Quantifizierung der zirkulierenden schweinespezifischen DNA im Blut eines Xenotransplantationsmodells

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22. September 2020

10.3791/61579-v

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Yangyang Deng^*¹^,² , Ming Zhou^*¹^,³ , Ying Lu¹ , Jiao Chen¹ , Zuhui Pu⁴ , Dongjing Yu¹^,⁵ , Yifan Dai⁶ , Yongqiang Zhan⁷ , Lisha Mou¹

¹Shenzhen Xenotransplantation Medical Engineering Research and Development Center, Institute of Translational Medicine, Shenzhen University Health Science Center, Shenzhen University School of Medicine, First Affiliated Hospital of Shenzhen University, Shenzhen Second People's Hospital, ²Xianning Hospital of Traditional Chinese Medicine, ³Liver-biotechnology (Shenzhen) Co., Ltd., ⁴Department of Radiology, Shenzhen University Health Science Center, Shenzhen University School of Medicine, First Affiliated Hospital of Shenzhen University, Shenzhen Second People's Hospital, ⁵Department of Life Sciences, University of Toronto, ⁶Jiangsu Key Laboratory of Xenotransplantation, Nanjing Medical University, ⁷Department of Hepatopancreatobiliary Surgery, Shenzhen University Health Science Center, Shenzhen University School of Medicine, First Affiliated Hospital of Shenzhen University, Shenzhen Second People's Hospital

^* These authors contributed equally

In diesem Protokoll wurden schweinespezifische Primer entwickelt, Plasmiden enthaltende Porenspezifische DNA-Fragmente konstruiert und Standardkurven für die Quantifizierung festgelegt. Anhand artspezifischer Primer wurde cpsDNA durch qPCR in Schweine-zu-Maus-Zelltransplantationsmodellen und Schweine-zu-Affen-Arterien-Patch-Transplantationsmodellen quantifiziert.

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Zirkulierende DNA

qPCR Quantifizierung

Blutprobenverarbeitung

Agarose Gelelektrophorese

Erstellung einer Standardkurve

speziesspezifische Primer

berwachung der immunologischen Absto ung

DNA Extraktionskit

Chapters in this video

0:04

Introduction

0:52

Isolating Genomic DNA

2:20

Verification of Primer Specificity

3:42

Standard Curve of cpsDNA

4:45

Quantitation of Circulating Pig-specific DNA

5:55

Results: PCR Validation of Porcine Specific Primers

6:51

Conclusion