Doppelte Direkteinspritzung von Blut in die Cisterna Magna als Modell der subarachnoiden Blutung

Das übergeordnete Ziel dieses Videos ist es, das Protokoll einer doppelten direkten Injektion von Blut in die Zisterne magna als Modell der subarachnoiden Blutung zu erklären. Die Physiologie der subarachnoiden Blutung ist oft auf einen Bruch eines Aneurysmen zurückzuführen. Und wir machen zuerst die Extravasation von Blut in das Kompartiment zwischen dem Gehirn und dem Gewebe, das das Gehirn bedeckt.

Dieses Fach ist der Subarachnoidenraum. Subarachnoide Blutungen machen bis zu 7% aller Streikfälle aus. Die Sterblichkeit schwankt zwischen 30 und 50% in bevölkerungsbasierten Studien und subarachnoiden Blutungen Überlebende erleben häufig kognitive Fortsetzungen als Gedächtnisdefizite, Asthenie oder affektive Störungen.

Die Hauptursache für die hohe Prävalenz des schlechten Ergebnisses ist die zerebrale Ischämie. Studien stellten einen Zusammenhang zwischen dem Auftreten von Ischämie in der Vasokonstriktion der großen Hirnarterien, genannt mikroskopischer Vasospasmus, der bei einer Mehrheit der Patienten zwischen dem vierten und fünfzehnten Tag nach dem ersten Blähungsereignis nachgewiesen werden kann. Aufgrund der Ineffizienz der derzeitigen therapeutischen Möglichkeiten besteht ein offensichtlicher medizinischer Bedarf an einem besseren Verständnis pathologischer Ereignisse.

Begleitende subarachnoide Blutungen und neue therapeutische Ziele sollten getestet werden, aber dies erfordert vielfältige und standardisierte Tiermodelle. Der Bruch des interkraniellen Aneurysmen, das hauptsächlich für subarachnoide Blutungen beim Menschen verantwortlich ist, ist wahrscheinlich schwierig, präklinische und menschliche Modelle zu erstellen. Bei Tieren liegen die Hauptschwierigkeiten in der Kontrollinzidenz von Blutungen und Blutverteilung, aber neuere Studien konzentrieren sich auf die Entwicklung redischerer Modelle von Modellen der subarachnoiden Blutung.

Hierstellen Sie ein standardisiertes Mausmodell von zwei aufeinanderfolgenden Injektionen von autologem arteriellem Blut unserer zwei Tage in die Zisterne magna. Die Hauptvorteile dieses Modells sind, einen nichtinvasiven chirurgischen Eingriff reproduzierbar zu meistern, die Qualität und Quantität des injizierten Blutes anzupassen und das Blutungsereignis zu verstärken, ohne den intrakraniellen Druck drastisch zu erhöhen. Vor Beginn der Operation müssen Sie eine weitere große Anzahl von Glaskapillaren mit einem Mikropipette-Puller setzen.

Die injizierende Pipette sollte einen Innendurchmesser von 0,86 Millimetern und einen Außendurchmesser von 0,5 Millimeter aufweisen. Bereiten Sie die künstliche zerebrale Rückenmarksflüssigkeit für Scheinzustand vor, wie im schriftlichen Protokoll angegeben. Sie müssen diese sauerstoffreiche künstliche zerebrale Rückenmarksflüssigkeit mit einem 0,22 Mikron Filterapparat realisieren.

Der erste Schritt unseres subarachnoiden Blutungsmodells besteht in der Isolierung der Karotisarterie entlang der Luftröhre und der Sammlung des Maximums an Blut aus der Karotisarterienpunktion. Nach der Anästhesie durch Isofluran eisern, überprüfen Sie den Mangel an Reflexen, indem Sie ein oder zwei Hinterbeine klemmen, um die Einstellung des experimentellen Verfahrens zu ermöglichen. Kodieren Sie eine ein Millimeter Spritze mit Eprin mit einer 26-Spur-Nadel.

Dies wird blutgerinnungsmöglich in den nächsten Schritten. Wiegen Sie jede Maus präzise mit einer elektronischen Waage. In der aktuellen Studie hätten Mäuse kurz vor der Operation ein Körpergewicht im Bereich von 20 bis 25 Gramm.

Wie bereits erläutert, induzierte Anästhesie der operierten Maus und dann rasieren den Hals und den Raum zwischen jedem Ohr mit Hilfe einer geeigneten elektrischen Knipser. Überprüfen Sie die Maus schläft und der Mauskopf ist gut blockiert. Subkutan 100 Mikroliter Buprenorphin mit 0,1 Milligramm pro Kilo mit einer 26-Meter-Nadel im unteren Rücken injizieren, um Schmerzen nach dem Erwachen zu vermeiden.

Verhindern Sie trockene Augen mit einem schützenden flüssigen Gel und halten Sie die intrauktale Temperatur von 37 Grad mit einer auto regulierten elektrischen Decke aufrecht. Vor der Behandlung des rasierten Bereichs mit einer antiseptischen Lösung wurden alle Instrumente, die das Gewebe berühren, sterilisiert und aseptisch behandelt. Schneiden Sie am ersten Tag einen einen Zentimeter langen Schnitt in den hinteren Hals, gefolgt von der Trennung der Muskeln entlang der Mittellinie, um auf die Zisternen magna zuzugreifen.

Schneiden Sie die Spitze der leeren Glaspipette mit einer dünnen Schere. Passen Sie sich dann an eine Spritze an, die mit einem flexiblen Siliziumstecker verbunden ist. Dann übertragen Sie 60 Mikroliter Blut oder künstliche zerebrale Rückenmarksflüssigkeit in einem 0,5 Milliliter Rohr mit einer Präzisionsmikropipette Suck in die Glaspipette, die 60 Mikroliter Blut für die subarachnoiden Blutung oder 60 Mikroliter künstlicher zerebraler Rückenflüssigkeit für den Scheinzustand.

Zur Injektion die Pipette auf den stereotaktischen Rahmen einzufügen, indem Sie z.B. einen Ring oder einen verwenden und sich langsam der Pipettenspitze an der Schnittstelle mit der Cisterna magna annähern. Legen Sie die Pipettespitze langsam durch die atlanto-okzipitale Membran in die Zisterne magna mit einem Mikromanipulator des stereotaktischen Rahmens ein. Schließen Sie die Pipette an die zuvor gefüllte Spritze an, die für die Druckinduktion bereit ist.

Injizieren Sie durch Druck mit einer niedrigen Rate um 10 Mikroliter pro Minute, um akute intrakranielle Hypertonie zu vermeiden. Während der Injektion, überwachen Sie die Atemfrequenz und die Rektaltemperatur genau. Am Ende der Injektion, vorsichtig nehmen Sie die Pipette mit dem Mikromanipulator und visuell kümmern darauf, dass es kein Leck während der Entnahme.

Erreichen Sie Homöostase und führen Sie zwei Nähte mit geflochtenem, nicht resorbierbarem Nährgewinde durch. Unmittelbar nach der Operation, isolieren und positionieren Sie die Maus im Niedergang Dekubitus und decken Sie mit einer Überlebensdecke in einer offenen Box für die Dauer der Genesung. Nach 24 Stunden, anästhesie neuflieren Sie die Maus auf dem stereotaktischen Rahmen wie am Vortag und entfernen Sie mit Sorgfalt die Nähte mit Mikroschere.

Bereiten Sie wie zuvor aseptisch der atlanto-okzipitalen Membran vor, indem Sie auf die rasierte Fläche und aseptische Lösung mit einer Baumwollstange auftragen. Injizieren, wie am Vortag, 30 Mikroliter Blut oder künstliche zerebrale Rückenmarksflüssigkeit mit einer niedrigen Rate. Wie bereits erwähnt, überwachen Sie Atemfrequenz und Rektaltemperatur.

Am Ende der Injektion, vorsichtig nehmen Sie die Pipette und kontrollieren das Fehlen von Blutleck während der Entnahme. Erreichen Sie Homöostase und führen Sie zwei Nähte mit einem geflochtenen resorbierbaren Nahtgewinde durch. Vom ersten Tag der Operation bis zum Tag des Opfers sollte das Körpergewicht täglich als sensibler Indikator für das allgemeine Wohlbefinden bewertet werden.

Es zeigte eine signifikante reduzierte Körpergewichtszunahme bei subarachnoiden Blutungen, im Vergleich zu Scheintieren, was auf einen lang anhaltenden Aktivitätsregenerationsprozess und verlängerte pathologische Ereignisse, postsubarachnoidale Blutungen hindeutet. Warum ist die Sterblichkeit nicht in Scheinzustand? Die Sterblichkeit liegt an Tag sieben bei subarachnoiden Blutungen, wobei die meisten Tiere am einen oder vierten Tag nach der Operation sterben.

Unter humanen Endpunkten wird eine signifikante Gewichtsabnahme von 15% des Anfangsgewichts festgestellt. Eine zurückgeknickte Haltung, langsame Bewegungen, Wunden, abnorme Stimmbildungen oder signifikante Aggressionsind sind ebenfalls Anzeichen dafür, dass das Tier leidet. Wenn eines dieser Zeichen oder eine Kombination von Zeichen erscheint, wird die Verfolgung des Tieres innerhalb von Stunden verstärkt, die seinem Aussehen folgen.

Wenn sich der Zustand des Tieres in der folgenden Stunde verschlechtert oder sich nicht innerhalb von 48 Stunden verbessert, wird davon ausgegangen, dass ein unerträgliches Leiden erreicht ist und die Tötung durchgeführt wird. In diesem Beispiel am ersten Tag der Operation kann es von einem Probenhirn beobachtet werden, Blutgerinnsel entlang der großen Arterien des Willis-Polygons in subarachnoiden Blutungen Subjekt. Am fünften Tag nach der Operation und vor dem Opfer ermöglicht die intervaskuläre indische Tinteninjektion den Nachweis von makroskopischem Vasospasmus, der der Vasokonstriktion großer Kleinhirnarterien entspricht, die Färbung von Hirnscheiben mit Hämatoxylin und Eosin ermöglicht die Messung des zerebralen Vasospasmus.

Hier, wie auf dieser Fotomikroskopie dargestellt, können Sie als Vasospasmus der Basilararterie beobachten. In diesem Modell der Umleitung direkte Injektion von Blut in die Zisterne magna, haben wir vor kurzem gezeigt zerebralen Vasospasmus der großen zerebralen Arterien, zerebrale vaskuläre fibril Ablagerung, und Zellapoptose, begleitet von veränderten sensorischen, motorischen und kognitiven Funktionen bei Mäusen. So macht es dieses Modell validiert und gekennzeichnet für kurzfristige und lang anhaltende Ereignisse, postarachnoidale Blutungen.

Es sollte ideal geeignet sein, um neue Ziele prospektiv zu identifizieren und studien über effiziente therapeutische Strategien gegen subarachnoidale Blutungen im Zusammenhang mit Komplikationen.