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DOI: 10.3791/61964-v
Philipp Tomsits*1,2,3, Dominik Schüttler*1,2,3, Stefan Kääb1,2, Sebastian Clauss*1,2,3, Niels Voigt*4,5,6
1Department of Medicine I, University Hospital Munich, Campus Großhadern,Ludwig-Maximilians University Munich (LMU), 2Partner Site Munich, Munich Heart Alliance (MHA),DZHK (German Centre for Cardiovascular Research), 3Walter Brendel Center of Experimental Medicine,Ludwig-Maximilians University Munich (LMU), 4Institute of Pharmacology and Toxicology,University Medical Center Göttingen, 5Partner Site Göttingen,DZHK (German Centre for Cardiovascular Research), 6Cluster of Excellence "Multiscale Bioimaging: from Molecular Machines to Networks of Excitable Cells" (MBExC),University of Göttingen
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study focuses on isolating high-quality murine atrial and ventricular cardiomyocytes to investigate arrhythmogenesis. By using a retrograde enzyme-based Langendorff perfusion method, the protocol allows the simultaneous measurement of calcium transients and L-type calcium current in isolated cardiac cells.
Mausmodelle ermöglichen es, Schlüsselmechanismen der Arrhythmogenese zu untersuchen. Zu diesem Zweck sind qualitativ hochwertige Kardiomyozyten notwendig, um Patch-Clamp-Messungen durchzuführen. In dieser Arbeit wird eine Methode zur Isolierung muriner atrialer und ventrikulärer Myozyten mittels retrograder enzymbasierter Langendorff-Perfusion beschrieben, die simultane Messungen von Calcium-Transienten und L-Typ-Calciumstrom ermöglicht.
Patch-Clamp- und Calcium-Imaging-Experimente sind arbeitsintensiv, zeitaufwändig und herausfordernd. Dieses Protokoll bietet eine bequeme Methode zur Isolierung hochwertiger atrialer und ventrikulärer Kardiomyozyten von Mäusen, die sich für Patch-Clamp-Experimente und gleichzeitig durchgeführte Kalziumbildgebung eignet. Der Hauptvorteil dieses Protokolls besteht darin, dass wir atriale und ventrikuläre Kardiomyozyten aus demselben Tier gewinnen können.
Die Isolierung von murinen atrialen Kardiomyozyten ist eine besondere Herausforderung und war ein limitierender Faktor für frühere Experimente. Beginnen Sie damit, das Langendorff-Gerät mit Perfusionspuffer vorzubefüllen und sicherzustellen, dass es luftfrei ist. Befestigen Sie eine Aortenkanüle unter dem Dissektionsmikroskop und verbinden Sie sie mit einer Ein-Milliliter-Spritze, die mit Perfusionspuffer gefüllt ist.
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