Name: Ein planarischer Motilitätstest zur Messung der biomodulierenden Eigenschaften natürlicher Produkte (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: Erfahren Sie den Planarian Locomotor Velocity Test zur Bewertung biomodulierender Eigenschaften natürlicher Produkte bei Planarien. Diese Methode liefert zuverlässige Verhaltensdaten für präklinische Einblicke in Wirbeltierreaktionen.

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Die Autoren möchten das Büro von Institutional Advancement und die Morrisville College Foundation für ein Publikationsstipendium zur Unterstützung dieser Arbeit sowie das SUNY Morrisville Collegiate Science and Technology Entry Program (CSTEP) für ihre laufende Unterstützung und Unterstützung der Bachelor-Forschung bei SUNY Morrisville würdigen. Wir möchten auch Sophia Hutchens für die hilfreichen Kommentare zu der beschriebenen Technik danken.

1. Planare Haltung
<ol><li>Verwenden Sie Planarier, die von einem biologischen Versorgungsunternehmen gekauft oder bei Bedarf wild gefangen werden. Die in diesem Protokoll verwendeten Planarier sind Dugesia tigrina, wie in der Versorgungsliste aufgeführt. Diese Art wird auch als Girardia tigrina31bezeichnet. Andere aquatische planare Arten sind auch akzeptabel2,3. HINWEIS: Das beschriebene Protokoll richtet sich an Tiere, die von einem biologischen Versorgungsunternehmen gekauft wurden. Dieses Assay-System wurde nicht mit wildgefangenen Planariern getestet. Wenn jedoch wild gefangene Planarier verwendet werden, wird empfohlen, dass sie an das in den Experimenten verwendete Wasser sowie die Laborumgebung für mindestens 1 Woche vor Gebrauch gewöhnt werden.</li>
	<li>Nach der Ankunft, Transfer Planarians auf Kunststoff-Lebensmittel-Lagerbehälter mit sauberem Quellwasser und halten Sie die Deckel ajar.</li>
	<li>Halten Sie Planarier in einer abgedunkelten Umgebung.</li>
	<li>Füttern Sie neu gelieferte Planarier nach 24-36 h in ihrer neuen Umgebung.</li>
	<li>Lassen Sie die Planarier sich mindestens 1 Woche vor dem Experimentieren an das Labor akklimatisieren.</li>
	<li>Füttern Sie Planarier nach einem regelmäßigen Zeitplan von zweimal pro Woche.<ol>
<li>Erlauben Sie Planariern, ad libitum auf gehackte Bio-gekochte Eier oder gemischte Bio-Rinderleber für 1-2 h zu füttern.</li>
		<li>Fütternde Planarier nach der Fütterung in einen sauberen Behälter geben.<ol>
<li>Entfernen Sie das verschmutzte Wasser von den Planariern.</li>
			<li>Verwenden Sie einen kleinen flachen Aquarellpinsel (Nummer 3–6), um Lebensmittelreste und Schleim, die an dem Behälter haften, von rund Planariern auf ein Papiertuch zu übertragen.</li>
			<li>Mit frischem Quellwasser und sanftem Wirbeln oder Erregen, vertreiben Sie Planarier und gießen Sie sie in einen sauberen Behälter.</li>
			<li>Alle am Behälter verbliebenen Planarier können mit einem runden Aquarellpinsel (Nummer 3–6) oder einer Transferpipette mit breiter Bohrung übertragen werden.</li>
			<li>Dekantieren Sie das Transferwasser.</li>
			<li>Bedecken Sie die Planarien mit sauberem Quellwasser.</li>
			<li>Entfernen Sie die Planarien aus der ausgestoßenen Lebensmittelverschwendung nach 24 h, indem Sie sie wie oben beschrieben in einen sauberen Behälter überführen (Schritte 1.6.2.1–1.6.2.6).</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>Um Behälter und Utensilien für die planare Haltung zu reinigen, verwenden Sie keine Seife oder Reinigungsmittel. Reinigen Sie diese Gegenstände, indem Sie sie gut mit sauberem Wasser spülen (Leitungswasser ist akzeptabel) und trocknen Sie sie mit einem sauberen Tuch oder Papiertuch.</li>
</ol>2. Vorbereitung von Planariern für Experimente
<ol><li>Lassen Sie neu ausgelieferte Planarier sich mindestens 1 Woche vor dem Experimentieren an ihre Umgebung anklimatisieren.</li>
	<li>Verhungern Sie Planarier für 5-10 Tage vor dem Experimentieren.</li>
	<li>Ändern Sie das Kulturwasser mindestens 1x während der Hungerperiode.</li>
</ol>3. Planarer Bewegungsgeschwindigkeitstest (pLmV): Stimulanzienverhalten
<ol><li>Stellen Sie vor dem Experimentieren sicher, dass ausgehungerte Planarier vollständig ausgebildet sind, mit einem vollständigen und pigmentierten Kopf und Schwanz.</li>
	<li>Bereiten Sie vor Beginn des Experiments eine 10 cm-Petrischale aus Glas oder Kunststoff und einen Wohnbehälter für den pLmV-Test vor.<ol>
<li>Legen Sie eine saubere Petrischale mit einem Durchmesser von 10 cm für den pLmV-Test auf vorlaminiertem Gitterpapier (mit 0,5 cm Quadraten) an.</li>
		<li>Fügen Sie 20 ml unverfälschtem Quellwasser für die Kontrollen oder Quellwasser mit der entsprechenden Konzentration des zu prüfenden Naturprodukts zu der Petrischale mit einem Durchmesser von 10 cm hinzu, die für den pLmV-Test verwendet werden soll.</li>
		<li>Positionieren Sie eine Kamera (z. B. Handy oder hochauflösende Kamera) über der vorbereiteten Petrischale mit einem Durchmesser von 10 cm, um während des Experiments planare Motilität über dem Gitterpapier aufzuzeichnen. Ein Ringständer ist eine bequeme Möglichkeit, die Kamera in einer Entfernung zu positionieren, die die gesamte Ansicht der 10 cm Petrischale und Gitterlinien aufzeichnen kann.</li>
		<li>Bereiten Sie einen Wohnbehälter mit 5–10 ml unverfälschtem Quellwasser (Kontrollen) oder Quellwasser vor, das die entsprechende Konzentration des zu prüfenden Naturprodukts enthält. Ein Behälter ähnlich einer Szintillationsdurchstechflasche oder einer kleinen 5 cm Petrischale ist geeignet.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Verwenden Sie einen kleinen, sauberen, flachen oder runden Aquarellpinsel, um einen Planarier vorsichtig aus dem Lagerbehälter mit Quellwasser in den Gewöhnungsbehälter mit 5–10 ml unverfälschtem Quellwasser oder Quellwasser zu bringen, das das zu prüfende Naturprodukt enthält. HINWEIS: Verwenden Sie beim Manipulieren von Planariern für den pLmV-Test einen kleinen, sauberen, flachen oder runden Aquarellpinsel (Nummer 3–6). Beim Bewegen von Planariern sollte der Pinsel unter das Tier gelegt werden, um es sanft zu heben. Um sicherzustellen, dass Dieplanare bei der Verwendung der Bürste nicht beschädigt werden, sollten die Borsten der Bürste nicht unter dem Tier ausgespreizt werden. Das Ausbreiten aus den Borsten könnte dem Planarier schaden, wenn er zwischen den Fasern der Bürste gefangen wird. HINWEIS: Eine weit bohrungstragende Transferpipette kann auch für die Übertragung des Planariers in einen sauberen und trockenen Wohnbehälter verwendet werden.<ol>
<li>Wenn Sie die Pipette verwenden, entfernen Sie überschüssiges Wasser, das mit dem Planarier aus dem Wohnbehälter bewegt wird, indem Sie die Transferpipette verwenden.</li>
		<li>Fügen Sie die Gewöhnungslösung (d. h. Quellwasser für Kontrollen oder Quellwasser, das die Konzentration des zu prüfenden Naturprodukts enthält) vorsichtig in den Gewöhnungsbehälter ein, der den Planarier enthält.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Die Besiedlungszeiten hängen von der Stimulationsdynamik ab, die für das zu prüfende Naturprodukt bewertet wird. Eine Gewöhnungszeit von 2 min erwies sich als akzeptabel, um Stimulation in dieser Arbeit zu erkennen1.</li>
	<li>Nach der 2-min-Gewöhnungszeit verwenden Sie einen Aquarellpinsel, um den Planarier für das pLmV Stimulationsexperiment sanft in die Mitte der vorbereiteten 10 cm Petrischale zu übertragen.</li>
	<li>Starten Sie die Kamera, um die Bewegung des Planariers aufzuzeichnen. Aufzeichnung 10–11 min Video.</li>
	<li>Bereiten Sie den Wohnbehälter und die 10 cm Petrischale für das pLmV-Experiment mit frischen Lösungen für jeden Planarier vor.</li>
	<li>Verwenden Sie spezielle Pipetten, Geschirr, Behälter und Pinsel für jede experimentelle Konzentration des zu testenden Naturprodukts, um zu vermeiden, dass Planarier während des Experimentierens versehentlich der falschen Lösung aussetzen.</li>
	<li>Da Planarier erlerntes Verhalten aufweisen, sollte jeder Planarier (Kontrolle oder Test) nur einmal21,22verwendet werden.</li>
</ol>4. Planarer Bewegungsgeschwindigkeitstest (pLmV): Entzugsverhalten
<ol><li>Stellen Sie vor dem Experimentieren sicher, dass ausgehungerte Planarier vollständig ausgebildet sind, mit einem vollständigen und pigmentierten Kopf und Schwanz.</li>
	<li>Bereiten Sie eine 10 cm Petrischale (Glas oder Kunststoff) für das pLmV-Experiment, eine 5 cm Petrischale (Glas oder Kunststoff) zum Spülen des Planariers nach der Gewöhnung und einen Wohnbehälter vor Beginn des Experiments vor.<ol>
<li>Legen Sie eine saubere Petrischale mit einem Durchmesser von 10 cm für das pLmV-Experiment auf vorlaminiertem Gitterpapier mit 0,5 cm Quadraten.</li>
		<li>Fügen Sie der Petrischale mit einem Durchmesser von 10 cm 20 ml unverfälschtes Quellwasser hinzu, das für das pLmV-Experiment verwendet werden soll.</li>
		<li>Positionieren Sie eine Kamera über der vorbereiteten Petrischale mit einem Durchmesser von 10 cm wie in Schritt 3.2.3, um während des Experiments planare Motilität über dem Gitterpapier aufzuzeichnen.</li>
		<li>Bereiten Sie den planaren Spülbehälter vor, indem Sie 5 ml Quellwasser allein auf die 5 cm Petrischale auffügen.</li>
		<li>Bereiten Sie einen Wohnbehälter mit 5–10 ml unverfälschtem Quellwasser (Kontrollen) oder Quellwasser vor, das das zu prüfende Naturprodukt enthält. Ein Behälter ähnlich einer Szintillationsdurchstechflasche oder einer kleinen 5 cm Petrischale (Glas oder Kunststoff) ist geeignet.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Verwenden Sie einen kleinen, sauberen, flachen oder runden Aquarellpinsel, um einen Planarier vom Quellwasser in den vorbereiteten Wohnbehälter mit 5–10 ml unverfälschtem Quellwasser (Kontrollen) oder Quellwasser zu bringen, das das zu prüfende Naturprodukt enthält. Bewegen Sie das Tier vorsichtig vom Lagerbehälter in den Gewöhnungsbehälter. Stellen Sie sicher, dass der Planarier nicht durch den Pinsel beschädigt wird. HINWEIS: Verwenden Sie beim Manipulieren von Planariern für den pLmV-Test einen kleinen, sauberen, flachen oder runden Aquarellpinsel (Nummer 3–6). Beim Bewegen von Planariern sollte der Pinsel unter das Tier gelegt werden, um es sanft zu heben. Um sicherzustellen, dass Dieplanare bei der Verwendung der Bürste nicht beschädigt werden, sollten die Borsten der Bürste nicht unter dem Tier ausgespreizt werden. Das Ausbreiten aus den Borsten könnte dem Planarier schaden, wenn er zwischen den Fasern der Bürste gefangen wird. HINWEIS: Eine breite Bohrung TransferPipette kann auch verwendet werden, um den Planarier in einen sauberen und trockenen Gewöhnungsbehälter zu übertragen.<ol>
<li>Bei Verwendung der Pipette sollte überschüssiges Wasser, das mit dem Planarier bewegt wird, mit der Transferpipette aus dem Wohnbehälter entfernt werden.</li>
		<li>Fügen Sie die Gewöhnungslösung (d. h. unverfälschtes Quellwasser für Kontrollen oder Quellwasser, das das zu prüfende Naturprodukt enthält) vorsichtig in den Gewöhnungsbehälter mit dem Planarier ein.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Die Wartezeiten für die Entnahme hängen von der Stimulationsdynamik ab, die für das zu prüfende Naturprodukt bewertet wird; 2:5 min haben sich als ausreichend erwiesen.</li>
	<li>Nach der Gewöhnungszeit verwenden Sie einen Aquarellpinsel, um den Planarier sanft auf die vorbereitete 5 cm Petrischale mit Quellwasser zu übertragen, um jedes Naturprodukt aus dem Gewöhnungsbehälter abzuspülen. Stellen Sie sicher, dass der Planarier nicht durch den Pinsel beschädigt wird.</li>
	<li>Den Planarier sofort in die Mitte der vorbereiteten 10 cm Petrischale mit Quellwasser für das pLmV-Entzugsexperiment verlegen. Stellen Sie sicher, dass der Planarier nicht durch den Pinsel beschädigt wird.</li>
	<li>Starten Sie die Kamera, um die Bewegung des Planariers aufzuzeichnen. Aufzeichnung 10–11 min Video.</li>
	<li>Bereiten Sie den Wohnbehälter, den Spülbehälter und die 10 cm Petrischale für das pLmV-Experiment mit frischen Lösungen für jeden Planarier vor.</li>
	<li>Verwenden Sie spezielle Pipetten, Geschirr, Behälter und Pinsel für jede experimentelle Konzentration des zu testenden Naturprodukts, um zu vermeiden, dass Planarier während des Experimentierens versehentlich der falschen Lösung aussetzen.</li>
	<li>Da Planarier erlernteVerhaltensweisen aufweisen, verwenden Sie jeden Planarier (Kontrolle oder Test) nur einmal26,27.</li>
</ol>5. Datenanalyse
<ol><li>Bereiten Sie eine Datensammlungstabelle vor, um das Verhalten und die Beweglichkeit von Planariern zu dokumentieren, da die Anzahl der Rasterlinien, die während der pLmV-Ausführung für jede Minute überschritten wurden. Die Tabelle sollte es ermöglichen, dass auch die kumulierte Anzahl von Zeilen pro Minute, die vom Planarier überschritten werden, dokumentiert werden kann. Fügen Sie Zeilen für Notizen und eine Tabelle mit Definitionen ein, um die Beobachtung von Verhaltensweisen während des Versuchszeitraums zu zählen, z. B. "wandern" und "anhalten" (siehe Diskussion).</li>
	<li>Zählen Sie mithilfe des Videos die Anzahl der vollständigen Rasterlinien, die vom Planarier pro Minute für 10 minuten überschritten werden, und notieren Sie diese Zahl in der Datentabelle. Typisches planares Verhalten besteht aus kontinuierlicher Geschwindigkeit, vorwärts gerichteter, horizontaler Bewegung, mit periodischen Drehungen und ohne Stopps.<ol>
<li>Beginnen Sie, das Experiment an dem Punkt zu beginnen, an dem der Planarier den Pinsel, mit dem er verwendet wurde, auf die 10 cm Petrischale übertragen hat. Zeichnen Sie diese Startzeit auf.</li>
		<li>Um zu bestimmen, wann das Tier ein vollständiges Rasterquadrat kreuzt, konzentrieren Sie sich auf den Kopf und punkten Sie eine Linie, wenn der Kopf ein Quadrat vollständig kreuzt.</li>
		<li>Um ein vollständiges Raster zu erzielen, wenn sich der Wurm um den Rand der Schale bewegt, visualisieren Sie einen Abstand von 0,5 cm, indem Sie auf die Linien verweisen, die sich von den Rändern der Schale erstrecken. Wenn der Planarier die Ecke eines Felds kreuzt, beziehen Sie sich auf die zweite Linie, die überschritten wird, um eine Rasterlinie zu erzielen. Konzentrieren Sie sich erneut auf den Kopf, um diese Entscheidungen zu treffen.</li>
		<li>Beenden Sie das Video nach jeder Minute, um die Daten aufzuzeichnen.</li>
		<li>Wenn das Video neu gestartet wird, um die nächste Minute zu zählen, wenn sich der Kopf des Wurms zwischen Gitternetzlinien befand, als das Video angehalten wurde, zeichnen Sie die erste Zeile auf, die als vollständige Sendebox gekreuzt wurde.</li>
		<li>Noten Sie die Anzahl der Gitterlinien, die für 10 min gekreuzt wurden.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Wenn sich das Tier während eines pLmV-Tests nicht mehr bewegt und während der 10-minuten-Aufzeichnungszeit keine Gitterlinien mehr kreuzt, dokumentieren Sie das Verhalten des Planariers im Verhaltensdiagramm (z. B. "wandern" oder "Stopp"). Tiere, die während des pLmV-Testes ihre Vorwärtsspur einstellen, sollten stattdessen zur Kenntnis genommen und die Daten als Häufigkeit der Gesamtzahl der Tiere dargestellt werden, die dieser Reagenzkonzentration ausgesetzt sind. Coiling oder Krampfverhalten (bekannt als C-Verhalten), das eine Vorwärtsbewegung während der Gewöhnungsperiode verhindert, weist darauf hin, dass die Konzentration des Naturprodukts nicht für die Verwendung in einem pLmV-Test geeignet ist, da der pLmV-Test auf Beweglichkeit basiert. C-Typ-Verhalten kann mit einem anderen Analysetyp analysiert werden (siehe Diskussion).</li>
	<li>Wenn möglich, testen Sie mehrere experimentelle Konzentrationen des Naturprodukts mit mindestens 9–12 Würmern an verschiedenen Tagen und zu verschiedenen Tageszeiten, wenn die Gesamtwirkung des Reagenzes auf die planarische Physiologie bestimmt wird. Wenn Forscher jedoch versuchen, die zirkadiane Rhythm-induzierte Variabilität zu reduzieren, können Experimente mit konstanter Beleuchtung zu einer festgelegten Tageszeit mit Würmern durchgeführt werden, die mit zeitlichen Licht-/Dunkelzyklen kultiviert werden und Fütterungszeiten einstellen. Mindestens zwei Experimentatoren am Projekt beteiligt haben, um die Möglichkeit zu ermöglichen, eine einzelne Datensatzdaten zu haben, während die zweite Person die Rasterlinien "blind" zu den Bedingungen für die Datenerfassung zählt. Die Beteiligung verschiedener Personen an der Datenerhebung sowie an statistischen Berechnungen und Analysen verringert auch mögliche Verzerrungen.</li>
	<li>Berechnen Sie die Anzahl der Rasterlinien für jede natürliche Produktkonzentration an jedem Tag relativ zur Kontrollanzahl für jede Minute, damit Daten aus verschiedenen Tagen, Zeiten und Experimentatoren kombiniert werden können. Diese Daten können gemittelt und dann mit den T-Tests von Student analysiert werden. Die P-Werte für jeden Test können pro Minute im Vergleich zur Kontrolle und zwischen den Reagenzkonzentrationen bewertet werden. ANOVA-Bewertungen mit Datensätzen aus verschiedenen experimentellen Konzentrationen bieten eine weitere Analysemethode.</li>
</ol>

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<li>Chan, J. D., Marchant, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+and+functional+genetic+assays+to+manipulate+regeneration+of+the+planarian+Dugesia+japonica%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Pharmacological and functional genetic assays to manipulate regeneration of the planarian Dugesia japonica.</a> Journal of Visualized Experiments. (54), e3058(2011).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu verraten.

Ein einfacher und zugänglicher planarer Motilitätstest wird beschrieben, um die Stimulans- und Entzugserscheinungen natürlicher Produkte zu bestimmen. Als Verhaltensmodell ist es notwendig, strenge Protokolle für scoring Bewegung und klare Definitionen von Verhaltensweisen zu haben, um Beobachtungen zwischen verschiedenen Experimentatoren zu standardisieren. Die vorgestellten Ideen zeigen, wie dies erreicht werden kann. Jedes Labor, das dieses Protokoll verwendet, sollte die vorgelegten Informationen an die Auswirkungen ...

Das beschriebene Protokoll verwendet die planare Beweglichkeit, um die biomodulierende Wirkung natürlicher Substanzen zu bewerten. Es wurde speziell angepasst, um festzustellen, ob diese Substanzen als Stimulanzien funktionieren, und ob sie dann mit einem messbaren Entzugsverhalten in Verbindung gebracht wurden1. Dieser Assay, bekannt als planarianer Lokomotorvelocity (pLmV) Test, wurde zuerst verwendet, um bekannte pharmakologische Wirkstoffe zu testen2,3. Die Anwendung dieses planarrischen Motilitäts-basierten Assays hat seitdem an Popularität gewonnen und wurde von verschiedenen Laboratorien angenommen, die an anderen Stoffen als natürlichenProdukten4,5interessiert sind. Für diesen Test wird ein Planarier in eine Petrischale mit Quellwasser oder Quellwasser mit gelöstem Biomodulator gelegt. Da die Schale selbst auf Graphenpapier platziert wird, kann die Anzahl der Gitterlinien, die das Tier mit der Zeit überquert, während es sich um den Behälter bewegt, verwendet werden, um die Bewegungsgeschwindigkeit in jedem Zustand zu bestimmen. Der Hell-Dunkel-Test, auch als Konditionierter Ortspräferenztest (CPP) bezeichnet, ist eine weitere Variante des Themas der Überwachung der planaren Beweglichkeit und bewertet, wie schnell die Tiere reagieren und in eine abgedunkelte Umgebung wandern6,7. Video-Tracking von planaren Bewegungen kann auch mit Computerprogrammen und Massenzentrum (COM) Tracking8,9,10,11analysiert werden.
Die Verwendung des Planariers als Tiermodell für solche Studien bietet mehrere Vorteile gegenüber anderen Tieren, da der Experimentator die Assay-Umgebung leicht kontrollieren kann. Insbesondere kann das Aushungern der Planarier vor dem Experimentieren ihre Exposition gegenüber anderen Ernährungs- oder pharmakologischen Wirkstoffen verhindern, die die Ergebnisse sonst verwirren könnten, und der spezifische Biomodulator, der untersucht wird, kann einfach durch direkte Zugabe in das Kulturwasser in die Planarier eingeführt werden, wodurch die Exposition standardisiert wird. Da Planarier ein Nervensystem und Neurotransmitter haben, die an Tiere höherer Ordnung erinnern, gelten die Physiologie und die experimentellen Reaktionen dieser Tiere auf neuromuskuläre Reize als biologisch relevant für andere Organismen12,13,14,15,16. Auch weil Planarier relativ kostengünstig und unkompliziert im Labor zu warten sind, bieten sie vielen Forschern ein zugängliches biologisches Modell.
Als Versuchstier eignen sich Planarier für eine Vielzahl von Studien. Zum Beispiel, unsere Gruppe, sowie andere Forscher verwenden Planarier Tumorigenese17,18,19zu studieren. Planarier zeigen auch eine Vielzahl von Reaktionsverhalten auf chemische, thermische, gravitarische, elektrische, Foto- und magnetische Reize, die die Grundlage anderer Assay-Systeme bildeten. Einige dieser Effekte wurden verwendet, um lernen und Gedächtnis bei diesen Tieren zu studieren20,21,22,23,24,25,26,27. Die primäre Verwendung des planarischen Modells in der Literatur konzentriert sich derzeit auf die Aktivität von planarianischen pluripotenten Stammzellen, neoblasten genannt, und ihre Rolle bei der Regeneration28,29,30. Die Annahme des hier beschriebenen Modells ermöglicht daher weitere Studien mit anderen planarianbasierten Assays, um ein breiteres Verständnis dafür zu vermitteln, wie natürliche Produkte und andere Biomodulatoren den Organismus beeinflussen.

<table><tbody><tr><td>Wasser in Flaschen - 1 Gallone</td><td>Polen Quelle</td><td>N/A</td><td>Quellwasser für die Planarienkultur und zur Herstellung von Lösungen</td></tr><tr><td>Braune Planarien (Dugesia tigrina)</td><td>Carolina Biological Supply Company</td><td>132954</td><td>Braune Planarien lebend (andere Arten sind akzeptabel)</td></tr><tr><td>Flacher Pinsel</td><td>Royal Crafter's Choice</td><td>9159</td><td>Flache Aquarellpinsel zum Reinigen von Planarienkulturbehältern</td></tr><tr><td>Petrischale aus Glas - 10 cm</td><td>Kimax</td><td>N/A</td><td>10 cm Durchmesser (Glas) Petrischalen für pLmV-Assays Petrischalen</td></tr><tr><td>aus Glas - 5 cm</td><td>Kimax</td><td>N/A</td><td>5 cm und Petrischalen zum Spülen von Planarien während Entzugsexperimenten und zur Gewöhnung an Stimulanzien</td></tr><tr><td>Gitterpapier</td><td>Beliebig</td><td>N/A</td><td>Standard 0,5 cm Rasterpapier für pLmV-Assay</td></tr><tr><td>iPEVO Visualizer (Software)</td><td>iPEVO</td><td>https://www.ipevo.com/software/visualizer</td><td>Dokumentenkamera-Software für die Videoaufnahme und -aufzeichnung</td></tr><tr><td>Metallwaren-Set mit Stützständer und Retortenring</td><td>Beliebig</td><td>N/A</td><td>Standard-Chemie-Labor-Ringständer zur Aufnahme einer Handykamera, falls verwendet</td></tr><tr><td>Bio-Ei</td><td>Beliebig</td><td>N/A</td><td>Bio-Ei oder Rinderleber zum Füttern von Planarains</td></tr><tr><td>Polycarbonatflasche mit Schraubverschluss - 10 mL</td><td>Beckman</td><td>N/A</td><td>Kunststofffläschchen zur Aufnahme von 5 bis 10 mL Volumen zur Gewöhnung an Stimulanzien</td></tr><tr><td>Runder Vorratsbehälter - 10 cm</td><td>Ziploc</td><td>N/A</td><td>10 cm Runde Vorratsbehälter für ca. 90 Planarien oder weniger</td></tr><tr><td>Runder Wasserpinsel</td><td>LOEW-Cornell</td><td>N/A</td><td>Kleine runde Aquarellpinsel (Nummern 3 bis 6) - weiche</td></tr><tr><td>Transferpipette</td><td>beliebig</td><td>N/A</td><td>Übertragungspipetten mit breiter Öffnung (5 ml) Kunststoff-Transferpipetten zum Bewegen von Planarien</td></tr><tr><td>USB-Dokumentenkamera</td><td>iPEVO</td><td>CDVU-06IP</td><td>Dokumentenkamera (oder eine andere Kamera oder Handykamera)</td></tr></tbody></table>

ein planarischer motilitätstest zur messung der biomodulierenden eigenschaften natürlicher produkte

A Planarian Motility Assay to Gauge the Biomodulating Properties of Natural Products

Beschrieben wird ein einfaches, kontrollierbares Mittel zur Verwendung des nicht-parasitären Planariers Dugesia tigrina, eines freilebenden Aqua-Flachwurms, um die Stimulans- und Entzugseigenschaften natürlicher Produkte zu untersuchen. Experimentelle Assays, die von einzigartigen Aspekten der planarischen Physiologie profitieren, wurden auf Studien zur Wundheilung, Regeneration und Tumorgenese angewendet. Da Planarier eine Sensibilität für eine Vielzahl von Umweltreizen aufweisen und in der Lage sind, konditionierte Reaktionen zu lernen und zu entwickeln, können sie in Verhaltensstudien verwendet werden, die Lernen und Gedächtnis untersuchen. Planarier besitzen eine grundlegende bilaterale Symmetrie und ein zentrales Nervensystem, das Neurotransmitter-Systeme verwendet, die für Studien zur Untersuchung der Auswirkungen neuromuskulärer Biomodulatoren geeignet sind. Folglich wurden experimentelle Systeme zur Überwachung der planaren Bewegung und Beweglichkeit entwickelt, um Die Sucht und Denentzug von Substanzen zu untersuchen. Da die planare Beweglichkeit das Potenzial für ein empfindliches, leicht standardisiertes Motilitäts-Assay-System zur Überwachung der Wirkung von Reizen bietet, wurde der planarische Bewegungsgeschwindigkeitstest (pLmV) angepasst, um sowohl das Stimulations- als auch das Entzugsverhalten von Planariern durch die Bestimmung der Anzahl der von den Tieren mit der Zeit gekreuzten Gitterlinien zu überwachen. Hier werden die Technik und ihre Anwendung demonstriert und erklärt.

Das Labor, das den Arbeitsbereich für den Betrieb des pLmV-Tests eingerichtet und vorbereitet, sollte vor Beginn der Experimente abgeschlossen sein. Dazu gehören die Vorbereitung des Gewöhnbehälters, Spülbehälter bei Bedarf (für Entzugsexperimente), Petrischale über laminiertem Gitterpapier und ordnungsgemäß platzierte Kamera(Abbildung 1). Sobald alle Videos aufgenommen wurden, ist es ratsam, ein gemeinsames Datenblatt zu verwenden, um die Datenerfassung und -darstellung zwischen den Prüfern...

Planare Beweglichkeit wird verwendet, um die Stimulans und Entzugseigenschaften von naturwissenschaftlichen Produkten im Vergleich zur Bewegung der Tiere im Quellwasser allein zu messen.

Ein planarischer Motilitätstest zur Messung der biomodulierenden Eigenschaften natürlicher Produkte

A straightforward, controllable means of using the non-parasitic planarian, Dugesia tigrina, a free-living aquatic flatworm, to study the stimulant and ...

Der Planarian Locomotor Velocity Test ist ein Mittel zur schnellen Beurteilung von Stimulans und möglichen Entzugserscheinungen für eine Vielzahl von biologischen Modifizierenden, die die Beweglichkeit beeinflussen könnten. Dieser Aufsatz ist leicht zu kontrollieren und bietet eine einfache und zugängliche Methode, um zuverlässige Verhaltensdaten auch in den grundlegendsten Forschungseinstellungen zu generieren. Da das planarische Nervensystem über ein zentralisiertes rudimentäres Gehirn, eine bilaterale Symmetrie und analoge Neurotransmittersysteme verfügt, bieten Verhaltensstudien mit diesen Organismen präklinische Einblicke in mögliche Wirbeltierreaktionen.Experimente können durch physiologische Signalmodifizierer, Medikamente oder sogar gentechnisch veränderte Planarier weiter beeinflusst werden, um Einblicke in die damit verbundenen biologischen Mechanismen zu geben. Es ist wichtig, den Planarier zu haben, damit die Übertragungen zwischen Containern sie nicht belasten, und die Rasterlinienkurven zwischen Labormitgliedern zu standardisieren. Der beste Weg, um konsistente Ergebnisse aus diesem Verhaltensessay-Experiment zu erhalten, ist zu sehen, wie erfahrene Benutzer sie durch

a-planarian-motility-assay-to-gauge-biomodulating-properties-natural

Research

Forschung

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

Ein attraktives Modell zur Untersuchung Stammzell-Differenzierung innerhalb eines lebenden Tieres ist der Planarie flatworm. Die Regeneration wird durch einfache Amputation Experimente, die leicht in einem der Grundlagenforschung im Labor durchgeführt werden untersucht und sind zugänglich für pharmakologische und genetische...

Pharmakologische und Functional genetischen Tests zu manipulieren Regeneration der Planarien Dugesia japonica</em

Dieses Video zeigt die Verwendung eines radialen Lokomotionsassays zur Bewertung der motorischen Dysfunktion in C. elegans, die entweder Wildtyp- oder ALS-mutiertes humanes TDP-43-Protein exprimieren. Würmer mit unterschiedlicher Wildtyp- oder mutierter TDP-43-Expression werden kriechen gelassen, und ihre Bewegung wird anhand der radialen Strecke gemessen, die vom zentralen Punkt auf der Assay-Platte zurückgelegt wird. Der Assay unterscheidet zwischen leichten, mittelschweren und schweren...

Bewertung der motorischen Beeinträchtigung in C. elegans-Modellen mit dem Radial Locomotion Assay

Verfahren zur quantitativen Bewertung der chemotaktischen Reaktion...

C. elegans Chemotaxis-Assay

Es wird ein Protokoll für den in vivo Nachweis der Wirkungen von mitochondrialen Inhibitoren im Modellorganismus Caenorhabditis elegans und für die Identifizierung potenziell verstärkender Verbindungen beschrieben. Dieses Protokoll kann verwendet werden, um Arzneimittelbibliotheken auf Verbindungen zu untersuchen, die die mitochondriale Funktion modulieren.

Ein screenbaren<em&gt; In-vivo-</em&gt; Assay für Mitochondriale Modulatoren Verwendung transgener Bioluminescent<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Dieses Protokoll zeigt, wie konsequent Planarien Augen (Augenbecher) ohne störende umgebende Gewebe auszuschneiden. Verwendung eine Insulin-Nadel und Spritze, entweder einen oder beiden Augen ablatiert werden können Untersuchungen über die Mechanismen der Regeneration regulierenden Auge, um die Entwicklung der visuellen Regeneration und die neuronalen Grundlage des lichtinduzierten Verhaltens zu erleichtern.

Chirurgische Ablation Assay zur Untersuchung von Augen Regeneration in Planarien

Süßwasserplanarier weisen drei Gangarten (Gleiten, Peristaltik und Scrunching) auf, die sich durch quantitative Verhaltensanalysen unterscheiden. Wir beschreiben eine Methode, um Scrunching mit verschiedenen schädlichen Reizen, Quantifizierung davon und Unterscheidung von Peristaltik und Gleiten zu induzieren. Anhand von Gen Knockdown zeigen wir die Spezifität des Scrunchings als quantitative phänotypische Auslesung.

Planarian Scrunching als quantitatives Behavioral Readout für Noxious Stimuli Sensing

Wir stellen ein Protokoll zur Charakterisierung der Motilität und des Verhaltens einer Population von hundert Mikro- bis Millimeterzellen mittels Hellfeldmikroskopie und Zellverfolgung vor. Dieser Assay zeigt, dass Stentor coeruleus bei der Regeneration eines verlorenen oralen Apparates vier verhaltensunterschiedene Phasen durchläuft.

Analyse von Motilitätsmustern von Stentor während und nach der oralen Apparateregeneration mittels Zellverfolgung

Dieses Protokoll beschreibt zwei empfindliche Assays zur Unterscheidung zwischen leichter, mittelschwerer und schwerer motorischer Beeinträchtigung in C. elegans-Modellen der amyotrophen Lateralsklerose, mit allgemeinem Nutzen für C. elegans-Stämme mit veränderter Motilität.

Evaluation der motorischen Beeinträchtigung bei C. elegans Modellen der amyotrophen Lateralsklerose

Das vorliegende Protokoll beschreibt einen Assay zur Bestimmung des Ansprechens auf Levamisol, einen pharmakologischen Agonisten einer Klasse von Caenorhabditis elegans-Acetylcholinrezeptoren. In diesem flüssigen Levamisol-Schwimmassay beobachten und quantifizieren Forscher visuell die zeitabhängige Lähmung von Tieren, die in 24-Well-Platten kultiviert werden.

Messung der Empfindlichkeit von Caenorhabditis elegans gegenüber dem Acetylcholinrezeptoragonisten Levamisol

In dem Artikel wird eine neuartige In-vitro-Methode zur schnellen und sensitiven Bewertung der Toxizität und Ökotoxizität von Schadstoffen vorgeschlagen, die auf der Motilität von Mytilus galloprovincialis-Hämozyten basiert. Die Methode soll zur Entwicklung ethischerer und empfindlicherer toxikologischer und ökotoxikologischer Expositionstests beitragen.

Ein toxikologischer und ökotoxikologischer Assay auf der Grundlage der Beweglichkeit der Hämozyten von Muscheln (Mytilus galloprovincialis)

Krampfanfälle wirken sich negativ auf verschiedene Funktionen und die Lebensqualität aus. Planaria-Würmer wurden unterschiedlichen Konzentrationen von Chemokonvulsiva ausgesetzt, um ihre Anfallsphänotypen und ihre störende Motilität zu bewerten. Diese Studie schlägt vor, Planarienwürmer als Modell für akute Anfälle beim Menschen zu verwenden und ist von Bedeutung für die Entwicklung von Medikamenten für Epilepsie.

Planarien als Tiermodell für experimentelle akute Anfälle

Erfahren Sie den Planarian Locomotor Velocity Test zur Bewertung biomodulierender Eigenschaften natürlicher Produkte bei Planarien. Diese Methode liefert zuverlässige Verhaltensdaten für präklinische Einblicke in Wirbeltierreaktionen.

Ein planarischer Motilitätstest zur Messung der biomodulierenden Eigenschaften natürlicher Produkte

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