Einrichtung eines akuten Pontininfarkts bei Ratten durch elektrische Stimulation

Wir stellen ein Protokoll zur Verfügung, um Infarkt in einem Rattenhaufen zu etablieren. Dieses Pontin-Infarkt-Rattenmodell wurde leicht durchgeführt, leicht reproduziert und sehr erfolgreich modell. Die elektrische Stimulation könnte verwendet werden, um Infarkt in jedem anderen Gehirnbereich wie Thalamus zu machen.

Wer dieses Modell durchführen will, sollte vor dem Experiment die Pontinautonomie lernen. Wägen Sie vor der Operation die Ratten ab und bewerten Sie ihre neurologische Leistung gemäß den Verhaltenstests, wie im Begleittext beschrieben. Das Heizkissen unmittelbar vor der Anästhesie auf 37 Grad Celsius vorheizen und den Schädelbohrer am Halter am stereotaxic-Rahmen befestigen.

Bestätigen Sie einen Mangel an Reaktion auf Pedalreflex in der ersten anästhesierten Ratte und montieren Sie die Ratte auf den stereotaxic Rahmen in der anfälligen Position auf dem Heizkissen. Positionieren Sie die Ohrstangen über dem Gehörgang, um den Kopf zu sichern, und achten Sie darauf, dass der Schädel horizontal gehalten wird, um ein Verkleben der Injektion zu vermeiden. Tragen Sie Salbe auf die Augen des Tieres auf und verwenden Sie einen Mikrorasierer, um das Haar aus dem Schädel zu entfernen.

Verwenden Sie einen Marker, um eine drei Zentimeter große Linie entlang der Mittellinie des Schädels von der Linie des seitlichen Canthus bis 0,5 Zentimeter hinter der hinteren Fontanelle zu zeichnen und verwenden Sie ein Skalpell, um einen Mittellinienschnitt entlang der markierten Linie zu machen. Verwenden Sie einen Wattestäbchen, um Blut zu entfernen und legen Sie ein Stück chirurgisches Band auf jeder Seite der Hautklappe, um den Schädel auszusetzen. Verwenden Sie einen neuen Tupfer mit 0,9% Natriumchlorid getränkt, um sanft jedes Bindegewebe aus dem Schädel zu entfernen und das Bregma zu lokalisieren.

Verwenden Sie einen Feinspitzenmarkerstift, um den zentralen Punkt des Bregma als Ursprungspunkt anzuzeigen, legen Sie den Bohrer auf sechs Millimeter vorderes Hinterteil, zwei Millimeter medial seitlich. Verwenden Sie den Bohrer, um eine Kraniotomie mit einem Millimeter Durchmesser sorgfältig durchzuführen. Als nächstes ersetzte der Bohrer eine 22-Spur-Sonde mit einem isolierten Mantel mit der Spitze, die zwei Millimeter über dem proximalen Ende des Mantels platziert wurde.

Legen Sie die Blätter sieben Millimeter in das Gehirn und fördern Sie die Sonde entlang der Hülle, bis die Oberseite der Sonde neun Millimeter unter der Oberfläche des Gehirns ist. Schließen Sie die Elektroden an einen elektrischen Stimulator an und schließen Sie die Anode an die Sonde an. Dann verbinden Sie sich mit der Kathode mit dem Ohr der Ratte.

Als nächstes schalten Sie den elektrischen Stimulator ein und stellen Sie die einzelne Pulsbreite auf 4, 050 Millisekunden, die Spannung auf 50 Volt und den Strom auf vier Milliampere ein. Lassen Sie die Sonde nach der Stimulation fünf Minuten in Position, bevor Sie das Gerät aus dem Gehirn entfernen. Bedecken Sie die Kraniotomie mit Knochenzement und lassen Sie den Zement trocknen, bevor Sie 4,0 Polyamid-Nahtfilamente verwenden, um die Wunde zu schließen.

Nach drei oder vier Stichen, binden 2-1-1 Standard chirurgische Knoten. Dann intraperitoneally injizieren Sie die Ratte mit 250 Mikroliter Penicillin und überwachen Sie die Ratte alle 15 Minuten, bis sie vollständig wach ist, bevor Sie das Tier in seinen Käfig zurückbringen. In dieser Analyse wurden sechs Tiere der Operation unterzogen, wie nachgewiesen, und sechs Tiere wurden als Kontrollen behandelt.

Die Gehirnscheiben in diesen Bildern wurden von einer Ratte pro Gruppe abgeleitet. Die MRT-Untersuchung ergab, dass sich der Infarkt in der Basis der Pons befand, die anterolaterale Infarkte bei menschlichen Patienten imitierten. Da eine isolierte Hülle verwendet wurde, wurde der Infarkt im Kortex, Kleinhirn oder Mittelhirn nicht beobachtet.

Diffusionsgewichtete Bilder zeigten auch den akuten Pontininfarkt. TTC-Färbung wurde verwendet, um den Infarkt 24 Stunden nach der Operation zu bestätigen. Wie erwartet war das Infarktvolumen in der Operationsgruppe deutlich höher als in der Kontrollgruppe.

Verhaltenswerte wurden vor und nach der Operation gemessen. Im Vergleich zur Kontrollgruppe kreisten Ratten mit einem Pontininfarkt nach links. Signifikante Unterschiede wurden bei den Longa-, Berderson-, Gliedmaßenplatzierungs-, Strahlbilanz- und Klebstoffentfernungs-Somatosensorischen Testergebnissen zwischen den Raten mit Pontininfarkt und Kontrollgruppenratten beobachtet.

Jeder bestimmte Hirnbereich wird durch die elektrische Stimulation zerstört.