Verwendung von Hühnerembryon als leistungsfähiges Werkzeug bei der Beurteilung von Entwicklungskardiotoxizitäten

Hallo an alle. Ich bin Qixiao Jiang, außerordentlicher Professor an der Abteilung für Toxikologie, School of Public Health an der Qingdao University. Im Namen meiner Forschungsgruppe werde ich die Vorteile der Verwendung des Hühnerembros bei der Entwicklung unserer Kardiotoxizitätsbewertung vorstellen.

Hühnerembryo ist ein klassisches Entwicklungsmodell, das mehrere Vorteile wie einfache Manipulation, hohe Zugänglichkeit, geschlossenes unabhängiges System usw. hat. Arbeiten mit mehreren Umweltschadstoffen wie phenolischer Gerbsäure. Dieselabgase, insbesondere die Materie auf den Kohlenstoff-Nanoröhren.

Wir haben mehrere Expositionsmethoden im Labor etabliert, aber für größere Ursachen werden die funktionellen Bewertungen auch routinemäßig durchgeführt. In diesem Video zeige ich Ihnen die Details, die Belichtungsmethoden und die morphologischen Methoden zur funktionellen Beurteilung. Zögern Sie nicht, uns zu kontaktieren, wenn Sie interessiert sind.

Vielen Dank. Hier sind unsere Belichtungsmethoden, die ich Ihnen vorstellen kann. Jetzt ist die erste Methode, die ich vorstellen werde, eine Luftzelleninjektion, bei der Sie direkt in die Luftzelle injizieren.

Reinigen Sie die Oberfläche der Eier mit Polyiodidlösung. Dies ist eine kommerziell erhältliche Polyiodidlösung, verdünnt mit entionisiertem Wasser, 1/5. Und dann trockne ich die Eierschale mit Seidenpapier, ohne zu schrubben.

Es ist wichtig, weil das Schrubben ihre Schutzschichtbeschichtung auf der Außenseite der Schale aufbricht. Alle Eier im dunklen Raum gereinigt und die Luftzelle mit einem Bleistift markiert. Eier mit Rissen auf der Schale ausschließen.

Schließen Sie auch Eier mit Luftzellen an der Seite aus. Wenn das eine stumpfe Spitze hat, ist es sehr unwahrscheinlich, dass diese normal schlüpfen. Desinfizieren Sie den Luftzellenbereich sowie die Metallsonde mit 75% Alkohol.

Wischen Sie sie trocken und bohren Sie dann mit der Sonde ein kleines Loch in der Mitte des Luftzellenbereichs. Stecken Sie die Sonde nicht tief in die Luftzelle. Brechen Sie stattdessen die Schale nur mit der Spitze der Sonde.

Wenn das Loch immer noch nicht groß genug ist, brechen Sie die Schale in der Nähe des vorhandenen Lochs erneut auf, bis sie groß genug ist, um das Einsetzen der Spitze zu ermöglichen. Setzen Sie die Pipettenspitze in das Loch ein, wobei die Spitze die innere Membran berührt. Injizieren Sie die Mischung langsam und halten Sie sie mindestens 10 Sekunden lang dort.

Dies soll es ermöglichen, das dosierte Öl vollständig zu dosieren. Und dann entfernen Sie die Spitze. Verschließen Sie nun das Loch mit einer Bürste und einem Tropfen geschmolzenem Paraffin.

Achten Sie darauf, geschmolzenes Paraffin nicht auf das innere Gedächtnis zu tropfen. Nach dem Versiegeln legen Sie die Eier in den Inkubator, bis sie das gewünschte Embryonalstadium erreichen. Die zweite, die Methode, die ich vorstellen werde, ist die Mikroinjektion.

Zunächst müssen die Eier gereinigt und gehandhabt werden, wie im Abschnitt Lufteinspritzung beschrieben. Dieses Verfahren muss in einer sterilisierten Kapuze durchgeführt werden. Sterilisieren Sie den Luftzellenbereich und instrumente mit Aceton.

Bohren Sie mit der Metallsonde ein kleines Loch in der Mitte des Luftzellenbereichs. Stecken Sie die Sonde nicht tief in die Luftzelle, da sonst das innere Gedächtnis beschädigt werden kann. Verwenden Sie dann den gleichen Prozess, um das Loch vorsichtig zu vergrößern, bis der Durchmesser etwa zwei Millimeter beträgt.

Dies kann die Verhältnisbestätigung des inneren Gedächtnisses ermöglichen. Dann laden Sie die Lösung in den Mikroinjektor und führen Sie die Nadel vorsichtig durch das Loch in die innere Membran für insgesamt etwa drei Millimeter ein. Dosieren Sie die Lösung vorsichtig und entfernen Sie dann die Nadel.

Halten Sie die Nadel so senkrecht wie möglich. Verschließen Sie das Loch dünn mit einem kleinen Stück Klebeband. Decken Sie das Loch vollständig ab, um die Austrocknung des Embryos und den Tod während der anschließenden Inkubation zu verhindern.

Die dritte Methode, die ich vorstellen werde, ist die Luftzelleninfusion. wo Sie eine Gasverunreinigung in die Luftzelle einflößen. Reinigen und behandeln Sie die Eier wie im Abschnitt Luftzelleninjektion beschrieben.

Und dann können Sie Eier bis zum embryonalen Tag 17 lesen. Behandeln Sie die Eizellen am embryonalen Tag 17, um den Luftzellenbereich zu markieren. Nehmen Sie am embryonalen Tag 18 die Eier aus dem Inkubator, sterilisieren Sie den Luftzellenbereich und die Instrumente mit Aceton.

Und dann bohren Sie vorsichtig zwei kleine Löcher auf zwei Seiten der Luftzelle. Einer ist für die Injektion von Gas oder Aerosol. Die andere ist für die Erweiterung unserer Luft.

Kontrollieren Sie sorgfältig die Größe der Löcher, so dass die Seite des Injektionslochs gerade ausreicht, um die Katheternadel einzulegen, während der Durchmesser des expandierenden Lochs etwas größer sein sollte. Etwa ein Millimeter Durchmesser. Jetzt ist dies der Probenbeutel, den wir verwenden, um das Zielgas oder Aerosol zu halten.

Sie können mit jedem Gerät, das Sie verwenden, ersetzen. Gießen Sie vorsichtig 10 ml Gas oder Aerosol in eine Spritze. Und dann befestigen Sie die Spritze vorsichtig mit der inneren Nadelfernbedienung an unserer Katheternadel, damit sie weich ist.

Führen Sie diese Katheternadel vorsichtig in das Infusionsloch ein. Sobald es drin ist, drücken Sie Aufdruck auf die Katheternadel. Dies dient dazu, die Leckage von der Injektionsstelle zu minimieren.

Ein weiterer Finger kann mit dem Ausstoßloch für Ihre Infusionsbestätigung herumgelegt werden. Wenn Sie die Infusion sanft durchführen, sollte der Luftstrom aus dem Ausstoßloch leicht zu spüren sein. Das ist originale Luft in der Luftzelle, die ausgestoßen wird.

Wenn die Infusion abgeschlossen ist, versiegeln Sie beide Löcher sofort. Diese Bänder und die geben die Eier in Ihren Inkubator zurück. Ich kann unseren Endpunktbewertungsprozess vorstellen.

Betäubung der Tiere mit Pentobarbital 33 mg/kg. IP-Injektion durch die Öffnungen getestet. Dann legen Sie Hühner auf den Operationstisch.

Sterilisieren Sie den Bauchbereich und die Elektroden mit Ethanol. Führen Sie dann zwei Nadelelektroden von zwei Seiten des Abdomens sub kontinuierlich ein. Stellen Sie sicher, dass die Nadeln nicht in die Bauchhöhle gelangen, indem Sie die Haut ein wenig anheben.

Und führen Sie die Nadel von dort ein. Drücken Sie die Nadel nach dem Einsetzen vorsichtig nach vorne, bis sie die Seite der Brusthöhle erreicht. Achten Sie darauf, dass die Nadel nicht tief in den Körper eindreckt oder aus der Haut herausragt.

Dann nehmen Sie die Messungen mit einem elektrokardiographischen Instrument vor. Andere Seminarinstrumente, die EKG-fähig sind, können ebenso verwendet werden. Dies ist unsere zweite Endpunktbewertungsmethode, um Motrin zu kartieren.

Dies ist der Querschnitt des Herzens im Weg von HME. Dies ist der richtige Ventrikel, mit dem wir messen werden. Dazu verwenden wir zwei Lineale.

Lineal 1 und Lineal 2. Jetzt kopieren wir einfach das Lineal auf den Bildschirm und ändern die Größe auf die entsprechende Größe und drehen es dann. Und wir bewegen es so, dass die beiden Enden der horizontalen Linie auf den 2 Enden der 3 rechten Ventrikelwände ruhen.

Und jetzt haben wir sieben Messlinien, die über unsere drei rechten Ventrikelwände verlaufen. Jetzt kopieren wir auch das sekundäre Lineal auf das Bild. Wir ändern auch die Größe ein wenig und drehen und ersetzen es, so dass es gleich platziert wird.

Diese horizontale Linie verläuft parallel zur Außenwand des rechten Ventrikels. Und der senkrechte würde über den Punkt gehen, wo die weißen Linien des Herrschers auf die innere Wand oder den rechten Ventrikel treffen. Und dann machen wir Messpunkte, damit es später mit Bild J gemessen werden kann.Wir wiederholen diesen Vorgang 7 mal pro Probe, so dass unsere repräsentative Messung des rechten Ventrikels.

Ich zeige Ihnen eine Zusammenfassung der aktuellen Ergebnisse. Dies ist die PFOA-Injektion in das Ei vor der Inkubation, und Sie können sehen, dass mit der Erhöhung der Serumkonzentration LPF im Serum effektiv erhöht wird. Laut der Demonstration, die Wirksamkeit, der Mikroinjektion.

Sie können sehen, dass A Kontrolle ist, und das B ist, wo der Antivirus-Express in großer Fluoreszenz q Protein injiziert wurde. Sie können eine starke Fluoreszenz sehen. Und dies ist der Beweis für die Wirksamkeit der Epithelinfusion.

Sie können sehen, dass mit der Infusion dramatische faseroptische Veränderungen im Myokardgewebe beobachtet wurden. Okay. Und Sie können auch sehen, dass die R-R-Intervalle der schlüpfenden Hühner 0, 1 und 2 Wochen. Es änderte sich auch signifikant nach der Infusion mit Dieselabgasen.

Geben Sie an, dass Sie dies berücksichtigen, diese Methode. Hier können Sie auch sehen, dass die Wirksamkeit der Epithelinfusion in diesem Beispiel. Sie können sehen, dass die rechten Ventrikel des Herzens effektiv erhöht wurden, nachdem sie mit Dieselabgasen infundiert wurden.

Und natürlich verwenden wir auch hier die histomorphometrischen Methoden. Wir zeigen es Ihnen einfach. Das ist sehr effektiv. Okay.

Dies sind alle Methoden, die ich Ihnen vorstellen werde. Ich hoffe, dass dies die Arbeit anderer Menschen mit Hühnerembryonen als leistungsfähiges Forschungswerkzeug in der Entwicklungstoxikologie erleichtern kann. Schönen Tag.