Name: Alternatives Eintauchen in Glukose, um eine verlängerte Hyperglykämie bei Zebrafischen zu erzeugen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-05-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 49 s
Description: Erfahren Sie, wie Sie mit einem nicht-invasiven Protokoll verlängerte Hyperglykämie bei Zebrafischen induzieren. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung diabetischer Komplikationen und retinaler Veränderungen über vier bis acht Wochen.

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Wir möchten VPC, CJR und MCP für die Entwicklung dieses Protokolls danken. EMM erhielt finanzielle Unterstützung vom American University College of Arts and Sciences Graduate Student Support, um diese Forschung durchzuführen. Diese Arbeit wurde auch durch einen Mellon Award der American University Faculty und eine Finanzierung durch das American University College of Arts and Sciences (beide an VPC) unterstützt.

Alle Verfahren wurden vom Institutional Animal Care and Use Committee der American University genehmigt.
1. Vorbereitung der Lösungstanks
<ol><li>Erhalten Sie sechs Tanks, zwei für jede experimentelle Gruppe (Glukose, Mannit und Wasser). Kennzeichnen Sie einen der beiden Tanks als "Gehäusetank" (er wird den Fisch beherbergen) und beschriften Sie den anderen "Lösungstank" (er enthält die Lösung). HINWEIS: Die Mannitol-Behandlungsgruppe ist die osmotische Kontrolle, und die Wasseraufbereitungsgruppe ist eine Handhabungs- / Stresskontrolle. Es ist wichtig, die Tanks, Fluggesellschaften / Luftsteine, Deckel und Reinigungsmittel für jede Behandlungsgruppe getrennt zu halten</li>
	<li>Verwenden Sie einen 2-L-Tank, wenn die Gesamtzahl der verwendeten Fische weniger als 20 beträgt. Verwenden Sie einen 4-L-Tank, wenn die Gesamtzahl der verwendeten Fische mehr als 20 beträgt. HINWEIS: Verwenden Sie ein N von 5-10 pro Behandlungsgruppe und Probenahmezeitpunkt.</li>
	<li>Halten Sie die Tanks in einem Wasserbad bei 28-29 °C, um die Wassertemperatur zu halten.</li>
	<li>An Tag 1 legen Sie die Fische für 24 Stunden in ihre jeweiligen Behandlungslösungen (Glukose, Mannit, Wasser) ("Water to Treatment"). An Tag 2 die Fische für 24 Stunden von ihren Behandlungslösungen ins Wasser überführen ("Treatment to Water"). Am Tag 3 den Fisch vom Wasser zu Behandlungslösungen ("Water to Treatment") überführen. Diese alternierende Exposition setzt sich für den Rest des Experiments fort (Abbildung 1). Übertragen Sie wasserbehandelte Kontrollfische täglich von Wasser zu Wasser.</li>
	<li>Stellen Sie sicher, dass die Fische während der gesamten Dauer des Experiments jeden Tag innerhalb desselben 2-Stunden-Fensters gefüttert und übertragen werden.</li>
</ol>2. Zubereitung des Fisches
<ol><li>Verwenden Sie erwachsene Zebrafische (4 Monate – 1 Jahr)5.</li>
	<li>Füttern Sie die fischgemahlenen Tetraminflocken täglich bei der Ankunft im Labor.</li>
	<li>Notieren Sie den pH-Wert und die Temperatur aller Becken und zeichnen Sie den Allgemeinzustand der Fische auf.</li>
</ol>3. Übertragen von Fischen
<ol><li>Übertragen Sie Fische in jeder Behandlungsgruppe mit einem Standardfischnetz aus dem Haltungsbecken in das entsprechende Lösungsbecken.</li>
	<li>Stellen Sie den Tank mit dem Fisch wieder in das Wasserbad, ersetzen Sie den Luftstein und den Tankdeckel. Dieser Tank ist jetzt der "Wohntank" und der Tank, in dem sich der Fisch zuvor befand, ist jetzt der "Lösungstank".</li>
	<li>Entsorgen Sie die alte Lösung und reinigen Sie den Tank zusammen mit den Tankdeckeln, Fluggesellschaften, Luftsteinen und Netzen, um die Ansammlung von Glukose und Mannit zu verhindern. HINWEIS: Waschen Sie Gegenstände nicht mit Seife. Verwenden Sie Wasser und eine spezielle Peelingbürste / Schwamm für jede Behandlungsbedingung, um die Tanks richtig zu reinigen.</li>
	<li>Trocknen Sie die neu gereinigten "Lösungstanks" mit einem Papiertuch. Bereiten Sie die Lösungen für den nächsten Tag mit diesem Tank vor. Stellen Sie sicher, dass die anderen Gegenstände getrocknet und durch geeignete Behandlungsgruppen getrennt sind. HINWEIS: Führen Sie ein Protokoll darüber, aus welchen Lösungen die Fische jeden Tag transferiert werden, sowie die Lösungen, die für den nächsten Tag vorbereitet werden. Zum Beispiel: Fisch von Glukose aufH2O übertragen, neue 1% ige Glukoselösung, die für morgen vorbereitet ist.</li>
</ol>4. Vorbereitung der Lösung nach dem Transfer
<ol><li>Herstellung von Zuckerlösungen<ol>
<li>Füllen Sie jeden Lösungstank mit 2 L (oder 4 L) Systemwasser (Systemwasser ist definiert als Wasser, das mit dem richtigen Verhältnis von Salzlösung behandelt wurde und die gleiche Temperatur wie Lager- und Behandlungstanks hat).</li>
		<li>Messen Sie die richtige Menge an Glukose und Mannit (siehe Schritt 5 unten) mit einer Top-Ladewaage und separaten Wiegebooten für jede Chemikalie.</li>
		<li>Geben Sie die gewogene Glukose oder Mannitol aliquot in den entsprechenden, gereinigten Lösungstank, der nur Systemwasser enthält.</li>
		<li>Rühren Sie die Glukose- und Mannitollösungen mit separaten Glasrührstäben um, bis die Zucker vollständig aufgelöst sind.</li>
		<li>Die Lösungstanks werden in das Wasserbad zurückgelegen und mit den entsprechenden Deckeln abgedeckt.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Vorbereitung von Wasserlösungen<ol>
<li>Füllen Sie Versuchstanks (2 L oder 4 L) mit Systemwasser.</li>
		<li>Bringen Sie diese "Lösungstanks" in das Wasserbad zurück und bedecken Sie sie mit den entsprechenden Deckeln.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Prozentsätze ändern
<ol><li>Halten Sie den Fisch in einer 1% igen Lösung während der ersten 2 Wochen der Behandlung: 40 g Glukose oder Mannit in einem 4 L Tank.</li>
	<li>Halten Sie den Fisch in einer 2% igen Lösung während der Wochen 3 und 4 der Behandlung: 80 g Glukose oder Mannit in einem 4 L Tank.</li>
	<li>Halten Sie den Fisch in einer 3% igen Lösung für die letzten 4 Wochen der Behandlung: 120 g Glukose oder Mannit in einem 4 L Tank.</li>
</ol>6. Blutzuckerspiegel messen und Gewebe sammeln
<ol><li>Betäuben Sie Fische 2 auf einmal in einer 0,02% igen Tricainlösung.</li>
	<li>Enthaupten Sie den Fisch direkt hinter den Kiemen mit einer Rasierklinge.</li>
	<li>Blutzuckerwert messen. HINWEIS: Wir verwenden ein Blutzuckermessgerät (z.B. Freestyle Lite) zur Blutzuckermessung und legen den Teststreifen direkt auf das exponierte Herz (Herzblutprobe).</li>
	<li>Sezieren Sie das gewünschte Gewebe aus dem Fisch (Gehirn, Muskel usw.).</li>
	<li>Lagern Sie gesammeltes Gewebe durch Schockgefrieren auf Trockeneis und Lagern in einem -80 °C-Gefrierschrank, fixieren Sie es in 4% Paraformaldehyd oder legen Sie es zur sofortigen Verwendung in eine Pufferlösung.</li>
</ol>

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<li>Capiotti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+impaired+glucose+metabolism+in+a+zebrafish+hyperglycemia+model%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Biochemistry+and+Physiology+Part+B%3A+Biochemistry+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Persistent impaired glucose metabolism in a zebrafish hyperglycemia model.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology. 171, 58-65 (2014).</li>
<li>Capiotti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperglycemia+alters+E-NTPDases%2C+ecto-5%27-nucleotidase%2C+and+ectosolic+and+cytosolic+adenosine+deaminase+activities+and+expression+from+encephala+of+adult+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Purinergic+Signaling%22%5BJournal%5D)">Hyperglycemia alters E-NTPDases, ecto-5'-nucleotidase, and ectosolic and cytosolic adenosine deaminase activities and expression from encephala of adult zebrafish (Danio rerio).</a> Purinergic Signaling. 12 (2), 211-220 (2016).</li>
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</ol>

Die Autoren erklären keine Interessenkonflikte.

Diabetes ist ein bundesweites Problem. Studien zeigen, dass bis 2030 schätzungsweise 400 Millionen Menschen irgendeine Form von Diabetes haben werden. In Nagetiermodellen wird Typ 2 DM mittels genetischer Manipulation untersucht. Bei Ratten liefern die Zucker diabetischen Fettratten (ZDF) und die Otsuka Long-Evans Tokushima Fettratten (OLETF) weitere Informationen über die Wirkung von Typ 2 DM10. Darüber hinaus wurden fettreiche Diäten bei Nagetieren verwendet, um Hyperglykämie zu induzieren. Dies...

Zebrafische (Danio rerio) werden schnell zu einem weit verbreiteten Tiermodell, um sowohl Krankheiten als auch Kognition zu untersuchen1. Die Leichtigkeit der genetischen Manipulation und die embryonale Transparenz durch die frühen Entwicklungsstadien machen sie zu einem erstklassigen Kandidaten, um menschliche Krankheiten mit einer bekannten genetischen Grundlage zu untersuchen. Zum Beispiel wurden Zebrafische verwendet, um Holt-Oram-Syndrom, Kardiomyopathien, glomerulozystische Nierenerkrankungen, Muskeldystrophie und Diabetes mellitus (DM) unter anderenKrankheiten zuuntersuchen 1 . Darüber hinaus ist das Zebrafischmodell aufgrund der geringen Größe der Art, der Wartungsfreundlichkeit und der hohen Fruchtbarkeit2,3ideal.
Die Zebrafisch-Bauchspeicheldrüse ist sowohl anatomisch als auch funktionell der Säugetier-Bauchspeicheldrüse ähnlich4. So machen die einzigartigen Eigenschaften von Größe, hoher Fruchtbarkeit und ähnlichen endokrinen Strukturen Zebrafische zu einem geeigneten Kandidaten für die Untersuchung von DM-bedingten Komplikationen. Beim Zebrafisch gibt es zwei experimentelle Methoden, um die für DM charakteristische verlängerte Hyperglykämie zu induzieren: einen Zustrom von Glukose (Modellierung Typ 2) und die Beendigung der Insulinsekretion (Modellierung Typ 1)5,6. Um die Insulinsekretion zu stoppen, können Pankreas- β-Zellen experimentell entweder mit Streptozotocin (STZ) oder Alloxan-Injektionen chemisch zerstört werden. STZ wurde erfolgreich bei Nagetieren und Zebrafischen eingesetzt, was zu Komplikationen im Zusammenhang mit Retinopathie7,8,9, kognitivenBeeinträchtigungen10und Gliedmaßenregeneration11führte . Bei Zebrafischen regenerieren sich jedoch β-Zellen nach der Behandlung, was dazu führt, dass "Booster-Injektionen" von STZ notwendig sind, um diabetischeErkrankungen aufrechtzuerhalten 12. Alternativ kann die Bauchspeicheldrüse des Zebrafisches entfernt werden6. Dies sind sowohl hochinvasive Verfahren, aufgrund der mehrfachen Injektionen, als auch eine lange Erholungszeit.
Umgekehrt kann Hyperglykämie nichtinvasiv durch Exposition gegenüber exogener Glukose induziert werden. In diesem Protokoll werden Fische für 24 Stunden5,13 oder kontinuierlich für 2 Wochen 14,15, 16in eine hochkonzentrierte Glukoselösung getaunken. Exogene Glukose wird transdermal, durch Einnahme und/ oder über die Kiemen aufgenommen, was zu erhöhten Blutzuckerspiegeln führt. Da diese nicht-invasive Technik den Insulinspiegel nicht direkt manipuliert, kann sie nicht behaupten, Typ-2-DM zu induzieren. Es kann jedoch verwendet werden, um Komplikationen zu untersuchen, die durch Hyperglykämie induziert werden, die eines der Hauptsymptome von Typ 2 DM ist.
Vor kurzem wurde die Zebrafischmutante pdx1-/- durch Manipulation des Pankreas- und Zwölffingerdarm-Homöobox-1-Gens entwickelt, einem Gen, das mit der genetischen Ursache von Typ 2 DM beim Menschen verbunden ist. Mit dieser Mutante konnten Forscher Pankreasentwicklungsstörungen, hohen Blutzucker replizieren und Hyperglykämie-induzierte diabetische Retinopathieuntersuchen 17,18.
In diesem Artikel beschreiben wir eine nichtinvasive Hyperglykämie-Induktionsmethode, die ein alternierendes Immersionsprotokoll verwendet. Dieses Protokoll hält hyperglykämische Zustände für bis zu 8 Wochen aufrecht, wobei nachfolgende Komplikationen beobachtet werden. Kurz gesagt, erwachsene Zebrafische werden für 24 Stunden in eine Zuckerlösung und dann für 24 Stunden in eine Wasserlösung gelegt. Im Gegensatz zum kontinuierlichen Eintauchen in externe Glukoselösungen ahmt der Wechsel zwischen Zucker und Wasser den Anstieg und Abfall des Blutzuckers bei Diabetes nach. Ein alternierendes Glukoseprotokoll ermöglicht es zusätzlich, Hyperglykämie über längere Zeiträume zu induzieren, da die Zebrafische die hohen äußeren Glukosebedingungen nicht so gut kompensieren können. Als Beweis für das Prinzip liefern wir Daten, die zeigen, dass Hyperglykämie, die mit diesem Protokoll induziert wird, die Netzhautchemie und -physiologie verändert.

<table><tbody><tr><td>Airline Tubing</td><td>petsmart</td><td>5291863</td><td>Dies kann im Tank verwendet werden, um Luft zu zirkulieren</td></tr><tr><td>Luftpumpe</td><td>petsmart</td><td>5094984</td><td>Dies kann im Tank verwendet werden, um Luft zu zirkulieren</td></tr><tr><td>Airstones</td><td>petsmart</td><td>5149683</td><td>Dies kann im Tank verwendet werden, um Luft zu zirkulieren</td></tr><tr><td>D-Glukose</td><td>Sigma</td><td>G8270-5KG</td><td></td></tr><tr><td>D-Mannitol</td><td>Acros Organics</td><td></td><td></td>AC125340050</tr><tr><td>Freestyle Lite Meter</td><td>Amazon</td><td>B01LMOMLTU</td><td></td></tr><tr><td>Freestyle Lite Strips</td><td>Amazon</td><td>B074ZN3H2Z</td><td></td></tr><tr><td>Net</td><td>Petsmart</td><td>5175115</td><td></td></tr><tr><td>Tanks</td><td>Amazon</td><td>B0002APZO4</td><td></td></tr></tbody></table>

alternatives eintauchen in glukose, um eine verlängerte hyperglykämie bei zebrafischen zu erzeugen

Alternate Immersion in Glucose to Produce Prolonged Hyperglycemia in Zebrafish

Zebrafische (Danio rerio) sind ein hervorragendes Modell, um die Auswirkungen der chronischen Hyperglykämie, einem Kennzeichen des Typ-II-Diabetes Mellitus (T2DM), zu untersuchen. Dieses alternative Immersionsprotokoll ist eine nichtinvasive, schrittweise Methode zur Induktion von Hyperglykämie für bis zu acht Wochen. Erwachsene Zebrafische werden abwechselnd 24 Stunden lang Zucker (Glukose) und Wasser ausgesetzt. Der Zebrafisch beginnt die Behandlung in einer 1% igen Glukoselösung für 2 Wochen, dann einer 2% igen Lösung für 2 Wochen und schließlich einer 3% igen Lösung für die restlichen 4 Wochen. Im Vergleich zu wasserbehandelten (Stress) und mannitolbehandelten (osmotischen) Kontrollen haben glukosebehandelte Zebrafische signifikant höhere Blutzuckerspiegel. Die mit Glukose behandelten Zebrafische zeigen blutzuckerwerte, die 3-mal so hoch sind wie die der Kontrollen, was darauf hindeutet, dass nach vier und acht Wochen hyperglykämie erreicht werden kann. Anhaltende Hyperglykämie war mit einem erhöhten Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) und einem erhöhten Kernfaktor Kappa B (NF-kB) in der Netzhaut und verminderten physiologischen Reaktionen sowie kognitiven Defiziten verbunden, die darauf hindeuten, dass dieses Protokoll zur Modellierung von Krankheitskomplikationen verwendet werden kann.

Unter Verwendung dieses Protokolls (Abbildung 1) sind die Blutzuckerwerte sowohl nach 4- als auch nach 8-wöchiger Behandlung signifikant erhöht (Abbildung 2A), wobei hyperglykämie als 3x der Kontrollmittelwerte sowohl von wasserbehandelten als auch von Mannitol-behandelten Gruppen definiert ist. Wasserbehandelte Steuerungen werden täglich in und aus dem Wasser übertragen, um eine Stress- / Handhabungskontrolle zu bieten. Mannitol dient als osmotische Kontrolle i...

Dieses Protokoll induziert nichtinvasiv Hyperglykämie bei Zebrafischen für bis zu 8 Wochen. Mit diesem Protokoll kann eine eingehende Untersuchung der nebenwirkungen von Hyperglykämie durchgeführt werden.

Alternatives Eintauchen in Glukose, um eine verlängerte Hyperglykämie bei Zebrafischen zu erzeugen

Zebrafish (Danio rerio) are an excellent model to investigate the effects of chronic hyperglycemia, a hallmark of Type II Diabetes Mellitus (T2DM). This ...

Dieses Protokoll induziert Hyperglykämie bei Zebrafischen in einem Anstiegs- und Fallmuster, das die Hyperglykämie nachahmt, die bei Typ-Zwei-Diabetes beobachtet wird. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass es sich um eine nichtinvasive Technik handelt, die es ermöglicht, sicherzustellen, dass Hyperglykämie die Ursache für alle Veränderungen ist, die bei den hyperglykämischen Fischen beobachtet werden. Dieses Protokoll könnte möglicherweise verwendet werden, um therapeutische Wege oder Arzneimittel zu erforschen, die auf Komplikationen der Hyperglykämie abzielen.Dieses Protokoll hat viele Schritte, aber wenn die Schritte richtig und mit Sorgfalt befolgt werden, sollte es schnell zur zweiten Natur werden. Denken Sie jedoch daran, die Tiere während des gesamten Protokolls immer sanft und menschlich zu behandeln. Beginnen Sie mit dem Aufstellen von sechs Panzern, zwei für jede experimentelle Gruppe.Verwenden Sie Zwei-Liter-Tanks, wenn die Gesamtzahl der Fische weniger als 20 beträgt, und Vier-Liter-Becken, wenn die Gesamtzahl der Fische mehr als 20 beträgt. Beschriften Sie einen der beiden Tanks, den Gehäusetank und den anderen Lösungstank. Halten Sie die Tanks in einem Wasserbad bei 28 bis 29 Grad Celsius, um die Wassertemperatur zu halten.Am ersten Tag legen Sie die Fische für 24 Stunden in ihre jeweiligen Behandlungslösungen. Am zweiten Tag die Fische für 24 Stunden von ihren Behandlungslösungen ins Wasser geben. Am dritten Tag den Fisch aus dem Wasser in Behandlungslösungen überführen.Setzen Sie diese abwechselnde Belichtung für den Rest des Experiments fort. Tägliche Übertragung von wasserbehandelten Kontrollfischen von Wasser zu Wasser. Stellen Sie sicher, dass die Fische während der gesamten Dauer des Experiments jeden Tag innerhalb desselben zweistündigen Fensters gefüttert und übertragen werden.Übertragen Sie Fische in jeder Behandlungsgruppe mit einem Standardfischnetz aus dem Haltungsbecken in das entsprechende Lösungsbecken. Stellen Sie den Tank mit dem Fisch wieder in das Wasserbad und ersetzen Sie den Luftstein und den Tankdeckel. Dieser Tank ist jetzt der Gehäusetank und der Tank, der zuvor den Fisch hielt, ist jetzt der Lösungstank.Entsorgen Sie die alte Lösung und reinigen Sie den Tank zusammen mit den Tankdeckeln, Luftleitungen, Luftsteinen und Netzen, um die Ansammlung von Glukose und Mannit zu verhindern. Verwenden Sie Wasser und einen speziellen Schwamm für jede Behandlungsbedingung, um die Tanks richtig zu reinigen. Trocknen Sie die neu gereinigten Lösungstanks mit einem Papiertuch und bereiten Sie die Lösungen mit diesem Tank für den nächsten Tag vor.Stellen Sie sicher, dass die anderen Gegenstände getrocknet und durch geeignete Behandlungsgruppen getrennt sind. Um die Zuckerlösungen vorzubereiten, füllen Sie jeden Lösungstank mit zwei oder vier Litern Systemwasser. Messen Sie die richtige Menge an Glukose und Mannit mit einer Top-Loading-Waage und separaten Wiegebooten für jede Chemikalie.Geben Sie die gewogene Glukose oder das Mannitol-Aliquot in den entsprechenden Sauberlösungstank. Rühren Sie die Lösungen mit separaten Glasrührstäben um, bis der Zucker vollständig aufgelöst ist. Dann bringen Sie die Lösungstanks in das Wasserbad zurück und bedecken sie mit den entsprechenden Deckeln.Um die Wasserlösung vorzubereiten, füllen Sie Versuchstanks mit Systemwasser Geben Sie diese Lösungstanks in das Wasserbad zurück und bedecken Sie sie mit den entsprechenden Deckeln. Die Blutzuckerwerte waren sowohl nach vierwöchigen als auch nach achtwöchigen Glukosebehandlungen signifikant erhöht. Mit Hyperglykämie definiert als das Dreifache der Kontrollmittelwerte sowohl aus wasserbehandelten als auch aus Mannitol behandelten Gruppen.Netzhautgewebe, das nach vier Wochen Hyperglykämie gesammelt wurde, hatte einen Anstieg des Gliafibrillär-sauren Proteins oder gfAP-Spiegels. Die GFAP-Expression wird in Mueller-Gliazellen in der Netzhaut beobachtet, die bei diabetischer Retinopathie verändert sind. Dieser Anstieg der GFAP war mit einem Anstieg der KappaB-Spiegel des Kernfaktors verbunden.Dies deutet darauf hin, dass die induzierte Hyperglykämie eine Entzündungsreaktion und reaktive Gliose auslöst. ERG-Aufnahmen nach vierwöchiger Behandlung identifizierten ein vermindertes Ansprechen der mit Glukose behandelten Netzhaut im Vergleich zu mit Mannit behandelten Kontrollen. Die Amplituden sowohl der Photorezeptor- als auch der bipolaren Zellkomponenten waren bei hyperglykämischen Fischen verringert.Dieses Verfahren kann durch andere Tests der Hyperglykämie ergänzt werden. Zum Beispiel kann ein Gedächtnistest verwendet werden, um kognitive Defizite zu untersuchen oder visuelle Reaktionen wie die optomotorische Reaktion aufzuzeichnen, um sehbasierte Komplikationen zu beurteilen. Sobald diese Technik etabliert war, konnte unser Labor sie verwenden, um hyperglykämie-induzierte Komplikationen im Zebrafischmodell zu untersuchen.Wir beobachteten diese Komplikationen relativ schnell, nach vier Wochen Behandlung.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Wir zeigen, intraperitoneale Injektion in das Erwachsenenleben Zebrafisch. Wir verwenden eine 10 ul Nanofil Mikrospritze durch eine Micro4 Controller und UltraMicroPump III geregelt. Diese Demonstration umfasst den Einsatz von kaltem Wasser als Betäubungsmittel.

Intraperitoneale Injektion in Adult Zebrafisch

Dieses Video beschreibt die Technik zur Erstellung eines Zebrafischmodells für Typ-1-Diabetes mellitus mit Hilfe des Medikaments Streptozocin, um die Pathophysiologie von diabetischen Komplikationen und des metabolischen Gedächtnisses zu untersuchen.

Streptozocin-Behandlung: Ein Zebrafischmodell für Typ-1-Diabetes mellitus

Metabolic Speicher ist das Phänomen, mit dem diabetischen Komplikationen fortbestehen und Fortschritte ungehinderten auch nach euglycemia pharmazeutisch erreicht. Hier beschreiben wir eine Diabetes mellitus Zebrafisch Modell, das einzigartig ist, dass es ermöglicht die Prüfung der mitotisch übertragbare epigenetische Komponenten des metabolischen...

Ein Zebrafisch Modell des Diabetes mellitus und Stoffwechselkrankheiten Speicher

Zebrafische sind ein wichtiger Modellorganismus für die Erforschung der Energiehomöostase.  Durch die Verwendung eines NADH2-empfindlichen Redoxindikators, alamar Blue, haben wir einen Assay entwickelt, der die Stoffwechselrate von Zebrafischlarven in einem 96-Well-Plattenformat misst und in der Arzneimittel- oder Genforschung eingesetzt werden kann.

Hochdurchsatz-<em&gt; Danio rerio</em&gt; Energieumsatz-Assay

Diese Arbeit beschreibt Methoden, um akute und chronische Hyperglykämie Modelle in Zebrafisch zu etablieren. Ziel ist es, die Auswirkungen von Hyperglykämie auf physiologische Prozesse, wie zB konstitutive und verletzungsinduzierte Neurogenese, zu untersuchen. Die Arbeit hebt auch die Verwendung von Zebrafisch hervor, um radiomarkierten Molekülen (hier [ 18 F] -FDG) unter Verwendung von PET / CT zu folgen.

Akute und chronische Modelle der Hyperglykämie in Zebrafisch: Eine Methode zur Beurteilung der Auswirkungen von Hyperglykämie auf die Neurogenese und die Biodistribution von radioaktiv markierten Molekülen

Hier diskutieren wir eine Methode-Protokoll ermöglicht eine einfache Analyse der Erwachsenen tg(fli:EGFP) Zebrafisch retinalen Gefäßsystem als eine schnelle Auslesung in Einstellungen des langfristigen vaskuläre Krankheiten Neoangiogenese und strukturelle Veränderungen verbunden.

Diabetes durch die Augen eines Fisches zu studieren: Mikrodissektion, Visualisierung und Analyse von den Erwachsenen tg(fli:EGFP) Zebrafisch Retinal Gefäßsystem

Beta-Zell-Funktion ist wichtig für die Blutzucker-Homöostase, die bei einzelligen Auflösung mit einem genetisch codierte Reporter für Kalzium Zustrom ausgewertet wird.

Analyse der Beta-Zellfunktion mit einzelligen Auflösung Kalzium Imaging im Zebrafisch Inselchen

Wir präsentieren eine Verhaltenskammer zur Beurteilung der kognitiven Leistung. Wir liefern Daten, die zeigen, dass sich Zebrafische nach dem Erwerb 8 Wochen später an die Aufgabe erinnern. Wir zeigen auch, dass hyperglykämische Zebrafische die kognitive Leistung verändert haben, was darauf hindeutet, dass dieses Paradigma auf Studien zur Beurteilung von Kognition und Gedächtnis anwendbar ist.

Die Dreikammer-Wahl-Verhaltensaufgabe mit Zebrafisch als Modellsystem

Klassische Angstkonditionierung Paradigma wurde für den menschlichen Teilnehmer in eine voll immersive Virtual Reality Umgebung angepasst. Mit einer Diskriminierung Paradigma, konditionierte Angst, Cue und Kontext Merkfähigkeit und Extinktion wurde mit Hautleitfähigkeit als Reaktion auf dynamische virtuelle Schlangen und Spinnen (die konditionierte Reize) in zwei verschiedenen virtuellen Kontexten gemessen.

Menschliche Angstkonditionierung in Full Immersion 3-Dimensional Virtual Reality Geleitete

Die vorliegende Video zeigt eine Methode, die nutzt die Kombination von Elektroporation und konfokale Mikroskopie, um Live-Aufnahmen zu den einzelnen neuronalen Vorläuferzellen im sich entwickelnden Zebrafisch Vorderhirn führen.

Zeitraffer-Live-Imaging von klonal verbundenen neuronalen Vorläuferzellen in der Entwicklung von Zebrafisch Vorderhirnneuronen

Erfahren Sie, wie Sie mit einem nicht-invasiven Protokoll verlängerte Hyperglykämie bei Zebrafischen induzieren. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung diabetischer Komplikationen und retinaler Veränderungen über vier bis acht Wochen.

Alternatives Eintauchen in Glukose, um eine verlängerte Hyperglykämie bei Zebrafischen zu erzeugen

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