Name: Eine quantitative Nachweismethode für microRNAs in der Niere eines Mausmodells mit ischämischer Nierenschädigung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Erfahren Sie eine quantitative Methode zur microRNA-Detektion in Nieren bei ischämischer Nierenschädigung im Mausmodell. Dieses Protokoll ermöglicht zuverlässige Biomarker-Analysen für akute Nierenverletzungen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Kelly, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+renal+failure%3A+much+more+than+a+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Seminas+in+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Acute renal failure: much more than a kidney disease.</a> Seminas in Nephrology. 26 (2), 105-113 (2006).</li>
<li>Saikumar, J., Ramachandran, K., Vaidya, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+micromarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Noninvasive micromarkers.</a> Clinical Chemistry. 60 (9), 1158-1173 (2014).</li>
<li>Beermann, J., Piccoli, M. T., Viereck, J., Thum, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-coding+RNAs+in+Development+and+Disease%3A+Background%2C+Mechanisms%2C+and+Therapeutic+Approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Non-coding RNAs in Development and Disease: Background, Mechanisms, and Therapeutic Approaches.</a> Physiological Reviews. 96 (4), 1297-1325 (2016).</li>
<li>Yang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovery+and+validation+of+extracellular%2Fcirculating+microRNAs+during+idiopathic+pulmonary+fibrosis+disease+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Discovery and validation of extracellular/circulating microRNAs during idiopathic pulmonary fibrosis disease progression.</a> Gene. 562 (1), 138-144 (2015).</li>
<li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+miR-126+is+a+potential+biomarker+to+predict+the+onset+of+type+2+diabetes+mellitus+in+susceptible+individuals%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Circulating miR-126 is a potential biomarker to predict the onset of type 2 diabetes mellitus in susceptible individuals.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 463 (1-2), 60-63 (2015).</li>
<li>Zhong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR-21+is+a+key+therapeutic+target+for+renal+injury+in+a+mouse+model+of+type+2+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">miR-21 is a key therapeutic target for renal injury in a mouse model of type 2 diabetes.</a> Diabetologia. 56 (3), 663-674 (2013).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downregulation+of+urinary+cell-free+microRNA-214+as+a+diagnostic+and+prognostic+biomarker+in+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Downregulation of urinary cell-free microRNA-214 as a diagnostic and prognostic biomarker in bladder cancer.</a> Journal of Surgical Oncology. 111 (8), 992-999 (2015).</li>
<li>Morishita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+expression+profiling+in+peritoneal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Research%3A+The+Journal+of+Laboratory+and+Clinial+Medicine%22%5BJournal%5D)">MicroRNA expression profiling in peritoneal fibrosis.</a> Translational Research: The Journal of Laboratory and Clinial Medicine. 169, 47-66 (2016).</li>
<li>Morse, S. M., Shaw, G., Larner, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concurrent+mRNA+and+protein+extraction+from+the+same+experimental+sample+using+a+commercially+available+column-based+RNA+preparation+kit%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Concurrent mRNA and protein extraction from the same experimental sample using a commercially available column-based RNA preparation kit.</a> BioTechniques. 40 (1), 54-58 (2006).</li>
<li>Mestdagh, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+quantitative+miRNA+expression+platforms+in+the+microRNA+quality+control+%28miRQC%29+study%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Evaluation of quantitative miRNA expression platforms in the microRNA quality control (miRQC) study.</a> Nature Methods. 11 (8), 809-815 (2014).</li>
<li>Bustin, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+MIQE+guidelines%3A+minimum+information+for+publication+of+quantitative+real-time+PCR+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">The MIQE guidelines: minimum information for publication of quantitative real-time PCR experiments.</a> Clinical Chemistry. 55 (4), 611-622 (2009).</li>
<li>Jonas, S., Izaurralde, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+molecular+understanding+of+microRNA-mediated+gene+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Genetics%22%5BJournal%5D)">Towards a molecular understanding of microRNA-mediated gene silencing.</a> Nature Reviews. Genetics. 16 (7), 421-433 (2015).</li>
<li>Ichii, O., Horino, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNAs+associated+with+the+development+of+kidney+diseases+in+humans+and+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">MicroRNAs associated with the development of kidney diseases in humans and animals.</a> Journal of Toxicologic Pathology. 31 (1), 23-34 (2018).</li>
<li>Ma, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+of+miRNA-17-5p%2C+miRNA-21+and+miRNA-106a+level+during+rat+kidney+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Zhonghua+Yi+Xue+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">Changes of miRNA-17-5p, miRNA-21 and miRNA-106a level during rat kidney ischemia-reperfusion injury.</a> Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 95 (19), 1488-1492 (2015).</li>
<li>Saikumar, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression%2C+circulation%2C+and+excretion+profile+of+microRNA-21%2C+-155%2C+and+-18a+following+acute+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicological+Sciences%3A+an+Official+Journal+of+the+Society+of+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Expression, circulation, and excretion profile of microRNA-21, -155, and -18a following acute kidney injury.</a> Toxicological Sciences: an Official Journal of the Society of Toxicology. 129 (2), 256-267 (2012).</li>
<li>Li, Y. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-21+in+the+pathogenesis+of+acute+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+%26+Cell%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-21 in the pathogenesis of acute kidney injury.</a> Protein & Cell. 4 (11), 813-819 (2013).</li>
<li>Zhou, J., Chen, H., Fan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+analysis+of+the+expression+profile+of+non-coding+RNAs+involved+in+ischemia%2Freperfusion-induced+acute+kidney+injury+in+mice+using+RNA+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Systematic analysis of the expression profile of non-coding RNAs involved in ischemia/reperfusion-induced acute kidney injury in mice using RNA sequencing.</a> Oncotarget. 8 (59), 100196-100215 (2017).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+expression+profile+by+next-generation+sequencing+in+a+novel+rat+model+of+contrast-induced+acute+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">MicroRNA expression profile by next-generation sequencing in a novel rat model of contrast-induced acute kidney injury.</a> Annals of Translational Medicine. 7 (8), 178(2019).</li>
<li>Colbert, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model-specific+role+of+microRNA-223+as+a+mediator+of+kidney+injury+during+experimental+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">A model-specific role of microRNA-223 as a mediator of kidney injury during experimental sepsis.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 313 (2), 553-559 (2017).</li>
<li>Delbridge, M. S., Shrestha, B. M., Raftery, A. T., El Nahas, A. M., Haylor, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+body+temperature+in+a+rat+model+of+renal+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">The effect of body temperature in a rat model of renal ischemia-reperfusion injury.</a> Transplantation Proceedings. 39 (10), 2983-2985 (2007).</li>
<li>Dallas, P. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+levels+assessed+by+oligonucleotide+microarray+analysis+and+quantitative+real-time+RT-PCR+--+how+well+do+they+correlate%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Gene expression levels assessed by oligonucleotide microarray analysis and quantitative real-time RT-PCR -- how well do they correlate.</a> BMC Genomics. 6, 59(2005).</li>
<li>Rockett, J. C., Hellmann, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confirming+microarray+data--is+it+really+necessary%5BTitle%5D)+AND+%22Genomics%22%5BJournal%5D)">Confirming microarray data--is it really necessary.</a> Genomics. 83 (4), 541-549 (2004).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Gebogene Pinzette ohne Haken</td><td>Natsume Seisakusho</td><td>MA-47</td><td></td></tr><tr><td>Buffer RLT</td><td>Qiagen</td><td>79216</td><td>Waschpuffer 1</td></tr><tr><td>Buffer RWT</td><td>Qiagen</td><td>1067933</td><td>Waschpuffer 2</td></tr><tr><td>C57B6 Mäuse</td><td>SLC</td> nicht <td>Pinzette mit</td> Zähnen zuweisen <td></td></tr><tr><td></td><td>Natsume Seisakusho</td><td>MA-49</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette ohne Zähne</td><td>Natsume Seisakusho</td><td>MA-48-1</td><td></td></tr><tr><td>Hämostatische Clips</td><td>Natsume Seisakusho</td><td>KN&minus; 353</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Optische 96-Well-Reaktionsplatte für qRT-PCR</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4316813</td><td>96-Well-Reaktionsplatte</td></tr><tr><td>MicroAmp Optische Klebefolie</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4311971</td><td>Klebefolie für 96-Well-Reaktionsplatte</td></tr><tr><td>miRNA-132-3p Primer</td><td>Qiagen</td><td>MS00003458</td><td>5'UAACAGUCUACAGCCAUGGUCG</td></tr><tr><td>miRNA-17-5p Primer</td><td>Qiagen</td><td>MS00029274</td><td>5'CAAAGUGUGCUUACAGUGCAGGUAG</td></tr><tr><td>miRNA-18a-5p Primer</td><td>Qiagen</td><td>MS00031514</td><td>5'UAAGGUGCAUCUAGUGCAGAUAG</td></tr><tr><td>miRNA-212-3p Primer</td><td>Qiagen</td><td>MS00003815</td><td>5'UAACAGUCUCCAGUCACGGCC</td></tr><tr><td>miRNA-21a-5p Primer</td><td>Qiagen</td><td>MS00009079</td><td>5'UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA</td></tr><tr><td>miRNA-223-3p Primer</td><td>Qiagen</td><td>MS00003871</td><td>5'UGUCAGUUUGUCAAAUACCCCA</td></tr><tr><td>miRNA-574-5p Primer</td><td>Qiagen</td><td>MS00043617</td><td>5'UGAGUGUGUGUGUGUGUGUGAGUGUGU</td></tr><tr><td>miRNeasy Mini-Kit</td><td>Qiagen</td><td>217004</td><td>Silica-Membran-basierte Spin-Säule</td></tr><tr><td>miScript II RT-Kit</td><td>Qiagen</td><td>218161</td><td></td></tr><tr><td>miScript SYBR Green PCR-Kit</td><td>Qiagen</td><td>218073</td><td></td></tr><tr><td>QIA Shredder</td><td>Qiagen</td><td>79654</td><td>Biopolymer-Zerkleinerungssystem in einer Mikrozentrifugen-Spinsäule</td></tr><tr><td>QIAzol Lysereagenz</td><td>Qiagen</td><td>79306</td><td>Phenol/Guanidin-basiertes Lysereagenz</td></tr><tr><td>QuantStudio 12K Flex Flex Real-Time PCR System</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4472380</td><td>real-time PCR Gerät</td></tr><tr><td>QuantStudio 12K Flex Software Version 1.2.1.</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4472380</td><td>real-time PCR-Instrumentensoftware</td></tr><tr><td>RNU6-2 Primer</td><td>Qiagen</td><td>MS00033740</td><td>nicht offengelegte</td></tr><tr><td>chirurgische Schere</td><td>Natsume Seisakusho</td><td>B-2</td><td></td></tr><tr><td>Gefäßclip-Applier</td><td>VITALITEC</td><td>1621420</td><td></td></tr></tbody></table>

eine quantitative nachweismethode für micrornas in der niere eines mausmodells mit ischämischer nierenschädigung

A Quantitative Detection Method for MicroRNAs in the Kidney of an Ischemic Kidney Injury Mouse Model

Hier wurde das miRNA-Expressionsprofil in AKI-Mäusen untersucht. Das miRNA-Expressionsprofil wurde in verschiedenen Organen und Geweben von Mäusen untersucht. MiRNAs sind wichtige posttranskriptionelle Regulatoren und werden derzeit ausgiebig bei der Charakterisierung einer Vielzahl von Krankheiten, einschließlich AKI, untersucht. MiRNAs haben das Potenzial, zur Aufklärung pathologischer Zustände beizutragen und bei der Behandlung von AKI12 eingesetzt zu werden. Die Hauptursachen für AKI sind IRI,...

Eine quantitative Nachweismethode für microRNAs in der Niere eines Mausmodells mit ischämischer Nierenschädigung

MicroRNAs (miRNAs) are involved in various disease states and are effective biomarkers for the early diagnosis of diseases and treatment in mice. However, ...

Eine veränderte Expression von microRNA in AKI kann für Biomarker und Therapie nützlich sein. Dieses Protokoll ist einfach und erzielt konstante Ergebnisse zwischen den Labors. Die IRI der Niere stellt einen der Hauptrisikofaktoren für AKI dar. Die Quantifizierung von microRNAs, die durch IRI verändert werden, führt zu einer Diagnose. MicroRNAs, die aus der Nierenprobe aufgereinigt werden, werden auf andere Systeme aufgebracht. Überwachen Sie während des gesamten Eingriffs sorgfältig auf Unterkühlung, Darmbefeuchtung und Narkosetiefe. Das liegt daran, dass es viele manuelle Techniken gibt, an die man sich gewöhnen muss.Nachdem Sie bestätigt haben, dass es keine Reaktion auf das Einklemmen der Zehen gibt, legen Sie die betäubte Maus in Rückenlage auf eine beheizte Operationsunterlage. Nachdem Sie einen Mittellinienschnitt gemacht haben, verwenden Sie ein mit PBS angefeuchtetes Wattestäbchen, um den Darm vorsichtig auf die linke Seite der zusätzlichen Bauchhöhle zu schieben, um die rechte Niere und den Harnleiter freizulegen, und verwenden Sie eine abgewinkelte Pinzette, um den rechten Harnleiter anzuheben. Lizieren Sie den Harnleiter an zwei Stellen mit 4-0 geflochtenen Seidennähten, lassen Sie längere Bänder für die Naht, die näher an der Niere liegt, und schneiden Sie zwischen den Nähten. Halten Sie die verbleibende Naht vorsichtig fest, präparieren Sie stumpf das Bindegewebe und das Fett entlang der Niere und identifizieren Sie ein Blutgefäß, das nicht die Nierenarterien oder -venen sind, die die rechte Niere mit Blut versorgen. Ligatieren Sie das Gefäß und, wenn die rechte Niere ausreichend abgelöst wurde, die Nierenvene und die Arterie. Schieben Sie den Darm mit einem mit PBS angefeuchteten Wattestäbchen vorsichtig auf die rechte Seite der zusätzlichen Bauchhöhle, um die linke Niere freizulegen und den Darm mit einem angefeuchteten Tuch zu bedecken. Nachdem Sie die linke Niere wie gezeigt vorbereitet haben, klemmen Sie die Nierenarterie und die Vene einen Zentimeter von der Niere entfernt, um eine Ischämie der linken Niere auszulösen. Eine erfolgreiche Ischämie kann durch eine allmähliche gleichmäßige Verdunkelung des Nierengewebes visuell bestätigt werden. Wenn eine Ischämie bestätigt wird, führen Sie das Darmgewebe in die Bauchhöhle zurück, achten Sie darauf, dass sich der Darm nicht verdreht, und schließen und drapieren Sie die Bauchhaut vorübergehend. Entfernen Sie nach 25 bis 45 Minuten die Klemme und bestätigen Sie, dass sich die Durchblutung und die Nierenfarbe verbessern. Nachdem Sie bestätigt haben, dass der Darm nicht verdreht ist, instillieren Sie intraperitoneale PBS und verschließen Sie den Bauchmuskel und die Haut in zwei Schichten mit 4-0-Nylonnähten. 24 Stunden nach der Einleitung einer ischämischen Verletzung öffnen Sie den Mittellinienschnitt wieder und verwenden Sie eine 27-Gauge-Nadel, um das Blut aus der unteren Hohlvene zu sammeln. Machen Sie einen Mittellinienschnitt in der Brustwand und führen Sie eine 23-Gauge-Nadel in den linken Ventrikel ein. Nachdem Sie den Rückfluss in die Nadel bestätigt haben, machen Sie einen Schnitt in den rechten Leberlappen und injizieren Sie 20 Milliliter PBS. Die Leber färbt sich rot in rosa, was bestätigt, dass ausreichend Blut abgelassen wurde. Verwenden Sie eine Zange und eine Schere, um die linke Niere zu entfernen, und waschen Sie das herausgeschnittene Gewebe in einer Schale mit PBS. Verwenden Sie dann die Pinzette, um die Nierenfaszie zu entfernen, ohne die Niere auszutrocknen, und schneiden Sie die Niere entlang der vertikalen Mittellinie in zwei Hälften. Für die microRNA-Aufreinigung geben Sie 30 Milligramm der gefrorenen Nierenprobe in einen Glashomogenisator mit 700 Mikrolitern Lysereagenz auf Phenylguanidin-Basis auf Eis und drehen Sie den Stößel langsam und wiederholt, um die Probe vollständig zu homogenisieren. Wenn das Gewebe vollständig dissoziiert ist, wird das homogenisierte Lysat in einem Zwei-Milliliter-Sammelröhrchen in das Biopolymer-Zerkleinerungssystem in einer Mikrozentrifugen-Spin-Säule überführt und die Probe durch Zentrifugation auf den Boden des Röhrchens gebracht. Das Lysat wird in ein neues Mikrozentrifugenröhrchen mit 140 Mikrolitern Chloroform überführt und das Röhrchen 15 Sekunden lang invertiert, wobei die Kappe fest angezogen ist. Nach einer zwei- bis dreiminütigen Inkubation bei Raumtemperatur wird die Probe durch Zentrifugation sedimentiert und der Überstand in ein neues Mikrozentrifugenröhrchen mit dem 1,5-fachen Volumen von 100 % Ethanol überführt, ohne das Pellet zu stören. Mischen Sie die Probe fünf Sekunden lang, indem Sie sie vortexen, bevor Sie 700 Mikroliter der Probe in eine Spin-Säule auf Siliziumdioxidmembranbasis in einem Zwei-Milliliter-Sammelröhrchen überführen. Nach einer kurzen Zentrifugation verwerfen Sie den Durchfluss und waschen Sie die Probe zweimal pro Waschgang mit 500 Mikrolitern Waschpuffer 2 in einer neuen Schleudersäule auf Basis von Kieselsäuremembranen, um alle Salzspuren zu entfernen. Nach dem zweiten Waschen zentrifugieren Sie die auf Kieselsäuremembranen basierende Spin-Säule erneut und überführen Sie die Säule nach dem Verwerfen des Durchflusses in ein neues 1,5-Milliliter-Sammelröhrchen. Geben Sie 25 Mikroliter RNase-freies Wasser in die Säule und inkubieren Sie die Probe fünf Minuten lang bei Raumtemperatur, bevor Sie die Probe erneut zentrifugieren. Übertragen Sie dann das 25 Mikroliter große microRNA-haltige Eluit in ein neues Mikrozentrifugenröhrchen. In dieser Studie wurden sieben microRNAs untersucht, die beim Menschen exprimiert wurden und in den Nieren von Mäusen mit akutem Nierenversagen hochreguliert waren. Es wurde festgestellt, dass die Spiegel von sechs der microRNAs in den Nieren von Mäusen mit Ischämie-Reperfusionsverletzung im Vergleich zu denen in Scheinmäusen signifikant erhöht waren, wobei quantitative Echtzeit-PCR gezeigt wurde. Der Harnstoffstickstoff- und Kreatininspiegel im Serumblut sowie die akute tubuläre Nekrose waren ebenfalls signifikant hochreguliert.Die Biomarker für die IRI-Diagnose und die spezifische Behandlung von AKI sind nach wie vor unklar. Ich hoffe, dass die microRNA-Forschung voranschreitet und zur Diagnose und Behandlung von AKI beiträgt.

a-quantitative-detection-method-for-micrornas-kidney-an-ischemic

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Dieser Artikel beschreibt ein in situ-Hybridisierungsprotokoll für die kolorimetrische Detektion der microRNA Expression in Formalin fixiert Nierenschnitten optimiert.

MicroRNA<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisierung für Formalin fixiert Nierengewebe

Das hier beschriebene Mausmodell der renalen Ischämie-Reperfusionsverletzung besteht aus einer rechten Nephrektomie, die Kontrollgewebe bereitstellt, und einer Klemmung des linken Nierenstiels, um eine Ischämie zu induzieren, die zu einem akuten Nierenversagen führt. Dieses Modell verwendet einen Mittellinien-Laparotomie-Ansatz, bei dem alle Schritte über einen Schnitt ausgeführt werden.

Renale Ischämie Reperfusionsschaden: Ein Maus-Modell der Schädigung und Regeneration

Dieses Protokoll beschreibt eine vollständige Niere Aufarbeitung, die in Mausmodellen der glomerulären Erkrankung durchgeführt werden soll. Die Methoden können für funktionelle, strukturelle und mechanistische Detailanalyse der glomerulären Funktion, die auf alle Maus-Modellen der glomerulären Erkrankung angewendet werden kann.

Beurteilung der Nierenfunktion in Mausmodellen der glomerulären Erkrankung

Wir beschreiben eine Methode zur Bewertung der microRNA-Expression in den Nieren von Mäusen mit einseitiger Harnleiterobstruktion (UUO) durch quantitative Reverse-Transkription-Polymerase-Kettenreaktion. Dieses Protokoll eignet sich zur Untersuchung von Nieren-MicroRNA-Expressionsprofilen bei Mäusen mit UUO und im Kontext anderer pathologischer Erkrankungen.

Quantitative Echtzeit-PCR-Bewertung von microRNA-Expressions in der Mausniere mit einseitiger ureteraler Obstruktion

microRNAs sind an der Pathogenese der IgA-Nephropathie beteiligt. Wir haben eine zuverlässige Methode zum Nachweis der microRNA-Expression in den Nieren eines IgA-Nephropathie-Mausmodells (HIGA-Mäuse) entwickelt. Diese neue Methode wird es erleichtern, die Beteiligung von miRNAs an der IgA-Nephropathie zu überprüfen.

Nachweis der MicroRNA-Expression in den Nieren von Immunglobulin A nephropathischen Mäusen

Wir stellen eine Methode zur Bewertung der microRNA-Expression in Niere und Serum von Mäusen mit altersabhängiger Nierenfunktionsstörung durch quantitative Reverse-Transkriptions-Polymerase-Kettenreaktion vor.

Quantitative Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktions-Bewertung der MicroRNA-Expression in Niere und Serum von Mäusen mit altersabhängiger Nierenfunktionsstörung

In dieser Arbeit bringen wir exogene künstlich synthetisierte miRNA-Nachahmungen in die Niere durch Schwanzveneninjektion eines nicht-viralen Vektors und Polyethylenimin-Nanopartikel in verschiedenen Mausmodellen für Nierenerkrankungen. Dies führte zu einer signifikanten Überexpression der Ziel-miRNA in der Niere, was in mehreren Mausmodellen zu einer Hemmung des Fortschreitens der Nierenerkrankung führte.

Abgabe von exogenen künstlich synthetisierten miRNA-Nachahmungen an die Niere unter Verwendung von Polyethylenimin-Nanopartikeln in verschiedenen Mausmodellen für Nierenerkrankungen

Dieser Artikel präsentiert ein ischämisches CKD-Modell unter Verwendung einer einseitigen nierenen IRI mit kontralateraler Nephrektomie, die einen Tag vor der Probenentnahme durchgeführt wird; dieses Protokoll ermöglicht eine serumbasierte funktionelle Beurteilung, ein hohes Überleben und reproduzierbare CKD-Pathologie nach 28 und 42 Tagen und bietet eine vielseitige Plattform für mechanistische und interventionelle Studien.

Mausmodell des Übergangs von akuter zu chronischer Nierenerkrankung, induziert durch Nierenischämie/Reperfusionsverletzung

Ein Laser-Speckle-Kontrastbildgebungssystem wurde verwendet, um die Veränderungen im renalen mikrovaskulären Blutfluss während einer einseitigen Nierischämie-Reperfusion nach der Resektion der rechten Niere bei Mäusen zu überwachen.

Mikrovaskuläre Perfusion überwacht durch Laser-Speckle-Kontrastbildgebung während der Nierenischämie-Reperfusionsverletzung bei Mäusen

Die Transplantation von isolierten Inseln wurde vorgeschlagen, eine potenzielle Behandlungsoption für Typ-1-Diabetes sein. Hier beschreiben wir eine Methode, um kleine Inseln aus Maus Bauchspeicheldrüsen zu isolieren und verpflanzen sie in die subkapsulären Raum der Niere.

Eine Methode zur Murine Islet Isolation und subkapsulären Nierentransplantation

Erfahren Sie eine quantitative Methode zur microRNA-Detektion in Nieren bei ischämischer Nierenschädigung im Mausmodell. Dieses Protokoll ermöglicht zuverlässige Biomarker-Analysen für akute Nierenverletzungen.

Eine quantitative Nachweismethode für microRNAs in der Niere eines Mausmodells mit ischämischer Nierenschädigung

Weitere Videos entdecken