receptor+2+attenuates+mechanical+allodynia+and+neuroinflammatory+responses+in+a+chronic+post-ischemic+pain+model+of+complex+regional+pain+syndrome+type+I+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Activation of cannabinoid receptor 2 attenuates mechanical allodynia and neuroinflammatory responses in a chronic post-ischemic pain model of complex regional pain syndrome type I in rats.</a> European Journal of Neuroscience. 44 (12), 3046-3055 (2016).</li>
<li>Coderre, T. J., Xanthos, D. N., Francis, L., Bennett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+post-ischemia+pain+%28CPIP%29%3A+a+novel+animal+model+of+complex+regional+pain+syndrome-type+I+%28CRPS-I%3B+reflex+sympathetic+dystrophy%29+produced+by+prolonged+hindpaw+ischemia+and+reperfusion+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Chronic post-ischemia pain (CPIP): a novel animal model of complex regional pain syndrome-type I (CRPS-I; reflex sympathetic dystrophy) produced by prolonged hindpaw ischemia and reperfusion in the rat.</a> Pain. 112 (1-2), 94-105 (2004).</li>
<li>Weissmann, R., Uziel, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+complex+regional+pain+syndrome%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Rheumatology+Online+Journal%22%5BJournal%5D)">Pediatric complex regional pain syndrome: a review.</a> Pediatric Rheumatology Online Journal. 14 (1), 29(2016).</li>
<li>Kim, H., Lee, C. H., Kim, S. H., Kim, Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+complex+regional+pain+syndrome+in+Korea%3A+An+electronic+population+health+data+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of complex regional pain syndrome in Korea: An electronic population health data study.</a> PLoS One. 13 (6), 0198147(2018).</li>
<li>Tang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+differences+in+complex+regional+pain+syndrome+type+I+%28CRPS-I%29+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pain+Research%22%5BJournal%5D)">Sex differences in complex regional pain syndrome type I (CRPS-I) in mice.</a> Journal of Pain Research. 10, 1811-1819 (2017).</li>
</ol>

Die Autoren erklären keine Interessenkonflikte in diesem Werk.

Dieses Protokoll beschreibt die detaillierten Methoden zur Etablierung eines Ratten-CPIP-Modells durch Anwendung von Ischämie/Reperfusion auf hintere Gliedmaßen der Ratten. Es beinhaltet die Bewertung des Aussehens der Hinterbeine, Ödeme, mechanische/thermische Überempfindlichkeiten und akute nocifensive Verhaltensweisen als Reaktion auf Capsaicin-Injektion.
LimbIschämie/Reperfusion ist ein häufiger Faktor, der bei menschlichen Patienten zu CRPS-I beiträgt12. Dieses Pro...

Komplexes regionales Schmerzsyndrom (CRPS) reprents komplexe und chronische Schmerzsymptome infolge von Frakturen, Trauma, Chirurgie, Ischämie oder Nervenverletzungen1,2,3. CRPS wird in 2 Unterkategorien eingeteilt: CRPS Typ-I und Typ-II (CRPS-I und CRPS-II)4. Epidemiologische Studien ergaben, dass die Prävalenz von CRPS etwa 1:20005betrug. CRPS-I, das keine offensichtlichen Nervenschäden zeigt, kann zu chronischen Schmerzen führen und die Lebensqualität der Patienten dramatisch beeinträchtigen. Die derzeit verfügbaren Behandlungen zeigen unzureichende therapeutische Wirkungen. Daher bleibt CRPS-I ein wichtiges und herausforderndes klinisches Problem, das angegangen werden muss.
Die Entwicklung eines präklinischen Tiermodells, das CRPS-I iiiiert, ist entscheidend für die Erforschung der Mechanismen, die CRPS-I zugrunde liegen. Um dieses Problem anzugehen, entwarfen Coderre et al. ein Rattenmodell, indem sie verlängerte Ischämie und Reperfusion auf die hintere Gliedmaße aufwendeten, um CRPS-I6zu rekapitulieren. Es ist bekannt, dass Ischämie/Reperfusionsverletzung eine der Hauptursachen für CRPS-I7ist. Das Ratten-CPIP-Modell weist viele CRPS-I-ähnliche Symptome auf, zu denen Hinterd-Gliederödem eödem und Hyperämie im frühen Stadium nach der Modelleinrichtung gehören, gefolgt von anhaltenden thermischen und mechanischen Überempfindlichkeiten6. Mit Hilfe dieses Modells wird vorgeschlagen, dass zentrale Schmerzsensibilisierung, periphere TRPA1-Kanalaktivierung und reaktive Sauerstoffspezies usw. zu CRPS-I8,9,10beitragen. Wir haben vor kurzem erfolgreich das CPIP-Rattenmodell etabliert und die RNA-Sequenzierung der dorsalen Wurzelganglien (DRGs) durchgeführt, die die betroffene Hinterpfote11innervate. Wir entdeckten einige mögliche Mechanismen, die möglicherweise an der Vermittlung der Schmerzüberempfindlichkeiten von CRPS-I11beteiligt sind. Wir identifizierten ferner den transienten Rezeptor-Potential-Vanilloid-Kanal 1 (TRPV1) in DRG-Neuronen als wichtigen Beitrag zu den mechanischen und thermischen Überempfindlichkeiten von CRPS-I12.
In dieser Studie haben wir die detaillierten Verfahren beschrieben, die bei der Erstellung des Rattenmodells von CPIP beteiligt sind. Wir haben das Ratten-CPIP-Modell weiter evaluiert, indem wir die mechanischen und thermischen Überempfindlichkeiten sowie deren Reaktionsfähigkeit auf akute Capsaicin-Herausforderungen gemessen haben. Wir schlagen vor, dass das Ratten-CPIP-Modell ein zuverlässiges Tiermodell für die weitere Untersuchung der Mechanismen von CRPS-I sein kann.

<table><tbody><tr><td>1,5 ml Eppendorf Röhrchen</td><td>Eppendorf</td><td>22431021</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1435</td><td></td></tr><tr><td>Capsaicin</td><td>APEXBIO</td><td>A3278</td><td></td></tr><tr><td>Digitaler Messschieber</td><td>Meinaite</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>O-Ring</td><td>O-Ringe West</td><td>Nitril 70 Durometer</td><td>7/32 Zoll Innendurchmesser</td></tr><tr><td>Plantarprüfgerät</td><td>UGO Basile, Italien</td><td>37370</td><td></td></tr><tr><td>von Frey filaments</td><td>UGO Basile, Italien</td><td>NC12775</td><td></td></tr></tbody></table>

chronisches post-ischemia schmerzmodell für komplexes regionales schmerzsyndrom typ-i bei ratten

Chronic Post-Ischemia Pain Model for Complex Regional Pain Syndrome Type-I in Rats

Das komplexe regionale Schmerzsyndrom Typ-I (CRPS-I) ist eine neurologische Erkrankung, die bei Patienten starke Schmerzen verursacht und nach wie vor eine ungelöste Erkrankung ist. Die zugrunde liegenden Mechanismen von CRPS-I müssen jedoch noch aufgedeckt werden. Es ist bekannt, dass Ischämie/Reperfusion einer der führenden Faktoren ist, die CRPS-I verursacht. Mittels längerer Ischämie und Reperfusion der Hintergliedsa wurde das modellierte chronische Post-Ischämie-Schmerz (CPIP) der Ratte etabliert, um CRPS-I nachzuahmen. Das CPIP-Modell hat sich zu einem anerkannten Tiermodell für die Untersuchung der Mechanismen von CRPS-I. Dieses Protokoll beschreibt die detaillierten Verfahren bei der Erstellung des Rattenmodells von CPIP, einschließlich Anästhesie, gefolgt von Ischämie/Reperfusion der Hintergliedsa. Die Merkmale des Ratten-CPIP-Modells werden weiter bewertet, indem die mechanischen und thermischen Überempfindlichkeiten der Hinterbleibse sowie die nozifensiven Reaktionen auf akute Capsaicin-Injektion gemessen werden. Das Ratten-CPIP-Modell weist mehrere CRPS-I-ähnliche Manifestationen auf, darunter Hinterd-Gliederödem und Hyperämie im frühen Stadium nach dem Aufbau, anhaltende thermische und mechanische Überempfindlichkeiten und erhöhte nocifensive Reaktionen auf akute Capsaicin-Injektion. Diese Eigenschaften machen es zu einem geeigneten Tiermodell für die weitere Untersuchung der mechanismen, die an CRPS-I beteiligt sind.

Nach der Platzierung des O-Rings am Knöchel zeigte die ipsilaterale Hinterpfotenhaut Zyanose, ein Hinweis auf Gewebehypoxie (Abbildung 1A). Nach dem Schneiden des O-Rings begann sich die ipsilaterale Hinterpfote mit Blut zu füllen und zeigte eine starke Schwellung, die ein intensives Anzeichen von Hyperämie zeigte (Abbildung 1A). Die Pfotenschwellung nahm allmählich ab und kehrte nach dem ischämischen/reperfusionsverfahren wiede...

Hier ist ein Protokoll, das Schritte zur Etablierung eines Tiermodells für chronische Post-Ischämie-Schmerzen (CPIP) beschreibt. Dies ist ein anerkanntes Modell, das das menschliche komplexe regionale Schmerzsyndrom Typ-I iiaht. Mechanische und thermische Überempfindlichkeiten werden weiter ausgewertet, sowie Capsaicin-induzierte nocifensive Verhaltensweisen, die im CPIP-Rattenmodell beobachtet wurden.

Chronisches Post-Ischemia Schmerzmodell für komplexes regionales Schmerzsyndrom Typ-I bei Ratten

Complex regional pain syndrome type-I (CRPS-I) is a neurological disease that causes severe pain among patients and remains an unresolved medical ...

Der Mechanismus, der DEM CRPS I zugrunde liegt, ist noch unklar. Die Entwicklung eines präklinischen Tiermodells, das CRPS I iimitiert, wird entscheidend für die Erforschung der Mechanismen sein, die CRPS I zugrunde liegen. Das Ratten-CPIP-Modell weist viele CRPS-I-ähnliche Simitance auf, zu denen Hindlimb-Ödeme und Hyperämie im frühen Stadium gehören. Nach der Modelleinrichtung, gefolgt von anhaltenden thermischen und mechanischen Überempfindlichkeiten.Beginnen Sie mit der Anästhesisierung aller Ratten mit Natriumphenobarbital. Stellen Sie sicher, dass die Ratten richtig beästhebt werden, indem Sie ihre Hinterpfote oder ihren Schwanz mit Zangen kneifen. Und legen Sie Tierarzt Salbe auf die Augen.Halten Sie die Ratte während des Eingriffs auf einem 37 Grad Celsius erhitzten Pad. Schmieren Sie die rechte Hinterpfote und den Knöchel mit Glycerin. Dann schieben Sie einen Nitrile 70 Durometer O Ring in die größere Seite eines ein Punkt fünf Milliliter Rohr mit der Fangkappe abgeschnitten.Setzen Sie die Hinterpfote vorsichtig in das Hohlrohr ein, bis sie den Boden erreicht. Nach und nach schieben Sie den O-Ring vom Rohr in die rechte Hinternin in der Nähe des Sprunggelenks. Und lassen Sie es dort für drei Stunden.Wenden Sie die gleiche Behandlung auf die Scheingruppe von Ratten an, außer mit einem gebrochenen O-Ring, der keine Ischämie auslösen sollte. Nach drei Stunden den O-Ring abschneiden und die Ratte überwachen, bis sie genug Bewusstsein zurückgewinnt, um die Brustbescheinheit aufrechtzuerhalten. Stellen Sie die Ratte nicht in die Gesellschaft anderer Ratten, bis sie vollständig aus der Anästhesie geborgen ist.Legen Sie die Ratte in eine transparente Plexiglaskammer auf einem Mesh-Boden und gewöhnen Sie die Ratte 30 Minuten lang an die Umwelt, bevor Sie verhaltensauffällig werden. Verwenden Sie von frey Filamente, um die Ratte auf mechanische Allodynie zu testen. Beginnen Sie den Test vom mittleren Filament aus, indem Sie ihn vertikal auf die mittlere Plantaroberfläche der Hinterpfote auftragen.Tragen Sie die geeignete Kraft auf, um das Filament für bis zu fünf Sekunden zu biegen. Ein plötzliches Zurückziehen der Pfote gilt als nocifensives Verhalten. Führen Sie den mechanischen Allodynie-Test an den Tagen drei, zwei, eins und jeden zweiten Tag bis zum 13. Tag durch.Wenden Sie die Up-Down-Testmethode an, um den Schwellenwert zu testen, und eine Dickson-Methode zur Berechnung der 50-Prozent-Pffotenentzugsschwelle. Um auf thermische Hyperalgesie zu testen, verwenden Sie hargreaves-Methode, indem Sie direkt auf den Lichtstrahl zielen, der von einer 50-Watt-Lampe auf die Hinterpfote emittiert wird. Messen Sie die Pfotenentzugslatenz, indem Sie 20 Sekunden als Cutoff-Schwelle festlegen, um übermäßige Verletzungen zu vermeiden.Wiederholen Sie jeden Test dreimal in fünf Minuten Intervallen für jede Hinterpfote, und nehmen Sie den Durchschnitt als Pfote Entzugslatenz. Führen Sie den thermischen Hyperalgesie-Test an den Tagen drei, zwei, eins und jeden zweiten Tag bis zum 13. Tag durch. Um auf Capsaicin induziertes akutes nocifensives Verhalten zu testen, bereiten Sie die 200 Millimolar Capsaicin-Stammlösung mit DMSO vor und verdünnen Sie sie weiter ein bis 1 000 in PBS zur Injektion.Capsaicin ist ein Reagenz, das Gelenkreizungen bei Haut, Augen und Atmung verursachen kann. Es ist wichtig, eine Maske und eine Brille bei der Zubereitung von Capsaicin-Lösung zu tragen. Dann injizieren Sie 50 Mikroliter des Capsaicin oder eines Fahrzeugs in die Hinterpfote mit einer 30-Spur-Nadel, die an einer Ein-Milliliter-Spritze befestigt ist.Zeichnen Sie ein nocifensives Verhalten auf, z. B. lecken, beißen oder zucken der injizierten Pfote mit einer Videokamera für 10 Minuten nach der Injektion. Bewerten Sie das Hinterpfotenödem, indem Sie die Erhöhung des Pfotendurchmessers auf 15 Minuten, 24 Stunden, 48 Stunden und 72 Stunden nach dem Modellaufbau messen. Nach der Platzierung des O-Rings am Knöchel zeigte die ipsilaterale Hinterpfotenhaut Zyanose, ein Hinweis auf Gewebehypoxie.Nach dem Schneiden des O-Rings begann sich die Pfote mit Blut zu füllen und zeigte eine starke Schwellung, was auf eine intensive Hyperämie hindeutet. Die Schwellung nahm allmählich ab und normalisierte sich 48 Stunden nach dem Eingriff wieder. Einen Tag nach der Modelleinrichtung zeigte die ipsilaterale Hinterpfote der CPIP-Gruppe offensichtliche mechanische Allodynien, die 13 Tage des Beobachtungszeitrahmens anhielten.Die kontralaterale Hinterpfote der CPIP-Gruppe zeigte ebenfalls 13 Tage lang mechanische Hyperalgesie. Bei der Messung der thermischen Hyperalgesie zeigten bilaterale Hinterpfoten von CPIP-Ratten eine signifikant reduzierte Entzugslatenz als Reaktion auf schädliche thermische Reize im Vergleich zu den Scheingruppenratten. Die thermische Hyperalgesie der ipsilateralen Hinterpfote hielt bis zum Ende des Beobachtungszeitrahmens an, während die thermische Hyperalgesie der kontralateralen Hinterpfote sieben Tage andauerte.Die Schein- und CPIP-Gruppen wurden mit der Capsaicin-Injektion auf nocifensives Verhalten getestet. Bei der Injektion eines Fahrzeugs zeigte die Scheingruppe eine leichte nocifensive Reaktion und die CPIP-Gruppe zeigte eine signifikant höhere Reaktion. Noch wichtiger ist, dass CPIP-Ratten signifikant höhere Reaktionen auf die Capsaicin-Injektion zeigten als die Scheingruppe, was darauf hindeutet, dass die CPIP-Ratten ein Ähnliches wie menschliche Patienten mit CRPS-I.By diesem Verfahren aufweisen, die Ratten werden vor und während der Modelleinrichtung besäutet.Das CPIP-Rattenmodell, das in diesem von Ischmia und Human CRPS I erstellten Protokoll beschrieben wird, mag Simitance. Familien dieser Modelle, mehr Mechanismus über CRPS I kann untersucht werden.

chronic-post-ischemia-pain-model-for-complex-regional-pain-syndrome

Research

Forschung

JoVE Journal

Behavior

Verhalten

Die Verschont Nerve Injury Tiermodell wird hier als ein Maus-Modell von peripheren neuropathischen Schmerzen nach einer partiellen Denervation der Ischiasnerv durch Läsion der Tibia-und N. peronaeus Filialen beschrieben, so dass die verbleibenden Nervus suralis intakt. Verhaltensmodifikation durch mechanische Allodynie wird durch von Frey Filamente quantifiziert.

Die Verschont Nerve Injury (SNI) Modell induzierte mechanische Allodynie in Mäusen

Aufgrund der Einfachheit des chirurgischen Eingriffs und der robusten Verhaltensauffälligkeiten, ist eine chronische Verengung der Ischiasnerv eines der herausragenden Tiermodellen des neuropathischen Schmerzes. Innerhalb von 24 Stunden nach der Operation wird Schmerzen Überempfindlichkeit gegründet und kann quantitativ gemessen werden mit Hilfe eines von Frey Aesthesiometer (mechanische Prüfung) und plantar Analgesie Meter (Thermal-Test).

Chronische Verengung des Ischiasnerv und Schmerzen Überempfindlichkeit Testing in Ratten

Neuropathische Schmerzen sind die Folge einer Verletzung oder Erkrankung des somatosensorischen Systems. Die "Manschette Modell" von neuropathischen Schmerzen bei Mäusen besteht aus der Implantation einer Polyethylen Manschette um den Hauptzweig des Ischiasnervs. Mechanische Allodynie wird mit Hilfe von Frey Filamente getestet.

Der Ischiasnerv cuffing Modell von neuropathischen Schmerzen bei Mäusen

Dieses Manuskript beschreibt ein Nagetiermodell zur Untersuchung von trigeminalen neuropathischen Schmerzen. Zu den beschriebenen Verfahren gehören chirurgische Eingriffe zur Durchführung einer chronischen Einschnürungsverletzung des Nervus infraorbitalis der Ratte und die postoperativen Verhaltenstests zur Messung der Veränderungen des spontanen und evozierten Verhaltens, die auf anhaltende Schmerzen und Allodynie hinweisen.

Chronische Verengung Verletzung des Ratten N. infraorbitalis (Ionen CCI) zu Trigeminal Neuropathischer Schmerz Studieren

Wir präsentieren ein Protokoll zur Messung der Aufnahme von [14C]-Iodantipyrin (IAP) und zur Bewertung der Aktivierung von neuronalen Substraten, die an zentralen Schmerzen nach Schlaganfall (CPSP) in einem Nagetiermodell beteiligt sind.

Autoradiographiebild Messungen von [<sup&gt; 14</sup&gt; C] -Iodoantipyrine in Rattengehirn Nach Central Post-Stroke Schmerz

Die modifizierte Operation ist eine vereinfachte Methode für das Modell der Nervenverletzung von Mäusen oder Ratten, die nur eine Ligatur und einen Schnitt erfordern, um sowohl den Nervus peroneus als auch den Nervus suralis zu verletzen.

Modifiziertes Modell der Chirurgie der Nervenverletzung bei neuropathischen Schmerzen bei Mäusen

Der mechanische Konfliktvermeidungsassay wird als nichtreflexives Auslesen der Schmerzempfindlichkeit bei Mäusen verwendet, um affektiv-motivationale Reaktionen in einer Vielzahl von Mausschmerzmodellen besser zu verstehen.

Mechanischer Konfliktvermeidungstest zur Messung des Schmerzverhaltens bei Mäusen

Methoden zur einfachen, schnellen Induktion eines Rückenschmerzmodells bei Mäusen werden hier unter Verwendung einer intraligamenten Injektion eines Plasminogenaktivators im Urin bereitgestellt.

Urokinase-Typ-Plasminogen-Aktivator-induziertes Modell für Rückenschmerzen bei Mäusen

Die partielle Ligatur des Ischiasnervs induziert lang anhaltende chronische neuropathische Schmerzen, die durch übertriebene Reaktionen auf thermische und mechanische Reize gekennzeichnet sind. Dieses Mausmodell für neuropathische Schmerzen wird häufig verwendet, um innovative Therapien zur Schmerzbehandlung zu untersuchen. Dieser Artikel beschreibt detailliert das chirurgische Verfahren zur Verbesserung der Standardisierung und Reproduzierbarkeit.

Partielle Ischiasnervligatur: Ein Mausmodell für chronische neuropathische Schmerzen zur Untersuchung der antinozizeptiven Wirkung neuartiger Therapien

Eine chronische Einschnürungsverletzung des distalen Nervus infraorbitalis bei Mäusen führt zu Veränderungen des spontanen Verhaltens (erhöhte Aktivität bei der Gesichtspflege) und des nozifensiven Verhaltens als Reaktion auf taktile Stimulation (Überempfindlichkeit auf von-Frey-Haarstimulation), die Anzeichen von anhaltenden Schmerzen und Allodynie sind und als Modell für trigeminale neuropathische Schmerzen dienen.

Chronische Einschnürungsverletzung des distalen Nervus infraorbitalis (DIoN-CCI) bei Mäusen zur Untersuchung von trigeminalen neuropathischen Schmerzen

Dieses Protokoll stellt ein reproduzierbares Rattenmodell vor, das sensorische Nerven verwendet, um menschliche Neuromschmerzen nachzuahmen und chirurgische Behandlungen zu bewerten, und bietet ein wertvolles Werkzeug für die translationale Neuromforschung.

Neuartiges chirurgisches Nagetiermodell zur Untersuchung von Behandlungsmöglichkeiten für Neuromschmerzen mit gezielter Muskelreinnervation durch den Nervus saphenus

Erfahren Sie die Etablierung eines chronischen post-ischämischen Schmerzmodells bei Ratten zur Untersuchung komplexer regionaler Schmerzsyndrome. Dieses Protokoll ermöglicht die Evaluation mechanischer und thermischer Hypersensitivitäten.

Chronisches Post-Ischemia Schmerzmodell für komplexes regionales Schmerzsyndrom Typ-I bei Ratten

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