Reduzierte Komplikationen nach arterieller Wiederverbindung in einem Rattenmodell der orthotopischen Lebertransplantation

Ratten-Orthotop-Lebertransplantationsmodell ist ein leistungsfähiges Werkzeug, um mehrere Aspekte der Lebertransplantation zu untersuchen. Von einer Immunantwort auf die Infektion bis hin zu technischen Aspekten des Verfahrens. Die Hauptvorteile dieser Technik sind, dass es Komplikationen reduzieren kann, besser komödliche Lebertransplantation darstellen, und das Überleben des Empfängers verbessern.

Dieses modifizierte orthotopische Lebertransplantationsprotokoll der Ratte imitiert Aspekte der menschlichen Lebertransplantation und dient als variables und klinisch relevantes Forschungsmodell. Es ist unsere Hoffnung, dass der Betrachter durch die visuelle Demonstration alle Details lernen und die Lernkurve verkürzen kann, um die für diese Technik erforderliche Mikrochirurgie-Fähigkeit zu meistern. Nach der Injektion von 300 internationalen Einheiten Heparin-Natrium in die intrahepatische minderwertige Vena cava einer anästhesierten 12 bis 14 Wochen alten Ratte, machen Sie einen fünf Millimeter großen Schnitt unterhalb der Gallengangbifurkation und setzen Sie den Gallengangstent in den gemeinsamen Gallengang ein.

Sichern Sie den Stent mit einer 7-0 Seidenligatur, einen Millimeter über dem Schnitt und einer Ligatur 10 Millimeter unter der Bifurkation. Schneiden Sie den Gallengang zwischen den beiden Krawatten und entlarven Sie die richtige Leberarterie. Teilen Sie die gastroduodenale Arterie zwischen zwei 7-0 Seidenligaturen, und entlarven Sie die linke Magenarterie, Milzarterie und Zöliakie Stamm.

Dann schneiden Sie die linke Magenarterie, Splenic Arterie, und Zöliakie Stamm zwischen den Arterien binden. Verwenden Sie eine 20-Milliliter-Spritze mit einer 21,5-Meter-Nadel, um langsam 20 Milliliter vier Grad Celsius Ringers Laktatlösung in die Portalvene zu injizieren. Um die Spenderleber vorzubereiten, schneiden Sie die Bifurkation des Zöliakie-Stamms, der Milzarterie und der linken Magenarterie auf, um eine größere arterielle Ärmelmanschette zu bilden, und legen Sie den 1,5 Millimeter langen 24 Gauge arteriellen Stent über die Manschette in die gemeinsame Leberarterie des Spenders ein.

Dann sichern Sie den Stent mit einem 8-0 Polypropylen-Ligatur und spülen Sie den Stent mit Ringers Laktatlösung. Nachdem Sie die Portalvene eines 12 bis 14 Wochen alten Rattenempfängers freigelegt haben, teilen Sie den Empfängergallengang 0,5 Zentimeter unter einer Fliesenlegerbifurkation auf und legen Sie einen Gallengangstent in den distalen gemeinsamen Gallengang ein. Setzen Sie die linke, mittlere und rechte Leberarterie aus und binden Sie die Gefäße distal an die Leberarterienverzweigung.

Schneiden Sie die Arterien in der Nähe der Leber über den Krawatten und legen Sie ein langes dünnes Stück Gaze hinter die super hepatische minderwertige Vena cava. Legen Sie einen 3D-gedruckten intrahepatischen Venen-Cava-Halter hinter die intrahepatische Vena cava und verwenden Sie eine Tenno nicht resorbierbare Monofilament-Nähte, um die Enden des 3D-gedruckten Griffs zusammenzunähen. Binden Sie eine 7-0 Seidenligatur unter dem 3D-gedruckten Halter zwischen dem intrahepatischen Venencava und der Portalvene und klemmen Sie die intrahepatische Venenhöhle knapp über der rechten Nierenvene unterhalb des 3D-gedruckten Cava-Halters.

Klemmen Sie die Portalvene knapp über der pyloric Vene und unter dem 3D-gedruckten PV-Halter. Mit einer Drei-Milliliter-Spritze mit einer 27-Meter-Nadel, die angebracht ist, spülen Sie zwei Milliliter 37 Grad Celsius Ringer-Laktatlösung über die Bifurkation der Portalvene und klemmen Sie die superhepatische Venenhöhle mit einer Kitzmiller-Klemme über die Leber. Dann unter die Klemme so nah wie möglich an der Leber schneiden und über die 3D-gedruckten Halter sowohl für die Portalvene und die interhepatische Vena cava schneiden, um die Empfängerleber zu entfernen.

Für eine Spenderlebertransplantation können Sie die Spenderleber in der Körperhöhle des Empfängers so sorgfältig ausrichten, dass eine obere Kopfsteinpflaster-Anastomose entsteht. Legen Sie die Portalvenenmanschette vom Spender in die Empfängerportalvene ein und ziehen Sie die 7-0 Seidenkrawatte fest. Entfernen Sie die atraumatische Klemme aus der superhepatischen Venenhöhle und entfernen Sie den mikrovaskulären Clip für die Portalvene.

Nach der erneuten Durchblutung der Leber mit warmem Blut, legen Sie die Spender intrahepatische Vena Cava Manschette in den Empfänger intrahepatischen Vena cava und sichern Sie das Gefäß mit der 7-0 Seidenkrawatte. Entfernen Sie dann den intrahepatischen Vena-Cava-Clip des Spenders, bevor Sie den Empfängerclip entfernen. Um eine arterielle Anastomose durchzuführen, schneiden Sie den Teil des Zöliakiestamms vom Spender ab, der über den Stent hinausgeht, und klemmen Sie die richtige Leberarterie des Empfängers.

Schneiden Sie die Krawatte am Ende und jedes zusätzliche Gewebe, das das Gefäß umgibt, ab. Und verwenden Sie Ringers Laktatlösung, um die Lumen des Spender- und Empfängergefäßenen zu spülen. Mit einer gekrümmten Nadel legen Sie eine 10-0 Ethilon Naht durch den linken Aspekt der Spender-Leberarterie, 2,5 Millimeter über der distalen Öffnung des Stents, und durch das Ende des Stents.

Transfixieren Sie die richtige Leberarterie 0,5 Millimeter unterhalb der Gefäßöffnung von der linken Seite des Schiffes auf die rechte Seite der Arterie. Legen Sie die nächste Naht durch die rechte Wand der Spender-Hederarterie von innen nach außen, in einem Abstand von der Stentöffnung identisch mit dem ursprünglichen Stich, und ziehen Sie an den beiden Enden des 10-0 nicht resorbierbaren Monofilaments nach oben, um die richtige Leberarterie des Empfängers nach oben zu schieben, und in den Leberarterienstent. Dann binden Sie das 10-0 nicht resorbierbare Monofilament mit sich selbst über die Spender-Leberarterie.

Spülen Sie sowohl den Empfänger- als auch den Spendergallengang, und legen Sie die Spender Gallengänge Stent in den Gallengang des Empfängers ein. Ziehen Sie dann die Krawatte fest, die zuvor um den Empfänger Gallengang gelegt wurde. In diesem repräsentativen Experiment zeigte das orthotopische Lebertransplantationsmodell der orthotopischen Lebertransplantation der nicht-hepatischen Arterienanastomoseratte 50 bzw. 37,5% Überlebensraten, nach der Operation bei 21 Tagen bzw. 60 Tagen.

Im Gegensatz dazu erhöhte das optimierte Hepatische Gelenkwiederverbindungsverfahren das langfristige Überleben signifikant. Die histologische Analyse einer repräsentativen Untergruppe transplantierter Tiere ohne hepatische Arterienwiederverbindung ergab anzeichen für eine hypoxische Leberverletzung mit zentraler lobulärer Nekrose am sechsten Tag und nach der Transplantation. Umfangreiche Lebernekrose war mit enorm erhöhten Konzentrationen von Alanin-Immun-Transferees und Aspartat-Aminotransferase bei diesen Tieren verbunden.

Im Gegensatz dazu zeigten transplantierte Ratten mit Leberarterienwiederverbindung keine Anzeichen einer Leberverletzung und histologische Analysen zeigten eine normale Leberparenchymstruktur mit organisierten Acini, Lobulen, Arterien und Gallengängen. Darüber hinaus zeigte die histologische Analyse der Lebern von nicht leberatorischen Arterien-Wiederverbindungsmodell Ratten reaktive Veränderungen nach hypoxischen Leberverletzungen. Einschließlich Der Verbreitung des Gallengangs, der Periportalfibrose und Entzündungen sowie des verzerrten Leberparenchyms.

Dieses Protokoll kann angepasst werden, um viele immunologische und chirurgische Aspekte der Lebertransplantation zu untersuchen und kann als Modell für die Erprobung neuartiger therapeutischer Interventionen dienen, die für die Transplantation relevant sind.