Name: Ein neonatales Bildgebungsmodell der gramnegativen bakteriellen Sepsis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-08-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 46 s
Description: Erfahren Sie ein Bildgebungsprotokoll für neonatale Sepsis mit biolumineszentem E. coli zur Echtzeit-Visualisierung bakterieller Ausbreitung in Mäusen. Diese Methode ermöglicht präklinische Tests von Interventionen.

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Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offenzulegen.

Unser subskapulares Infektionsmodell zur Induktion von bakteriellen Sepsis bei neonatalen Mäusen ist eine neuartige Methode, um die Längsausbreitung bakterieller Krankheitserreger in Echtzeit zu untersuchen. Intravital-Bildgebung bietet die Möglichkeit, die bakterielle Verbreitung in Echtzeit in Neonaten zu erforschen. Dies ist entscheidend, um die Kinetik der bakteriellen Verbreitung zu verstehen und die Reaktion und den Schaden des Wirts in der entsprechenden Krankheitsphase weiter zu untersuchen. Mauswelpen wird eine ...

Bakterielle Sepsis ist ein wichtiges Anliegen für Neonate, die ein einzigartiges Immunprofil in den ersten Tagen des Lebens aufweisen, die keinen angemessenen Schutz vorInfektionenbieten 1 . Neonatale Sepsis ist nach wie vor ein erhebliches US-Gesundheitsproblem, das mehr als 75.000 Fälle pro Jahr allein in den USA ausmacht2. Um diese Infektionen eingehend zu untersuchen, sind neuartige Tiermodelle erforderlich, die Aspekte menschlicher Krankheiten rekapitulieren. Wir haben ein neonatales Mausinfektionsmodell mit Escherichia coli, O1:K1:H73. E. coli ist die zweithäufigste Ursache für neonatale Sepsis in den USA, ist aber für die Mehrheit der Sepsis-assoziierten Sterblichkeit4,5verantwortlich. Es ist jedoch die Hauptursache, wenn Vor- und sehr niedrige Geburtsgewicht (VLBW) Babys unabhängig betrachtet werden5. Der K1-Serotyp wird am häufigsten mit invasiven Blutkreislaufinfektionen und Meningitis bei Neonaten6,7in Verbindung gebracht. Derzeit gibt es keine anderen Behandlungsmöglichkeiten als Antibiotika und unterstützende Pflege. In der Zwischenzeit steigen die Antibiotikaresistenzraten für viele pathogene Bakterien weiter an, wobei einige Stämme von E. coli gegen eine Vielzahl von Antibiotika resistent sind, die häufig in der Behandlung verwendet werden8. Daher ist es unerlässlich, dass wir weiterhin Methoden generieren, um die Mechanismen der Sepsis und die Wirtsreaktion in Neonaten zu untersuchen. Diese Ergebnisse können dazu beitragen, aktuelle Behandlungen und Infektionsergebnisse zu verbessern.
Der Immunzustand von Neonaten ist sowohl durch phänotypische als auch funktionelle Unterschiede im Vergleich zu Erwachsenen gekennzeichnet. Zum Beispiel, erhöhte Konzentrationen von entzündungshemmenden und regulatorischen Zytokinen, wie Interleukin (IL)-10 und IL-27, haben gezeigt, dass durch Nabelschnurblut-abgeleitete Makrophagen produziert werden und sind in höheren Konzentrationen im Serum der murinen Neonate9,10,11. Dies stimmt mit niedrigeren IFN-α-, IFN-ɣ-, IL-12- und TNF-α überein, die häufig von neonatalen Zellen im Vergleich zu erwachsenen Pendants berichtet werden10. Darüber hinaus ist das neonatale Immunsystem in Richtung einer Th2 und regulatorischen T-Zell-Antwort im Vergleich zu Erwachsenen12verzerrt. Erhöhte Anzahl von Neutrophilen, T-Zellen, B-Zellen, NK-Zellen und Monozyten sind auch in Neonaten vorhanden, aber mit erheblichen funktionellen Beeinträchtigungen. Dazu gehören Defekte in der Expression von Zelloberflächenmarkern und Antigendarstellungen, die auf Unreife13,14,15hindeuten. Darüber hinaus sind neonatale Neutrophile signifikant mangelhaft in ihrer Fähigkeit, zu chemotaktischen Faktoren zu migrieren16. Myeloide-abgeleitete Suppressorzellen (MDSCs) sind auch auf erhöhten Niveaus in Neonaten gefunden und vor kurzem gezeigt, dass eine Quelle von IL-2711. MDSCs sind gegenüber T-Zellen17stark unterdrückend. Zusammen zeigen diese Daten Einschränkungen der neonatalen Immunität, die eine erhöhte Anfälligkeit für Infektionen verleihen.
Um das Fortschreiten der bakteriellen Belastung zu untersuchen und schützende Wirtsimmunreaktionen während einer neonatalen Sepsis zu sezieren, haben wir ein neuartiges Infektionsmodell entwickelt. Neonatale Mäuse an den Tagen 3-4 des Lebens sind schwierig, in den intraperitonealen Raum oder Schwanz Vene zu injizieren. In unserem Modell werden Tag 3 oder 4 Welpen das bakterielle inokulum oder PBS subkutan in den Skapulierbereich verabreicht. Eine systemische Infektion entwickelt sich und mit lumineszierenden E. coli O1:K1:H7 können wir einzelne neonatale Mäuse längs abbilden, um der verbreiteten bakteriellen Belastung in peripheren Geweben zu folgen. Dies ist das erste gemeldete Modell, um intravitale Bildgebung zu nutzen, um die Kinetik der Verbreitung von Bakterien während der Sepsis in murinen Neonaten zu verstehen3.
Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Induzieren septischer E. coli-Infektionen bei neonatalen Mäusen3. Wir beschreiben, wie man das bakterielle Inokulum für die Injektion vorbereitet und wie man Gewebe für die Beurteilung der Pathologie, die Messung von Entzündungsmarkern durch Genexpressionsanalyse und die Aufzählung der bakteriellen Belastung erntet. Darüber hinaus wird die Verwendung von lumineszierendem E. coli für die intravitale Bildgebung infizierter Neugeborenen und die Quantifizierung der bakteriellen Tötung durch neonatale Immunzellen beschrieben. Diese Protokolle können auch angepasst werden, um andere wichtige bakterielle Infektionen bei Neonaten zu untersuchen. Die hier vorgestellten Daten stellen einen neuartigen Gesamtansatz zum Verständnis der Infektionsdynamik in einem übersetzbaren neonatalen Sepsismodell dar.

<table><tbody><tr><td>1 ml Insulinspritze</td><td>Coviden</td><td>1188128012</td><td>Inokulum oder PBS</td></tr><tr><td>Injektion 10% neutrales gepuffertes Formalin</td><td>VWR</td><td>89370-094</td><td>Histopathologie</td></tr><tr><td>ACK Lysis Buffer</td><td>Gibco</td><td>LSA1049201</td><td>Bakterieller Clearance-Assay</td></tr><tr><td>Tier-Tattoo-Tinte Paste</td><td>Ketchum</td><td>KI1482039</td><td>Tierkennzeichnung</td></tr><tr><td>Tier-Tattoo-Tinte Grüne Paste</td><td>Ketchum</td><td>KI1471039</td><td>Tierkennzeichnung</td></tr><tr><td>Anti-Ly-6B.2 Mikrokügelchen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-100-781</td><td>Zellisolierung</td></tr><tr><td>Escherichia coli O1:K1:H7</td><td>ATCC</td><td>11775</td><td></td></tr><tr><td>Escherichia coli O1:K1:H7-lux (exprimiert Luciferase)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Eigens bei WVU konstruiert</td></tr><tr><td>E.Z.N.A. HP Total Extraction RNA Kit</td><td>Omega Bio-tek</td><td>R6812</td><td>RNA-Extraktion</td></tr><tr><td>DPBS, 1X</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Difco Tryptic Soja Agar</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>236950</td><td>Bakterielles Wachstum</td></tr><tr><td>IL-1 beta Primer/Sonde (Mm00434228)</td><td>Thermo Fisher</td><td>Scientific 4331182</td><td>Zytokinexpression qPCR</td></tr><tr><td>IL-6 Primer/Sonde (Mm00446190)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4331182</td><td>Zytokinexpression qPCR</td></tr><tr><td>iQ Supermix</td><td>Bio-Rad</td><td>1708860</td><td>quantitative Echtzeit-PCR</td></tr><tr><td>iScript cDNA-Synthesekit</td><td>Bio-Rad</td><td>1708891</td><td>cDNA-Synthese</td></tr><tr><td>Isolationspuffer</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N/A</td><td>Bakterieller Clearance-Assay</td></tr><tr><td>IVIS Spectrum CT und Living Image 4.5 Software</td><td>Perkin Elmer</td><td>N/A</td><td>Intravitale Bildgebung</td></tr><tr><td>LB Brühe, Lennox</td><td>Fisher BioReagents</td><td>BP1427-500</td><td>Bakterienwachstum</td></tr><tr><td>EASYstrainer (Nylon Basket)</td><td>Greiner Bio-one</td><td>542 040</td><td>Zellsieb</td></tr><tr><td>SpectraMax iD3</td><td>Molecular Devices</td><td>N/A</td><td>Plattenleser</td></tr><tr><td>Pellet Stößel Motor</td><td>Grainger</td><td>6HAZ6</td><td>Gewebehomogenisierung</td></tr><tr><td>Polypropylen Pellet Stößel</td><td>Grainger</td><td>6HAY5</td><td>Gewebehomogenisierung</td></tr><tr><td>Prime Thermal Cycler</td><td>Techne</td><td>3PRIMEBASE/02</td><td>cDNA-Synthese</td></tr><tr><td>TNF-alpha Primer/Sonde (Mm00443258)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4331182</td><td>Zytokinexpression qPCR</td></tr><tr><td>TriReagenz (GTCP)</td><td>Molekulares Forschungszentrum</td><td>TR 118</td><td>RNA-Extraktion</td></tr></tbody></table>

ein neonatales bildgebungsmodell der gramnegativen bakteriellen sepsis

A Neonatal Imaging Model of Gram-Negative Bacterial Sepsis

Neonate haben ein erhöhtes Risiko für bakterielle Sepsis aufgrund des einzigartigen Immunprofils, das sie in den ersten Lebensmonaten zeigen. Wir haben ein Protokoll zur Untersuchung der Pathogenese von E. coli O1:K1:H7, einem Serotyp, der für hohe Sterblichkeitsraten bei Neonaten verantwortlich ist, erstellt. Unsere Methode nutzt intravitale Bildgebung von neonatalen Welpen zu verschiedenen Zeitpunkten während des Fortschreitens der Infektion. Diese Bildgebung, parallel zur Messung von Bakterien im Blut, entzündliche Profilierung und Gewebehistopathologie, bedeutet einen strengen Ansatz zum Verständnis der Infektionsdynamik während der Sepsis. Im aktuellen Bericht modellieren wir zwei infektiöse Inokulaums zum Vergleich der bakteriellen Belastungen und der Schwere der Krankheit. Wir stellen fest, dass subscapulare Infektion führt zu einer disseminierten Infektion durch 10 h Post-Infektion. Bis 24 h war eine Infektion mit lumineszierendem E. coli im Blut, in der Lunge und anderen peripheren Geweben reichlich vorhanden. Die Expression von entzündlichen Zytokinen in der Lunge ist bei 24 h signifikant, gefolgt von einer zellulären Infiltration und Hinweisen auf Gewebeschäden, die mit der infektiösen Dosis zunehmen. Intravital-Bildgebung hat einige Einschränkungen. Dazu gehören eine leuchtende Signalschwelle und einige Komplikationen, die bei Neonaten während der Anästhesie auftreten können. Trotz einiger Einschränkungen stellen wir fest, dass unser Infektionsmodell einen Einblick bietet, um die Dynamik der Längsinfektion bei neonataler muriner Sepsis zu verstehen, die bis heute nicht gründlich untersucht wurde. Wir erwarten, dass dieses Modell auch angepasst werden kann, um andere kritische bakterielle Infektionen im frühen Leben zu untersuchen.

Dieses Protokoll induzierte bakterielle Sepsis bei neonatalen Mäusen, und wir verwendeten Längsinalintravital-Bildgebung, Aufzählung von Bakterien im Blut, histologische Bewertungen der Pathologie und entzündliche Zytokin-Expressionsprofile, um den Krankheitsverlauf zu untersuchen. Anzeichen einer Morbidität wurden bei neonatalen Welpen beobachtet, die sowohl mit niedrigen (2 x 106 KBE) als auch mit hohen E.coli-Inokulumen (ca. 7 x 106 KBE) infiziert waren. Welpen, die das größere Inokulum...

Die Infektion von neonatalen Mäusen mit biolumineszierendem E. coli O1:K1:H7 führt zu einer septischen Infektion mit signifikanter Lungenentzündung und Lungenpathologie. Hier beschreiben wir Verfahren zur Modellierung und weiteren Untersuchung der neonatalen Sepsis unter Verwendung von längsinaler intravitaler Bildgebung parallel zur Aufzählung systemischer bakterieller Belastungen, entzündlicher Profilierung und Lungenhistopathologie.

Ein neonatales Bildgebungsmodell der gramnegativen bakteriellen Sepsis

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a ...

Unser Protokoll ermöglicht die bakterielle Verbreitung und Lastverfolgung in einem experimentellen neonatalen Sepsismodell in Echtzeit und die Fähigkeit, andere Krankheitsmarker mit der Krankheitserregung zu korrelieren. Dieses Protokoll ermöglicht es uns, Sepsis bei einzelnen neonatalen Mäusen längs zu analysieren und die Möglichkeit zu bieten, Infektionsdynamik und bakterielle Verbreitung in Echtzeit zu beobachten und zu vergleichen. Mit dieser Methode können präklinische Tests von Eingriffen auf neonatale Sepsis durchgeführt werden, die die Überwachung der Auswirkungen der Wirtskontrolle der Bakterien ermöglichen.Beginnen Sie damit, altersgerechte Welpen in entweder hoch- oder niedrig dosierte Wurfgruppen innerhalb eines Schranks der Biosicherheitsstufe zwei zu platzieren. Zeichnen Sie am postnatalen Tag drei oder vier die Gewichte aller Welpen vor der Impfung auf. Insulinspritzen mit PBS oder dem hoch- oder niedrig dosierten E.coli lux Inoculum in den Biosicherheitsschrank laden und die geladenen Spritzen auf Eis legen.Legen Sie das Neugeborene auf eine saubere Oberfläche innerhalb des Biosicherheitsschranks und heben Sie die Haut am Nacken, als ob sie den Welpen zerschwirre. Legen Sie die Nadel ab schräg unter der Haut in den Raum zwischen der Haut und dem Muskel erstellt. Wenn die Nadel unter der Haut gefühlt werden kann, injizieren Sie 50 Mikroliter des Inokants und geben Sie gleichzeitig den eingeklemmten Teil der Haut frei, um einen Rückfluss zu verhindern, und entfernen Sie die Nadel dann langsam und mit Sorgfalt.Wenn alle Welpen auf die gleiche Weise injiziert wurden, kehren Sie die Welpen zu ihren Dämmen zurück. Unmittelbar nach der Injektion und zu den entsprechenden Versuchszeitpunkten danach den Käfig mit E.coli lux infizierten Neonatalen Mäusen und Damm in eine Biosicherheitsstufe zwei laminare Strömungshaube legen und die Software im Mikro-CT-Computer öffnen. Nachdem Sie das System initialisiert und darauf gewartet haben, dass die Bühnentemperatur bei 37 Grad Celsius und die CCD-Temperatur bei minus 90 Grad Celsius verriegelt wird, legen Sie bis zu vier anästhesierte Welpen in der Bildgebungsbox in der anfälligen Position auf die Bildbox.Schließen Sie die Bildkammertür und wählen Sie die Lumineszenz-Bildgebungsoption. Wählen Sie den öffnenden Filter und als nächstes aus, und stellen Sie den zu blockierenden Anregungsfilter und den zu öffnenden Emissionsfilter ein. Wählen Sie 500, 520, 560, 580, 600 und 620 Nanometer.Dann stellen Sie die Welpen vor der Rückkehr in den Käfig mit dem Damm mit Überwachung bis zur Anästhesie Erholung. Am entsprechenden experimentellen Endpunkt, in einem Biosicherheitsschrank, das eingeschläferte Neugeborene mit 70% Ethanol dosieren, um eine Kontamination zu verhindern und das Tier auf die rechte Seite zu stellen. Verwenden Sie Zangen, um die Haut zwischen dem Bauch und dem hinteren linken Bein zu erfassen und verwenden Sie eine chirurgische Schere mit feiner Spitze, um einen Hautschnitt zu machen.Dann weiter Einschnitt in Richtung des Rückens des Tieres, bis die gesamte Milz ausgesetzt ist. Verwenden Sie die Zange und die Schere, um die Milz aus dem Bauch zu entfernen und legen Sie sie in die Lösung, die für ihre nachgeschaltete Anwendung geeignet ist. Um die Lunge zu erhalten, schälen Sie die Haut der Brust vollständig und treten sie an der Basis des Brustbeins mit der Schere vertikal gehalten, nach oben schneiden, bis der Rippenkäfig gespalten ist.Verwenden Sie Zangen, um die rechte und linke Lunge einzeln zu erfassen und die Lunge aus der Brusthöhle zu entfernen. Entfernen Sie das Herz mit einer Schere aus dem Lungengewebe. Dann legen Sie die Lunge in die Lösung, die für ihre nachgelagerte Anwendung geeignet ist.Um einen in vitro bakteriellen Tötungstest durchzuführen, legen Sie die nicht infizierte Milz in ein 40 Mikrometer Nylonsieb innerhalb einer sterilen 60-Millimeter-Petrischale mit fünf Milliliterpbs, ergänzt mit 10%fetalem Rinderserum, und verwenden Sie einen sterilen Drei-Milliliter-Spritzenkolben, um das Gewebe zu einer einzelzelligen Suspension zu zerlegen. Übertragen Sie die Zellen in ein 15 Milliliter Zentrifugenrohr und sammeln Sie sie durch Zentrifugation. Setzen Sie das Pellet in einem Milliliter roter Blutzelllysepuffer pro drei bis vier Milz aus.Nach fünf Minuten bei Raumtemperatur die Milz in PBS waschen und das Pellet in 250 Mikroliter PBS, ergänzt mit Rinderserumalbumin und zwei Millimolaren EDTA, zum Zählen wieder aufhängen. Als nächstes isolieren Sie die Ly6 B2-positiven Zellen mit den entsprechenden immunmagnetischen Perlen nach Herstellerprotokoll und säen die angereicherten Ly6 B2-positiven Zellen mit einem mal 10 zu den fünf Zellen pro 100 Mikroliter komplettem Medium pro Brunnendichte in einer schwarzen oder weißen 96-Well-Platte. Bereiten Sie das bakterielle Inokulum bei der gewünschten Vielzahl der Infektion in einem Endvolumen von 100 Mikrolitern pro Brunnen vor und fügen Sie 100 Mikroliter bakterielles Inokulum oder Medium allein zu jedem Brunnen für eine einstündige Inkubation im Zellkultur-Inkubator hinzu.Ersetzen Sie am Ende der Inkubation das Medium durch 200 Mikroliter frisches komplettes Medium, ergänzt durch 100 Mikrogramm pro Milliliter Gentamycin, um die verbleibenden extrazellulären Bakterien zu entfernen und die Zellen für weitere zwei Stunden an den Zellkultur-Inkubator zurückzugeben. Am Ende der Inkubation und zu jedem versuchsweise Zeitpunkt danach verwenden Sie einen Plattenleser, um die Lumineszenz in jedem Brunnen der Deckelkulturplatte zu messen, bevor Sie die Platte bis zur nächsten Lesung an den Zellkultur-Inkubator zurückgeben. Während die meisten Tiere zeigen hohe Konzentrationen von Bakterien im Blut bei 24 Stunden nach der Infektion, einige Welpen haben niedrige oder nicht nachweisbare Bakterien im Blut, was darauf hindeutet, dass die Infektion zu diesem Zeitpunkt frei.Darüber hinaus drückten neonatale Ly6 B2-positive Milzzellen, die eine Stunde vor der Entfernung extrazellulärer Bakterien und der anschließenden Gentamycin-Behandlung mit biolumineszierenden E.coli infiziert waren, eine hohe Lumineszenz nach drei Stunden aus, die im Laufe der Zeit abnimmt und auf eine bakterielle Clearance hindeutet. Die Live-Tierbildgebung der leuchtmbischen Bakterien bestätigt die Zunahme der Verbreitung und des Wachstums von Bakterien bei neugeborenen Welpen im Laufe der Zeit nach 10 und 24 Stunden nach der Infektion. Intravitale Bildgebung in Verbindung mit Mikro-CT erleichtert die Identifizierung von Infektionsherden im Gehirn, in der Lunge und anderen peripheren Geweben.Die Lunge einiger hochinfizierter Mäuse zeigt undurchsichtige Regionen, die mit der entzündlichen Konsolidierung übereinstimmen, die zu leuchtenden bakteriellen Signalen kolokalisiert ist. Diese Regionen mit vermutetem entzündlichem Exuldate werden in nicht infizierten Kontrolllungen nicht beobachtet. Eine signifikante Zunahme der entzündlichen Zytokinexpression im Vergleich zu Kontrollen wird auch bei niedrigen und hohen Inokulumgruppen beobachtet, die mit einer bemerkenswerten Verdickung der Alveolarwand, vermehrten Alveolarblutungen und entzündlicher Infiltration bei diesen Tieren korrelieren.Die wichtigsten Dinge zu erinnern sind, die richtige Technik bei der Durchführung der Injektionen auszuführen und bei der Verabreichung der Anästhesie strikt auf die Neonate zu achten. Mit dieser Technik können wir neonatale Sepsis in Echtzeit visualisieren, um Interventionen zu studieren und gezielte Therapien zu hosten, die auf die Verbesserung der Immunantwort abzielen.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Quelle: Seman, B. G., et.al. Neonatales Bildgebungsmodell der gramnegativen bakteriellen Sepsis. J. Vis. Exp. (2020)Dieses Video demonstriert die Isolierung von Neutrophilen und entzündlichen Monozyten aus neonatalen Mausmilzen und deren Anwendung in einem leuchtenden bakteriellen Tötungsassay. Es behandelt mechanische Dissoziation, rote Blutkörperchenlyse, magnetische perlenbasierte Zellanreicherung, bakterielle Inkubation und Antibiotikaschutz. Zeitgesteuerte Lumineszenzmessungen zeigen eine...

In-vitro-Untersuchung der bakteriellen Tötung durch neonatale Maus-Milzphagozyten

Quelle: Seman, B. G. et al. Ein neonatales Bildgebungsmodell der gramnegativen bakteriellen Sepsis. J. Vis. Exp. (2020)Das Video demonstriert ein neonatales Mausmodell zur Untersuchung systemischer Infektionen mit gekapselten biolumineszenten Bakterien. Neugeborene Welpen werden mit hoch- oder niedrigdosierten bakteriellen Suspensionen injiziert und zur Nachsorge zu ihrer Mutter zurückgegeben. Die gekapselten Bakterien entgehen der frühen Immundetektion, breiten sich systemisch aus und werden...

Modellierung von Infektionen bei neonatalen Mäusen mit gekapselten biolumineszenten Bakterien

Hier wird ein Verfahren für die Festlegung der systemischen Infektion in der neonatalen Ratten mit Kulturen von Escherichia coli K1 beschrieben. Diese nichtinvasive Vorgehensweise erlaubt Besiedlung des Magen-Darm-Trakt, die Translokation des Erregers in den systemischen Kreislauf, und das Eindringen des zentralen Nervensystems in den Plexus choroideus.

Nichtinvasive Modell Neuropathogenic Escherichia coli Infektion in der neonatalen Ratten

Hypoxisch-ischämische Enzephalopathie nach perinataler Asphyxie kann mit Tiermodellen untersucht werden. Wir demonstrieren die Verfahren, die zur Etablierung eines Ferkelmodells der neonatalen hypoxisch-ischämischen Enzephalopathie erforderlich sind.

Ein Ferkel Modell Neonatal hypoxischischämischer Enzephalopathie

Die Frühgeborenen-Enzephalopathie umfasst die Anomalien des Zentralnervensystems, die mit Verletzungen durch Frühgeburten verbunden sind. Dieser Bericht beschreibt ein klinisch relevantes Rattenmodell der in utero transienten systemischen Hypoxie-Ischämie und der intraamniotischen Lipopolysaccharid-Verabreichung (LPS), das die Chorioamnionitis nachahmt, und den damit verbundenen Einfluss von infektiösen Reizen und Plazenta-Unterperfusion auf die ZNS-Entwicklung.

Modellierung Enzephalopathie praematurorum Mit Prenatal Hypoxie-Ischämie mit Intra-Frucht Lipopolysaccharide bei Ratten

Dieses Protokoll bietet die notwendigen Schritte zu etablieren und neonatale Sepsis bei 7 Tage alten Mäusen zu bewerten.

Eine kontrollierte Mausmodell für neonatale Sepsis Biofilm

Wir entwickelten ein Modell der Chorioamnionitis, um die fetale Exposition gegenüber mütterlichen Entzündungen (FEMI) ohne Komplikationen lebender Organismen zu simulieren, um die Auswirkungen von FEMI auf die Entwicklung des Darmtraktes der Nachkommen zu untersuchen. Dies ermöglicht die Untersuchung der mechanistischen Ursachen für die Entwicklung von Darmverletzungen nach Chorioamnionitis.

Ein murines Modell der fetalen Exposition gegenüber mütterlicher Entzündung, um die Auswirkungen der akuten Chorioamnionitis auf die Darmentwicklung von Neugeborenen zu untersuchen

Dieses Protokoll beschreibt ein in vitro Modell der nekrotisierenden Enterokolitis (NEC), das für mechanistische Studien zur Krankheitspathogenese verwendet werden kann. Es verfügt über einen mikrofluidischen Chip, der mit Darmenteroiden besät ist, die aus dem menschlichen Neugeborenendarm, Endothelzellen und dem Darmmikrobiom eines Neugeborenen mit schwerem NEC stammen.

Mikrofluidisches Modell der nekrotisierenden Enterokolitis unter Einbeziehung menschlicher neonataler Darmenteroide und eines dysbiotischen Mikrobioms

Frühgeburten (Entbindung &lt; 37. Woche) sind ein dringendes globales Gesundheitsproblem mit suboptimalen Präventions- und Behandlungsmöglichkeiten. Wir stellen ein Mausmodell der aufsteigenden vaginalen bakteriellen Infektion induzierten Frühgeburt vor und skizzieren, wie die daraus resultierende neonatale Morbidität und Mortalität analysiert werden kann.

Modellierung von aufsteigenden vaginalen Infektionen, Frühgeburten und neonataler Morbidität bei Mäusen

Dieses Protokoll skizziert ein neonatales Mausmodell der nekrotisierenden Enterokolitis (NEC) und die anschließende Isolierung von Immunzellen der Lamina propria aus dem neonatalen Dünndarm der Maus.

Ein neonatales Mausmodell der nekrotisierenden Enterokolitis und der Isolierung von Lamina propria für die Erstellung von Immunzellprofilen

Erfahren Sie ein Bildgebungsprotokoll für neonatale Sepsis mit biolumineszentem E. coli zur Echtzeit-Visualisierung bakterieller Ausbreitung in Mäusen. Diese Methode ermöglicht präklinische Tests von Interventionen.

Ein neonatales Bildgebungsmodell der gramnegativen bakteriellen Sepsis

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