A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE^-/- Mäuse mit einem Miniaturschnitt

Was wir heute vorgestellt haben, ist eine vereinfachte modifizierte und chirurgisch effiziente Methode, um die Hintergliedmaßen-Ischämie bei ApoE-Mäusen zu etablieren. Diese Methode kann in jeder Tieranlage eingesetzt werden. Der Hauptvorteil der Synovialmethode ist eine geringe Invasivität mit einem Schnitt von weniger als fünf Millimetern.

Die Methode hat einen Lernhof. Wir empfehlen daher, vor der Arbeit an den Tieren, die in die endgültige Analyse einbezogen werden, an mikrochirurgischen Modellen zu üben. Die Methode wird von Kaixuan Yan, einem Doktor der Medizin und dem Studenten aus meinem Labor, demonstriert.

Beginnen Sie mit der Vorbereitung der erforderlichen Ausrüstung und Werkzeuge für die Operation. Nachdem Sie der Maus die Anästhesie verabreicht haben, tragen Sie diese Salbe auf die Augen auf, um Trockenheit zu verhindern. Legen Sie dann die Maus auf ein Heizkissen, um die Körperkerntemperatur bei etwa 37 Grad Celsius zu halten.

Entfernen Sie mit einem Wattestäbchen und einer Haarentfernungscreme vorsichtig die Haare von der Hinterhaut auf der rechten Seite. Legen Sie die Maus in Rückenlage unter ein Seziermikroskop auf das Heizkissen. Verwenden Sie Alkohol, um die Haut zu desinfizieren und wischen Sie mit der Baumwolle von der Pflanzenseite des Schnitts weg.

Machen Sie mit der spitzen Pinzette und der Chirurgischen Schere einen Schnitt von etwa drei bis vier Millimetern in der Mitte der Leistengegend. Entfernen Sie vorsichtig das Unterhautfettgewebe mit Hilfe einer feinen spitzen Pinzette, um das proximale femorale neurovaskuläre Bündel freizulegen. Bewegen Sie mit einem mit Kochsalzlösung angefeuchteten Wattestäbchen die Oberschenkelarterie vorsichtig vom Oberschenkelnerv und der Oberschenkelvene weg.

Dann mit der Spitze einer 7.0-Naht vorsichtig die Membran der Femurscheide durchbohren. Gehen Sie dann zu 7-0 resorbierbaren Nähten durch die proximale Oberschenkelarterie und machen Sie doppelte Knoten mit der Federschere. Anschließend durchschneiden Sie die Oberschenkelarterie zwischen den beiden Bindungen.

Führen Sie die resorbierbare 6-0-Naht durch den unteren Rand des Schnitts und ziehen Sie den Schnitt vorsichtig in den Bereich der rechten Seite des Knies der Hintergliedmaße, um die distale Oberschenkelarterie freizulegen. Bewegen Sie das Unterhautgewebe vorsichtig zur Seite, um das neurovaskuläre Bündel freizulegen. Sezieren Sie die Oberschenkelarterie von der Oberschenkelvene und dem Oberschenkelnerv und verwenden Sie Baumwolle, um den Nerv zu schützen.

Dann mit der Spitze einer 7.0-Naht die Membran der Femurscheide durchbohren. Führen Sie zwei 7-0 resorbierbare Nähte durch die distale Oberschenkelarterie und machen Sie doppelte Knoten mit der Federschere, um die Oberschenkelarterie zwischen zwei Bindungen zu durchschneiden. Anschließend nähen Sie den Schnitt mit den 6-0 resorbierbaren Nähten.

Legen Sie die Maus auf ein Heizkissen in einem sauberen Käfig und überwachen Sie ihre Vitalparameter bis zur Genesung. Bestimmen Sie den Erfolg der Doppelligatur der Oberschenkelarterie oder DLFA am nächsten Tag über MRT. Vor dem DLFA-Verfahren lagen die Gewichte der Mäuse zwischen 29,6 und 38,0 Gramm.

Sieben Tage nach der DLFA-Operation lagen die Gewichte zwischen 26,5 und 34,1 Gramm, deutlich niedriger als die Gewichte vor DLFA. Die proximalen und distalen Regionen der rechten FA zeigten keine Perfusion. Die Ergebnisse der Tarlov-Skala waren einen Tag nach der Operation signifikant erniedrigt.

Obwohl sie in den folgenden Tagen langsam zunahmen, waren sie bis zum siebten Tag immer noch niedriger als der Ausgangswert. Die Pfoten der ischämischen Hinterbeine bei sieben Mäusen konnten sich im Vergleich zur kontralateralen Seite nicht auf natürliche Weise dehnen. Darüber hinaus zeigten vier der Mäuse eine leichte Verfärbung der Pfoten im Vergleich zur kontralateralen Seite.

Die H & E-Färbung des rechten GM-Muskels zeigte Myofiber, die eine unregelmäßige ischämische Nekrose aufwiesen, bei der proliferierende Satellitenzellen die nekrotischen Myofiber ersetzt hatten und in einer Masse oder mit einer regelmäßigen Dispersion verteilt waren. Myofiber, die eine entzündliche Infiltration durch mehrkernige Makrophagen aufwiesen, hatten ihre normalen morphologischen Eigenschaften verloren, wobei nur sehr wenige regenerierte Myofiber vorhanden waren. Querteile dieser regenerierten Myofiber waren rund.

Das Zytoplasma war rot gefärbt und ein kleiner Kern oder mehrere Kerne befanden sich in der Mitte. Diese Art von Entzündungsmuster wurde jedoch bei der linken GM nicht beobachtet. Die CD31-Antikörperfärbung, die zur Beobachtung der mikrovaskulären Dichte durchgeführt wurde, zeigte, dass ischämische Hintergliedmaßen signifikant mehr mikrovaskuläre Dichte aufwiesen als die nicht-ischämische Seite. Das Wichtigste ist die Dissektion der Oberschenkelarterie.

Der Bediener muss Erfahrung in mikrochirurgischen Techniken haben und mit der Anatomie der Maus im Hinterteil vertraut sein. Prinzipiell könnte diese Methode auch zur Untersuchung von Ischämie-Reperfusionsverletzungen im Bein eingesetzt werden. Dabei kann die Arterie mit einer weichen Gefäßklemme verschlossen werden, bevor eine Reperfusion zugelassen wird.