Name: Optimierung der Manschettentechnik für DieMurine Heart Transplantation (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 1 s
Description: Erfahren Sie die optimierte Manschettentechnik für die heterotope Herztransplantation bei Mäusen. Diese Methode mit Innenrohransatz verkürzt die Operationszeit erheblich und verbessert die chirurgische Effizienz durch erfahrene Zusammenarbeit.

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Diese Arbeit wurde unterstützt durch das Fujian Provincial Health Education Joint Research Project (WKJ2016-2-20), die National Natural Science Foundation of China (81771271 und 81800664), das National Key R&D Program of China (2018YFA0108 304) und das Bildungs- und Wissenschaftliche Forschungsprojekt für junge und mittlere Lehrer in der Provinz Fujian (JAT170714), die Natural Science Foundation of Hunan Province of China (2019JJ50842) und Huxiang Young Talents of Hunan Province (2019RS2013).

Tiere (BALB/c, C57BL/6, männlich, 8-12 Wochen) werden in einer speziellen pathogenfreien Anlage im Xiamen University Laboratory Animal Center untergebracht. C57BL/6 wird als Empfänger und BALB/c als Spender verwendet. Alle Verfahren werden gemäß den Richtlinien des Institutionellen Ausschusses für Tierpflege und -nutzung (IACUC) durchgeführt.
HINWEIS: Eine Reihe von mikrochirurgischen Instrumenten, einschließlich einer Mikroschere, MikrogeradeZange, Mikro gekrümmten Zangen und Mikronadelhalter, sind für die Operation notwendig (Tabelle und Materialien, Abbildung 1B, C, D, E). Ein Paar Einweg-Bulldog-Klemmen (Abbildung 1F) wird benötigt. Zwei Manschetten für die äußere Jugularvene und die Halsschlagader werden durch Schneiden der kundenspezifischen Polyamidröhren mit einem Skalpell Nr. 10 unter dem Mikroskop hergestellt. Der Durchmesser der Vene und der Arterienmanschette beträgt 0,9 mm bzw. 0,55 mm. Darüber hinaus beträgt der Durchmesser des Innenrohres für die entsprechende Venenmanschette 0,6 mm, und diese des Innenrohres für die entsprechende Arterienmanschette beträgt 0,28 mm(Abbildung 1G).
1. Empfängervorbereitung
<ol><li>Anästhetisieren Sie die Empfängermaus mit Pentobarbital (60 mg/kg, i.p). Verwenden Sie atraumatische mechanische Clippers, um das Haar im rechten seitlichen Zervixbereich zu entfernen.</li>
	<li>Verwenden Sie einen sterilen Baumwollspitzenapplikator, um den chirurgischen Bereich mit Jod-Antiseptikum gefolgt von 70% Ethanol abzuwischen.</li>
	<li>Platzieren Sie die Maus in der Supine-Position auf der Bedienplattform. Bedecken Sie die Maus mit steriler Gaze.</li>
	<li>Verwenden Sie eine ophthalmologische Schere, um einen Querschnitt vom unteren Ein-Drittel-Ausschnitt-Mittellinie zum rechten Schulter-Clavusgelenk zu machen.</li>
	<li>Isolieren Sie die rechte äußere Jugularvene mit mikrogekrümmten Zangen, um genügend Länge freizulegen, schneiden Sie die Zweige durch Elektrokoagulation ab und legen Sie das Gefäß am distalen Ende mit einer 6-0 Seidennaht auf.</li>
	<li>Klemmen Sie die äußere juguläre Vene proximal mit einer Bulldoggeklemme und transsektieren Sie die Vene dann proximal mit einer Mikroschere auf die Ligatur.</li>
	<li>Waschen Sie das Gefäßlumen mit 100 U/mL 0-4 °C heilsamen Saline, um Restblut zu entfernen.</li>
	<li>Ziehen Sie die externe jugular Vene durch die Venenmanschette mit Mikro gerade Zange; Setzen Sie das Veneninnenrohr als Stent in das Lumen ein und lassen Sie die Gefäßwand mit mikrogeraden Zangen über die Manschette legen (Abbildung 2A).</li>
	<li>Fixieren Sie das everted Gefäß Endothel am proximalen Ende der Manschette mit einem umfangreichen 8-0 Seidennaht (Abbildung 2B).</li>
	<li>Verwenden Sie Mikrogerade Zangen, um das Veneninnenrohr aus dem Venengefäß zu ziehen.</li>
	<li>Führen Sie eine stumpfe Zerlegung mit mikrogekrümmten Zangen durch, um die rechte Halsschlagader neben dem inneren Rand des Sternocleidomastoids zu isolieren.</li>
	<li>Klemmen Sie die rechte Halsschlagader proximally mit einer Bulldogge Klemme, ligate die Halsschlagader distal mit einer 6-0 Seidennaht, und verwenden Sie eine Mikroschere, um die Halsschlagader proximal auf die Ligatur zu transsektieren.</li>
	<li>Waschen Sie die Halsschlagader mit 100 U/mL 0-4 °C heilsamen Saline, um Restblut zu entfernen.</li>
	<li>Passieren Sie die Halsschlagader durch die Arterienmanschette und legen Sie das Arterien-Innenrohr mit Mikro-Geradenzangen in das Arteriengefäß ein (Abbildung 2C).</li>
	<li>Evert das Gefäß über der Manschette mit Mikro gerade Zange; fixieren Sie das Everted-Gefäß-Endothel mit einem umfangreichen 8-0 Seidennaht (Abbildung 2D).</li>
	<li>Ziehen Sie das Arterien-Innenrohr mit Mikrogeraden aus dem Arteriengefäß. HINWEIS: Bewahren Sie die submandibuläre Drüse des Empfängers auf.</li>
</ol>2. Spendervorbereitung
<ol><li>Anästhetisieren Sie die Spendermaus mit Pentobarbital (60 mg/kg, i.p). Verwenden Sie atraumatische mechanische Clippers, um das Haar im Bauchbereich zu entfernen.</li>
	<li>Platzieren Sie die Maus in der Supine-Position auf der Bedienplattform. Bedecken Sie die Maus mit steriler Gaze.</li>
	<li>Verwenden Sie einen sterilen Baumwollspitzenapplikator, um den chirurgischen Bereich mit Jod-Antiseptikum gefolgt von 70% Ethanol abzuwischen.</li>
	<li>Machen Sie einen AbdominalMittelschnitt mit einer augenheilbemischen Schere und belichten Sie die Bauchhöhle.</li>
	<li>Verwenden Sie mikrogekrümmte Zangen, um die minderwertige Vena cava freizulegen, und intravenös injizieren Sie dann 200 L von 100 U/mL 0-4 °C heparinisierte Saline pro 20 g Körpergewicht durch die inferiorvena cava.</li>
	<li>Thorakotomie mit ophthalmologischer Schere durchführen, die Rippen durch die bilateralen midaxillären Linienschnitte abschneiden, die vordere Brustwand nach außen kippen, um die Brusthöhle freizulegen.</li>
	<li>Verbrauchen Sie den Thymus mit mikrogekrümmten Zangen.</li>
	<li>Setzen Sie die Aorta aus, und durchdringen Sie dann 200 l von 100 U/ml 0-4 °C heilte Saline durch den Aortenbogen an die Herzkranzgefäße. HINWEIS: Vermeiden Sie es, Gasblasen in das Spenderherz zu durchdringen.</li>
	<li>Verwenden Sie eine Mikroschere, um die aufsteigende Aorta am Anfang des Aortenbogens zu transsektieren.</li>
	<li>Transect die Lungenarterie am Anfang der beiden Hauptzweige mit einer Mikroschere.</li>
	<li>Ligate die überlegene Vena cava und unterlegenven cava proximally mit einer 6-0 Seidennaht und verwenden Sie eine Mikroschere, um Vene distally auf die Ligatur zu transsektieren.</li>
	<li>Die Lungenvenen umlaufend mit einer einzigen 6-0 Seidennaht zusammenziehen und die Venenzweige mit einer Mikroschere distal zur Ligatur abschneiden.</li>
	<li>Entfernen Sie das Herztransplantat aus dem umgebenden Weichgewebe; in 0-4 °C heiler Saline aufbewahren.</li>
</ol>3. Herzimplantation
<ol><li>Legen Sie das Spenderherz kopfüber in den rechten Halsbereich des Empfängers.</li>
	<li>Geben Sie die Lungenarterie des Spenderherzens in eine 6-0 Seidenschlaufe mit Mikrogeraden ein.</li>
	<li>Wickeln Sie das Gefäßlumen um die Venenmanschette, und ziehen Sie dann die 6-0 Seidennahtschlaufen um die Manschette, um das Gefäßgelenk zu banden.</li>
	<li>Führen Sie eine Anastomose der Aorta des Transplantats und der Arterienmanschette durch Befolgen der in Schritt 3.2 beschriebenen Schritte.</li>
	<li>Lassen Sie die geklemmte Jugularvene gefolgt von der geklemmten Jugulararterie los. Halten Sie das Gefäßgelenk ungedreht und stellen Sie sicher, dass der Blutfluss ungehindert ist. HINWEIS: Der Sinusrhythmus, der innerhalb von 1 min zu mehr als 200 Mal zurückkehrt, gilt als normal.</li>
	<li>Befeuchten Sie das Spenderherz mit warmer (37 °C) Saline und prüfen Sie, ob das Transplantat blutet. Stellen Sie das pulsierende Herztransplantat in den subkutanen Raum ein, und verschließen Sie dann den Schnitt.</li>
</ol>4. Postoperative Pflege und Graft-Bewertung
<ol><li>Nehmen Sie die Zeit zum normalen Sinusrhythmus und die Erhaltung des normalen Sinusrhythmus für mindestens 5 Minuten nach der Klemmenfreigabe auf, um die postoperative Transplantatfunktion zu überwachen.</li>
	<li>Legen Sie den Empfänger allein auf eine warme Decke, bis der Empfänger aus der Anästhesie aufwacht. Verabreichen Sie Buprenorphin Analgesie, 0,05 mg/kg, s.c. am Ende der Operation und alle 12 Stunden für 72 Stunden nach der Operation.</li>
	<li>Zeichnen Sie das Gewicht und den postoperativen Wiederherstellungsstatus des Empfängers täglich auf. Im Falle von >15% Gewichtsverlust im Vergleich zu dem am Operationsdatum, hemiplegische Lähmung, oder Infektion, einschläfern den Empfänger über terminale Isofluran-Inhalation21.</li>
	<li>Überwachen Sie das Transplantatüberleben durch tägliche Palpation. Die Operation gilt als erfolgreich, wenn der murine Allograft für >72 Stunden überlebt. Grad die Transplantatfunktion, wie zuvor berichtet22: Skala 3 - kräftig pulsieren und Frequenz; Skala 2 - weniger pulsierend; Skala 1- Fibrillation und bevorstehende Ablehnung; oder Skala - 0, Verlust des Herzschlags und vollständige Ablehnung.</li>
</ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts zu verraten.

Mausherztransplantationsmodelle sind wichtige Werkzeuge für die Transplantationsimmunologieforschung, da Werkzeuge und Materialien zur Bewertung der Immunmechanismen dieses Modells und einer großen Anzahl genmodifizierter Mäuse zur Verfügung stehen. Mikrochirurgische technische Herausforderungen, wie Die Naht gefäßnah und die Eversion, haben jedoch ihre weit verbreitete Verwendung eingeschränkt. In der vorliegenden Studie haben wir einige technische Kernherausforderungen der murinen Herztransplantation untersucht und gut...

Die Etablierung einer heterotopischen Mausherztransplantation durch End-to-End-Anastomose im Bauch im Jahr 1973 war ein wichtiger Meilenstein in der grundlagenlichen Transplantimmunologieforschung1. Dieses Modell bot ein wichtiges und gültiges Werkzeug für die Analyse der Mechanismen der Ischämie-Reperfusionsverletzung2, immunologische Abstoßung und Toleranz3,4. Die komplexe und zeitaufwändige Betätigung der Operation sowie das Infektionspotenzial können jedoch zu schweren perioperativen Bauchverklebungen und Entzündungsreaktionen führen, was zu einer geringen Effizienz für das heterotopische Herztransplantationsmodell führt.
Die zervikale heterotopische Herztransplantationstechnik wurde erstmals 1991 von Chen beschrieben5. In diesem Modell wird die äußere Jugularvene des Empfängers an der Lungenarterie des Transplantats anastomosed und die Halsschlagader wird anderastomosed zur aufsteigenden Aorta. Die Hauptvorteile dieser Methode sind die Bequemlichkeit der Überwachung und die Verringerung von Traumata für den Empfänger. Im selben Jahr beschrieb Matsuura eine verbesserte Technik, bei der das Ende der äußeren Jugularvene und der Halsschlagader über eine Teflonmanschette getrungen und mit einer umlaufenden Seidenligatur6fixiert wurde. Einige Forscher fixierten auch die Manschette an der rechten Lungenarterie im Spenderherz, bevor sie die Manschette in die äußere Jugularvene des Empfängers7einsteckten. Bisher wurde die Manschettentechnik in verschiedenen vaskulären Pedikelntransplantationsmodellen weit verbreitet, einschließlich der fürLungen-8-,Leber-9-und Nieren-10-Transplantationen.10
Bis heute gibt es mehrere Schwierigkeiten im Zusammenhang mit der Manschettentechnik. Zum Beispiel ist die Halsschlagader aufgrund der zusätzlichen Elastizität, die dazu führt, dass das Gewebe nach hinten kippt, schwer über die Manschette zu werfen. Daher kann eine zusätzliche Praxis und ein mikrochirurgischer Dilator erforderlich sein, um diesen Schritt abzuschließen. Darüber hinaus kann die Zervixgefäßvorbereitung bis zu 25 Minuten dauern.
Um diese Probleme zu lösen, führen wir die Innenrohrtechnik ein, die auf der Manschettentechnik basiert und die Befestigung der Manschette an der äußeren Jugularvene und der Halsschlagader mit einem Innenrohr umfasst, um bei der Eversion der Gefäßwand zu helfen. Darüber hinaus wird die Empfängervorbereitung mit einfachem Training auf 15,5 Minuten reduziert. Diese Technik reduziert die Komplexität der Operation und erfordert keine zusätzliche Praxis oder den Einsatz eines Gefäßdilators. Es kann in der gesamten Transplantationsimmunforschung angewendet werden, insbesondere zur Überprüfung der Immuntoleranz Dritter, bei der der Empfänger zwei Herz-Allografts erhält, eine im Bauch und die andere im Nacken11. Wir empfehlen auch die Zusammenarbeit zwischen zwei erfahrenen Chirurgen, um dieses Modell zu etablieren, wobei ein Chirurg das Empfängertier vorbereitet und das andere das Spenderherz erntet und implantiert. Eine solche Zusammenarbeit kann die Betriebszeit auf 25 Minuten verkürzen. Mit diesem optimierten Verfahren haben wir syngene, allogene12,13,14,15,16,17,18,19, und xenogene Maus Herz Transplantation Modelle20.
Der Grund für die Entwicklung der Innenrohrtechnik war es, die Betriebszeit für die Etablierung eines Mausherztransplantationsmodells mit hoher Erfolgsrate zu reduzieren. Die Optimierung des Zervixherztransplantationsmodells erleichtert den Erwerb hoher Erfolgsraten in kurzer Zeit im Vergleich zur herkömmlichen Naht- und Manschettentechnik21. Darüber hinaus kann das Kooperationsmodell die warme ischämische Zeit des Spenderherzens im Vergleich zu Operationen mit einem einzigen Bediener weiter reduzieren.

<table><tbody><tr><td>Arterienmanschette</td><td>Selbstgemachter</td><td></td><td>Polyamidschlauch. Durchmesser: 0,55 mm, Länge: 1,0 mm</td></tr><tr><td>Arterienschlauch</td><td>Selbstgemachter</td><td></td><td>Polyamidschlauch. Durchmesser: 0,28 mm</td></tr><tr><td>Mikro gebogene Pinzette</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Chirurgische Instrumente Fabrik</td><td>WA3050</td><td>1/8 Bogen, 0,3 mm Spitze ohne Haken</td></tr><tr><td>Mikronadelhalter</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Chirurgische Instrumente Fabrik</td><td>WA2050</td><td>0,2 mm</td></tr><tr><td>Spitze Mikroschere</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fabrik</td> <td>für chirurgische InstrumenteWA1050</td><td>Gerade, Klingenlänge: 10 mm</td></tr><tr><td>Gerade Mikropinzette</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory</td><td>WA3060</td><td>0,15 mm Spitze ohne Haken</td></tr><tr><td>Scanlan Vascu-Statt Bulldog Klemmen</td><td>Scanlan International Inc</td><td>1001-531</td><td>Klemmdruck 20&ndash; 25 Gramm</td></tr><tr><td>Venenmanschette</td><td>Selbstgemachter</td><td></td><td>Polyamidschlauch. Durchmesser: 0,9 mm, Länge: 1,2 mm</td></tr><tr><td>Venenschlauch</td><td>Selbstgemachter</td><td></td> Polyamidschlauch<td>. Durchmesser: 0,6 mm</td></tr></tbody></table>

optimierung der manschettentechnik für diemurine heart transplantation

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

Die murine Herztransplantation wird seit mehr als 40 Jahren durchgeführt. Mit Fortschritten in der Mikrochirurgie wurden bestimmte neue Techniken eingesetzt, um die chirurgische Effizienz zu verbessern. In unserem Labor haben wir die Manschettentechnik mit zwei Hauptschritten optimiert. Zuerst verwendeten wir die innere Rohrtechnik, um ein temporäres Innenrohr in die äußere Jugularvene und das Karotisarterienblutgefäß einzufügen, um die Umwandlung des Gefäßes über die Manschette zu erleichtern. Zweitens führten wir eine vollständige heterotopische Herztransplantation in Zusammenarbeit mit zwei erfahrenen Chirurgen durch. Diese Änderungen reduzierten effektiv die Betriebszeit auf 25 Minuten, mit einer Erfolgsrate von 95%. In diesem Bericht beschreiben wir diese Verfahren ausführlich und stellen ein zusätzliches Video zur Verfügung. Wir glauben, dass dieser Bericht über die verbesserte Manschettentechnik praktische Anleitungen für die murine heterotopische Herztransplantation bieten und den Nutzen dieses Mausmodells für die Grundlagenforschung verbessern wird.

Chirurgische Operationszeit
Nach der Ausbildung kann ein erfahrener Chirurg die Operation innerhalb von 35 Minuten mit der Innenrohrtechnik erfolgreich durchführen, wobei ca. 15,5 Minuten für die Empfängervorbereitung benötigt werden, 10,9 Minuten für die Spendervorbereitung und 4,4 Minuten für Spenderherzanastomosen erforderlich sind. Die kalte und warme Ischämiezeit (von der Spendervorbereitung bis zur Herzimplantation) wird im Vergleich zur Operation mit der Manschettentech...

Wir führen einen inneren Röhrenansatz zur Manschettentechnik für die heterotopische Herztransplantation der Maus ein, um das Gefäß über die Manschette zu bringen. Wir stellten fest, dass die Zusammenarbeit zwischen zwei erfahrenen Chirurgen die Operationszeit deutlich verkürzt.

Optimierung der Manschettentechnik für DieMurine Heart Transplantation

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...

Hallo an alle. Mein Name ist Dr.Zhongquan Qi.Es ist allgemein bekannt, dass die Manschettentechnik seit 1991 als Herztransplantation verwendet wird. Obwohl es große Fortschritte in der medizinischen Chirurgie und der neuen chirurgischen Technik gegeben hat, gibt es immer noch einige Schwierigkeiten auf der Grundlage der Manschettentechnik.Es ist eine Form der Enthüllung, wo sie Ihnen eine optimotische Halbtechnik zeigen, die der chirurgischen Effizienz deutlich entsprechen kann. Die Hauptprozeduren sind das Einsetzen eines vorübergehenden in dieses Rohr in das Visier. Beweis lesen die ISO fast die Hälfte.Einsetzen der Rohrtechnik. Ein erfahrener Chirurg kann die Operation innerhalb von 35 Minuten mit einer Erfolgsrate von 95% durchführen. Dann können sie das Thermal Surgeon Operation Module einsetzen, das die Effizienz der Operation im Skeptimic weiter verbessert und die Betriebszeit auf ca. 35 Minuten verkürzt.Vielen Dank. Und das ist, dass das Rezept und Meilen mit Pentobarbital verbindet. Verwenden Sie atraumatische mechanische Clippers, um das Haar an der rechten seite späteren Zervixbereich zu entfernen.Verwenden Sie einen sterilen Baumwollspitzenapplikator, um den chirurgischen Bereich mit Jod-Antiseptikum gefolgt von 70% Ethanol abzuwischen. Platzieren Sie die Maus in der Supine-Position auf der Bedienplattform. Bedecken Sie die Maus mit steriler Gaze.Verwenden Sie eine ophthalmologische Schere, um einen Querschnitt von der unteren ein Drittel NACMEC Linie zum rechten Schulterschlüsselgelenk zu machen. Isolieren Sie die rechte äußere junguläre Vene mit mikrogekrümmten Zangen, um genügend Länge freizulegen. Schneiden Sie die Brunchs durch Elektrokoagulation ab.Und lokalisieren Sie das Gefäß an der Disto und mit einer sechs 2 0 sechs Naht. Klemmen Sie die äußere Junglarvene proximal mit einer Pulverklemme. Und dann übersetzen Sie die Vene mit einer Mikroschere in die Ligatur.Waschen Sie das GefäßLumen mit 100 Einheiten pro Milliliter 02 vier Grad Heparin hervor, um Restblut zu entfernen. Ziehen Sie die äußere junglarVendurch durch die Vena cava mit Mikrogeraden. Setzen Sie das Veneninnenrohr als Stent in das Lumen und über die Gefäßwand über die Kurve mit mikrogeraden Zangen.Fixieren Sie das reizende Faso-Endothel am proximalen Ende der Kurve mit einer umlaufenden Naht von acht bis 06. Verwenden Sie Mikrogerade Zangen, um das Veneninnenrohr aus dem Venengefäß zu ziehen. Führen Sie eine stumpfe Zerlegung mit Mikrozangen durch, um die rechte Halsschlagader neben dem inneren Rand des Sternocleidomastoids zu isolieren.Klemmen Sie die rechte Karotisarterie proximally mit einer Babcock Klemme. Finden Sie die Halsschlagader distally mit einer Sechs-06-Naht. Und verwenden Sie eine Mikroschere, um die Halsschlagader proximal auf die Ligatur zu übertragen.Waschen Sie die Halsschlagader mit 100 Einheiten pro Milliliter 02 vier Grad Celsius Heparin hervor, um Restblut zu entfernen. Passieren Sie die Halsschlagader durch die Arterienkurve und legen Sie das Arterien-Innenrohr mit Mikro-Geradenzangen in das Arteriengefäß ein. Ziel für das Gefäß über die Kurve mit Mikro gerade Zange.Fixieren Sie das invertierte facile Endothel mit einer umlaufenden Naht von acht bis 06. Ziehen Sie die Arterien-Innenspitze mit Mikrogeraden aus dem Arteriengefäß. Anästhesie und ihre Infektion sind die gleichen wie der Empfänger.Machen Sie einen AbdominalMittelschnitt mit einer Augenschere und belichten Sie die Bauchhöhle. Verwenden Sie Mikrokurvenzange, um die minderwertige Vena cava freizulegen. Und dann intravenös injizieren 200 Mikroliter von 100 Einheiten pro Milliliter 02 vier Grad Heparin hervorhebend pro 20 Gramm Körpergewicht durch die unterlegene Vena cava.Thorakotomie mit ophthalmologischer Schere durchführen. Schneiden Sie die Rippen durch die Paletten Romita axillary Licht einschneiden. Flav die vordere Brustwand nach außen, um die Brusthöhle freizulegen.Verbrauchen Sie den Thymus mit Mikrozange. Die Aorta aussetzen und dann 200 Mikroliter von 100 Einheiten pro Milliliter 02 vier Grad Heparin durch den Aortenbogen auf die Herzkranzgefäße aussetzen. Verwenden Sie eine Mikroschere, um die aufsteigende Aorta am Anfang des Aortenbogens zu transsektieren.Transect die Lungenarterie am Anfang der beiden Hauptzweige mit einer Mikroschere. Suchen Sie die überlegene Vena cava und die untere Vena cava ungefähr mit einer Naht von sechs bis 02 und verwenden Sie eine Mikroschere, um das Venendestillat auf die Ligatur zu übertragen. Die Lungenvenen mit einer einzigen Sechs- bis 06-Naht umlaufend zusammen zu lokalisieren und die Venenzweige mit einer Mikroschere distal zur Ligatur abschneiden.Entfernen Sie das Herztransplantat aus dem umgebenden Weichgewebe. Legen Sie das Spenderherz kopfüber in den rechten Halsbereich des Empfängers. Geben Sie die Lungenarterie des Spenderherzens in eine Sechs- bis 06-Schleife mit Mikrogeraden ein.Wickeln Sie das Gefäßlumen um die Vena cava und ziehen Sie dann die Sechs-6-Nahtschleife um das Kalb, um das Gefäßgelenk zu biegen. Führen Sie eine Anastomose der Aorta der Transplantat- und Arterienkurve durch. Lassen Sie die verklumpte Jugularvene, gefolgt von verklumpter Jugulararterie, los.Halten Sie das Gefäß verbunden und verdreht und stellen Sie sicher, dass der Blutfluss ungehindert ist. Stellen Sie das vorbeiziehende Herztransplantat in den subkutanen Raum ein und verschließen Sie dann den Schnitt. Nehmen Sie die Zeit zum normalen Sinusrhythmus und die Erhaltung des normalen Sinusrhythmus für mindestens fünf Minuten nach der Klemmenfreigabe auf, um die postoperative Transplantatfunktion zu überwachen.Legen Sie den Empfänger allein auf die eine Decke, bis der Empfänger aus der Anästhesie aufwacht. Zusammengenommen, obwohl unsere Chirurgie Manschettentechniken verwendet, die berichtet wurden, haben wir die innere Kerntechnik auf dieser Grundlage etabliert. Reduzieren Sie die Schwierigkeit in der Chirurgie und verkürzen Sie die Anastomosezeit durch Optimierungstechnik.Wir schlugen das Motto der doppelten Chirurgischen Eingliederung vor, um die Effizienz der operation im Schaltplan gezeigt weiter zu verbessern. Und die Betriebszeit wird auf ca. 25 Minuten verkürzt. Ein vollständig MHC nicht übereinstimmendes BALBC-Allograft-Herz kann acht Tage nach der Transplantation in C57BL6-Empfängermäuse abgelehnt werden.Syngene Herztransplantationen, die in unserer Forschung verwendet wurden, überlebten mehr als 100 Tage, außer einem seltenen Fall aufgrund eines Gewichtsverlustes von 15 % im Vergleich zum normalen Gewicht vor der Operation. Die Histopathologie des Allografts am siebten Tag zeigte typische Merkmale der akuten Abstoßung, einschließlich eines schweren zellulären Infiltrats mit Gewebenekrose. Syngene Transplantate sind nahezu normal, ohne Dassindizfürst in Myozytennekrose oder entzündliche Zellinfiltration.100 Tage nach der syngenetischen Herztransplantation kann das vaskuläre Endothel der Anastomose-Stelle gesammelt und mit Immunfluoreszenz gefärbt werden. Bei dieser Analyse wurden keine aversen den Vasen der Gefäßwand, Thrombose oder Verdickung der Intima beobachtet. Die elektromikroskopische Bildgebung ergab, dass ein glattes Endothel und eine regelmäßige Längskrustenbildung mit den Endothelzellen sauber und eng angeordnet sind, ohne dass ein offensichtliches Sediment an der Oberfläche liegt.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Die murine Gebärmutterhalskrebs Herztransplantation Modell ist für immunologische sowie Ischämie Reperfusionsschaden Studien gut geeignet. Wir modifizierten das Verfahren mit einem nicht-Nahttechnik und Manschette durchgeführt mehr als 1.000 erfolgreiche Transplantationen mit diesem Ansatz.  Hier stellen wir weitere Einzelheiten dieser Technik, um das Video zu ergänzen.

Murine Cervical Herztransplantation Modell mithilfe eines modifizierten Cuff-Technik

Das Manuskript beschreibt die erforderlich sind, um die heterotopen Herztransplantation in der Maus führen Sie die Schritte.

Murine Heterotope Heart Transplant-Technik

Die Manschettentechnik verkürzt und erleichtert das Modell der heterotopen zervikalen Herztransplantation bei Mäusen, indem technisch anspruchsvolle Nahtanastomosen kleiner Gefäße vermieden werden. Die technischen Details, die in diesem Videopapier gezeigt werden, sollten es Forschern ermöglichen, dieses Modell in ihren Labors zu etablieren.

Heterotope Cervical Herztransplantation bei Mäusen

Hier stellen wir ein Protokoll der heterotopischen Aortentransplantation bei Mäusen mit der Nicht-Naht-Manschettentechnik in einem zervikalen Murin-Modell vor. Dieses Modell kann verwendet werden, um die zugrunde liegende Pathologie der chronischen Allograft-Vaskulopathie (CAV) zu untersuchen und kann helfen, neue therapeutische Wirkstoffe zu bewerten, um ihre Bildung zu verhindern.

Murine Cervical Aortic Transplantation Modell mit einer modifizierten Non-Suture Manschettentechnik

Im vorliegenden Protokoll wird ein Maus-Herztransplantationsmodell verwendet, um den Mechanismus der kardialen Allotransplantatabstoßung zu untersuchen. In diesem heterotopen Herztransplantationsmodell wird die Operationseffizienz verbessert und das Überleben von Herztransplantaten durch eine zervikale End-to-End-Anastomose der Herzimplantation unter Verwendung einer modifizierten Manschettentechnik sichergestellt.

Eine modifizierte Manschettentechnik für das zervikale heterotope Herztransplantationsmodell der Maus

Maus-Herztransplantationsmodelle stellen wertvolle Forschungswerkzeuge für die Untersuchung der Transplantationsimmunologie dar. Das vorliegende Protokoll beschreibt die heterotope zervikale Herztransplantation der Maus, bei der Manschetten auf die gemeinsame Halsschlagader des Empfängers und den Lungenarterienstamm des Spenders gelegt werden, um einen laminaren Blutfluss zu ermöglichen.

Heterotope zervikale Herztransplantation der Maus mit Gefäßmanschetten

Dieses Protokoll enthält technische Informationen für die Gefäßrekonstruktion mit der Manschettentechnik bei der orthotopen Lebertransplantation der Maus.

Gefäßrekonstruktion mit der Manschettentechnik bei der orthotopen Lebertransplantation der Maus

Dieses Protokoll stellt eine manschettenfreie, nahtbasierte heterotope zervikale Herztransplantationstechnik bei Mäusen vor, die darauf ausgelegt ist, die zuverlässige Platzierung eines zweiten heterotopen Herztransplantats zur Bewertung der donorspezifischen Immuntoleranz unter physiologischen Bedingungen mit minimaler Interferenz durch Fremdmaterial zu ermöglichen.

Manschettenfreies, nahtbasiertes zervikales Modell für sekundäre heterotopische Herztransplantation zur Bewertung der spenderspezifischen Immuntoleranz bei Mäusen

Dieses Protokoll präsentiert eine vereinfachte, end-zu-seitige Nahtanastomose-Technik für die Zervikalherztransplantation der Maus und bietet ein robustes und reproduzierbares Modell zur Untersuchung der Transplantationsimmunologie.

Zervikale heterotopische Mausherztransplantation mit End-to-Side-Anastomose-Technik zur Untersuchung der Transplantationsimmunologie

In diesem Video zeigen wir, das Verfahren der CD40-Aktivierung und Expansion von murinen B-Zellen aus Splenozyten von C57BL / 6 Mäusen, die als Modell-Antigen-präsentierende Zellen (APC) zur Induktion der Immunität Studie verwendet werden können.

Mausmodell der CD40-Aktivierung von B-Zellen

Erfahren Sie die optimierte Manschettentechnik für die heterotope Herztransplantation bei Mäusen. Diese Methode mit Innenrohransatz verkürzt die Operationszeit erheblich und verbessert die chirurgische Effizienz durch erfahrene Zusammenarbeit.

Optimierung der Manschettentechnik für DieMurine Heart Transplantation

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