Name: Isolierung humaner primärer Klappenzellen für die In-vitro-Krankheitsmodellierung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-16T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Lernen Sie die Isolierung humaner primärer Klappenzellen für die In-vitro-Modellierung der kalzifizierenden Aortenklappenstenose. Dieses Protokoll gewährleistet hohe Zellviabilität und spezifische Phänotypen.

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Wir danken Jason Dobbins für die aufschlussreiche Diskussion und kritische Lektüre dieses Manuskripts. Wir möchten dem Center for Organ Recovery and Education für seine Hilfe und Unterstützung danken und danken den Gewebespendern und ihren Familien, die diese Studie ermöglicht haben. Alle Patientenproben stammen von Personen, die an Studien teilnehmen, die vom institutionellen Prüfungsausschuss der Universität Pittsburgh in Übereinstimmung mit der Deklaration von Helsinki genehmigt wurden. Leichengewebe, das über das Center for Organ Recovery and Education (CORE) gewonnen wurde, wurde vom University of Pittsburgh Committee for Oversight of Research and Clinical Training Involving Decedents (CORID) genehmigt.
Einige Figuren, die mit Biorender.com erstellt wurden.
CSH wird vom National Heart, Lung and Blood Institute K22 HL117917 und R01 HL142932, der American Heart Association 20IPA35260111 unterstützt.

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IS erhält institutionelle Forschungsunterstützung von Atricure und Medtronic und fungiert als Berater für Medtronic Vascular. Keiner dieser Konflikte steht im Zusammenhang mit dieser Arbeit. Alle anderen Autoren haben nichts offenzulegen.

Die Gewinnung von Kontroll- und Krankheitsgewebe vom Menschen ist entscheidend für die In-vitro- und Ex-vivo-Krankheitsmodellierung. Während man jedoch oft über die Herausforderungen spricht, die Lücke zwischen Bank und Krankenbett zu überbrücken, ist die umgekehrte Reihenfolge - vom OP-Raum zur Bank - oft genauso entmutigend. Wesentlich für einen Grundlagenwissenschaftler, um primäre menschliche Gewebeproben zu erhalten, ist eine Zusammenarbeit mit einem investierten Chirurgenwissenschaftler, der über ein Team von Krank...

Die kalzifische Aortenklappenerkrankung (CAVD) ist eine chronische Pathologie, die durch Entzündung, Fibrose und Makroverkalzifizierung von Aortenklappenflügeln gekennzeichnet ist. Ein fortschreitender Umbau und eine Verkalkung der Blättchen (Aortensklerose genannt) kann zur Behinderung des Blutflusses (Aortenstenose) führen, was zum Schlaganfall beiträgt und zu Herzversagen führt. Derzeit ist die einzige Behandlung für CAVD der chirurgische oder Transkatheter-Aortenklappenersatz (SAVR bzw. TAVR). Es gibt keine nicht-chirurgische Möglichkeit, die CAVD-Progression zu stoppen oder umzukehren, und ohne Klappenersatz nähern sich die Sterblichkeitsraten innerhalb von 2-3 Jahren 50% 1,2,3. Die Definition der zugrunde liegenden Mechanismen, die dieser Pathologie zugrunde liegen, wird potenzielle neue therapeutische Ansätze identifizieren.
Bei einem gesunden Erwachsenen sind die Aortenklappenflügel etwa einen Millimeter dick und ihre Hauptfunktion besteht darin, den unidirektionalen Blutfluss aus dem linken Ventrikel aufrechtzuerhalten4. Jedes der drei Blättchen besteht aus einer Schicht von Klappendothelzellen (VECs), die die äußere Oberfläche des Blattes auskleidet und als Barriere fungiert. VECs halten die Klappenhomöostase aufrecht, indem sie die Permeabilität, die entzündliche Zelladhäsion und die parakrine Signalisierung regulieren 5,6,7. Klappeninterstitielle Zellen (VICs) umfassen die Mehrheit der Zellen innerhalb des Klappenblattes8. VICs sind in drei unterschiedlichen Schichten in der Packungsbeilage angeordnet. Diese Schichten sind als Ventricularis, Spongiosa und Fibrosa9 bekannt. Die Ventricularis ist dem linken Ventrikel zugewandt und enthält Kollagen- und Elastinfasern. Die mittlere Schicht, die Spongiosa, enthält einen hohen Proteoglykangehalt, der während des Herzzyklus für Scherflexibilität sorgt. Die äußere Fibrosaschicht befindet sich in der Nähe der Ausflussoberfläche auf der Aortenseite und ist reich an fibrillärem Kollagen Typ I und Typ III, das Kraft zur Aufrechterhaltung der Koaptation während der Diastole10,11,12 bietet. VICs befinden sich in einem Ruhezustand, jedoch können Faktoren wie Entzündungen, Umbau der extrazellulären Matrix (ECM) und mechanischer Stress die VIC-Homöostase 8,9,13,14,15,16 stören. Mit Verlust der Homöostase aktivieren und erwerben VICs einen myofibroblastenähnlichen Phänotyp, der zur Proliferation, Kontraktion und Sekretion von Proteinen fähig ist, die das extrazelluläre Millieu17 umgestalten. Aktivierte VICs können in kalzifizierende Zellen übergehen, was an die Differenzierung einer mesenchymalen Stammzelle (MSC) in einen Osteoblasten 15,17,18,19,20,21,22,23,24,25 erinnert.
Die Verkalkung scheint in der kollagenreichen Fibrosaschicht durch Beiträge von VECs und VICs zu beginnen, dehnt sich jedoch aus und dringt in die anderen Schichten des Blättchensein 8. So ist es klar, dass sowohl VECs als auch VICs auf Reize reagieren, um die Expression osteogener Gene hochzuregulieren, aber die genauen Ereignisse, die die Aktivierung osteogener Gene vorantreiben, sowie das komplexe Zusammenspiel zwischen den Zellen und der extrazellulären Matrix des Blättchens bleiben unklar. Murine Modelle sind keine ideale Quelle, um nicht-genetische Treiber der CAVD-Pathogenese zu untersuchen, da Mäuse kein CAVD de novo26,27 entwickeln, daher ist die Verwendung von primärem menschlichem Gewebe und den aus diesen Geweben isolierten primären Zelllinien notwendig. Insbesondere ist es unerlässlich, diese Zellen in hoher Anzahl und guter Qualität zu erhalten, da sich das Feld der 3D-Zellkulturen und der Organoidmodellierung erweitert und wahrscheinlich zu einer ex vivo humanbasierten Alternative zu Mausmodellen wird.
Der Zweck der vorliegenden Methode besteht darin, einen Workflow zu teilen, der die Bedingungen für die effiziente Isolierung und Züchtung von VECs und VICs, die aus chirurgisch entfernten Ventilen von menschlichen Spendern gewonnen werden, geschaffen hat. Frühere Studien haben eine erfolgreiche Isolierung von VECs und VICs aus Schweineklappen28 und murinen Klappen29 gezeigt, nach unserem Wissen ist dies die erste, die die Isolierung dieser Zellen in menschlichem Gewebe beschreibt. Das hier beschriebene Protokoll ist auf menschliche herausgeschnittene Klappen anwendbar und umgeht und verbessert den Schaden, der durch die oft lange Beschaffungszeit zwischen der Gewebeentfernung und der Laborverarbeitung verursacht wird, erheblich, indem es die Verwendung einer Kühllagerlösung einführt, einer gepufferten Lösung, die klinisch bei Organtransplantationen verwendet wird und die Zellen des ausgeschnittenen Gewebes stark stabilisiert. Das hier beschriebene Protokoll zeigt auch, wie der Zellphänotyp bestimmt und eine hohe Effizienz des Zellüberlebens bei minimaler Zellkreuzkontamination gewährleistet werden kann.

<table><tbody><tr><td>0,45 &mu; m Filter</td><td>Thermo Scientific</td><td>7211345</td><td>Präparationsplatte mit Kollagenbeschichtung</td></tr><tr><td>10 cm Zellkulturplatte</td><td>Greiner Bio-One</td><td>664160</td><td>Zellkultur-/Zelllinienerweiterung</td></tr><tr><td>10 mL serologische Pipette</td><td>Fisher</td><td>14955234</td><td>VEC/VIC Isolierung, Zellkultur, Zelllinienerweiterung</td></tr><tr><td>1000 &mu; L-Filterspitzen</td><td>VWR</td><td>76322-154</td><td>Zellkultur-/Zelllinienerweiterung</td></tr><tr><td>10XL Filterspitzen</td><td>VWR</td><td>76322-132</td><td>Zellkultur-/Zelllinienerweiterung</td></tr><tr><td>15 mL konische Röhrchen</td><td>Thermo Scientific</td><td>339650</td><td>Gewebelagerung, VIC/VEC-Isolierung</td></tr><tr><td>16 % wässrige Paraformaldehyd-Lösung</td><td>Elektronenmikroskopie Sciences</td><td>15710S</td><td>Gewebe- und Zellfixiermittel</td></tr><tr><td>190 proof ethanol</td><td>Decon</td><td>2801</td><td>Desinfektion</td></tr><tr><td>1x DPBS: kein Kalzium, kein Magnesium</td><td>Gibco</td><td>14190250</td><td>Kochsalzlösung. VIC/VEC Isolierung</td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Fisher</td><td>BP2944100</td><td>Kochsalzlösung. Gewebeaufbereitung, VIC/VEC Isolierung</td></tr><tr><td>20 &mu; L Filterspitzen</td><td>VWR</td><td>76322-134</td><td>Zellkultur-/Zelllinienerweiterung</td></tr><tr><td>200 Proof Ethanol</td><td>Decon</td><td>2701</td><td>Entparaffinierung von Gewebeproben</td></tr><tr><td>2-Propanol</td><td>Fisher</td><td>A416P 4</td><td>Herstellung von kollagenbeschichteten Platten</td></tr><tr><td>5 mL serologische Pipette</td><td>Fisher</td><td>14955233</td><td>VEC/VIC-Isolierung, Zellkultur, Zelllinienerweiterung</td></tr><tr><td>50 mL konische Röhrchen</td><td>Thermo Wissenschaftliche</td><td>339652</td><td>Gewebelagerung, VIC/VEC-Isolierung</td></tr><tr><td>60-mm-Schale</td><td>GenClone</td><td>25-260</td><td>VEC-Isolierung</td></tr><tr><td>6-Well-Zellkulturplatte</td><td>Corning</td><td>3516</td><td>Zellkultur-/Zelllinienerweiterung</td></tr><tr><td>Essigsäure, Gletscher</td><td>Fisher</td><td>BP2401 500</td><td>Herstellung von kollagenbeschichteten Platten</td></tr><tr><td>AlexaFluor 488 Phalloidin</td><td>Invitrogen</td><td>A12379</td><td>Fluoreszierend f-actin Gegenfärbung</td></tr><tr><td>Belzer UW Cold Storage Transplant Solution</td><td>Bridge to Life</td><td>BUW0011L</td><td>Gewebespeicherlösung</td></tr><tr><td>Rinderserum Albumin, Fraktion V - Fettsäurefrei 25g</td><td>Bioworld</td><td>220700233</td><td>VEC Bestätigung mit CD31+ Dynabeads</td></tr><tr><td>Calponin 1 Antikörper&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab46794</td><td>Primärer Antikörper (VIC-positiver Farbstoff)</td></tr><tr><td>CD31 (PECAM-1) (89C2)</td><td>Cell Signaling</td><td>3528</td><td>Primärer Antikörper (VEC-positiver Farbstoff)</td></tr><tr><td>CD31+ Dynabeads</td><td>Invitrogen</td><td>11155D</td><td>VEC-Bestätigung mit CD31+ Dynabeads</td></tr><tr><td>CDH5</td><td>Cell Signaling</td><td>2500</td><td>Primärer Antikörper (VEC-positiver Farbstoff)</td></tr><tr><td>Zellsieb mit 0,70 &mu; m Poren</td><td>Corning</td><td>431751</td><td>VIC Isolierung</td></tr><tr><td>Kollagen 1, Rattenschwanzprotein</td><td>Gibco</td><td>A1048301</td><td>Herstellung von kollagenbeschichteten Platten</td></tr><tr><td>Kollagenase II</td><td>Worthington Biochemical Corporation</td><td>LS004176</td><td>Gewebeverdauung. Gewebeaufbereitung, VIC/VEC-Isolierung</td></tr><tr><td>Conflikt Gebrauchsfertiges Desinfektionsspray</td><td>Decon</td><td>4101</td><td>Desinfektion</td></tr><tr><td>Countess II Automatisierter Zellzähler</td><td>Invitrogen</td><td>A27977</td><td>Automatisierter Zellzähler</td></tr><tr><td>Countess II wiederverwendbare Objektträger</td><td>Invitrogen</td><td>2026h</td><td>Automatisierter Zellzähler erforderlicher Objektträgerdeckel</td></tr><tr><td>Deckgläser</td><td>Fisher</td><td>125485E</td><td>Einbetten von Ventilproben</td></tr><tr><td>Kryogene Fläschchen</td><td>Olympus Plastics</td><td>24-202</td><td>Einfrieren von Zell-/Gewebeproben</td></tr><tr><td>Desinfizierendes Bleichmittel mit CLOROMAX - Konzentrierte Formel&nbsp;</td><td>Clorox</td><td>N/A</td><td>Desinfektion</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>10569044</td><td>Wachstumsmedien. VIC-Expansion</td></tr><tr><td>EBM - Endotheliales Zellmedium, Basalmedium, Phenolrotfrei 500</td><td>Lonza Walkersville</td><td>CC3129</td><td>Wachstumsmedien. VEC-Expansion</td></tr><tr><td>EGM-2 Endothelzelle Medium-2 - 1 Kit SingleQuot Kit</td><td>Lonza Walkersville</td><td>CC4176</td><td>Nahrungsergänzungsmittel für Wachstumsmedien. VEC-Expansion</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EVOS FL Mikroskop</td><td>Life Technologies</td><td>Modellnummer: AME3300</td><td>Fluoreszenzbildgebung</td></tr><tr><td>EVOS XL Mikroskop</td><td>Life Technologies</td><td>AMEX1000</td><td>Visualisierung von Zellen während der Zelllinienexpansion</td></tr><tr><td>Fötales Kälberserum - Premium Select</td><td>R& D Systems</td><td>S11550</td><td>VIC-Expansion</td></tr><tr><td>Feine Schere</td><td>Fine Science Tools</td><td>14088-10</td><td>Gewebeaufbereitung, VIC/VEC-Isolierung</td></tr><tr><td>Fisherbrand Zellschaber</td><td>Fisher</td><td>08-100-241</td><td>VIC-Expansion</td></tr><tr><td>Fungizone</td><td>Gibco</td><td>15290-026</td><td>Antimykotikum: Gewebeaufbereitung, VIC/VEC-Isolierung</td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Gibco</td><td>15710-064</td><td>Antibiotikum: Gewebevorbereitung, VIC/VEC-Isolierung</td></tr><tr><td>Objektträger Objektträger</td><td>Globe Scientific Inc</td><td>1358L</td><td>Montage Ventilproben</td></tr><tr><td>Ziege Anti-Maus 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11001</td><td>Fluoreszierender Sekundärantikörper</td></tr><tr><td>Ziege Anti-Maus 594</td><td>Invitrogen</td><td>A11005</td><td>Fluoreszierender Sekundärantikörper</td></tr><tr><td>Ziege Anti-Kaninchen 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td>Fluoreszierend Sekundärer Antikörper</td></tr><tr><td>Ziege Anti-Kaninchen 594</td><td>Invitrogen</td><td>A11012</td><td>Fluoreszierender Sekundärantikörper</td></tr><tr><td>Invitrogen Countess II FL Wiederverwendbarer Objektträger</td><td>Invitrogen</td><td>A25750</td><td>Automatisierter Zellzähler erforderlicher Objektträger</td></tr><tr><td>Invitrogen NucBlue Fixed Cell ReadyProbes Reagenz (DAPI)</td><td>Invitrogen</td><td>R37606</td><td>Fluoreszierender Zellkern-Gegenfärbemittel</td></tr><tr><td>LM-HyCryo-STEM - 2X Kryokonservierungsmedien für Stammzellen</td><td>HyClone Laboratories, Inc.</td><td>SR30002</td><td>Lagerung von gefrorenen Zellen</td></tr><tr><td>Eindeckmedium</td><td>Fisher Chemical Permount</td><td>SP15-100</td><td>Einbettung von Proben</td></tr><tr><td>mit Ventil Mr. Frosty Gefrierbehälter</td><td>Nalgene</td><td>51000001</td><td>Behälter für kontrolliertes Einfrieren von Proben</td></tr><tr><td>Mycoplasma-ExS Spray</td><td>PromoCell</td><td>PK-CC91-5051</td><td>Desinfektion</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140163</td><td>Antibiotikum. VIC-Expansion</td></tr><tr><td>Plasmocin</td><td>Invivogen</td><td>ANTMPT</td><td>Anti-Mykoplasmen. VIC/VEC-Isolierung und -Expansion</td></tr><tr><td>SM22a-Antikörper</td><td>Abcam</td><td>ab14106</td><td>Primärer Antikörper (VIC-positiver Farbstoff)</td></tr><tr><td>Schere mit Standardmuster</td><td>Fine Science Tools</td><td>14001-14</td><td>Gewebevorbereitung, VIC/VEC-Isolierung</td></tr><tr><td>Steriles Wattestäbchen</td><td>Puritan</td><td>25806 10WC</td><td>VEC-Isolierung</td></tr><tr><td>Swingsette Kassette für menschliches Gewebe</td><td>Simport Scientific</td><td>M515-2</td><td>Behälter für die Gewebeeinbettung</td></tr><tr><td>Taylor Forceps (17cm)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11016-17</td><td>Gewebevorbereitung, VIC/VEC-Isolierung</td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution, 0,4%</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td>Zellzähllösung</td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzym</td><td>Gibco</td><td>12604021</td><td>Spaltung von VIC/VECs</td></tr><tr><td>Von Kossa Kit</td><td>Polysciences</td><td>246331</td><td>Färben von Paraffinschnitten von Geweben zur Verkalkung</td></tr><tr><td>von-Willebrand-Faktor-Antikörper</td><td>Abcam</td><td>ab68545</td><td>Primärantikörper (VEC-positiver Farbstoff)</td></tr><tr><td>Xylole</td><td>Fisher Chemical</td><td>X3S-4</td><td>Entparaffinisierende Gewebeproben</td></tr><tr><td>&alpha;SMA-Antikörper</td><td>Abcam</td><td>ab7817</td><td>Primärantikörper (VIC-positiver Farbstoff)</td></tr></tbody></table>

isolierung humaner primärer klappenzellen für die in-vitro-krankheitsmodellierung

Isolation of Human Primary Valve Cells for In vitro Disease Modeling

Die kalzifische Aortenklappenerkrankung (CAVD) ist bei fast einem Drittel der älteren Bevölkerung vorhanden. Verdickung, Versteifung und Verkalkung der Aortenklappe verursacht Aortenstenose und trägt zu Herzinsuffizienz und Schlaganfall bei. Die Krankheitspathogenese ist multifaktoriell, und Belastungen wie Entzündungen, extrazelluläres Matrixumbau, turbulenter Fluss und mechanische Belastung und Belastung tragen zur osteogenen Differenzierung von Klappendothel- und Klappeninterstitialzellen bei. Die genauen auslösenden Faktoren, die den osteogenen Übergang einer gesunden Zelle in eine kalzifizierende Zelle vorantreiben, sind jedoch nicht vollständig definiert. Weiterhin ist die einzige aktuelle Therapie bei CAVD-induzierter Aortenstenose der Aortenklappenersatz, bei dem die native Klappe entfernt wird (chirurgischer Aortenklappenersatz, SAVR) oder eine vollständig zusammenklappbare Ersatzklappe über einen Katheter eingeführt wird (Transkatheter-Aortenklappenersatz, TAVR). Diese chirurgischen Eingriffe sind mit hohen Kosten und ernsthaften Risiken verbunden. Daher ist die Identifizierung neuer therapeutischer Ziele für die Wirkstoffforschung unerlässlich. Zu diesem Zweck entwickelt die vorliegende Studie einen Workflow, bei dem chirurgisch entferntes Gewebe von Patienten und Spenderkadavergewebe verwendet werden, um patientenspezifische primäre Linien von Herzklappenzellen für die In-vitro-Krankheitsmodellierung zu erstellen. Dieses Protokoll führt die Verwendung einer Kühllagerlösung ein, die üblicherweise bei Organtransplantationen verwendet wird, um die Schäden zu reduzieren, die durch die oft lange Beschaffungszeit zwischen der Gewebeentfernung und der Laborverarbeitung verursacht werden, mit dem Vorteil, dass die Zellen des herausgeschnittenen Gewebes stark stabilisiert werden. Die Ergebnisse der vorliegenden Studie zeigen, dass isolierte Klappenzellen ihre proliferative Kapazität und endothelialen und interstitiellen Phänotypen in Kultur über mehrere Tage nach der Klappenentfernung vom Spender behalten. Die Verwendung dieser Materialien ermöglicht die Sammlung von Kontroll- und CAVD-Zellen, aus denen sowohl Kontroll- als auch Krankheitszelllinien gebildet werden.

Das obige Protokoll beschreibt die Schritte, die für den Umgang mit menschlichem Klappengewebe und die Isolierung und Etablierung lebensfähiger Zelllinien aus diesen Geweben erforderlich sind. Leaflets der Aortenklappe werden zur Paraffineinbettung verarbeitet, für die Langzeitlagerung für biochemische oder genetische Analysen eingefroren und zur Isolierung von VECs und VICs verdaut (Abbildung 1). Während chirurgische Proben wahrscheinlich eine klinische Diagnose einer Aortenstenose haben un...

Dieses Protokoll beschreibt die Entnahme menschlicher Aortenklappen, die während chirurgischer Aortenklappenersatzverfahren oder aus Leichengewebe extrahiert werden, und die anschließende Isolierung, Expansion und Charakterisierung patientenspezifischer primärer Klappenendothel- und interstitieller Zellen. Enthalten sind wichtige Details zu den Prozessen, die erforderlich sind, um die Zelllebensfähigkeit und Phänotypspezifität sicherzustellen.

Isolierung humaner primärer Klappenzellen für die In-vitro-Krankheitsmodellierung

Calcific aortic valve disease (CAVD) is present in nearly a third of the elderly population. Thickening, stiffening, and calcification of the aortic valve ...

Die Isolierung humaner primärer Klappendothel- und interstitieller Zellen ist entscheidend für das Verständnis des zugrunde liegenden Mechanismus der Pathogenese der kalzifischen Aortenklappenerkrankung. Wenn die Klappe aus dem nativen Gewebe herausgeschnitten wird, sinkt die Zelllebensfähigkeit. Wir haben also eine Methode identifiziert, die die Zelllebensfähigkeit verlängert.Nach Erhalt der extrahierten Klappengewebeproben extrahieren Sie die Aortenwurzel und tauchen das Gewebe in ein 50-Milliliter-konisches Röhrchen mit steriler Spüllösung. Nach einer 10-minütigen Inkubation in einem Eiskübel auf einer Wippe die Röhrchen mit 70% Ethanol besprühen. In einer sterilen Gewebekulturhaube das Gewebe in eine Petrischale geben und zwei Klappenflügel herausschneiden.Geben Sie ein Blättchen in eine kryogene Durchstechflasche und frieren Sie das Gewebe in flüssigem Stickstoff für minus 80 Grad Celsius ein. Um das Gewebe für die Färbung des Kalziumgehalts zu fixieren, schneiden Sie das zweite Blättchen von Knötchen zu Scharnier in zwei Hälften und legen Sie beide Gewebestücke in eine Kassette, die in 4% Paraformaldehyd getaucht ist. Stellen Sie dann das gesamte Setup für mindestens zwei, ab

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Wir stellen eine Methode zur Isolierung und Kultivierung von reinen Populationen von Herzklappen-Endothelzellen (VEC). VEC von beiden Seiten der Höcker oder Prospekt isoliert werden können und unmittelbar nach ist zugrundeliegenden interstitiellen Zellen (VIC) Isolierung einfach.

Isolierung von Valvular Endothelzellen

Dieser Artikel wird eine Methode zur Isolierung und Kultivierung von Wachteln oder Huhn...

Isolierung und Kultivierung von Avian Embryonale Valvular Progenitorzellen

In diesem Video demonstrieren wir die Isolierung von interstitiellen Zellen der Aortenklappe aus dem Herzen einer erwachsenen Maus mit einem zweistufigen Kollagenase-Verfahren und deren anschließende Kultivierung in einem geringen Volumen an Wachstumsmedien.

Isolierung von interstitiellen Zellen der Mausklappe: Eine enzymatische Methode zur Isolierung und Kultivierung von VICs aus der Aortenklappe der Maus

Die Fähigkeit, Herzklappen-Endothelzellen (VECs) zu isolieren, ist entscheidend für das Verständnis der Mechanismen der Klappenentwicklung, -erhaltung und -erkrankung.  Hier beschreiben wir die Isolierung von VECs aus embryonalen und adulten Tie2-GFP-Mäusen mittels FACS, die Studien zur Bestimmung des Beitrags von VECs zu Entwicklungs- und Krankheitsprozessen ermöglichen wird.

Isolierung von murinen Ventil Endothelzellen

Hier präsentieren wir ein ex vivo Strömungsmodell, in dem murine Herzklappen kultiviert werden können, was das Studium der Biologie der Klappe ermöglicht.

Kultivierung von Maus-Herzklappen in der Miniatur-Gewebekultursystem

Dieses Protokoll beschreibt die Isolierung, die Kultur und die Verkalkung der Ratte abgeleitet Ventil interstitiellen Zellen, ein höchst physiologischen in Vitro Modell der Schulterarthrose Aortenklappe Krankheit (CAVD). Ausbeutung von diesem Rattenmodell erleichtert die CAVD Forschung in der Erforschung der Zelle und der molekularen Mechanismen, die diese komplexen Krankheitsgeschehen zugrunde liegen.

Isolierung und Charakterisierung von primären Ratte Ventil interstitielle Zellen: ein neues Modell zur Verkalkung der Aortenklappe

In dieser Studie beschreiben wir den Prozess der T-Lymphozyten-Isolierung aus frischen Proben verkalkter Aortenklappen und die analytischen Schritte des T-Zell-Klonens zur Charakterisierung der adaptiven Leukozyten-Untergruppen unter Verwendung der Durchflusszytometrie-Analyse.

Untersuchung der Aortenklappenverkalkung durch Isolierung und Kultur von T-Lymphozyten unter Verwendung von Feederzellen aus bestrahltem Buffy-Fell

Dieser Artikel beschreibt die Isolierung von Aortenklappenzellen der Maus durch ein zweistufiges Kollagenase-Verfahren. Isolierte Mausklappenzellen sind wichtig für die Durchführung verschiedener Assays, wie diesen In-vitro-Verkalkungsassay, und für die Untersuchung der molekularen Wege, die zur Aortenklappenmineralisierung führen.

Isolierung von interstitiellen Klappenzellen der Maus zur Untersuchung der Verkalkung der Aortenklappe in vitro

Dieser Beitrag beschreibt eine explantationskulturbasierte Methode zur Isolierung und Kultivierung primärer, patientenspezifischer humaner Aortenglattmuskelzellen und dermaler Fibroblasten. Weiterhin wird eine neuartige Methode zur Messung der Zellkontraktion und anschließenden Analyse vorgestellt, mit der patientenspezifische Unterschiede in diesen Zellen untersucht werden können.

Isolierung primärer patientenspezifischer glatter Aortenmuskelzellen und semiquantitative Echtzeit-Kontraktionsmessungen in vitro

Primäre Hepatozyten ein wertvolles Instrument, um biochemische, molekulare und metabolische Funktionen in einem physiologisch relevanten experimentellen Systems zu evaluieren. Wir beschreiben ein zuverlässiges Protokoll für Ratte in situ Leberperfusion, die konsequent erzeugt lebensfähigen Hepatozyten bis bis 1,0 ×...

Isolierung und Primärkultur von Ratten Leberzellen

Lernen Sie die Isolierung humaner primärer Klappenzellen für die In-vitro-Modellierung der kalzifizierenden Aortenklappenstenose. Dieses Protokoll gewährleistet hohe Zellviabilität und spezifische Phänotypen.

Isolierung humaner primärer Klappenzellen für die In-vitro-Krankheitsmodellierung

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