Name: Ein Mausmodell für chronische Pankreatitis mittels Gallengangs-TNBS-Infusion (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-28T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Lernen Sie die optimierte TNBS-Gallengangsinfusion zur Erzeugung eines chronischen Pankreatitis-Mausmodells. Diese Methode ermöglicht reproduzierbare Studien zu Entzündung, Fibrose und neuropathischem Schmerz.

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Diese Studie wurde vom Department of Veterans Affairs (VA-ORD BLR & D Merit I01BX004536) unterstützt, und das National Institute of Health gewährt HW # 1R01DK105183, DK120394 und DK118529. Wir danken Dr. Hongju Wu für den Austausch technischer Erfahrungen.

Alle Verfahren wurden mit Genehmigung der Institutional Animal Care and Use Committees an der Medical University of South Carolina und dem Ralph H. Johnson Medical Center durchgeführt. C57BL/6J männliche Mäuse im Alter von 8-10 Wochen wurden in dieser Studie verwendet. Mäuse wurden unter einem Standard-12-Licht- / 12-Dunkel-Zyklus mit ad libitum Zugang zu Nahrung und Wasser untergebracht.
1. Herstellung von TNBS-Injektionslösung
<ol><li>Bereiten Sie 10% Ethanol in 0,9% Kochsalzlösung vor. TNBS -Stamm (siehe Materialtabelle)in 10% Ethanol bis zu einer Endkonzentration von 7,5 mM auflösen, indem 7,5 μL TNBS in 1 ml 10% Ethanol zugefüllt werden. ACHTUNG: TNBS stellt eine chemische Gefahr dar. Bereiten Sie die Lösung in einem Abzug vor und verwenden Sie persönliche Schutzausrüstung wie Handschuhe, Schutzbrille und einen Laborkittel, um direkten Kontakt mit TNBS zu vermeiden.</li>
	<li>Laden Sie 50 μL 0,75% TNBS-Lösung mit einer 31-Gauge-Nadel in eine Insulinspritze. Laden Sie 50 μL 10% Ethanol in Kochsalzlösung in eine Spritze der gleichen Größe wie die Fahrzeugsteuerung. Legen Sie die Spritzen auf Eis und schützen Sie sie vor Licht, bis sie benötigt werden.</li>
</ol>2. Mausvorbereitung und Operation
<ol><li>Rasieren Sie die Haare aus dem abdominalen Operationsbereich.</li>
	<li>Injizieren Sie vor der Operation eine präventive Dosis des Analgetikums (z. B. Buprenorphin 0,1 mg/kg i.p.).</li>
	<li>Induzieren und erhalten Sie die Maus unter Vollnarkose mit 1,5-2% Isofluran und 1 L/min Sauerstoff. Bestätigen Sie die Betäubung, indem Sie die Zehen einklemmen und das Tier auf einen Mangel an Reflex beobachten.</li>
	<li>Legen Sie die Maus während der Operation auf ein beheiztes Operationspad. Tragen Sie tierärztliche Salbe auf jedes Auge auf, wenn die Maus unter Betäubung steht.</li>
	<li>Desinfizieren Sie die Operationsstelle, indem Sie den Operationsbereich 3x mit 2% Jod abwischen, gefolgt von 70% Alkohol (Materialtabelle).</li>
	<li>Führen Sie eine Laparotomie mit einer Mikroschere durch, um einen Schnitt von 0,5-1 cm zu erzeugen.</li>
	<li>Legen Sie den Zwölffingerdarm vorsichtig frei und lokalisieren Sie den gemeinsamen Gallengang mit Wattestäbchen (Materialtabelle).</li>
	<li>Legen Sie einen geraden Mikro-Hämoclip ( Materialtabelle ) über den proximalengemeinsamenKanal, um den Fluss von TNBS oder Vehikellösungen in die Leber und die Gallenblase zu verhindern (Abbildung 1A, B).</li>
	<li>Legen Sie den Zwölffingerdarm vorsichtig frei und führen Sie die Nadel durch die Papille von Vater in den Pankreasgang ein.</li>
	<li>Sobald sich die Nadel im Kanal befindet, legen Sie einen gekrümmten Mikro-Hämoclip (Materialtabelle) über den Zwölffingerdarm, der die Nadel umgibt (Abbildung 1A), um die Nadel an Ort und Stelle zu sichern und zu verhindern, dass die injizierte Lösung in den Zwölffingerdarm gelangt.</li>
	<li>Die Lösung (TNBS oder Vehikel) wird im Laufe von einer Minute schrittweise in den Pankreasgang einfließen. HINWEIS: TNBS muss langsam über eine Minute infundiert werden, und es ist einfach, die Infusionsgeschwindigkeit zu kontrollieren, wenn die Bauchspeicheldrüse mit einer Insulinspritze mit einer 5/16 Zoll und 31G Nadel perfundiert wird. Halten Sie die Hand so stabil wie möglich, um ein Stechen des Gallengangs zu vermeiden. Wenn TNBS erfolgreich injiziert wird, kann gelbe Farbe in der Bauchspeicheldrüse sichtbar sein.</li>
	<li>Entfernen Sie nach der Infusion vorsichtig die Mikroklemme in der Nähe der Leber und entfernen Sie dann die Mikroklemme, die die Nadel und den Zwölffingerdarm hält.</li>
	<li>Bringen Sie den Zwölffingerdarm vorsichtig in seine ursprüngliche Position zurück.</li>
	<li>Lassen Sie 0,5 ml warme sterile Kochsalzlösung (36-37 ° C) vor dem Verschluss in der Bauchhöhle, um dem Zwölffingerdarm zu helfen, in seine ursprüngliche Position zurückzukehren und die Wiederherstellung der Peristaltik zu unterstützen.</li>
	<li>Schließen Sie den Schnitt in der Muskelschicht mit einer kontinuierlichen Naht mit einem 5-0-Stich. Schließen Sie die Haut mit unterbrochener Naht mit einem 4-0-Stich.</li>
	<li>Stellen Sie den Käfig mit Mäusen auf ein Heizkissen, um die Genesung von der Anästhesie zu ermöglichen.</li>
	<li>Vergewissern Sie sich, dass die Mäuse warm und zu spontanen Bewegungen fähig sind, bevor Sie sie in den Haltungsraum zurückbringen.</li>
	<li>Stellen Sie weiterhin alle 12 Stunden ein Analgetikum (z. B. Buprenorphin 0,1 mg / kg i.p.) und 48 Stunden nach der Operation zusätzliche Wärme zur Verfügung.</li>
</ol>3. Überwachung des Mausverhaltens
<ol><li>Entfernen Sie die Nähte am Tag 7 nach der Operation.</li>
	<li>Überwachen Sie die Gesundheit und das Verhalten der Maus täglich in der ersten Woche nach der Operation. Achten Sie auf Anzeichen von Stress wie Vokalisieren, gebückte Rückenhaltung oder reduzierte Fortbewegung. Messen Sie das Körpergewicht jeden zweiten Tag.</li>
	<li>Verwenden Sie Von Frey Monofilamente (VFFs), um die abdominale mechanische Überempfindlichkeit vor und 2, 3 Wochen nach der Operation wie beschrieben zu messen9,14.<ol>
<li>Tragen Sie VFFs verschiedener aufgebrachter Kräfte in aufsteigender Reihenfolge 10x alle 1-2 s auf den oberen Bauchbereich auf. Betrachten Sie das Anheben, Zurückziehen oder Lecken des Bauches (Entzugsreaktion) als positive Reaktion.</li>
		<li>Wenden Sie einen stärkeren Reiz an, wenn keine positive Reaktion beobachtet wird, und einen schwächeren Reiz, wenn eine positive Reaktion beobachtet wird. Die Entzugsschwelle ist die Kraft, mit der die Maus 50% der Zeit reagiert.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Sammlung und histologische Analyse von Pankreasgewebe
<ol><li>Opfern Sie die Mäuse unter Anästhesie durch zervikale Dislokation und sezieren Sie vorsichtig die Bauchspeicheldrüse aus dem Darm und anderen Organen.</li>
	<li>Fixieren Sie die Bauchspeicheldrüse 24 Stunden lang in 10% Paraformaldehyd, betten Sie sie in Paraffin ein, schneiden Sie Gewebeabschnitte von 5 μm Dicke und legen Sie sie zur Färbung auf Glasobjektträger.</li>
	<li>Führen Sie Hämatoxylin-Eosin und Massons Trichromfärbung mit Standardmethoden durch, wie zuvor berichtet4.</li>
</ol>

<ol><li>Klauss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+induced+vs.+classical+animal+models+of+chronic+pancreatitis%3A+a+critical+comparison%5BTitle%5D)+AND+%22The+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology+Journal%22%5BJournal%5D)">Genetically induced vs. classical animal models of chronic pancreatitis: a critical comparison.</a> The Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 32, 5778-5792 (2018).</li>
<li>Liao, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+deacetylase+2+is+involved+in+%C2%B5-opioid+receptor+suppression+in+the+spinal+dorsal+horn+in+a+rat+model+of+chronic+pancreatitis+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Histone deacetylase 2 is involved in µ-opioid receptor suppression in the spinal dorsal horn in a rat model of chronic pancreatitis pain.</a> Molecular Medicine Reports. 17 (2), 2803-2810 (2018).</li>
<li>Gui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trypsin+activity+governs+increased+susceptibility+to+pancreatitis+in+mice+expressing+human+PRSS1R122H%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Trypsin activity governs increased susceptibility to pancreatitis in mice expressing human PRSS1R122H.</a> The Journal of Clinical Investigation. 130 (1), 189-202 (2020).</li>
<li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+Stem+Cell+Therapy+Mitigates+Chronic+Pancreatitis+via+Differentiation+into+Acinar-like+Cells+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Adipose Stem Cell Therapy Mitigates Chronic Pancreatitis via Differentiation into Acinar-like Cells in Mice.</a> Molecular Therapy. 25 (11), 2490-2501 (2017).</li>
<li>Aghdassi, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+investigating+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Fibrogenesis+and+Tissue+Repair%22%5BJournal%5D)">Animal models for investigating chronic pancreatitis.</a> Fibrogenesis and Tissue Repair. 4 (1), 26(2011).</li>
<li>Scoggins, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p53-dependent+acinar+cell+apoptosis+triggers+epithelial+proliferation+in+duct-ligated+murine+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">p53-dependent acinar cell apoptosis triggers epithelial proliferation in duct-ligated murine pancreas.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 279 (4), 827-836 (2000).</li>
<li>Bradley, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+duct+pressure+in+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Pancreatic duct pressure in chronic pancreatitis.</a> The American Journal of Surgery. 144 (3), 313-316 (1982).</li>
<li>Zhao, J. B., Liao, D. H., Nissen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+pancreatitis%3A+can+it+be+translated+to+human+pain+study%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Animal models of pancreatitis: can it be translated to human pain study.</a> World Journal of Gastroenterology. 19 (42), 7222-7230 (2013).</li>
<li>Winston, J. H., He, Z. J., Shenoy, M., Xiao, S. Y., Pasricha, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+behavioral+changes+in+nociception+in+a+novel+rat+model+of+chronic+pancreatitis+for+the+study+of+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Molecular and behavioral changes in nociception in a novel rat model of chronic pancreatitis for the study of pain.</a> Pain. 117 (1-2), 214-222 (2005).</li>
<li>Cattaruzza, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+receptor+potential+ankyrin+1+mediates+chronic+pancreatitis+pain+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Transient receptor potential ankyrin 1 mediates chronic pancreatitis pain in mice.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 304 (11), 1002-1012 (2013).</li>
<li>Bai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+insular+cortex+mediates+hyperalgesia+induced+by+chronic+pancreatitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Brain%22%5BJournal%5D)">Anterior insular cortex mediates hyperalgesia induced by chronic pancreatitis in rats.</a> Molecular Brain. 12 (1), 76(2019).</li>
<li>Puig-Diví, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+pancreatic+disease+by+trinitrobenzene+sulfonic+acid+infusion+into+rat+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts.</a> Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PAX4+Gene+Transfer+Induces+alpha-to-beta+Cell+Phenotypic+Conversion+and+Confers+Therapeutic+Benefits+for+Diabetes+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">PAX4 Gene Transfer Induces alpha-to-beta Cell Phenotypic Conversion and Confers Therapeutic Benefits for Diabetes Treatment.</a> Molecular Therapy. 24 (2), 251-260 (2016).</li>
<li>Ceppa, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+proteases+mediate+inflammatory+pain+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Serine proteases mediate inflammatory pain in acute pancreatitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 300 (6), 1033-1042 (2011).</li>
<li>Puig-Divi, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+pancreatic+disease+by+trinitrobenzene+sulfonic+acid+infusion+into+rat+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts.</a> Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).</li>
<li>Xu, G. Y., Winston, J. H., Shenoy, M., Yin, H., Pasricha, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+excitability+and+suppression+of+A-type+K%2B+current+of+pancreas-specific+afferent+neurons+in+a+rat+model+of+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Enhanced excitability and suppression of A-type K+ current of pancreas-specific afferent neurons in a rat model of chronic pancreatitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 291 (3), 424-431 (2006).</li>
<li>Drewes, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pain+in+chronic+pancreatitis%3A+the+role+of+neuropathic+pain+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Pain in chronic pancreatitis: the role of neuropathic pain mechanisms.</a> Gut. 57 (11), 1616-1627 (2008).</li>
</ol>

Alle Autoren erklären, dass sie keinen Interessenkonflikt haben.

Die Gallengangsinfusion von TNBS zur Induktion einer chronischen Pankreatitis ist bei Mäusen technisch anspruchsvoll, da bis zu 22,5% der Mäuse innerhalb von 3-4 Tagen nach der Medikamenteninfusion sterben können10. Hier verfeinerte dieser Bericht das Verfahren auf der Grundlage früherer Studien und reduzierte die frühe Maussterblichkeit auf <10%. Zum Beispiel kann das erhöhte Arzneimittelvolumen (von 35 μL auf 50μL) sicherstellen, dass die Medikamente die gesamte Bauchspeicheldrüse erreichen. Die...

Chronische Pankreatitis (CP) ist eine chronisch entzündliche Erkrankung, die durch Atrophie der Bauchspeicheldrüse, Fibrose, Bauchschmerzen und eventuellen Verlust exokriner und endokriner Funktionen gekennzeichnet ist1. Aktuelle medizinische und chirurgische Behandlungen sind nicht heilend, sondern werden durchgeführt, um Symptome zu lindern, die die Folge der Krankheit sind: refraktäre Bauchschmerzen, endokrine und exokrine Dysfunktion. Daher sind wirksamere Behandlungen dringend erforderlich2. Tiermodelle sind ein wesentliches Werkzeug, um ein besseres Verständnis der Krankheit zu entwickeln und potenzielle Therapeutika zu untersuchen3. Es wurden mehrere Mausmodelle für CP entwickelt, von denen Cerulein- und/ oder Alkoholmodelle häufig verwendet werden. Cerulein, ein Oligopeptid, das die Pankreassekretion stimuliert, hat gezeigt, dass es ein CP-Modell mit Pankreasatrophie, Fibrose und anderen reproduzierbar induziert4. Ein anderes gängiges Modell verwendet serielle Injektionen von L-Arginin, das eine exokrine Insuffizienz erzeugt, die der bei menschlichen Patienten beobachtetenähnelt 5. CP kann auch durch vollständige oder partielle Pankreasgangligatur sowie Pankreasganghypertonie6,7induziert werden. Trotz der Vielfalt der für CP verfügbaren Tiermodelle reproduziert keines dieser Modelle effektiv die Bauchschmerzen von CP-Patienten8.
Frühere Studien zeigten, dass die lokale Pankreasinjektion von 2,4,6-Trinitrobenzolsulfonsäure (TNBS) die anhaltenden Schmerzen von CP-Patienten repliziert9,10,11. TNBS-behandelte Mäuse zeigten abdominale Überempfindlichkeit und erhöhtes schmerzbedingtes Verhalten sowie eine "generalisierte Überempfindlichkeit" gegen schmerzhafte Reize, ein Phänomen, das bei CP-Patienten beobachtet wurde10. Neben der genauen Nachahmung von CP-Schmerzen repliziert das TNBS-Modell auch andere pathologische Merkmale des menschlichen Zustands wie Fibrose, mononukleäre Zellinfiltration und Ersatz von Acinarzellen durch Fettgewebe10,12. Die TNBS-Infusion über den Gallengang ist jedoch ein technisch anspruchsvolles Verfahren bei Mäusen, das zum Tod führen kann. Unseres Wissens gibt es kein visuelles Protokoll, um zu zeigen, wie die Gallengangsinfusion durchgeführt wird. In diesem Artikel demonstrieren wir das Verfahren der Gallenabduktion von TNBS zur Erzeugung eines CP-Mausmodells. Dieses Verfahren wird dazu beitragen, wertvolle Tiermodelle für die Untersuchung von CP und anderen Pankreaserkrankungen zu generieren und kann verwendet werden, um andere Materialien (z. B. Virus, Zellen) in die Bauchspeicheldrüse einzuschmeißen13.

<table><tbody><tr><td>10% neutrales gepuffertes Formalin v/v</td><td>Fisher Scientific</td><td>23426796</td><td></td></tr><tr><td>Alkohol-Vorbereitungspads, steril</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-750</td><td></td></tr><tr><td>Tieranästhesiesystem</td><td>VetEquip, Inc.</td><td></td><td></td>901806</tr><tr><td>Buprenorphinhydrochlorid, Injektion</td><td>Par Sterile Products, LLC</td><td>NDC 42023-179-05</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifugenröhrchen, 15 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>0553859A</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol, absolut (200 proof), molekularbiologische</td><td>Qualität Fisher Scientific</td><td>BP2818500</td><td></td></tr><tr><td>Extra feine Mikro-Präparierschere 4" gerade scharf</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Pinzette 4" extra zarte Spitze</td><td>Roboz Chirurgisches Instrument Co.</td><td>RS-5136</td><td></td></tr><tr><td>Heizkissen</td><td>Amazon</td><td>B07HMKMBKM</td><td></td></tr><tr><td>Hegar-Baumgartner Nadelhalter 5,25"</td><td>Roboz Chirurgisches Instrument Co.</td><td>RS-7850</td><td></td></tr><tr><td>Insulinspritze mit 31-Gauge-Nadel</td><td>BD</td><td>324909</td><td></td></tr><tr><td>Jodvorbereitungspads</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027048</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Piramal Intensivpflege</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>Mikroclip-Applikationszange 5,5"</td><td>Roboz Chirurgisches Instrument Co.</td><td>RS-5410</td><td></td></tr><tr><td>Micro Clip, gerade stark gebogen 1x6mm</td><td>Roboz Chirurgisches Instrument Co.</td> KG<td>RS-5433</td><td></td></tr><tr><td>Mikro-Clip, gerade, 0,75 mm Clipbreite</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5420</td><td></td></tr><tr><td>Picrylsulfonsäurelösung, TNBS, 1M in H2O</td><td>Millipore Sigma</td><td>92822-1ML</td><td></td></tr><tr><td>Polypropylen-Naht 4-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8683</td><td></td></tr><tr><td>Polypropylen-Nahtmaterial 5-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8661</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchlorid, 0,9 % intravenöse Lösung</td><td>VWR</td><td>2B1322Q</td><td></td></tr><tr><td>OP-Tuch, steril</td><td>Med-Vet International</td><td>DR1826</td><td></td></tr><tr><td>Gewebekassette</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-272416</td><td></td></tr><tr><td>Von Frey Filamente</td><td>Bioseb</td><td>EB2-VFF</td><td></td></tr></tbody></table>

ein mausmodell für chronische pankreatitis mittels gallengangs-tnbs-infusion

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

Chronische Pankreatitis (CP) ist eine komplexe Erkrankung mit Pankreasentzündung und Fibrose, Drüsenatrophie, Bauchschmerzen und anderen Symptomen. Mehrere Nagetiermodelle wurden entwickelt, um CP zu untersuchen, von denen das Gallengang 2,4,6-Trinitrobenzolsulfonsäure (TNBS) Infusionsmodell die Merkmale neuropathischer Schmerzen bei CP repliziert. Die Infusion von Gallengangsmedikamenten bei Mäusen ist jedoch technisch anspruchsvoll. Dieses Protokoll demonstriert das Verfahren der Gallengangs-TNBS-Infusion zur Erzeugung eines CP-Mausmodells. TNBS wurde durch die Ampulle von Vater im Zwölffingerdarm in die Bauchspeicheldrüse infundiert. Dieses Protokoll optimierte das Arzneimittelvolumen, die chirurgischen Techniken und die Handhabung während des Eingriffs. TNBS-behandelte Mäuse zeigten Merkmale von CP, die sich in Gewichtsreduktionen des Körpergewichts und der Bauchspeicheldrüse, Veränderungen des schmerzbedingten Verhaltens und einer abnormalen Pankreasmorphologie widerspiegeln. Mit diesen Verbesserungen war die Mortalität im Zusammenhang mit der TNBS-Injektion minimal. Dieses Verfahren ist nicht nur entscheidend für die Erstellung von Pankreaserkrankungsmodellen, sondern auch für die lokale Verabreichung von Pankreasmedikamenten.

Die Gallengangsinfusionsverfahren wurden optimiert, um die mit diesem Verfahren verbundene Maussterblichkeit zu reduzieren10. TNBS wurde zunächst in einem Gesamtvolumen von 35 μL oder 50 μL verabreicht. Die Injektion von TNBS in einem Volumen von 50 μL könnte die gesamte Bauchspeicheldrüse erreichen und einen homogeneren Krankheitsphänotyp induzieren (Abbildung 1B). Darüber hinaus könnte die Injektion von TNBS mit einer Insulinspritze mit 31G-Nadel die Infusionsgeschw...

Chronische Pankreatitis (CP) ist eine Krankheit, die durch Entzündungen und Fibrose der Bauchspeicheldrüse gekennzeichnet ist, die oft mit hartnäckigen Bauchschmerzen verbunden sind. Dieser Artikel konzentriert sich auf die Verfeinerung der Technik, um ein Mausmodell von CP durch Gallengangsinfusion mit 2,4,6-Trinitrobenzolsulfonsäure (TNBS) zu erzeugen.

Ein Mausmodell für chronische Pankreatitis mittels Gallengangs-TNBS-Infusion

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...

Chronische Pankreatitis ist eine komplexe Erkrankung mit Pankreasentzündungen, Fibrose, Bauchschmerzen und anderen Symptomen. Das Gallengangs-TNBS-Infusionsmodell repliziert die neuropathischen Schmerzen, die bei Patienten mit chronischer Pankreatitis beobachtet wurden. Dieses Gallengangs-TNBS-Infusionsprotokoll wurde optimiert, um die Erzeugung eines chronischen Pankreatitis-Modells bei Mäusen zu induzieren.Da die Gallengangsmedikamentenfusion bei Mäusen technisch anspruchsvoll ist, wird ihre Visualisierung für Forscher, die neu in der Methode sind, hilfreich sein. Verwenden Sie vor und zwei und drei Wochen nach der Operation Von Frey-Monofilamente, um verschiedene Kraftniveaus in aufsteigender Reihenfolge auf den Oberbauchbereich einer acht bis 10 Wochen alten, C57 schwarzen sechs Maus anzuwenden, 10 Mal für ein bis zwei Sekunden pro Anwendung. Erwägen Sie, den Rückzug oder das Lecken des Bauches als positive Reaktion zu erhöhen.Laden Sie als nächstes eine Insulinspritze, die mit einer 31-Gauge-Nadel ausgestattet ist, mit 50 Mikrolitern einer frisch zubereiteten 0,75-prozentigen TNBS-Lösung. Laden Sie eine zweite Spritze mit 50 Mikrolitern 10 Prozent Ethanol in Kochsalzlösung als Fahrzeugsteuerung und legen Sie beide Spritzen lichtgeschützt auf Eis. Nachdem Sie eine mangelnde Reaktion auf den Pedalreflex bestätigt haben, entfernen Sie die Haare aus der Bauchregion der betäubten Maus, indem Sie sich rasieren oder haarentfernungscreme auftragen und die Maus auf ein beheiztes Operationspad unter einem Seziermikroskop legen.Tragen Sie Tiersalbe auf jedes Auge auf und desinfizieren Sie die Operationsstelle mit drei sequenziellen zwei Prozent Jod und drei 70 Prozent Ethanoltüchern verwenden Sie eine Mikroschere, um in einer kontinuierlichen Bewegung einen Schnitt von 0,5 bis einem Zentimeter zu machen, und verwenden Sie Wattestäbchen, um den Zwölffingerdarm sanft freizulegen und den gemeinsamen Gallengang zu lokalisieren. Um den Fluss der Behandlung in die Leber und gallenblase zu verhindern, verwenden Sie das Mikroskop, um einen geraden Mikro-Hämoclip über den proximalen gemeinsamen Kanal zu legen, und führen Sie die Nadel der TNBS-geladenen Spritze durch die Papille des Vaters in den Pankreasgang ein. Verwenden Sie einen gekrümmten Mikro-Hämoclip, um die Nadel zu sichern, und geben Sie die Lösung im Laufe einer Minute in den Pankreasgang.Wenn die gesamte Lösung geliefert wurde, entfernen Sie vorsichtig die Mikroklemmen und bestätigen Sie, dass der Zwölffingerdarm in seine ursprüngliche Position zurückgekehrt ist. Vor dem Schließen der Bauchhöhle 500 Mikroliter von 36 bis 37 Grad Celsius sterile Kochsalzlösung hinzufügen, um dem Zwölffingerdarm zu helfen, in seine ursprüngliche Position zurückzukehren und die Wiederherstellung der Peristaltik zu unterstützen. Verwenden Sie eine kontinuierliche Naht mit einem Fünf-O-Stich, um den Schnitt in der Muskelschicht zu schließen, und schließen Sie die Haut mit einer unterbrochenen Naht mit einem Vier-O-Stich.Dann legen Sie die Maus in einen Erholungskäfig auf einem Heizkissen mit Überwachung bis zur vollständigen Liege. Überwachen Sie die Gesundheit und das Verhalten der Maus täglich in der ersten Woche nach der Operation auf Anzeichen von Stress, wie Vokalisieren, eine gebeugte Rückenhaltung oder reduzieren Sie die Fortbewegung und messen Sie das Körpergewicht jeden zweiten Tag. Wie beobachtet, führt die Injektion von 50 Mikrolitern Tinte, wie gezeigt, zur Infiltration der gesamten Bauchspeicheldrüse, was die Induktion eines homogeneren Krankheitsphänotyps ermöglicht.In dieser repräsentativen Analyse verloren die Mäuse in der Kontrollgruppe in den ersten drei Tagen nach der Operation etwa sechs Prozent ihres ursprünglichen Körpergewichts, bevor sie sich allmählich erholten und bis zum 21. Tag über 100% ihres ursprünglichen Körpergewichts zunahmen. Im Gegensatz dazu verloren Mäuse, die TNBS erhielten, in den ersten fünf Tagen nach der Operation etwa 15 Prozent ihres ursprünglichen Körpergewichts und gewannen bis zum 21. Tag knapp 100 Prozent ihres ursprünglichen Körpergewichts zurück. Im Vergleich zu Kontrollmäusen zeigten die TNBS-injizierten Tiere in der zweiten und dritten Woche nach der Operation eine erhöhte abdominale mechanische Überempfindlichkeit.Die Größe und das Gewicht pro Körpergewicht der Bauchspeicheldrüse waren bei TNBS-Mäusen im Vergleich zu Bauchspeicheldrüsen, die von Kontrolltieren geerntet wurden, signifikant reduziert, was auf eine ausgeprägte Pankreasatrophie bei TNBS-behandelten Tieren hindeutet, die mit den Befunden bei Menschen mit schwerer und langfristiger chronischer Pankreatitis übereinstimmt. Die histologische Analyse von Pankreasgewebeabschnitten von mit Kontrollethanol behandelten Mäusen zeigte eine normale Morphologie, während Gewebeabschnitte von TNBS-behandelten Mäusen eine leere Realisierung mit einem massiven Verlust von Acinarzellen zeigten, die durch Fettzellinfiltration und Fibrose ersetzt wurden. Zu verhindern, dass das injizierte TNBS in die Galblase und den Darm gelangt, ist wichtig, da ein TNBS gewebeschädigende Wirkungen hat.Halten Sie die Hand während der Infusion so stabil wie möglich, um eine Punktion dieses Gallengangs zu vermeiden. Neben der Induktion der Entwicklung einer chronischen Pankreatitis kann diese Gallengangsinfusionskunst für Mäuse für die Entwicklung der anderen Pankreaserkrankungsmodelle verwendet werden. Dieses TNBS-Modell der chronischen Pankreatitis Maus kann verwendet werden, um sowohl die Pathogenese als auch die Behandlung von chronischer Pankreatitis sowie anderer Pankreaserkrankungen zu untersuchen.

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Dieses Video beschreibt das Verfahren zur Generierung eines Mausmodells mit akuter biliärer Pankreatitis mittels Pankreasinfusion von Natriumtaurocholat. Dieses Modell hilft bei der Untersuchung pathophysiologischer Veränderungen, die durch Natriumtaurocholat in der Bauchspeicheldrüse induziert werden.

Modell der akuten biliären Pankreatitis: Eine Methode zur Generierung eines Mausmodells für akute biliäre Pankreatitis mittels Infusion des Pankreasgangs

Tiermodelle für schwere akute Pankreatitis ermöglichen die Untersuchung pathophysiologischer Veränderungen im Anfangsstadium und erleichtern die Beobachtung der Evolution von Entzündungsereignissen. Hier stellen wir ein Protokoll für die Induktion einer schweren akuten biliären Pankreatitis durch retrograde Infusion von Natriumtaurocholat in den Pankreasgang von anästhesierten C57BL/6-Mäusen zur Verfügung.

Natriumtaurocolat induzierte schwere akute Pankreatitis bei C57BL/6 Mäusen

Ein Mausmodell der schweren akuten Pankreatitis wird hierin beschrieben. Das hier vorgestellte Verfahren ist sehr schnell, einfach und zugänglich und ermöglicht so möglicherweise die Untersuchung der molekularen Mechanismen und verschiedener therapeutischer Interventionen bei akuter Pankreatitis auf bequeme Weise.

Etablierung eines Mausmodells für schwere akute Pankreatitis mittels retrograder Injektion von Natriumtaurocholat in den Gallengang

Wir haben ein Mausmodell für chronische Leberfibrose etabliert, das ein geeignetes Tiermodell für die virusinduzierte Leberfibrose-mechanistische Untersuchung der Gallengangsatresie (BA) und eine Plattform für zukünftige BA-Behandlungen darstellt.

Ein Mausmodell der chronischen Leberfibrose zur Untersuchung der Gallengangsatresie

Die intraperitoneale Verabreichung von Arzneimitteln ist ein sicherer und wirksamer nicht-invasiver Ansatz zur Induktion von Pankreasverletzungen. In dieser Studie wurden fünf verschiedene intraperitoneale Injektionsprotokolle an Mäusen verglichen, um einen unterschiedlichen Grad an Pankreasschädigung zu induzieren, und ein Modell für schwere Pankreasverletzungen etabliert, um die pathologischen Veränderungen und Behandlungsstrategien für schwere akute Pankreatitis (SAP) zu untersuchen.

Vorbereitung eines Mäusemodells für schwere akute Pankreatitis durch eine Kombination aus Caerulein und Lipopolysaccharid intraperitoneale Injektion

Das vorliegende Protokoll beschreibt einen neuartigen Ansatz zur Modellierung der chronisch obstruktiven Pankreatitis, der die Visualisierung des Pankreasgangs und die Elektrokoagulation des Pankreasgangs beinhaltet, um eine Obstruktion des Pankreasgangs zu verursachen.

Ein obstruktives Modell der chronischen Pankreatitis, das durch Elektrokoagulation etabliert wurde

Ein Protokoll für die Kanülierung der Maus Glandula Speicheldrüse über die Wharton-Gang beschrieben. Für dieses Experiment ist die Trypanblau-Lösung als Färber verwendet werden, um zu demonstrieren, wie diese Technik effektiv liefert Infusionen in die gezielte Drüse, und die Zuverlässigkeit dieses neuen Ansatzes als potenzielle klinische Arzneimittelentwicklung / Zelltherapie für die Regeneration der Speicheldrüsen vorschlagen.

Kanülierung der Maus Submandibular Speicheldrüsen über die Wharton-Gang

Ein Verfahren zur Visualisierung und Quantifizierung der 3-dimensionalen Struktur von Maus Pfortader oder intrahepatischen Gallengang wird beschrieben. Dieses Harz gegossenen Technik kann auch auf andere duktalen oder vaskulären Systemen angewendet werden und...

3-Dimensional Resin Casting und Imaging of Mouse Pfortader oder intrahepatische Gallengang-System

Ein Protokoll für chronische Infusion von Glukose und Intralipid in Ratten beschrieben. Dieses Modell kann verwendet werden, um die Auswirkungen der Nährstoff Überschuß auf Organfunktion und physiologischen Parametern zu untersuchen.

Ein Modell der chronischen Nährstoff Infusion in der Ratte

Chronische Augenhypertension induziert wird mittels Laserkoagulation der Trabekelnetzwerk in Maus Augen. Der Augeninnendruck (IOP) wird für mehrere Monate nach der Laser-Behandlung erhöht. Die Abnahme der Sehschärfe und Kontrastempfindlichkeit von Versuchstieren werden anhand des optomotor Test.

Ein Laser-induzierten Maus-Modell der chronischen Ocular Hypertension zu Sehfehler Charakterisierung

Lernen Sie die optimierte TNBS-Gallengangsinfusion zur Erzeugung eines chronischen Pankreatitis-Mausmodells. Diese Methode ermöglicht reproduzierbare Studien zu Entzündung, Fibrose und neuropathischem Schmerz.

Ein Mausmodell für chronische Pankreatitis mittels Gallengangs-TNBS-Infusion

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