Name: Ein modifiziertes Zwei-Nieren-One-Clip-Mausmodell der Reninregulation bei Nierenarterienstenose (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-10-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 21 s
Description: Lernen Sie das modifizierte Zwei-Nieren-One-Clip-Mausmodell zur Untersuchung der Reninregulation bei Nierenarterienstenose. Diese Methode ermöglicht die Erforschung molekularer Mechanismen und therapeutischer Ansätze bei renaler Hypertonie.

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Die Forschung wurde durch den NHLBI Research Scientist Development Grant (1K01HL135461-01) an JAG unterstützt. Vielen Dank an David Carmona-Berrio und Isabel Adarve-Rengifo für ihre technische Unterstützung.

Mäuse wurden im Vanderbilt University Medical Center (VUMC) Division of Animal Care nach den Richtlinien der National Institutes of Health (NIH) und dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren des US-Gesundheitsministeriums untergebracht und gepflegt. Alle Tierverfahren wurden vor Beginn der Experimente vom VUMC Institutional Animal Care and Use Committee genehmigt.
1. Tierpräparation und Präparation
<ol><li>Schalten Sie den Keimer und die Wasserpumpe des Heizkissens ca. 30 min vor Beginn der Operation ein.</li>
	<li>Schneiden Sie 0,5 mm lange Polyurethanschläuche mit einem scharfen Skalpell. Entfernen Sie 0,2 mm des Umfangs, indem Sie einen Schnitt der Länge nach machen, um eine Manschette zu machen. HINWEIS: Dies ist ein kritischer Teil der Nierenarterienstenose, der äußerste Präzision, Liebe zum Detail und Geduld erfordert. Versuchen Sie, mehrere Stücke Polyurethanschläuche gleichzeitig zu schneiden. Führen Sie alle diese Verfahren unter dem Mikroskop durch.</li>
	<li>Bevor Sie fortfahren, ziehen Sie chirurgische sterile Handschuhe und eine chirurgische Maske an.</li>
	<li>Verwenden Sie C57BL / 6 Wildtyp-Mäuse (WT) von 6-8 Wochen. Verwenden Sie eine gleiche Anzahl von männlichen und weiblichen Mäusen, um sexuelle Verzerrungen zu vermeiden.</li>
	<li>Notieren Sie das Gewicht der Mäuse, bevor Sie eine Operation durchführen. Das Idealgewicht für die Durchführung einer Nierenarterienstenose mit Polyurethanschlauch beträgt 18-22 g. Behandeln Sie Mäuse vorsichtig und bewegen Sie sich nicht, während Sie die Anästhesie injizieren. Präoperative Analgesie (Ketofgen, 5 mg/kg Körpergewicht) verabreichen. HINWEIS: Wenn Sie die Mäuse von ihrem Wohnzimmer in den Operationssaal bringen, tragen Sie sie mit großer Sanftheit und Vorsicht, um Unruhe zu vermeiden. Es wird dringend empfohlen, Mäusekäfige in den Händen anstelle eines Trolleys zu tragen.</li>
	<li>Betäuben Sie die Mäuse mit einer Mischung aus Ketamin (100 mg/kg KG) und Xylazin (10 mg/kg KG) über intraperitoneale (I.P.) Injektionen.</li>
	<li>Setzen Sie die Maus wieder in den Käfig, bis sie vollständig betäubt ist. Es dauert etwa 4-5 Minuten, bis die Maus völlig bewusstlos ist. Kneifen Sie den Schwanz oder Zeh mit einer Pinzette, um zu überprüfen, ob die Maus völlig bewusstlos und bereit für die Operation ist.</li>
	<li>Legen Sie die Maus auf den Rücken auf ein Papiertuch. Entfernen Sie die Haare des seitlichen Bauches mit einer elektrischen Haarschneidemaschine in entgegengesetzter Richtung des Haarwuchses. Nachdem Sie die Operationsstelle rasiert haben, reinigen Sie den Bereich mit einem chirurgischen Peeling, das Jod (oder Chlorhexidin) enthält, gefolgt von einer Spülung mit 70% Ethanol (oder steriler Kochsalzlösung).  Wiederholen Sie 3 mal. HINWEIS: Die Haarentfernung muss in einiger Entfernung oder vorzugsweise auf einer anderen Bank als die Operationsbank durchgeführt werden, um Haarstörungen und Haarkontaminationen während des chirurgischen Eingriffs zu vermeiden.</li>
	<li>Decken Sie das Heizkissen mit einem sterilen Blatt ab. Bringen Sie die Maus zur Operationsbank und legen Sie sie auf das sterile Blatt, wobei Sie die rechte seitliche Seite der Maus in Richtung Mikroskop zeigen. Halten Sie eine konstante Pad-Temperatur von 37 °C mit zirkulierendem Wasser aufrecht.</li>
	<li>Öffnen Sie den sterilisierten Beutel mit allen chirurgischen Geräten. Machen Sie mit einem Seziermikroskop und einer sterilen scharfen Schere einen kleinen Flankenschnitt (nahe der 13. Brustrippe, die letzte Rippe bei der Maus) und etwa 0,5 cm von den Wirbeln entfernt. Gehen Sie entlang der Lendenwirbel und machen Sie einen 1-Zoll-Einschnitt.</li>
	<li>Ziehen Sie die Haut und den Muskel zurück, um die Niere freizulegen.</li>
	<li>Reinigen und entfernen Sie das umgebende Fett mit sterilen Wattestäbchen, um die Nierenarterie zu isolieren. Isolieren Sie den Nierennerv mit einer gekrümmten Pinzette von der Nierenarterie.</li>
	<li>Wenn Sie die Scheinoperation durchführen, legen Sie Nähte an, um die Haut zu schließen, und tragen Sie ein Antibiotikum auf die geschlossene Wunde auf, dann fahren Sie mit der postoperativen Pflege fort. Wenn nicht, fahren Sie mit dem folgenden Abschnitt fort, um die Arterie zu stenosieren. HINWEIS: Jedes Experiment sollte Scheintiere als Kontrollen des chirurgischen Eingriffs haben. Scheintiere bestehen aus Mäusen, die den chirurgischen Eingriff durchlaufen haben, bei dem die Nierenarterie freigelegt wurde, ohne eine Manschette darauf zu legen.</li>
</ol>2. Rechtsrenarterienstenose
<ol><li>Legen Sie zwei Nylonnähte unter die rechte Nierenarterie, machen Sie lose Knoten und legen Sie dann die Manschette um die Hauptnierenarterie ungefähr gleich weit entfernt zwischen Niere und Aortenbifurkation</li>
	<li>Schließen Sie die Manschette mit den Nylonnähten. Machen Sie vier Knoten für jede Naht, um die Wahrscheinlichkeit zu vermeiden, dass die Nähte nach der Operation verloren gehen.</li>
	<li>Schließen Sie den Schnitt im Muskel, indem Sie eine einfache durchgehende Naht anwenden.</li>
	<li>Machen Sie einfache unterbrochene Nähte, um die Haut zu schließen.</li>
	<li>Verabreichen Sie IACUC-zugelassene Analgetika. HINWEIS: Autoklavieren Sie chirurgische Instrumente vor jedem Gebrauch. Wenn mehr als eine Operation gleichzeitig durchgeführt wird, wischen Sie alle verwendeten Werkzeuge mit einem sterilen Alkoholmessgerät ab und legen Sie sie nach jeder Operation für 15-30 s in einen heißen Keimer. Wechseln Sie sterile Handschuhe auch für jede Maus.</li>
</ol>3. Nachsorge
<ol><li>Bringen Sie die Mäuse in ihren Käfig zurück und lassen Sie den Käfig halb an, halb aus, ein zirkulierendes Wasserheizkissen für 2 - 3 Stunden. Fügen Sie Gel-Diät-Erholungsnahrung in den Käfig ein.</li>
	<li>Schmerzmittel (Ketoprofen) intraperitoneal (Dosis: 5 mg/kg Körpergewicht) am nächsten Tag verabreichen.</li>
	<li>Wiegen Sie die Mäuse für die nächsten zwei Tage; Wenn einige Mäuse mehr als 20% ihres Gewichts verlieren, konsultieren Sie den Tierarzt und entscheiden Sie, ob das Tier nach dem entsprechenden IACUC-zugelassenen Verfahren eingeschläfert werden muss.</li>
	<li>Überwachen Sie die Mäuse täglich, um Rötungen, Schwellungen, Schmerzen oder Infektionen zu beurteilen.</li>
	<li>Suchen Sie tierärztliche Beratung für postoperative Komplikationen in Übereinstimmung mit den institutionellen IACUC-Richtlinien.</li>
</ol>4. Gewebeentnahme
<ol><li>Gewebe 3 Wochen nach dem chirurgischen Eingriff entnehmen. Notieren Sie das Gewicht jeder Maus.</li>
	<li>Euthanasieren Sie die Maus mit einem IACUC-zugelassenen Verfahren.</li>
	<li>Legen Sie die Maus in Rückenlage auf eine sterile Plattform, um sie zu sezieren.</li>
	<li>Sichern und strecken Sie die Gliedmaßen, um die Bewegung einzuschränken.</li>
	<li>Besprühen Sie die Mäuse gründlich mit 70% Ethanol.</li>
	<li>Machen Sie einen Mittellinienschnitt, um den Bauch und den Brustbereich mit einer scharfen Schere zu öffnen.</li>
	<li>Ziehen Sie die Haut und die Peritonealwand zurück.</li>
	<li>Belichten Sie vorsichtig das Herz und punktieren Sie den rechten Ventrikel und entbluten Sie die Maus.</li>
	<li>Entfernen Sie beide Nieren mit einer Pinzette. Nieren befinden sich auf dem Rücken der Mäuse. HINWEIS: Mischen Sie nicht beide Nieren. Achten Sie auf stenosierte, vorgetäuschte und kontralaterale Nieren.</li>
	<li>Entfernen Sie die Nierenkapsel, reinigen Sie sie von jeglichem Fett und notieren Sie das Gewicht jeder Niere separat.</li>
	<li>Schneiden Sie einen Längsschnitt beider Nieren ab und fixieren Sie 4% PFA über Nacht bei 4 ° C, um später für die Paraffineinbettung verarbeitet zu werden, um eine In-situ-Hybridisierung (ISH) und Immunhistochemie (IHC) durchzuführen. Befolgen Sie die ISH- und IHC-Protokolle wie berichtet23,24.</li>
	<li>Isolieren Sie den Kortex der verbleibenden Niere und gefrieren Sie in flüssigem Stickstoff, um Western Blot durchzuführen. Lagern Sie die Proben bis zur Analyse bei -80 °C.</li>
	<li>Quantifizieren Sie Renin- und N-GAL-Ausdrücke mit Western Blot, wie in der Literatur 23,24 beschrieben.</li>
</ol>5. Statistik
<ol><li>Verwenden Sie Einweg- oder Zweiweg-ANOVA für Experimente mit drei oder mehr Bedingungen, gefolgt von Bonferroni-Post-hoc-Tests für Vergleiche zwischen einzelnen Gruppen. Betrachten Sie einen p-Wert gleich oder kleiner als 0,05 als signifikant. Verwenden Sie Software (z. B. GraphPad Prism 8.2), um alle statistischen Analysen durchzuführen.</li>
</ol>

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<li>Wiesel, P., Mazzolai, L., Nussberger, J., Pedrazzini, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-kidney%2C+one+clip+and+one-kidney%2C+one+clip+hypertension+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Two-kidney, one clip and one-kidney, one clip hypertension in mice.</a> Hypertension. 29 (4), 1025-1030 (1997).</li>
<li>Johns, C., Gavras, I., Handy, D. E., Salomao, A., Gavras, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+experimental+hypertension+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Models of experimental hypertension in mice.</a> Hypertension. 28 (6), 1064-1069 (1996).</li>
</ol>

Es werden keine Interessenkonflikte, finanziell oder anderweitig, von den Autoren erklärt.

Nierenarterienstenose ist eine wichtige Ursache für sekundäre oder resistente Hypertonie und Nierenschädigung 1,29. Das Goldblatt-Modell mit zwei Nieren (2K1C) wurde verwendet, um RAStenosis-induzierte renovaskuläre Hypertonie 1,17,18,19 zu untersuchen. Eine Reihe früherer Studien mit verschiedenen Tiermodellen haben gezeigt, dass eine ...

Die Nierenarterienstenose (RAStenosis) ist ein hartnäckiges Problem, von dem etwa 6% der Menschen über 65 und bis zu 40% der Menschen mit koronarer oder peripherer Gefäßerkrankung betroffen sind 1,2. Aktuelle Behandlungen für die Krankheit sind begrenzt; Daher besteht ein dringender Bedarf an der Entwicklung neuer Therapien zur Behandlung der renovaskulären Hypertonie oder der resistenten Hypertonie, die durch RAStenosis induziert wird. Das Renin-Angiotensin-Aldosteron-System (RAAS) ist der Schlüsselweg, der an der Pathogenese der RAStenosis-induzierten Hypertonie oder der renovaskulären Hypertonie beteiligtist 3,4. Bekannte Therapien, die auf RAAS abzielen, wie ACE-Hemmer oder Angiotensin-Rezeptorblocker, lindern Bluthochdruck, müssen jedoch eingehend auf Nierenversagen und Hyperkaliämie untersuchtwerden 5,6,7. Renin katalysiert den ratenbegrenzenden Schritt in RAAS; es wandelt Angiotensinogen in Angiotensin I um. Bei Atherosklerose verursacht die Bildung von Plaque die Verengung der Nierenarterie, die die Reninsekretion antreibt, was zu renovaskulärer Hypertonie und Nierenschäden führt8. Eine Reihe von Studien berichtete über erhöhte oxidative Belastungen während der renovaskulären Hypertonie beim Menschen, die mit dem Modell der zwei Nieren One Clip (2K1C) Mäuse sowie anderen hypertensivenTiermodellen 2,9,10,11,12,13,14,15,16 bestätigt wurden. . Der molekulare Mechanismus der Reninexpressionskontrolle während der RAStenosis-induzierten renovaskulären Hypertonie ist nicht gut verstanden und rechtfertigt weitere Untersuchungen.
Experimentelle Tiermodelle, die RAStenosis zuverlässig und reproduzierbar rekapitulieren, sind wichtig, um die zellulären und molekularen Mechanismen der Renin-Expressionskontrolle für die Entwicklung neuartiger Therapien aufzuklären. Das 2K1C-Mausmodell ist ein etabliertes experimentelles Modell zur Untersuchung der Pathogenese der renovaskulären Hypertonie17,18,19,20. Dieses Modell wird durch die Verengung der Nierenarterie unter Verwendung eines Clips 17,20,21 erzeugt, wodurch ein Nierenarterienverschluss erzeugt wird, der zu einer Erhöhung der Reninexpression und Hypertonieführt 17,19,20,21. Es liegen jedoch keine technischen Berichte vor, die ein schrittweises Vorgehen zur Erzeugung einer Nierenarterienstenose im Tiermodell beschreiben.
Herkömmliche U-förmige Silberclips, Polyurethanröhrchen und andere Clips wurden verwendet, um die Nierenarterie zu verengen, um eine Nierenarterienstenose zu induzieren. Einige Studien haben gezeigt, dass das Design und das Material des Clips entscheidend sind, um zuverlässige und reproduzierbare Daten mit dem 2K1C-Tiermodell zu erhalten. Laut Lorenz et al. induziert die Verwendung herkömmlicher U-designter Silberclips eine niedrige Erfolgsrate von Bluthochdruck (40-60%)21. Aufgrund des Clip-Designs wird die Nierenarterie seitlich gedrückt, was einige Verengungen und eine größere Wahrscheinlichkeit auslöst, von der Nierenarterie entfernt zu werden. Silberformbarkeit und Duktilität können Änderungen der Clipbreiten ermöglichen; Daher verursacht dies unterschiedliche Hypertoniewerte bei Mäusen. Silberdioxid auf dem Clip kann perivaskuläre Entzündungen, Intimproliferation und Gewebegranulation verursachen und den Durchmesser der Nierenarterieverändern 22. Aufgrund der Variabilität der Hypertoniegrade, die mit dem herkömmlichen U-Design-Silberclip erzielt wurden, haben Warner et al. und Lorenz et al. erfolgreich einen Polyurethanschlauch mit runderen Design verwendet, um eine Nierenarterienstenose bei Mäusen einzuleiten, wodurch eine zuverlässigere und konsistentere Induktion des Tiermodells20,21 mit zwei Nieren erzeugt wurde.
In diesem Bericht beschreiben wir ein chirurgisches Protokoll zur Erzeugung einer experimentellen RAStenose bei Mäusen, wobei der Polyurethanschlauch verwendet wird, um die Nierenarterie zu verengen. Die Polyurethan-Manschette mit rundem Design ist ein reproduzierbarerer, zuverlässigerer und kostengünstigerer Clip zur Erzeugung von Stenosen bei Mäusen. Ziel dieses experimentellen Modells ist es, den molekularen und zellulären Mechanismus der Reninexpressionskontrolle während der Nierenarterienstenose zu untersuchen und zu definieren. Wir bestätigten den Erfolg des RAStenosis-Mäusemodells durch Messung der Reninexpression und des Nierenverletzungsmarkers neutrophiles Gelatinase-assoziiertes Lipocalin (N-GAL).

<table><tbody><tr><td>Diet Gel</td><td>Clear H2O</td><td>Diet-Gel 76A</td><td>Surgery Recovery Diet</td></tr><tr><td>EMC Heated Hard Pad</td><td>Hallowell</td><td>000A2788B</td><td>Heizkissen wurden verwendet, um Mäuse warm zu halten</td></tr><tr><td>Ethilon Nylon Naht</td><td>Ethicon</td><td>662G</td><td>4-0 (1,5 metrisch), Diese Naht wurde verwendet, um das Bauchfell und die Haut zu schließen</td></tr><tr><td>Ethilon Nylon Naht</td><td>Ethicon</td><td>2815 G</td><td>8-0 (0,4 metrisch), Diese Naht wurde verwendet, um die Manschette zu schließen, um die Arterie zu binden und zu verengen</td></tr><tr><td>Germinator 500</td><td>Braintree Scientific Inc.</td><td>GER 5287</td><td>Sterilisieren Sie chirurgische Instrumente zwischen Operationen</td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>Zoetis</td><td>Ketofen</td><td>Schmerzmittel</td></tr><tr><td>Polyurethan</td><td>Braintree Scientific Inc.</td><td>MRE-025</td><td>Dieser Schlauch wurde verwendet, um eine Stenose einzuleiten</td></tr><tr><td>Povidon-Jod antiseptische Tupfer</td><td>Medline</td><td>MDS093901</td><td>Es wurde nach der Haarentfernung und Operation auf der Haut aufgetragen</td></tr><tr><td>Reflex 7 Clip Applier</td><td>Roboz Chirurgisches Instrument Co</td><td>204-1000</td><td>Dieser Clip Applier wurde verwendet, um einen Clip anzubringen, falls eine oder mehrere Nähte abgingen</td></tr><tr><td>Sterile Handtuchabdeckungen</td><td>Dynarex</td><td>4410</td><td>Es wurde während der Operation als Bettlaken für Mäuse verwendet</td></tr><tr><td>Dreifache antibiotische Salbe</td><td>Medi-First</td><td>22312</td><td></td></tr><tr><td>Wasserpumpe</td><td>Stryker</td><td>T/Pumpe Profis</td><td>Wird verwendet, um Wasser im Heiz-Hartkissen zu erwärmen und zu zirkulieren, um Mäuse während und nach der Operation warm zu halten</td></tr></tbody></table>

ein modifiziertes zwei-nieren-one-clip-mausmodell der reninregulation bei nierenarterienstenose

A Modified Two Kidney One Clip Mouse Model of Renin Regulation in Renal Artery Stenosis

Nierenarterienstenose ist eine häufige Erkrankung bei Patienten mit koronarer oder peripherer Gefäßerkrankung, bei der das Renin-Angiotensin-Aldosteron-System (RAAS) überaktiviert ist. In diesem Zusammenhang kommt es zu einer Verengung der Nierenarterien, die eine Erhöhung der Expression und Freisetzung von Renin, der geschwindigkeitsbegrenzenden Protease bei RAAS, stimuliert. Der daraus resultierende Anstieg der Reninexpression ist ein bekannter Treiber der renovaskulären Hypertonie, die häufig mit Nierenschäden und Endorganschäden einhergeht. Daher besteht ein großes Interesse an der Entwicklung neuartiger Behandlungen für diese Erkrankung. Der molekulare und zelluläre Mechanismus der Reninkontrolle bei Nierenarterienstenose ist nicht vollständig verstanden und erfordert weitere Untersuchungen. Um eine Nierenarterienstenose bei Mäusen zu induzieren, wurde ein modifiziertes 2-Nieren-1-Clip (2K1C) Goldblatt-Mausmodell entwickelt. Die rechte Niere wurde bei Wildtyp-Mäusen stenosiert und scheinoperierte Mäuse wurden als Kontrolle verwendet. Nach Nierenarterienstenose bestimmten wir die Reninexpression und Nierenschädigung. Nieren wurden geerntet, und frische Kortices wurden verwendet, um die Protein- und mRNA-Expression von Renin zu bestimmen. Dieses Tiermodell ist reproduzierbar und kann verwendet werden, um pathophysiologische Reaktionen, molekulare und zelluläre Signalwege zu untersuchen, die an renovaskulärer Hypertonie und Nierenschäden beteiligt sind.

Die Verengung der Nierenarterien erhöht die Reninexpression in der stenosierten Niere und unterdrückt die Expression in der kontralateralen Niere. Das Zwei-Nieren-Eins-Clip (2K1C) oder Goldblatt-Modell der Stenose induziert eine erhöhte Reninexpression und Nierenschädigung. Dies gilt als das beste repräsentative Modell der einseitigen Nierenarterienstenose beim Menschen.
Die Expression von Renin und Prorenin (Vorstufe von Renin) wurde mittels Immunoblotting gemessen. Die Daten zeigen, dass die...

Ein modifiziertes Goldblatt-Mausmodell mit 2 Nieren 1 Clip (2K1C) wurde unter Verwendung von Polyurethanschläuchen entwickelt, um eine Nierenarterienstenose einzuleiten, die eine Erhöhung der Reninexpression und Nierenschädigung induziert. Hier beschreiben wir ein detailliertes Verfahren zur Vorbereitung und Platzierung der Manschette auf der Nierenarterie, um ein reproduzierbares und konsistentes 2K1C-Mausmodell zu erstellen.

Ein modifiziertes Zwei-Nieren-One-Clip-Mausmodell der Reninregulation bei Nierenarterienstenose

Renal artery stenosis is a common condition in patients with coronary or peripheral vascular disease where the renin angiotensin aldosterone system (RAAS) ...

Das 2K1C-Mausmodell ist eine zuverlässige und reproduzierbare Methode zur Induktion einer Nierenarterienstenose. Dieses Protokoll ist wertvoll für die Aufklärung molekularer Mechanismen, die an der Kontrolle der Reninexpression bei renaler vaskulärer Hypertonie beteiligt sind. Dieses Tiermodell ahmt die einseitige Nierenarterienstenose beim Menschen nach.Die Zuverlässigkeit und Reproduzierbarkeit machen es zu einem guten Modell, um neue therapeutische Ziele für die Behandlung der renalen vaskulären Hypertonie zu erkennen. Diese Technik erfordert grundlegende Kenntnisse in der Durchführung von Operationen bei Mäusen. Es gibt zwei kritische Teile: die Vorbereitung der Schläuche und die Platzierung der Schläuche in der Nierenarterie.Beides wird ausführlich beschrieben. Die Verengung der rechten Nierenarterie mit präzise geschnittenen Schläuchen ist entscheidend. Dieses Video des Verfahrens zeigt den Lernenden, wie sie den Schlauch durchschneiden, dann auf die Arterie zugreifen und sie verengen.Beginnen Sie damit, die Schläuche für das Stenoseverfahren zu durchtrennen. Schneide ein 0,5 Millimeter langes Stück Polyurethanschlauch mit einem scharfen Skalpell ab. Machen Sie dann eine Manschette, indem Sie 0,2 Millimeter des Umfangs mit einem Längsschnitt entfernen.Notieren Sie das Gewicht der Mäuse, das zwischen 18 und 22 Gramm liegen sollte, um eine Nierenarterienstenose mit dem Polyurethanschlauch durchzuführen. Das Gewicht der Mäuse ist entscheidend für die Durchführung der Operation. Nachdem Sie die Maus betäubt und dem Schmerzmittel verabreicht haben, legen Sie sie wieder in den Käfig, bis sie völlig bewusstlos ist.Kneifen Sie den Zeh mit einer Pinzette zusammen, um zu überprüfen, ob die Maus vollständig betäubt und bereit für die Operation ist. Legen Sie die Maus auf den Rücken auf ein Papiertuch weg vom Operationsbereich und entfernen Sie die Haare des seitlichen Bauches mit einem elektrischen Haarschneider, der der entgegengesetzten Haarwuchsrichtung folgt. Reinigen Sie den rasierten Bereich mit einem sterilen Alkohol-Mullpad und tragen Sie topische Povidon-Jod-Lösung auf.Öffnen Sie den sterilisierten Beutel mit allen chirurgischen Geräten. Wenn Sie unter dem Präpariermikroskop arbeiten, verwenden Sie eine sterile, scharfe Schere, um einen kleinen Flankenschnitt in etwa 0,5 Zentimeter Entfernung von den Wirbeln zu machen. Gehen Sie entlang der Lendenwirbel vor und machen Sie einen Einschnitt von einem Zoll.Ziehen Sie die Haut und den Muskel zurück, um die Niere freizulegen. Reinigen und entfernen Sie dann das umgebende Fett mit Wattestäbchen, um die Nierenarterie zu isolieren. Isolieren Sie den Nierennerv mit der gekrümmten Pinzette von der Nierenarterie.Reinige die ausgetretene Flüssigkeit in der Nähe der Nierenarterie mit einem Wattestäbchen. Legen Sie zwei Nylonnähte unter die rechte Nierenarterie, machen Sie lockere Knoten und legen Sie die Manschette um die Hauptnierenarterie in etwa gleichem Abstand zwischen der Nieren- und Aortengabelung. Schließen Sie die Manschette mit den Nylonnähten und machen Sie drei Knoten für jede Naht, um die Wahrscheinlichkeit zu vermeiden, dass die Nähte nach der Operation verloren gehen.Schließen Sie den Schnitt im Muskel, indem Sie eine einfache durchgehende Naht anlegen und einfache unterbrochene Nähte machen, um die Haut zu schließen. Bringen Sie die Mäuse in ihren Käfig zurück und lassen Sie den halben Käfig zwei bis drei Stunden lang auf einem zirkulierenden Wasserheizkissen, damit sich die Tiere von der Operation erholen können. Versorgen Sie die Tiere mit Gel-Diät, Erholungsfutter.Verabreichen Sie am nächsten Tag ein Schmerzmittel. Wiegen Sie die Mäuse in den nächsten zwei Tagen und konsultieren Sie den Tierarzt, wenn eine Maus mehr als 20 % ihres Gewichts verliert. Untersuchen Sie die Mäuse täglich, um sie auf Rötungen, Schwellungen, Schmerzen oder Infektionen zu beurteilen.Notieren Sie sich das Gewicht jeder Maus. Nachdem Sie das Tier eingeschläfert haben, legen Sie es in Rückenlage auf eine sterile Plattform. Sichern und verlängern Sie die Gliedmaßen, um die Bewegung einzuschränken, und besprühen Sie die Maus gründlich mit 70% Ethanol.Mache mit einer Schere einen Schnitt in der Mittellinie und öffne den Bauch- und Brustbereich. Ziehen Sie die Haut und die Bauchfellwand zurück, legen Sie dann vorsichtig das Herz frei und punktieren Sie den rechten Ventrikel. Entferne beide Nieren mit einer Pinzette und behalte im Auge, welche Niere stenosiert wurde.Entfernen Sie die Nierenkapseln, reinigen Sie sie von jeglichem Fett und notieren Sie das Gewicht jeder Niere separat. Schneiden Sie einen Längsschnitt beider Nieren und fixieren Sie sie über Nacht bei vier Grad Celsius in 4 % PFA für die In-situ-Hybridisierung und Immunhistochemie. Isolieren Sie die Rinde der verbleibenden Niere und frieren Sie sie in flüssigem Stickstoff ein, um einen Western Blot durchzuführen.Lagern Sie die Proben bis zur weiteren Analyse bei minus 80 Grad Celsius. Eine Verengung der Nierenarterie erhöht die Reninexpression in der stenosierten Niere, während sie die Expression in der kontralateralen Niere unterdrückt. Das Zwei-Nieren-Ein-Clip-Modell der Stenose induzierte die Reninexpression und erhöhte Nierenschäden.Die Expression von Renin und Prorenin wurde mittels Immunblotting gemessen. Die Daten zeigen, dass die Renin- und Proreninexpression in der stenosierten Niere im Vergleich zu kontralateralen und Scheinnieren zunahm, was darauf hindeutet, dass die Manschette die Nierenarterie verengte und Veränderungen der Nierenperfusion verursachte. Es wurde eine Immunhistochemie durchgeführt, um die Lokalisation der Reninexpression sichtbar zu machen.Die Bilder bestätigten eine erhöhte Expression von Renin in der abgeschnittenen Niere. Darüber hinaus wurde eine juxtaglomeruläre Zellrekrutierung entlang der afferenten Arterie in der stenosierten Niere beobachtet. Um den Effekt auf die Renin-mRNA-Expression zu untersuchen, wurde eine in situ Hybridisierung durchgeführt.Die Daten deuten auf eine erhöhte Rekrutierung von Renin-mRNA- und JG-Zellen in der stenosierten Niere hin. Ein weiteres Merkmal der Nierenarterienstenose ist die Hochregulierung von Nierenverletzungsmarkern aufgrund von Veränderungen der Nierenperfusion, der Superoxidproduktion und des Bluthochdrucks. Daher wurde N-GAL mit Immunblotting gemessen, was zeigt, dass der Marker für akute Nierenschäden in der stenosierten Niere stark hochreguliert war.Wenn Sie dieses Protokoll versuchen, denken Sie daran, die Nylonnähte um die Nierenarterie zu legen, bevor Sie die Manschette anlegen. Es hilft, das Verfahren zu beschleunigen.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Dieses Video zeigt ein Verfahren zur sympathischen Denervierung der Nierenarterie in einem Angiotensin-II-induzierten hypertensiven Mausmodell, bei dem Phenol verwendet wird, um die Funktion des sympathischen Nerven zu stören und den Blutdruck zu senken.

Sympathische Denervierung der Nierenarterien in einem Angiotensin-II-induzierten Hypertonie-Mausmodell

Das hier beschriebene Mausmodell der renalen Ischämie-Reperfusionsverletzung besteht aus einer rechten Nephrektomie, die Kontrollgewebe bereitstellt, und einer Klemmung des linken Nierenstiels, um eine Ischämie zu induzieren, die zu einem akuten Nierenversagen führt. Dieses Modell verwendet einen Mittellinien-Laparotomie-Ansatz, bei dem alle Schritte über einen Schnitt ausgeführt werden.

Renale Ischämie Reperfusionsschaden: Ein Maus-Modell der Schädigung und Regeneration

Die Maus isoliert perfundierten Nieren (MIPK) ist eine Technik zum Halten einer Mausniere unter ex vivo - Bedingungen durchbluteten und funktionell für 1 Std. Die Puffer und die chirurgische Technik werden ausführlich beschrieben.

Die Maus isoliert perfundierten Nieren-Technik

Diese Handschrift enthält eine detaillierte zweistufigen chirurgische Prozedur zum Maus 5/6th partiellen Nephrektomie (PNx) mit Pol Ligatur durchzuführen. Vier Wochen nach der Operation im Vergleich zu Schein betrieben Mäuse, die PNx Mäuse entwickelt, eingeschränkter Nierenfunktion, Anämie, Herzhypertrophie, kardialer Fibrose und sank der systolische und der diastolische Herzfunktion.

5/6th Nephrektomie Mausmodell, die experimentelle urämischen Kardiomyopathie induziert

Nierenischämie-Reperfusionsverletzungen sind mit hoher Morbidität und Mortalität bei hospitalisierten Patienten verbunden. Hier stellen wir ein einfaches und effektives Mausmodell der einseitigen renalen Ischämie-Reperfusionsverletzung vor und geben einen sequentiellen Überblick über repräsentative pathologische Veränderungen, die in der Niere beobachtet wurden.

Ein effektives Mausmodell der einseitigen renalen Ischämie-Reperfusionsverletzung

Hier stellen wir ein Protokoll für die renale sympathische Denervierung (RDN) bei Mäusen mit Bluthochdruck vor, die durch Angiotensin-II-Infusion induziert wurde. Das Verfahren ist wiederholbar, bequem und ermöglicht es, die Regulationsmechanismen von RDN bei Bluthochdruck und Herzhypertrophie zu untersuchen.

Verbesserte renale Denervierung milderte Hypertonie durch Angiotensin-II-Infusion

Dieses Protokoll beschreibt die chirurgischen Schritte der Bildung einer musinen gemeinen iliakalen arteriovenösen Fistel. Wir haben dieses Modell entwickelt, um die Pathophysiologie der Gliedmaßen zu untersuchen, die mit dem Zugang zur Hämodialyse zusammenhängt.

Ein murines Modell der Hämodialysezugangsbedingten Handfunktionsstörung

Diese Arbeit enthält detaillierte Anweisungen, die es den Forschern ermöglichen, eine reversible einseitige Harnleiterobstruktion bei Mäusen unter Verwendung eines standardisierten Modells durchzuführen, das eine Analyse der langfristigen strukturellen und funktionellen Ergebnisse nach der Umkehrung einer anhaltenden Harnleiterobstruktion ermöglicht.

Ein Mausmodell zur Bewertung der langfristigen strukturellen und funktionellen Ergebnisse nach der Umkehrung einer anhaltenden einseitigen Harnleiterobstruktion

Dieser Artikel präsentiert ein ischämisches CKD-Modell unter Verwendung einer einseitigen nierenen IRI mit kontralateraler Nephrektomie, die einen Tag vor der Probenentnahme durchgeführt wird; dieses Protokoll ermöglicht eine serumbasierte funktionelle Beurteilung, ein hohes Überleben und reproduzierbare CKD-Pathologie nach 28 und 42 Tagen und bietet eine vielseitige Plattform für mechanistische und interventionelle Studien.

Mausmodell des Übergangs von akuter zu chronischer Nierenerkrankung, induziert durch Nierenischämie/Reperfusionsverletzung

Eine genaue Mausmodell für akute Nierenschädigung (AKI) aufgrund einer Ischämie ist ein wichtiges Instrument, um akutes Nierenversagen zu untersuchen und möglicherweise finden therapeutische Werkzeuge zur Nierenschädigung zu behandeln. Die hängende Gewicht System bietet ein Werkzeug für die sofortige und zuverlässige Nierenarterie Okklusion und Reperfusion ohne Nieren Staus.

Die Verwendung eines Hanging-weight-System für Isolated Nierenarterie Occlusion

Lernen Sie das modifizierte Zwei-Nieren-One-Clip-Mausmodell zur Untersuchung der Reninregulation bei Nierenarterienstenose. Diese Methode ermöglicht die Erforschung molekularer Mechanismen und therapeutischer Ansätze bei renaler Hypertonie.

Ein modifiziertes Zwei-Nieren-One-Clip-Mausmodell der Reninregulation bei Nierenarterienstenose

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