Name: Schnelle und kostengünstige RNA-Extraktion von Ratten-Pankreasgewebe (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 12 s
Description: Lernen Sie eine schnelle und kostengünstige Methode zur RNA-Extraktion aus Ratten-Pankreasgewebe. Diese Technik liefert hochreine RNA mit hoher Integrität für biologische Assays und verbessert die Forschungseffizienz erheblich.

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Die vorliegende Studie wurde von der Shiraz University of Medical Sciences finanziell unterstützt (Grant-Nr. 93-01-01-7178-03-07-2014). Wir danken Herrn Zomorodian und Herrn Rostami am Department of e-Learning in Medical Sciences, Virtual School und Center of Excellence in e-Learning, Shiraz University of Medical Sciences für die Bearbeitung des Videos.

Die ethische Zulassung für diese Studie wurde von der Shiraz University of Medical Sciences (Zulassungsnummer: 93-01-01-7178-03-07-2014) eingeholt.
HINWEIS: Verwenden Sie männliche Sprague-Dawley-Ratten mit einem Gewicht von 250 g. Legen Sie die Durchstechflasche mit einem Splitter von Bauchspeicheldrüsengewebe, das in das RNA-stabilisierende Reagenz eingetaucht ist, bei -80 °C in einen flüssigen Stickstofftank und verwenden Sie eine RNA-Extraktionsreagenzlösung, um die Integrität der RNA zu erhalten.
1. Entfernung des Bauchspeicheldrüsengewebes der Ratte
<ol><li>Bereiten Sie den Operationssaal vor und legen Sie alle benötigten Materialien unter die Haube.</li>
	<li>Sterilisieren Sie alle chirurgischen Instrumente (Dressing Zange, Brown-Adson Zange, Irisschere und Littler Schere) in einem Ofen für mindestens 4 h bei 240 °C, um RNases15zu inaktivieren. Sterilisieren Sie die Oberfläche des Operationsplatzes mit 70% Alkohol unter der Haube.</li>
	<li>Ketamin/Xylazin intraperitoneal mit einer Insulinspritze injizieren [80/8 mg/kg]. Überprüfen Sie die Tiefe der Anästhesie, indem Sie die Zehen der Ratte auf mangelnde Reaktion kneifen.</li>
	<li>Fügen Sie 1 ml RNA-Stabilisierungsreagenz in das richtige Mikrorohr (2 ml) ein, um die Aktivierung von Endonukleasen in ausgeschnittenen Geweben zu hemmen.</li>
	<li>Legen Sie die Ratte sofort auf das Operationsbrett (Kopf weg vom Chirurgen) für einen Mittellinienschnitt.</li>
	<li>Sterilisieren Sie die gesamte Bauchoberfläche mit 70% Alkohol und entfernen Sie Rattenhaare mit einem Haarschneider mit #40 Klingen.</li>
	<li>Machen Sie einen V-förmigen Schnitt, um den Bauch vom Schambereich zu den Vorderbeinen mit Dressing Zange, Brown-Adson Zange, Irisschere und Littler Schere zu öffnen.</li>
	<li>Drehen Sie die Bauchorgane auf die linke Seite, um die Bauchspeicheldrüse freizulegen. Finden Sie sorgfältig das Bauchspeicheldrüsengewebe, das sich in der Bauchhöhle ausbreitet. Suchen Sie den Bereich unter der Milz, um die Bauchspeicheldrüse zu finden, ohne mit dem Fettgewebe verwechselt zu werden.</li>
	<li>Entfernen Sie sofort 20-30 mg Bauchspeicheldrüse aus der Bauchhöhle in weniger als 2 min. Legen Sie das entfernte Gewebe schnell in das 2 ml Mikrorohr und schneiden Sie es mit einem sterilen Fräser, um das abgetrennte Gewebe mit RNA-Stabilisierungsreagenz zu durchdringen.</li>
	<li>Legen Sie das Mikrorohr in einen Stickstofftank, um es sofort einzufrieren. Halten Sie das Mikrorohr in einem -80 °C Gefrierschrank für 24 h16.</li>
	<li>Nach 24 h die winzigen Stücke Bauchspeicheldrüsengewebe in einen Eisbehälter geben.</li>
	<li>Injizieren Sie Kaliumchlorid (KCl) intrakardinativ zur Euthanasie von Ratten nach der Operation.</li>
</ol>2. RNA-Extraktion
<ol><li>Sterilisieren Sie die Oberfläche unter der Haube mit 70% Alkohol.</li>
	<li>1 ml des RNA-Extraktionsreagenzes, das Guanidiniumthiocyanat enthält, um RNase zu hemmen, in das sterile Mikrorohr geben.</li>
	<li>Übertragen Sie das abgetrennte Bauchspeicheldrüsengewebe in das Mikrorohr. Übertragen Sie das Mikrorohr auf den flüssigen Stickstoff, um sofort einzufrieren.</li>
	<li>Homogenisieren Sie das Gewebe mit dem Mikrospitzensondensonicator bei 4 °C auf Stufe 20 für 60 s ein und 5 s aus.</li>
	<li>Inkubieren Sie jede homogenisierte Probe für 5 min bei 4 °C mit zerkleinertem Eis, um die Nukleoproteinkomplexe vollständig zu dissoziieren.</li>
	<li>Bereichern Sie die Proben mit 0,2 ml Chloroform für jeweils 1 ml RNA-Extraktionsreagenz. Das Rohr fest verkapseln und 15 s kräftig schütteln.</li>
	<li>Inkubieren Sie das Rohr für 15 min auf dem zerkleinerten Eis (4 °C), um das Reagenz in drei Phasen zu trennen.</li>
	<li>Führen Sie die Zentrifuge bei 12.000 x g 15 min bei +2 bis +8 °C. Übertragen Sie die farblose wässrige Phase auf ein neues Mikrorohr.</li>
	<li>0,5 ml 100% Isopropanol in die wässrige Phase geben. Schließen Sie die Röhre und invertieren Sie sie dann mindestens 3 Mal, um die RNA gründlich zu mischen.</li>
	<li>Inkubieren Sie die Probe für 5-10 min auf einer Kalten Dose (4 °C), um die RNA-Ausfällung zu ermöglichen.</li>
	<li>Führen Sie die Zentrifuge bei 12.000 x g 15 min bei +2 bis +8 °C. Entsorgen Sie den Überstand.</li>
	<li>Bereichern Sie jeden der Zentrifugenrohre mit 1 ml 75% Ethanol.</li>
	<li>Waschen Sie das RNA-Pellet, indem Sie das Rohr mindestens 3 Mal invertieren.</li>
	<li>Führen Sie die Zentrifuge bei 7.500 x g bei +2 bis +8 °C für 5 min. Entsorgen Sie den Überstand, um das überschüssige Ethanol durch Lufttrocknung aus dem RNA-Pellet zu entfernen.</li>
	<li>Das RNA-Pellet in Diethylpyrocarbonat (DEPC)-behandeltem RNase-freiem Wasser wieder aufsetzen.</li>
	<li>Übergeben Sie die Lösung mehrmals durch eine Pipettenspitze, um das RNA-Pellet aufzulösen. Dann inkubieren Sie die Lösung für 10-15 min bei +65 °C.</li>
</ol>3. Beurteilung der RNA-Integrität mit Denaturierungselektrophorese
<ol><li>Bereiten GelLaufpuffer: 50 mM NaAc (DEPC behandelt) und 0,5 M EDTA (pH 8.0) in DEPC-behandelten H2O.</li>
	<li>5x Formaldehyd-Gel-Laufpuffer (MOPS-Laufpuffer): 0,1 M MOPS (pH 7,0), 40 mM NaAc, 5 mM EDTA (pH 8,0).<ol>
<li>20,6 g MOPS in 800 ml dePC behandeltem 50 mM Natriumacetat auflösen. Stellen Sie den pH-Wert auf 7,0 mit 2 N NaOH ein. 10 ml DEPC-behandelte 0,5 M EDTA (pH 8,0) hinzufügen. Stellen Sie das Volumen der Lösung mit DEPC-behandeltem Wasser auf 1 L ein.</li>
		<li>Filtern Sie die Lösung durch einen 0,2 m-Filter und halten Sie sie zur Sterilisation bei Raumtemperatur vom Licht fern. Der Puffer wird mit der Zeit gelb, wenn er Licht ausgesetzt oder autoklaviert ist. Ein strohfarbener Puffer funktioniert gut, aber dunkler eisern nicht17.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bereiten Sie ein 1,5% Agarose Gel18vor. Für 50 ml 0,75 g Agarose und 31 mlH2O hinzufügen. Mikrowelle die Lösung in der Mikrowelle für 1 min. Fügen Sie 9 ml Formaldehyd und 10 ml 5x MOPS Laufpuffer hinzu.</li>
	<li>Bereiten Sie die Proben für das Gel vor. Mischen Sie Folgendes in einem sterilen Mikrofugenrohr: X-L-RNA (bis zu 30 g) 2 l 5x Gel-Ladepuffer 10 l Formamid 4 L DES MOPS-Laufpuffers 1 l von 0,1 mg/ml EtBr 3 l Formaldehyd 5-x l DEPC-H2O</li>
	<li>Die Proben 15 min bei 65 °C bebrüten und auf Eis abkühlen lassen. Zentrifuge für 5 s, bis die gesamte Flüssigkeit abgelagert ist.</li>
	<li>Führen Sie das Gel bei 5 V/cm 5 Minuten vor.</li>
	<li>Die Proben sofort in die Bahnen des Gels geben und dann das Gel in einen 1x Formaldehyd-Gel-Laufpuffer untertauchen. Laufen Sie bei 3-4 V/cm19.</li>
</ol>

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</ol>

Keine deklariert.

In der Molekularbiologie ist es wichtig, hochwertige RNA zu erhalten. Das Vorhandensein der Ribonuklease-Enzyme in Zellen und Geweben baut die RNA schnell aus und macht den Extraktionskomplex. RNasen sind stabile Enzyme, die ohne Co-Faktoren wirken. Kleine Mengen an RNase sind ausreichend, um RNA zu zerstören. Wenn das Bauchspeicheldrüsengewebe der Ratte aus der Bauchhöhle entfernt wird, ist es notwendig, die chirurgischen Instrumente mit starken Reinigungsmitteln zu desinfizieren, gründlich zu spülen und sie mindestens ...

Strukturelle Gendaten können durch Genexpression auf ein funktionelles Produkt übertragen werden. Die RNA-Analyse wird verwendet, um Unterschiede in der Genexpression zwischen verschiedenen Bedingungen zu entdecken. Es gibt eine Reihe von Methoden, um Nukleinsäuren wie folgt zu extrahieren: Guanidiniumthiocyanat, Extraktion über Phenol-Chlorform, Cellulose-basierte Chromatographie, Extraktion durch Kieselsäurematrizen und Anionenaustausch1,2.
Der richtige Nachweis der Genexpression wird durch die Integrität der aus Geweben isolierten RNA beeinflusst; Daher ist es wichtig, die Integrität der aus Geweben isolierten RNA zu bewerten, bevor weitere Tests durchgeführt werden, da ergänzende molekulare Tests an minderwertiger RNA die Ergebnisse der diagnostischen Anwendung gefährden können. Daher wird hochintegrierte RNA für molekularbiologische Tests mit verschiedenen diagnostischen Anwendungen benötigt: quantitative RT-PCR, Mikro-Arrays, Ribonuklease-Schutz-Assay, Nordfleckanalyse, RNA-Mapping und cDNA-Bibliothekskonstruktion3,4.
RNA wird ziemlich instabil, nachdem sie für eine lange Zeit gehalten wurde. Lange mRNA-Fragmente über 10 kb sind besonders anfällig für Abbau5,6. Daher müssen die Forscher verschiedene Faktoren berücksichtigen, die die Integrität der gereinigten RNA beeinflussen. Die Reinheit der RNA muss gegen RNasen, Proteine, genomische DNA und enzymatische Inhibitorkontamination geschützt werden. Darüber hinaus muss das beste und akzeptable Absorptionsverhältnis von RNA zu UV (260/280) im Bereich von 1,8-2,0 bei minimaler Fragmentierung über Elektrophorese liegen. Kürzlich entwickelte Labortechniken haben es Wissenschaftlern ermöglicht, die Integrität molekularer Analyseprobenpraktischerzu bewerten 7,8.
Es ist viel schwieriger, unbeschädigte RNA aus Bauchspeicheldrüsengewebe zu extrahieren als andere Gewebearten wegen der hohen Menge an Ribonukleasen (RNasen). Jedoch, bestehende Extraktionsmethoden, nämlich der schnelle Auswurf des Bauchspeicheldrüsengewebes aus der Bauchhöhle und Homogenisierung bei niedrigen Temperaturen, um RNases zu behindern, haben sich als ineffektiv7,8,9,10,11,12,13,14.
Der Zweck der vorliegenden vergleichenden experimentellen Studie besteht darin, bestehende Methoden zu modifizieren und zu vergleichen, um die effizientesten Methoden zu bestimmen. Zu diesem Zweck wurden verschiedene Protokolle der RNA-Extraktion modifiziert und verglichen. Es zielte speziell darauf ab, die am wenigsten teure Methode zu bestimmen, die eine minimale Menge an Bauchspeicheldrüsengewebe erfordert.

<table><tbody><tr><td>Agarose</td><td>Merck</td><td>116801</td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>Atoklav</td><td>Teb Zaim</td><td></td><td>Iran</td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td>Sigma</td><td></td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Merck</td><td>107024</td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>Diethylpyrocarbonat (DEPC)-behandeltes Wasser</td><td>Sigma</td><td></td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>sigma</td><td>60-00-4</td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>Elektrophoresetank</td><td>Payapajoohesh</td><td></td><td>Iran</td></tr><tr><td>Eppendorf microTube</td><td>Extragene</td><td></td><td>Taiwan</td></tr><tr><td>EtBr</td><td>sigma</td><td>E 8751</td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Merck</td><td>81870</td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>Falcon Tube</td><td>Extragene</td><td></td><td>Taiwan</td></tr><tr><td>Formaldehyd</td><td>Merck</td><td>344198</td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>Formamid</td><td>Merck</td><td>344206</td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>Homogenisator-Sunicator</td><td>Microson XL 2000</td><td></td><td>USA</td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>sigma</td><td>19516</td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>Ketaminhydrochlorid</td><td>sigma</td><td>1867-66-9</td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>Laminar Flow Hood</td><td>Jal Tajhiz</td><td></td><td>Iran</td></tr><tr><td>Mgnetic Rührer</td><td>Labrotechnik</td><td></td><td>USA</td></tr><tr><td>Mikrozentrifuge</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>Mikropipettenspitzen</td><td>Extragene</td><td></td><td>Taiwan</td></tr><tr><td>MOPS</td><td>sigma</td><td>85022106</td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>Na AC</td><td>Merck</td><td>567422</td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Merck</td><td>109137</td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>Ofen</td><td>Teb Zaim</td><td></td><td>Iran</td></tr><tr><td>PH meter</td><td>Knick</td><td></td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>RNA Later/RNA Stabilisierungsreagenz</td><td>Qiagen</td><td>76104</td><td>USA</td></tr><tr><td>Chirurgisches Instrument</td><td>Agn Thos</td><td></td><td>Deutsche</td></tr><tr><td>Herstellung</td><td>Spritzen AvaPezeshk</td><td></td><td>Iran</td></tr><tr><td>TriPure Reagenz/RNA Extraktionsreagenz</td><td>Roche</td><td>11667157001</td><td></td></tr><tr><td>USA Vortex</td><td>Labinco</td><td></td><td>Niederlande</td></tr><tr><td>Wasserbad</td><td>Memmert</td><td></td><td>Germany</td></tr><tr><td>zylazine</td><td>sigma</td><td>7361-61-7</td><td>Germany</td></tr></tbody></table>

schnelle und kostengünstige rna-extraktion von ratten-pankreasgewebe

Rapid and Cost-Effective RNA Extraction of Rat Pancreatic Tissue

Unabhängig von der Extraktionsmethode erfolgt die optimierte RNA-Extraktion von Geweben und Zelllinien in vier Stufen: 1) Homogenisierung, 2) effektive Denaturierung von Proteinen aus der RNA, 3) Ribonuklease-Inaktivierung und 4) Entfernung von Verunreinigungen aus DNA, Proteinen und Kohlenhydraten. Jedoch, Es ist sehr mühsam, die Integrität der RNA zu erhalten, wenn es hohe Niveaus von RNase im Gewebe. Die spontane Autolyse macht es sehr schwierig, RNA aus Bauchspeicheldrüsengewebe zu extrahieren, ohne sie zu beschädigen. Daher ist eine praktische RNA-Extraktionsmethode erforderlich, um die Integrität des Bauchspeicheldrüsengewebes während des Extraktionsprozesses zu erhalten. Eine experimentelle und vergleichende Untersuchung bestehender Protokolle wurde durchgeführt, indem 20-30 mg Bauchspeicheldrüsengewebe der Ratte in weniger als 2 Minuten erhalten und die RNA extrahiert wurden. Die Ergebnisse wurden durch Elektrophorese bewertet. Die Experimente wurden dreimal zur Verallgemeinerung der Ergebnisse durchgeführt. Das Eintauchen von Bauchspeicheldrüsengewebe in das RNA-Stabilisierungsreagenz bei -80 °C für 24 h ergab eine hochintegrierte RNA, als das RNA-Extraktionsreagenz als Reagenz verwendet wurde. Die erzielten Ergebnisse waren vergleichbar mit den Ergebnissen kommerzieller Kits mit Spinsäulenbindungen.

Bewertung der Integrität der RNA in der RNA-Extraktionsreagenz nach einem Routine- und modifizierten Operationsprotokoll ohne RNA-Stabilisierungsreagenz Nach der Extraktion von RNA mit dem RNA-Extraktionsreagenz aus einem routinemäßigen Operationsprotokoll wurden inakzeptable Bänder beobachtet. Lane 1 zeigt RNA aus der Leber als Kontrolle. Lane 2 zeigt den herabgestuften Status von 28S/18S rRNA-Bändern in der gesamten RNA, die aus einem routinemäßigen chirurgischen Protokoll gewonnen werden. Wenn die ...

Die Reinheit und Integrität der isolierten RNA ist ein wichtiger Schritt in RNA-abhängigen Assays. Hier präsentieren wir eine praktische, schnelle und kostengünstige Methode, um RNA aus einer kleinen Menge unbeschädigtem Bauchspeicheldrüsengewebe zu extrahieren.

Schnelle und kostengünstige RNA-Extraktion von Ratten-Pankreasgewebe

Regardless of the extraction method, optimized RNA extraction of tissues and cell lines are carried out in four stages: 1) homogenization, 2) effective ...

Hallo zusammen. Wir haben eine einfache, schnelle, schnelle, klassenbeschreibende Methode für eine effiziente RNA-Extraktion aus Bauchspeicheldrüsengewebe entwickelt. Der Hauptvorteil dieser Methode ist ein optimiertes Verfahren zur Extraktion von RNA aus minimaler Gewebemenge durch Autolyse. Hallo wieder. Die Demonstration des Verfahrens wird von Sanaz Dastghaib durchgeführt werden, das ist mein DOKTORand in unserem Labor an der Biochemie-Abteilung der Shiraz University of Medical Sciences.Erste Vorbereitung der Operation Ort, setzen alle Anforderungen unter die Haube. Um RNase zu inaktivieren, sterilisieren Sie alle chirurgischen Instrumente in einem Ofen. Injizieren Sie Ketamin-Xylazin intraperitoneal 80/8 Milligramm pro Kilogramm. Fügen Sie 1 cc.RNA-Stabilisierungsreagenz in das richtige Mikrorohr ein, um die Aktivierung der Endonuklease in existierenden Geweben zu bewohnen. Legen Sie die Ratte sofort auf das Operationsbrett. Kopf weg den Chirurgen für einen Mittellinienschnitt. Dann sterilisieren Sie die gesamte Bauchoberfläche mit 70% Alkohol, um das Rattenhaar zu entfernen. Schneiden Sie die Haut für die Operation. Umformung Schnitt wurde getan, um den Bauch aus dem Schamber

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

Lasermikrodissektion ist eine Technik, die die Gewinnung von ausgewählten Zellen aus winzigen Mengen von Parenchym ermöglicht. Hier beschreiben wir ein Protokoll zum Erfassen menschlicher Pankreasinseln aus chirurgischen Proben für transkriptomischen Studien verwendet werden. Unser Protokoll verbessert die intrinsische Autofluoreszenz der menschlichen Beta-Zellen und erleichtert so ihre Sammlung.

Verbessertes Protokoll für Laser Mikrodissektion Of Human Pankreasinseln Von chirurgischen Proben

Wir berichten über ein Verfahren zur Isolierung von RNA mit hoher Integrität aus der Ribonuklease-reichen Bauchspeicheldrüse der Maus.

RNA-Isolierung aus Maus Pankreas: Eine Ribonuklease-reichen Gewebe

Kritische Herausforderungen für die Diabetesforschung Bereich sind die molekularen Mechanismen zu verstehen, die Insel β-Zellreplikation regulieren und β-Zellregeneration zur Stimulierung der Methoden zu entwickeln. Hierin ist ein High-Content-Screening-Verfahren zur Identifizierung und der β-Zellreplikation fördernden Aktivität von kleinen Molekülen bewerten dargestellt.

Ein hoher Gehalt<em&gt; In Vitro</em&gt; Pancreatic Islet β-Zell-Replikation-Discovery-Plattform

Hier stellen wir ein Protokoll für den Nachweis der microRNA-Expression in der Ratten-Peritonealmembran unter Verwendung einer quantitativen Echtzeit-Reverse-Transkription-Polymerase-Kettenreaktion vor. Diese Methode eignet sich zur Untersuchung des microRNA-Expressionsprofils in der Ratten-Peritonealmembran in mehreren pathologischen Zuständen.

Nachweis der microRNA-Expression in der peritonealen Membran von Ratten unter Verwendung der quantitativen Echtzeit-PCR

Dieses Inselisolierungsprotokoll beschrieb einen neuartigen Weg der Kollagenase-Injektion zur Verdauung des Exokringewebes und ein vereinfachtes Gradientenverfahren, um die Inseln von Mäusen zu reinigen. Es beinhaltet enzymatische Verdauung, Gradiententrennung/Reinigung und Islet-Handpicking. Eine erfolgreiche Isolierung kann 250–350 hochwertige und voll funktionsfähige Inselchen pro Maus ergeben.

Ein einfaches Hocheffizienzprotokoll für die Isolierung von Pankreas-Isleten von Mäusen

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um Insulin mit dem Ausdruck 3D murinen Pancreatoids von Pankreas Stammväter frei schwebenden e10.5 getrennt und die damit verbundenen Mesenchym zu generieren.

Generation von Gerüst-frei, dreidimensionale Insulin mit dem Ausdruck Pancreatoids vom Maus Pankreas Stammväter In-vitro-

Wir beschreiben eine Methode zur Isolierung von endokrinen Zellen aus embryonalen, Neugeborenen- und postnatale Bauchspeicheldrüsen gefolgt von einzelligen RNA Sequenzierung. Diese Methode ermöglicht Analysen der pankreatischen endokrinen Linie Entwicklung, Zell-Heterogenität und transkriptomischen Dynamik.

Einzellige Transkriptomischen Analysen der Maus endokrinen Zellen der Bauchspeicheldrüse

Metaplastische Zellen der Bauchspeicheldrüse sind Vorläufer bösartiger Zellen, aus denen Pankreastumoren entstehen. Die Isolierung intakter, lebensfähiger Pankreaszellen ist jedoch eine Herausforderung. Hier stellen wir eine effiziente Methode zur Dissoziation von Pankreasgewebe vor. Die Zellen können dann für die Einzelzell-RNA-Sequenzierung (scRNA-seq) oder für die zwei- oder dreidimensionale Co-Kultivierung verwendet werden.

Pankreasgewebedissektion zur Isolierung lebensfähiger Einzelzellen

Diese Studie entwickelte eine vereinfachte Methode, um funktionelle primäre Inselchen und Acinarzellen effizient aus der Bauchspeicheldrüse der Maus zu extrahieren, was ein wertvolles Werkzeug zur Untersuchung der interzellulären Kommunikation in der Pathogenese des akuten Pankreatitis-induzierten Diabetes bietet.

Eine einfache und schnelle Methode zur gleichzeitigen Isolierung von primären Inselchen und primären Pankreas-Acinarzellen von Mäusen

Dieses Protokoll beschreibt eine standardisierte Methode zur chirurgischen Entnahme, enzymatischen Verdauung und Dichtegradientenreinigung von Lewis-Rattenpankreasinseln, die ertragreiche, hochreine Präparate für den direkten Einsatz bei Transplantationen oder in vitro-Studien ermöglicht.

Isolierung und Reinigung von Pankreasinseln bei Lewis-Ratten mittels enzymatischer Verdauung und Dichtegradiententrennung

Lernen Sie eine schnelle und kostengünstige Methode zur RNA-Extraktion aus Ratten-Pankreasgewebe. Diese Technik liefert hochreine RNA mit hoher Integrität für biologische Assays und verbessert die Forschungseffizienz erheblich.

Schnelle und kostengünstige RNA-Extraktion von Ratten-Pankreasgewebe

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