Name: Durchführen von colonoscopic-Guided Pinch Biopsien bei Mäusen und Bewertung nachfolgender Gewebeveränderungen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-05T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 52 s
Description: Lernen Sie die koloskopisch geführte Pinzettebiopsie bei Mäusen zur Untersuchung kolonaler Wundheilung und molekularer Veränderungen. Diese Methode ermöglicht präzise Kontrolle über Verletzungsort und Heilungszeitpunkt.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Diese Arbeit wurde durch Stipendien der Crohn es and Colitis Foundation (D.C.M) und der New York Crohn es Foundation (D.C.M. und A.J.D.) unterstützt. Die Autoren danken Frau Carmen Ferrara für die Unterstützung bei der Erstellung der Videobegleitung zu diesem Artikel.

Alle hier beschriebenen Verfahren wurden vom Institutional Animal Care and Use Committee der Weill Cornell Medicine genehmigt." Zu: "Alle hier beschriebenen Verfahren wurden von den Institutional Animal Care and Use Committees der Weill Cornell Medicine und der Stony Brook University genehmigt.
1. Koloskopie und Wundinduktion
<ol><li>Montieren Sie die Komponenten des Endoskops vor, indem Sie zunächst das 1,9 mm lange Endoskop in den Mantel einsetzen (Abbildung 1A-B). Befestigen Sie die Luftpumpe (um eine Koloninsufflation zu gewährleisten) mit dem mitgelieferten Schlauch an das Gasventil auf der linken Seite des Mantels neben dem Arbeitskanal(Abbildung 1C). HINWEIS: Obwohl die hier beschriebene Linse 0° ist, kann auch eine 30°-Linse für diesen Zweck verwendet werden.</li>
	<li>Stellen Sie sicher, dass sich der Arbeitskanal in der offenen Position befindet, und setzen Sie 3 Fr-Biopsiezangen durch den Arbeitskanal ein und leiten Sie ihn bis zum Ende des Mantels (wobei sichergestellt wird, dass er nicht aus dem Mantel herausragt) (Abbildung 1C). Befestigen Sie das montierte Endoskop gemäß den Anweisungen des Herstellers an der Lichtquelle und dem Videobildgerät.</li>
	<li>Anästhesisieren Sie die Maus mit 5% Isofluran mit Sauerstoff in einer Induktionskammer. Dann bewegen Sie die Maus zu einer endoskopischen Staging-Plattform, die ein Heizsystem (zur Vorbeugung von Unterkühlung) auf seiner ventralen Seite enthält und unter Anästhesie mit einem Nasenkegel mit 2% Isofluran mit Sauerstoff pflegen. Fügen Sie den Augen eine Tierarztsalbe hinzu, um Trockenheit unter Anästhesie zu verhindern. Stellen Sie sicher, dass die Maus vollständig beästhetisiert ist, indem Sie den hinteren Fuß vorsichtig kneifen, um auf einen Reflex zu testen. HINWEIS: Jede Sorte oder jedes Geschlecht von Mäusen kann mit dieser Technik verwendet werden; Es ist jedoch vorzuziehen, dass Mäuse mindestens 8 Wochen alt sind, so dass sie groß genug für das Verfahren sind.<ol>
<li>Fügen Sie den Augen eine Tierarztsalbe hinzu, um Trockenheit unter Anästhesie zu verhindern.</li>
		<li>Stellen Sie sicher, dass die Maus vollständig beästhetisiert ist, indem Sie den hinteren Fuß vorsichtig kneifen, um auf einen Reflex zu testen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Füllen Sie eine 3 ml Spritze mit einer angebrachten Rattengavagenadel mit Raumtemperatur Phosphat-gepufferter Saline (PBS). Fügen Sie die Nadel ca. 1 cm in den Anus der Maus ein und infundieren Sie PBS vorsichtig, um Fäkalienmaterial zu löschen. Mehrere Fäkalienpellets sollten die Maus zusammen mit dem PBS verlassen, das infundiert wurde. HINWEIS: Die Instillation eines übermäßigen PBS-Volumens kann zu Schaumbildung im Lumen führen, die die Sicht des Lumens verschleiern könnte.</li>
	<li>Setzen Sie das montierte Endoskop 0,5 cm in den Anus der Maus ein. Fördern Sie die Biopsieinzange in das Lumen des Rektums, bis die vollen "Kiefer" (einschließlich Scharnier) der Zange über das Ende des Mantels hinausgehen (wie auf dem Videomonitor beobachtet) (Ergänzendes Video 1). Drehen Sie die Zange um 90°, so dass sich die Backen in Ost-West-Ausrichtung öffnen (Zusatzvideo 1).</li>
	<li>Zur Biopsie, öffnen Sie die Zange und bewegen Sie ca. 1 cm, schließen Sie die Zange und in einer glatten Bewegung schnell zurückziehen auf die Zange, während sie geschlossen lassen (Ergänzendes Video 1).<ol>
<li>Vermeiden Sie eine vollständige Aufblähung des Dickdarms bei der Durchführung der Biopsie. Lassen Sie daher die rechte Seite des Gasventils während dieses Schritts offen; obwohl es beachten sollte, dass beim Öffnen der Zange die Gefahr besteht, die Schleimhaut zu beschädigen, wenn sich der Dickdarm in dieser Position befindet.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Visualisierung und Messung des Wundbettes
<ol><li>Initiieren Sie die Videoaufzeichnung unmittelbar nach der Biopsie, indem Sie das am Kolonoskop angeschlossene Fußpedal drücken. Den Dickdarm vollständig insuffieren, indem man einen Zeigefinger fest gegen die rechte Seite des Gasventils drückt, um die Öffnung vollständig zu bedecken, um die Luft in das Endoskop und damit in den Dickdarm zu zwingen. HINWEIS: Obwohl dieses Protokoll den Einsatz einer Luftpumpe beschreibt, in der der Luftstrom manuell gesteuert wird, kann auch eine peristaltische Pumpe mit einer kontrollierten Luftzufuhr verwendet werden.</li>
	<li>Fördern Sie die Zange zurück aus dem Mantel und in das rektale Lumen, während sie sich in der geschlossenen Position befinden (Zusatzvideo 1). Legen Sie die Zange direkt über der Wunde gegen die rektale Wand, bis die Basis der Backen am oberen Rand des Sichtfeldes ausgerichtet ist (Abbildung 2 & Ergänzendes Video 1). Setzen Sie die vollständige Insufflatierung des Dickdarms fort, bis eine klare Sicht auf die Wunde beobachtet werden kann. HINWEIS: Es sollte darauf geachtet werden, die Zange weit genug zu verlängern, um nur die Kiefer der Zange bis zur Basis für jede untersuchte Maus zu offenbaren, um einen konsistenten Abstand zwischen der Linse des Endoskops und der Läsion zu gewährleisten (Abbildung 2,weißer Pfeil).</li>
	<li>Wenn Sie am selben Tag Biopsien an mehreren Mäusen durchführen, entfernen Sie das biopsied Gewebe der vorherigen Maus aus der Zange (mit der mitgelieferten Reinigungsbürste) und wischen Sie die Linsenhülle mit 70 % Ethanol ab, um sie zu reinigen, bevor Sie eine Wunde in der nächsten Maus induzieren. HINWEIS: Obwohl dieses Protokoll die Durchführung einer einzigen Biopsie pro Maus beschreibt, können mehrere Biopsien an einer einzigen Maus durchgeführt werden, vorausgesetzt, das Gewebe, das aus der vorherigen Biopsie entnommen wurde, wird aus der Zange entfernt, um sicherzustellen, dass eine vollständige Biopsie auf nachfolgenden Biopsien durchgeführt werden kann.</li>
	<li>Legen Sie die Maus in einen Käfig, der von anderen Mäusen und auf einem Handtuch leer ist, bis sie sich nach Abschluss des Eingriffs von der Anästhesie erholt. Überwachen Sie die Maus, um sicherzustellen, dass sie sich von der Anästhesie erholt, wie durch Wiederherstellung der Aktivität angegeben. HINWEIS: Zwei Personen sind verpflichtet, die Wunde zu induzieren und das Wundbett am Tag 0 zu visualisieren (eine, die das Endoskop und die andere die Biopsiezange bedient), aber nur eine Person wird benötigt, um Wunden an den folgenden Tagen zu visualisieren (wie unten beschrieben).</li>
	<li>Befolgen Sie das gleiche Verfahren zur Vorbereitung der Maus und der Koloskopie für nachfolgende Wundmessungen (in der Regel die Tage 2, 4 und 6 nach der Biopsie), wie oben in den Abschnitten 1.1-1.4 beschrieben, mit Ausnahme der Induktion der Wunde.</li>
	<li>Suchen Sie das Wundbett auf dem Videomonitor zu diesen Zeitpunkten nach dem Einsetzen des Endoskops, und bringen Sie die Biopsiezangen (in geschlossener Position) auf das Wundbett vor, insuffieren Sie den Dickdarm und initiieren Sie videoaufnahmen, wie in den Abschnitten 2.1 und 2.2 beschrieben (Abbildung 2). HINWEIS: Es kann schwierig sein, das Wundbett mehr als 6 Tage nach der Biopsie zu lokalisieren.</li>
	<li>Bringen Sie die Zange an diesen folgenden Tagen in die gleiche Entfernung wie am Tag 0, um einen konsistenten Abstand zwischen der Linse des Endoskops und der Läsion über Tage hinweg zu gewährleisten. Die Sicherstellung eines konsistenten Abstands zwischen Linse und Läsion erhöht die Genauigkeit der Messungen im Laufe der Zeit. HINWEIS: Eine Person kann an diesen Tagen Messungen durchführen (Endoskop wird mit der rechten Hand betrieben und die Biopsiezangen werden mit der linken Hand vorgerückt).</li>
	<li>Sobald alle Messungen abgeschlossen sind, öffnen Sie die Videoaufzeichnungen der seriellen Koloskopien in der Videobearbeitungssoftware, die die Erstellung von Standbildern aus Video ermöglicht.</li>
	<li>Fördern Sie das Video zu einem Rahmen, der einen Zeitpunkt zeigt, an dem das Wundbett leicht visualisiert werden kann, die geschlossenen Zangen über dem Wundbett und gegen die Rektalwand und die Wand straff ist. Machen Sie eine Momentaufnahme dieses Rahmens und kodieren Sie den Dateinamen, um sicherzustellen, dass die Messungen der Wundbetten in einer blinden Weise durchgeführt werden.</li>
	<li>Öffnen Sie die Bilder mit codierten Dateinamen in NIH ImageJ, um die Größe des Wundbettes zu quantifizieren. Wählen Sie auf der Registerkarte Analysieren die Option Messungen festlegen aus, und aktivieren Sie das Kontrollkästchen Bereich.<ol>
<li>Wählen Sie das Werkzeug Freihandauswahl aus der Hauptmenüleiste aus, und zeichnen Sie einen Umfang um die Wunde (siehe Abbildung 2). Wählen Sie unter der Registerkarte Analysieren die Option Messen aus, und der Wert dieser Messung wird automatisch im Fenster Ergebnisse angezeigt.</li>
	</ol></li>
	<li>Exportieren Sie die Ergebnisse in eine Kalkulationstabelle, nachdem Sie die Messungen für alle Bilder abgeschlossen haben, indem Sie unter der Registerkarte Datei im Fenster Ergebnisse die Option Speichern unter auswählen und die Erweiterung in eine Tabellenkalkulationsdatei ändern.</li>
	<li>Berechnen Sie die Größe der Wunde an Tagen nach der Induktion der Wunde (d. h. tage 2, 4 und 6) relativ zur Größe am Tag 0 (unmittelbar nach der Verwundung) in einer Tabelle. Erreichen Sie dies, indem Sie die Größe der Wunde an jedem Tag durch die Größe der Wunde am Tag 0 dividieren und diesen Wert in einen Prozentsatz umwandeln. ANMERKUNG: Unter normalen Bedingungen mit dieser Methode der kolonoskopischen Betrachtung wird der größte Verschluss der Wunde nach den ersten 2 Tagen beobachtet (75 % Verkleinerung der Größe) mit einem allmählicheren Verschluss an den Tagen 4 und 6 (80 % bzw. 95 % Verkleinerung der Größe).</li>
</ol>3. Sammlung des Wundbettes für die molekulare Analyse
<ol><li>Euthanisieren Sie die Maus mit CO2-Erstickung, gefolgt von zervikalen Dislokationen (oder gleichwertiger Technik) am ausgewählten Tag nach der Biopsie.</li>
	<li>Ernten Sie den distalen Bereich des Dickdarms, indem Sie die Haut und den Bauchmuskel öffnen, um die Körperhöhle freizulegen. Legen Sie geschlossene Scheren unter den Doppelpunkt und heben Sie sie vorsichtig aus dem zugrunde liegenden Mesentery und schneiden Sie dann den Doppelpunkt an seinem Mittelpunkt und am Anus, um ihn von der Maus zu entfernen.</li>
	<li>Spülen Sie den Fäkaliengehalt mit einer Rattengavagenadel, die an einer 20 ml Spritze befestigt ist, die mit eiskaltem 1x PBS gefüllt ist, und legen Sie dann den Dickdarm auf Filterpapier.</li>
	<li>Den Doppelpunkt längs auf Filterpapier schneiden, um sicherzustellen, dass die mesenterische Seite mit dem Gesicht nach unten gegen das Filterpapier gerichtet ist. 0,2% Methylenblau auf die Schleimhaut mit einer Squeeze Pipette auftragen, während sich das Gewebe noch auf dem Filterpapier befindet, und dann überschüssiges Methylenblau abtropfen lassen. Sehen Sie sich den Doppelpunkt unter einem Sezieren des Mikroskops an und lokalisieren Sie das Wundbett (Abbildung 3A).</li>
	<li>Mit 4 Zoll Mikro-Iris-Schere, um den Rand des Wundbettes geschnitten(Abbildung 3A, gestrichelten Kreis) achten darauf, nicht in die Muskelschicht zu schneiden (es sei denn, der Muskel ist gewünscht) und übertragen Sie das sezierte Wundbett auf ein Rohr mit Feiner Punkt Pinzette für Snap-Freezing oder gewünschte Lagerung methode. HINWEIS: Die auf diese Weise gesammelte Gewebemenge reicht aus, um RNA für RNA-seq oder eine gleichwertige Analyse zu extrahieren.</li>
</ol>4. Vorbereitung von Gewebe für die histologische Analyse
<ol><li>Euthanisieren Sie die Maus und ernten Sie den Doppelpunkt, wie in Schritt 3.1-3.2 beschrieben.</li>
	<li>Den Doppelpunkt längs auf Filterpapier schneiden, um sicherzustellen, dass die mesenterische Seite mit dem Gesicht nach unten gegen das Filterpapier gerichtet ist. 4% Paraformaldehyd (oder Fixiermittel nach Wahl) vorsichtig mit einer Squeeze Pipette auftragen und das Gewebe mit Parafilm bedecken. Lassen Sie flach in einem versiegelten Behälter für 4-6 Stunden.</li>
	<li>Gewebe zur Lagerung auf 70% Ethanol übertragen. Wenn Sie bereit sind, das Gewebe zu verarbeiten, entfernen Sie Parafilm und tragen Sie 0,2% Methylenblau auf die Schleimhaut auf, indem Sie eine Quetschungspipette verwenden, während sich das Gewebe noch auf Filterpapier befindet. Dann überschüssiges Methylenblau abtropfen lassen.</li>
	<li>Sehen Sie sich den Doppelpunkt unter einem Sezieren des Mikroskops an und lokalisieren Sie das Wundbett (Abbildung 3A). Mit einem Skalpell mit einer #10 Klinge, schneiden Sie direkt durch die Mitte des Wundbettes und weiter schneiden durch den Rest des Dickdarms in einer geraden Linie, so dass der Doppelpunkt in der Hälfte geschnitten wurde, längenmäßig(Abbildung 3A,schwarze Linie).</li>
	<li>Verarbeiten Sie den Dickdarm und dann Paraffin einbetten (entweder eine oder beide Seiten, die nach dem Schneiden bleiben), so dass die Seite, die durch das Skalpell geschnitten wurde (die Seite, die die Mitte des Wundbettes vor dem Bisektion war) ist nach unten in der Paraffin. Fahren Sie mit Schnittprofilen und Färbung für gewünschte Flecken oder Hersteller fort.</li>
	<li>Wenn für eine bestimmte Färbung Kryosections erforderlich sind, ernten Sie den Dickpunkt wie in Schritt 3.1 beschrieben und öffnen Sie längs auf Filterpapier, um sicherzustellen, dass die mesenterische Seite mit dem Gesicht nach unten gegen das Filterpapier gerichtet ist.</li>
	<li>Bisect das Wundbett innerhalb des frisch geernteten Dickdarms, wie in Schritt 4.5 beschrieben und den Dickdarm (entweder eine oder beide Seiten, die nach dem Schneiden übrig bleiben) so einbetten, dass die Seite, die vom Skalpell geschnitten wurde, in einer Basisform, die halb mit Gewebegefriermedium gefüllt ist, nach unten gerichtet ist.</li>
	<li>Sichern Sie das Gewebe an Ort und Stelle mit feiner Pinzette und legen Sie die Basisform auf eine Metallplatte auf trockenem Eis, um das Gefriermedium zu härten. Sobald der untere Teil des Mediums eingefroren ist (und das Gewebe an Ort und Stelle gehalten wird), lassen Sie das Gewebe los und füllen Sie das restliche Volumen der Basisform mit Gefriermedium und legen Sie wieder auf Trockeneis.<ol>
<li>Nachdem das gesamte Volumen des Gefriermediums eingefroren ist, in einen -80 °C-Gefrierschrank bis zum Schnitt überführen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Für Paraffin- oder gefrorene Abschnitte zusätzliche Abschnitte von H&E schneiden und färben, um sicherzustellen, dass das Wundbett auf dem Abschnitt eingefangen wurde, bevor Sie mit der studienspezifischen Färbung fortfahren. Abbildung 3B zeigt ein Beispiel für einen Abschnitt, in dem das Wundbett deutlich beobachtet werden kann.</li>
</ol>

<ol><li>Boal Carvalho, P., Cotter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucosal+Healing+in+Ulcerative+Colitis%3A+A+Comprehensive+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Drugs%22%5BJournal%5D)">Mucosal Healing in Ulcerative Colitis: A Comprehensive Review.</a> Drugs. 77 (2), 159-173 (2017).</li>
<li>Chen, M. L., Sundrud, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+Networks+and+T-Cell+Subsets+in+Inflammatory+Bowel+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammatory+Bowel+Diseases%22%5BJournal%5D)">Cytokine Networks and T-Cell Subsets in Inflammatory Bowel Diseases.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 22 (5), 1157-1167 (2016).</li>
<li>Habtezion, A., Nguyen, L. P., Hadeiba, H., Butcher, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukocyte+Trafficking+to+the+Small+Intestine+and+Colon%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Leukocyte Trafficking to the Small Intestine and Colon.</a> Gastroenterology. 150 (2), 340-354 (2016).</li>
<li>Halfvarson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+the+human+gut+microbiome+in+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Dynamics of the human gut microbiome in inflammatory bowel disease.</a> Nature Microbiology. 2, 17004(2017).</li>
<li>Johansson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacteria+penetrate+the+normally+impenetrable+inner+colon+mucus+layer+in+both+murine+colitis+models+and+patients+with+ulcerative+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Bacteria penetrate the normally impenetrable inner colon mucus layer in both murine colitis models and patients with ulcerative colitis.</a> Gut. 63 (2), 281-291 (2014).</li>
<li>Luissint, A. C., Parkos, C. A., Nusrat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+the+Intestinal+Barrier%3A+Leukocyte-Epithelial+Cell+Interactions%2C+Cell+Junction+Remodeling%2C+and+Mucosal+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Inflammation and the Intestinal Barrier: Leukocyte-Epithelial Cell Interactions, Cell Junction Remodeling, and Mucosal Repair.</a> Gastroenterology. 151 (4), 616-632 (2016).</li>
<li>Pineton de Chambrun, G., Blanc, G., Peyrin-Biroulet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+evidence+supporting+mucosal+healing+and+deep+remission+as+important+treatment+goals+for+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Gastroenterology+%26+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Current evidence supporting mucosal healing and deep remission as important treatment goals for inflammatory bowel disease.</a> Expert Review of Gastroenterology & Hepatology. 10 (8), 915-927 (2016).</li>
<li>Fung, K. Y., Putoczki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Models+of+Inflammatory+Bowel+Disease+and+Colitis-Associated+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">In Vivo Models of Inflammatory Bowel Disease and Colitis-Associated Cancer.</a> Methods in Molecular Biology. 1725, 3-13 (2018).</li>
<li>Jurjus, A. R., Khoury, N. N., Reimund, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacological+and+Toxicological+Methods%22%5BJournal%5D)">Animal models of inflammatory bowel disease.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 50 (2), 81-92 (2004).</li>
<li>Mizoguchi, A., Takeuchi, T., Himuro, H., Okada, T., Mizoguchi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+engineered+mouse+models+for+studying+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Genetically engineered mouse models for studying inflammatory bowel disease.</a> Journal of Pathology. 238 (2), 205-219 (2016).</li>
<li>Seno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+colonic+mucosal+wound+repair+requires+Trem2+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Efficient colonic mucosal wound repair requires Trem2 signaling.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (1), 256-261 (2009).</li>
<li>Alam, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microenvironment+of+injured+murine+gut+elicits+a+local+pro-restitutive+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The microenvironment of injured murine gut elicits a local pro-restitutive microbiota.</a> Nature Microbiology. 1, 15021(2016).</li>
<li>Alam, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redox+signaling+regulates+commensal-mediated+mucosal+homeostasis+and+restitution+and+requires+formyl+peptide+receptor+1%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Redox signaling regulates commensal-mediated mucosal homeostasis and restitution and requires formyl peptide receptor 1.</a> Mucosal Immunology. 7 (3), 645-655 (2014).</li>
<li>Kuhn, K. A., Manieri, N. A., Liu, T. C., Stappenbeck, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-6+stimulates+intestinal+epithelial+proliferation+and+repair+after+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">IL-6 stimulates intestinal epithelial proliferation and repair after injury.</a> PLoS One. 9 (12), 114195(2014).</li>
<li>Leoni, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Annexin+A1%2C+formyl+peptide+receptor%2C+and+NOX1+orchestrate+epithelial+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Annexin A1, formyl peptide receptor, and NOX1 orchestrate epithelial repair.</a> Journal of Clinical Investigation. 123 (1), 443-454 (2013).</li>
<li>Manieri, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucosally+transplanted+mesenchymal+stem+cells+stimulate+intestinal+healing+by+promoting+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Mucosally transplanted mesenchymal stem cells stimulate intestinal healing by promoting angiogenesis.</a> Journal of Clinical Investigation. 125 (9), 3606-3618 (2015).</li>
<li>Miyoshi, H., Ajima, R., Luo, C. T., Yamaguchi, T. P., Stappenbeck, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt5a+potentiates+TGF-beta+signaling+to+promote+colonic+crypt+regeneration+after+tissue+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Wnt5a potentiates TGF-beta signaling to promote colonic crypt regeneration after tissue injury.</a> Science. 338 (6103), 108-113 (2012).</li>
<li>Neurath, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+tumor+development+and+wound+healing+using+endoscopic+techniques+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Assessment of tumor development and wound healing using endoscopic techniques in mice.</a> Gastroenterology. 139 (6), 1837-1843 (2010).</li>
<li>Montrose, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonoscopic-Guided+Pinch+Biopsies+in+Mice+as+a+Useful+Model+for+Evaluating+the+Roles+of+Host+and+Luminal+Factors+in+Colonic+Inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Colonoscopic-Guided Pinch Biopsies in Mice as a Useful Model for Evaluating the Roles of Host and Luminal Factors in Colonic Inflammation.</a> American Journal of Pathology. 188 (12), 2811-2825 (2018).</li>
<li>Bruckner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+endoscopy+for+in+vivo+multimodal+imaging+of+carcinogenesis+and+assessment+of+intestinal+wound+healing+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Murine endoscopy for in vivo multimodal imaging of carcinogenesis and assessment of intestinal wound healing and inflammation.</a> Journal of Visualized Experiments. (90), (2014).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu verraten.

Die Sicherstellung konsistenter und genauer Biopsien sowie Messungen der Wundgröße sind von größter Bedeutung, wenn versucht wird, die Rate des Wundverschlusses in diesem Modell effektiv zu bewerten. Daher sollten mehrere Maßnahmen ergriffen werden, um darauf zu vertrauen, dass die Verfahren ordnungsgemäß durchgeführt werden. Erstens darf die Tiefe der Biopsie nicht zu flach oder tief sein. Wenn zu flach, wird es nicht genügend Fenster, um Wundverschluss zu bewerten. Abbildung 2 zeigt eine o...

Der Magen-Darm-Trakt (GI) ist ein komplexes Organsystem mit seinen vielfältigen Funktionen, Wirtszelltypen (z.B. Epithel, Immun, Stromal, etc.) sowie Billionen von Mikroben. Angesichts dieser Komplexität beinhalten Krankheiten des GI-Traktes oft das Zusammenspiel all dieser Faktoren. Zum Beispiel, entzündliche Darmerkrankungen (IBD) sind mit Zyklen der Entzündung und Remission im GI-Trakt verbunden, mit der Aktivierung von entzündlichen Zellen, Dysbiose, und epitheliale Reparatur1,2,3,4,5,6,7. Geeignete Modellsysteme zur Untersuchung von IBD und anderen entzündlichen Erkrankungen des GI-Traktes ist entscheidend für die Aufklärung der Pathogenese von Krankheiten. Es gibt mehrere Modelle zur Untersuchung der IBD-Pathogenese, einschließlich gentechnisch veränderter Mäuse und der Verwendung von Chemikalien wie Dextran-Natriumsulfat (DSS) bei Nagetieren8,9,10. Zu den Einschränkungen dieser Modelle gehören die Unfähigkeit, die Induktion von Entzündungen genau zu kontrollieren, sowie Schwierigkeiten bei der Beurteilung der Wundheilung. Alternative Methoden zur Nachahmung von Aspekten der IBD-Pathogenese könnten sich als nützlich für die Entwicklung von Therapien erweisen.
Kolonoskopisch geführte Pinch-Biopsien bei Mäusen bieten ein nützliches Modellsystem, um die Pathogenese der Entzündungsreaktion, Wundheilung sowie Wirt-Mikroben-Wechselwirkungen im Dickdarm zu untersuchen. Dieser Ansatz wurde erstmals als experimentelles Werkzeug im Jahr 2009 verwendet, das seine Nützlichkeit für die Untersuchung der akuten Entzündungsreaktion und Wundheilung im Darm11demonstrierte. Nachfolgende Studien nutzten diese Technik, um die Rollen der verschiedenen Signalwege sowie der Darmmikrobiota, in der Darmwundheilung11,12,13,14,15,16,17,18. In jüngerer Zeit nutzte unsere Gruppe dieses Modell, um die Bedeutung von Sphingosin-1-Phosphat-Signalisierung und Bakterien in der akuten Reaktion auf Darmverletzungen zu untersuchen19. Obwohl nützlich, kann die Durchführung von kolonoskopisch geführten Pinch-Biopsien bei Mäusen und die Bewertung nachfolgender Gewebeveränderungen technisch eine Herausforderung darstellen. Zum Beispiel kann die Perforation des Darms bei der Induktion von Verletzungen auftreten und die Sicherstellung konsistenter Messungen des Wundbettes durch serielle Koloskopien kann schwierig sein. Darüber hinaus kann es schwierig sein, das Kolosgewebe richtig zu orientieren, um das Wundbett für histologische oder immunhistochemische Analysen zu visualisieren. Obwohl einige Informationen über diese Methoden existieren18,20, eine präzise schrittweise Beschreibung dieser Techniken entlang wird visuelle Hilfsmittel verspricht, die Zuverlässigkeit und breiteren Nutzen dieses Modells zu verbessern. Hier stellen wir eine detaillierte Methode zur Durchführung von kolonoskopisch geführten Pinch-Biopsien bei Mäusen vor, verfolgen den Wundverschluss im Laufe der Zeit und bereiten das Gewebe so vor, dass histologische und molekulare Analysen des Wundbettes möglich sind. Die Erstellung einer Standardmethode zur Durchführung dieser Techniken kann die Verwendung dieses Modells erweitern, um zuvor nicht untersuchte Mediatoren zu untersuchen, die potenziell wichtig für GI-Entzündungen und Wundreparaturen sind.

<table><tbody><tr><td>Biopsiezange, 3 Fr</td><td>Karl Storz</td><td>61071ZJ</td><td></td></tr><tr><td>Coloview Tower-System</td><td>Karl Storz</td><td>Kontakt Firma</td><td></td></tr><tr><td>Untersuchungsschleuse, 9 Fr, Kit</td><td>Karl Storz</td><td>61029DK</td><td></td></tr><tr><td>Hopkins Teleskop, 0', 1,9 mm x 10 cm</td><td>Karl Storz</td><td>64301AA</td><td></td></tr><tr><td>Isofluoran</td><td>Covetrus</td><td>2905</td><td></td></tr><tr><td>Methylenblau</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9140</td><td></td></tr><tr><td>Mikro-Irisschere</td><td>Integra</td><td>18-1619</td><td></td></tr><tr><td>NIH ImageJ</td><td>NIH</td><td>N/A</td><td>Software zum kostenlosen Download verfügbar unter: https://imagej.nih.gov/ij/</td></tr> <tr><td>Pawfly MA-60 Aquarienpumpe</td><td>Amazon</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Skalpell mit #10 Klinge</td><td>Hill-Rom</td><td>372610</td><td></td></tr></tbody></table>

durchführen von colonoscopic-guided pinch biopsien bei mäusen und bewertung nachfolgender gewebeveränderungen

Performing Colonoscopic-Guided Pinch Biopsies in Mice and Evaluating Subsequent Tissue Changes

Das Verständnis der Gewebe- und Zellveränderungen, die sowohl bei der akuten Verletzungsreaktion als auch während des Wundheilungsprozesses auftreten, ist von größter Bedeutung bei der Untersuchung von Erkrankungen des Magen-Darm-Traktes (GI). Das murine Kolosonnenbiopsiemodell ist ein nützliches Werkzeug, um diese Prozesse zu definieren. Zusätzlich kann das Zusammenspiel zwischen Darm-Luminal-Gehalt (z.B. Mikroben) und dem Dickdarm untersucht werden. Die Wundinduktion und die Fähigkeit, den Wundverschluss im Laufe der Zeit zuverlässig zu verfolgen, können jedoch eine Herausforderung darstellen. Darüber hinaus muss die Gewebevorbereitung und -orientierung standardisiert erfolgen, um histologische und molekulare Veränderungen optimal abzuhören. Hier stellen wir eine detaillierte Methode vor, die biopsieinduzierte Verletzungen und die Überwachung des Wundverschlusses durch wiederholte Koloskopien beschreibt. Es wird ein Ansatz beschrieben, der konsistente und reproduzierbare Messungen der Wundgröße, die Fähigkeit, das Wundbett für molekulare Analysen zu sammeln sowie das Wundbett beim Schnitt von Geweben zu visualisieren, sicherstellt. Die Fähigkeit, diese Techniken erfolgreich durchzuführen, ermöglicht Studien über die akute Verletzungsreaktion, Wundheilung und Luminal-Host-Wechselwirkungen innerhalb des Dickdarms.

Die kleinen Gegenstände (Linse, Mantel, Biopsiezange), die für die Durchführung von Biopsien benötigt werden, sind in Abbildung 1 zusammen mit Indikatoren für die ordnungsgemäße Montage dieser Komponenten dargestellt. Abbildung 2 zeigt repräsentative Bilder von akzeptablen Ansichten des Wundbettes, um die Größe des Wundbettes und die Verschlussrate der Wunde genau zu quantifizieren. Ein Beispiel für eine Ex-vivo-Ansicht des Wundbettes ist in <strong class="xfig"...

Hier bieten wir eine detaillierte Beschreibung des Verfahrens zur Induzieren von kolonoskopisch geführten Pinch-Biopsien bei Mäusen und verfolgen Denkwunden in Echtzeit. Zusätzlich werden Methoden zur Herstellung von Geweben für histologische, immunhistochemische und molekulare Analysen des Wundbettes bereitgestellt.

Durchführen von colonoscopic-Guided Pinch Biopsien bei Mäusen und Bewertung nachfolgender Gewebeveränderungen

Understanding the tissue and cellular changes that occur in the acute injury response as well as during the wound healing process is of paramount ...

Diese Methode bietet einen idealen Ansatz für die Untersuchung der Darmwundheilung und der molekularen und histologischen Veränderungen, die nach Verletzungen auftreten. Diese Methode kann auch Licht auf IBD Pathogenese werfen. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, den Ort der Verletzung und den Zeitpunkt des Wundheilungsprozesses genau zu steuern.Personen, die diese Methode zum ersten Mal durchführen, können Schwierigkeiten haben, das Kolonoskop in den Doppelpunkt der Maus einzufügen und konsistente Wunden zu erzeugen. Das wiederholte Üben dieser Techniken sollte diese Probleme lösen. Angesichts der mehrfach koordinierten Schritte und Nuancen, die mit diesem Verfahren verbunden sind, ist die visuelle Demonstration dieser Methode von entscheidender Bedeutung.Bevor Sie mit dem Verfahren beginnen, legen Sie ein 1,9 Millimeter starres Lochendoskop in eine Endoskophülle ein. Und befestigen Sie das montierte Endoskop gemäß den Anweisungen des Herstellers an der Lichtquelle und dem Video-Imaging-Gerät. Verwenden Sie die mitgelieferten Schläuche, um die Luftpumpe am Gasventil auf der linken Seite des Mantels neben dem Arbeitskanal zu befestigen.Stellen Sie sicher, dass sich der Arbeitskanal in der offenen Position befindet, und legen Sie drei französische Biopsiezangen durch den Arbeitskanal. Fördern Sie die Zange bis zum Ende des Mantels, ohne aus dem Mantel herauszuragen. Als nächstes legen Sie die anästhesierte Maus auf eine endoskopische Staging-Plattform auf ihrer ventralen Seite und bestätigen Sie das entsprechende Maß an Sedierung durch mangelnde Reaktion auf Pedalreflex.Nach dem Auftragen der Augensalbe eine Drei-Milliliter-Spritze mit einer beigefügten Rattengavagenadel mit Raumtemperatur PBS füllen. Und legen Sie die Nadel etwa einen Zentimeter in den Anus der Maus. Befestig vorsichtig mit PBS einrühren, bis das Fäkalienmaterial gelöscht ist.Mehrere Fäkalienpellets sollten die Maus zusammen mit dem PBS verlassen, das infundiert wurde. Setzen Sie das montierte Endoskop 0,5 Zentimeter in den Anus ein und leiten Sie die Biopsiezangen in das gereinigte Lumen des Rektums, bis die vollen Backen der Zange über das Ende der Hülle hinausgehen. Drehen Sie die Zange um 90 Grad, so dass sich die Backen in Ost-West-Ausrichtung öffnen und die Spitzen öffnen und die Zange etwa einen Zentimeter voranbringen, und schließen und ziehen Sie die Zange in einer glatten, schnellen Bewegung, um die Biopsie zu ernten.Um zu vermeiden, dass der Dickdarm während der Biopsie vollständig aufgeblasen wird, lassen Sie die rechte Seite des Gasventils offen. Unmittelbar nach der Biopsie drücken Sie das am Kolonoskop befestigte Fußpedal, um die Videoaufnahme zu initiieren. Und drücken Sie fest einen Zeigefinger gegen die rechte Seite des Gasventils, um die Öffnung vollständig zu bedecken, Luft in das Endoskop und damit in den Dickdarm zu zwingen.Ziehen Sie die Zange in geschlossener Position aus dem Mantel zurück in das rektale Lumen. Und legen Sie die Zange gegen die rektale Wand direkt über der Wunde, bis die Basis der Kiefer mit dem oberen Rand des Sichtfeldes ausgerichtet ist. Setzen Sie die vollständige Insufflatierung des Dickdarms fort, bis eine klare Sicht auf die Wunde beobachtet werden kann.Um die besten Messungen des Wundbettes zu erhalten, seien Sie geduldig und legen Sie das Kolonoskop in einem genauen Winkel, damit Sie Ihr bestes Bild vom Wundbett erhalten. Öffnen Sie das Video in einem entsprechenden Softwareprogramm und bringen Sie das Video zu einem Frame vor, der einen Zeitpunkt zeigt, an dem das Wundbett leicht visualisiert werden kann. Und an dem die geschlossenen Zangen über dem Wundbett und gegen die Rektalwand sind, und die Wand ist straff.Zu jedem Zeitpunkt erhalten Sie eine Momentaufnahme dieses Rahmens und kodieren Sie den Dateinamen, um sicherzustellen, dass die Messungen der Wundbetten in einer blinden Weise durchgeführt werden. Um die Größe des Wundbettes zu quantifizieren, öffnen Sie die Bilder in ImageJ und verwenden Sie das Werkzeug Freihandauswahl, um einen Umfang um die Wunde zu zeichnen. Wählen Sie unter Analysieren die Option Messen aus.Und der Wert dieser Messung wird automatisch im Ergebnisfenster angezeigt. Wenn alle Messungen erfasst wurden, berechnen Sie die Größe der Wunde an den folgenden Tagen relativ zur Größe am Tag Null in einer Kalkulationstabelle. Öffnen Sie am entsprechenden experimentellen Endpunkt die Haut- und Bauchmuskelschichten, um die Körperhöhle des Versuchstiers freizulegen, und legen Sie geschlossene Zangen unter den Dickdarm.Heben Sie den Dickdarm vorsichtig an, um ihn aus dem zugrunde liegenden Mesentery zu befreien und schneiden Sie das Gewebe an seinem Mittelpunkt und am Anus, um es von der Maus zu sammeln. Verwenden Sie eine 20-Milliliter-Spritze gefüllt mit eiskalten PBS und ausgestattet mit einer Rattengavage-Nadel, um den Fäkalieninhalt auszuspülen. Und legen Sie den geräumten Doppelpunkt auf ein Stück Filterpapier.Öffnen Sie den Kolon längs, wobei Sie darauf achten, dass die mesenterische Seite mit dem Gesicht nach unten gegen das Filterpapier gerichtet ist. Und verwenden Sie eine Pasteur Pipette, um die Schleimhaut mit 0,2% Methylenblau abzudecken. Nach ein paar Sekunden den überschüssigen Fleck abtropfen lassen und den Dickdarm unter einem Sezierendes Mikroskop betrachten, um das Wundbett zu lokalisieren.Verwenden Sie vier Zoll Micro Iris Schere um den Rand des Bettes zu schneiden, achten Sie darauf, nicht in die Muskelschicht zu schneiden. Und verwenden Sie Feine Punkt Pinzette, um das sezierte Gewebe in ein Rohr für Snap Freezing und oder Lagerung zu übertragen. Am entsprechenden experimentellen Endpunkt den geernteten Dickdarm längs auf einem Stück Filterpapier, mesenterer Seite nach unten, öffnen.Bedecken Sie das Gewebe vorsichtig mit Ihrem Fixativ Ihrer Wahl. Das Gewebe 4 bis 6 Stunden vor der Lagerung in 70% Ethanol mit Parafilm in einem verschlossenen Behälter bedecken. Entfernen Sie am Tag der Verarbeitung den Parafilm und fügen Sie dem Gewebe 0,2% Methylenblau hinzu, wie gezeigt.Nach dem Abtropfen des überschüssigen Flecks legen Sie das Gewebe unter ein Sezierendes Mikroskop, um das Wundbett zu lokalisieren. Mit einem Skalpell mit einer Klinge der Zahl 10, schneiden Sie direkt durch die Mitte des Wundbettes und weiter schneiden durch den Rest des Dickdarms in einer geraden Linie, so dass der Dickdarm in der Länge halbiert wird. Zum Kryosektionen die Doppelpunktstücke so einbetten, dass die Seite, die vom Skalpell geschnitten wurde, mit dem Gesicht nach unten in einer Basisform liegt, die halb mit Gewebegefriermedium gefüllt ist.Sichern Sie das Gewebe mit einer feinen Pinzette an Ort und Stelle und legen Sie die Basisform auf eine Metallplatte oder dicke Aluminiumfolie auf trockenem Eis, um das Gefriermedium zu härten. Sobald der untere Teil des Mediums eingefroren ist, füllen Sie das restliche Volumen der Basisform mit Gefriermedium bei Raumtemperatur. Und geben Sie die Form in das Trockeneis zurück, bis der gesamte Gewebeblock eingefroren ist.Dann übertragen Sie die Form in einen 80 Grad Celsius Gefrierschrank bis zum Schnitt. Hier werden repräsentative Bilder von akzeptablen Ansichten des Wundbettes zur genauen Quantifizierung der Größe des Wundbettes und der Verschlussrate der Wunde gezeigt. In dieser ex-vivo Ansicht eines Wundbettes können Indikatoren des Umfangs des Wundbettes und wo das Gewebe geschnitten werden können, um die Visualisierung des Wundbettes beim Schneiden zu ermöglichen.In diesem repräsentativen Bild kann ein H- und E-Fleckenabschnitt eines Wundbettes deutlich beobachtet werden. Es ist wichtig, sofort Bilder des Wundbettes zu jeder Zeit zu erfassen, um eine genaue Beurteilung der Wundheilungsrate zu gewährleisten. Nach der Pinch-Biopsie können verschiedene Interessense in das Wundbett injiziert werden, um deren Auswirkungen auf die Wundheilungsrate zu testen.

performing-colonoscopic-guided-pinch-biopsies-mice-evaluating

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Dieses Video beschreibt die Generierung eines kolorektalen Mausmodells durch segmentale Adeno-Cre-Infektion. Das infizierte Dickdarmsegment führt zu einer Tumorgenese innerhalb dieses Segments der Schleimhaut, was dazu führt, dass die Adenome schließlich zu invasiven und metastasierten Karzinomen fortschreiten. Dieses Modell ist eine attraktive Plattform für Studien zur Krebsbiologie und präklinische therapeutische Studien.

Segmentale Adeno-Cre-Infektion: Eine Technik zur Erzeugung von isoliertem Darmkrebs unter Verwendung gentechnisch veränderter Mausmodelle

Dieses Video zeigt das Protokoll für die Durchführung einer koloskopgesteuerten Pinch-Biopsie in der Maus. Diese Technik hilft bei der visuellen Analyse des Dickdarmlumens und der Entnahme von Gewebeproben für detaillierte Studien.

Koloskopisch geführte Pinch-Biopsie in einem Mausmodell: Eine Technik zur Visualisierung und Extraktion von Gewebeproben aus dem Dickdarm der Maus

In diesem Video beschreiben wir ein Verfahren zur Isolierung des koloskopieinduzierten Wundbetts zu einem geeigneten Zeitpunkt für eine detaillierte molekulare Analyse. Diese Analyse hilft, den Wundheilungsprozess bei entzündlichen Erkrankungen des Magen-Darm-Trakts zu verstehen.

Koloskopisch geführtes Maus-Wundmodell: Eine Methode zur Isolierung eines biopsieinduzierten Wundbetts aus dem Dickdarm, um den Heilungsprozess zu verstehen

In den vergangenen Jahren wurden neue Generation Endoskope wichtige diagnostische Forschung Hilfsmittel zum Auswerten murinen Colitis und kolorektalen Tumoren entwickelt. Wir stellen hier ein detailliertes Protokoll für endoskopische Beurteilung von Entzündungen und kolorektalen Tumoren in Mäusen, sowie eine neuartige Bewertungssystem, das Dezimal-Identifikatoren verwendet, um die Schwere der endoskopischen ulcerosa und kolorektalen Tumoren dokumentiert.

Flexible Koloskopie in der Maus, um die Schwere der Colitis und kolorektalen Tumoren auswerten mit einem validierten Endoskopische Scoring System

Kleintierbildgebung Techniken ermöglichen Serien diagnostische Untersuchungen und therapeutische Interventionen in vivo. Vor kurzem hat der Umfang der Anwendungen erheblich erweitert und umfasst gegenwärtig Beurteilung Colontumorentwicklung, Wundheilung und Kontrolle von Entzündungen. Dieses Protokoll zeigt diese verschiedenen Anwendungsmöglichkeiten der murinen Endoskopie.

Murine Endoskopie für In Vivo Multimodale Bildgebung der Krebsentstehung und Bewertung der Darm Wundheilung und Entzündung

Wir beschreiben Methoden zur longitudinalen Überwachung der Wirksamkeit von Therapeutika zur Behandlung von Dickdarmpathologien bei Mäusen mit einem starren Endoskop. Dieses Protokoll kann leicht für die Charakterisierung des therapeutischen Ansprechens eines einzelnen Tumors bei lebenden Mäusen und auch für die Überwachung eines möglichen Krankheitsrückfalls verwendet werden.

Nicht-invasive Beurteilung der Wirksamkeit neuer Therapeutika für Darmpathologien Verwenden der seriellen endoskopische Bildgebung von lebenden Mäusen

Ein Protokoll für die Etablierung eines gentechnisch veränderten Mausmodells von Darmkrebs durch segmentale Adeno-Cre-Infektion und deren Überwachung durch hochauflösende Koloskopie wird vorgestellt.

Ein genetisch manipuliertes Mausmodell des sporadischen Darmkrebses

Um hochempfindliche Detektion der Verbreitung von menschlichen colorectal Krebses (CRC) Zellen Gewebe besiedeln können, zeigen wir hier ein Protokoll zur effizienten Transduktion des grün fluoreszierenden Proteins (GFP) Lentivirale Partikel in PDX-abgeleitete CRC organoide Zellen vor der Injektion in Empfänger Mäuse mit Stereo-Fluoreszenz-mikroskopische Beobachtung.

Hochempfindlichen Nachweis von Fixierungsprotokoll von GFP Lentivirus ausgestrahlt Organellen kultiviert von einem Patienten abgeleitet Doppelpunkt Tumor erzeugt

Hier präsentieren wir Ihnen eine Protokoll, die beschreibt allogenen hämatopoetischen Stammzelltransplantation und ermöglicht sich wiederholenden Mini-endoskopische Auswertungen des distalen Colon an Ort und Stelle für die Präsenz, die Merkmale und die Schwere der Kolon Entzündung im live Mäuse Darm Graft - Versus - Host-Seuche leiden.

Induktion der intestinalen Graft - Versus - Host-Seuche und seiner Mini-endoskopische Beurteilung in Live Mäuse

Die Translation von Befunden der Intravitalmikroskopie wird durch das geringe Eindringen in das Gewebe erschwert. Hier beschreiben wir ein Mausmodell mit dorsaler Fensterkammer, das die Co-Registrierung der Intravitalmikroskopie und klinisch anwendbarer Bildgebungsmodalitäten (z. B. CT, MRT) für eine direkte räumliche Korrelation ermöglicht und so die klinische Translation von Befunden der Intravitalmikroskopie möglicherweise rationalisiert.

Ein Mausmodell eines dorsalen Hautfaltenfensterkammertumors für die kombinierte Intravitalmikroskopie und Magnetresonanztomographie in der translationalen Krebsforschung

Lernen Sie die koloskopisch geführte Pinzettebiopsie bei Mäusen zur Untersuchung kolonaler Wundheilung und molekularer Veränderungen. Diese Methode ermöglicht präzise Kontrolle über Verletzungsort und Heilungszeitpunkt.

Durchführen von colonoscopic-Guided Pinch Biopsien bei Mäusen und Bewertung nachfolgender Gewebeveränderungen

Weitere Videos entdecken