Ein einstellbares Hochauflösendes Bildgebungssystem für Verhaltensstudien von Drosophila Erwachsenen

Aufgrund seiner unbeholfenen Größe ist Drosophila schwer abbildend. Diese Methode demonstriert die Abbildung des Verhaltens und der Morphologie von Fliegen durch den Einsatz eines Stereomikroskops. Dieses Protokoll kann sowohl für die wissenschaftliche Forschung als auch für die Lehre verwendet werden.

Demonstrieren wird das Verfahren Ms.Li Tong und Frau Weng Yujia, Studenten, die unter meiner Anleitung eine Forschungsausbildung absolvieren. Machen Sie zunächst eine Fliegenverhaltensbeobachtungskammer (FBOC) mit einem transluzenten Plastikflaschenverschluss von etwa 17 x 22 Millimetern oder durch Schneiden eines Abschnitts von 17 Millimetern vom dicken Ende einer fünf Milliliter Pipettenspitze. Gießen Sie 1% Agar in den FBOC, um seine Tiefe einzustellen.

Wenn Nahrung in das FBOC gegeben werden muss, gießen Sie das Agar, um eine Tiefe von 12 Millimetern zu erhalten. Wenn das Futter nicht in das FBOC gegeben werden muss, gießen Sie das Agar bis zu einer Tiefe von fünf Millimetern, um den Verbleib von Fruchtfliegen leichter zu verfolgen. Wenn Sie eine Pipettenspitze verwenden, um ein FBOC herzustellen, legen Sie den Abschnitt der Abgeschnittenpipettenspitze in eine 35- oder 60-Millimeter-Petrischale.

Gießen Sie das 1% Agargel in die Petrischale auf eine Dicke von etwa fünf Millimetern und warten Sie, bis das Agar erstarrt ist und den Boden des FBOC versiegelt. Dann gießen Sie das Agargel in das FBOC auf die gewünschte Dicke. Machen Sie eine FBOC-Basis, indem Sie ein 10 Millimeter tiefes Loch in der Mitte eines Stücks Ethylaminschaumplatte mit dem gleichen Durchmesser wie das FBOC bohren.

Setzen Sie das FBOC in das Loch ein. Machen Sie Fliegenfutter bei Bedarf mit Hefemedium, künstlicher Diät oder reiner Saccharose oder Glukose, abhängig vom Zweck der Beobachtung. Um visuell festzustellen, ob Fliegen füttern, fügen Sie dem Futter Lebensmittelfarbstoffe bis zu einer Endkonzentration von 12,5 Milligramm pro 100 Milliliter hinzu.

Gießen Sie das zubereitete Essen in eine Petrischale auf eine Höhe von acht Millimetern. Nach der Erstarrung legen Sie das Futter auf ein rechteckiges, auf Papier gezeichnetes Futter und schneiden Sie das Futter entsprechend und legen Sie es auf ein Stück Plastik und schneiden Sie es in eine viereckige Pyramide oder viereckige Frustumpyramide, um das Fliegenverhalten aus verschiedenen Winkeln zu erfassen, wenn die Fliegen auf dem Futter landen. Schneiden Sie ein Stück Plastik und verwenden Sie eine Pinzette, um den Kunststoff und das Essen in die Mitte des FBOC zu stellen.

Gießen Sie 1% Agargel in eine saubere leere Flasche mit einer Dicke von 1-2 Zentimetern und stellen Sie es für 1-2 Stunden auf Raumtemperatur. Übertragen Sie die Fliegen in die Flasche und stellen Sie sie für 36 Stunden oder länger bei 25 Grad Celsius auf. Kühlen und inaktivieren Sie die Fliegen in Crushed Ice, sortieren Sie sie auf einem Eisbeutel und übertragen Sie sie wie zuvor beschrieben in das FBOC.

Nachdem Sie die Fliegen auf das FBOC übertragen haben, bedecken Sie es mit 30-40 Millimetern UV oder einem klaren Filter, damit die Kamera einen FBOC-Komplex bildet. Legen Sie den FBOC-Komplex zur Beobachtung unter das Stereomikroskop. Beleuchten Sie das FBOC.

Montieren Sie Mini-LED-Videoleuchten, um Blitzschuhhalterungen zu blinken, und platzieren Sie die Leuchten auf der linken und rechten Seite des FBOC. Schalten Sie die Lichter ein und stellen Sie die Farbtemperatur auf 5.000 bis 5, 600 Kelvin und die Helligkeit auf 100% ein Schalten Sie die LED-Videoleuchten ein und stellen Sie das Stereozoommikroskop ein, bis der Rand des FBOC mit bloßem Auge deutlich zu sehen ist. Verschieben Sie das FBOC in die Mitte des Sichtfelds.

Befestigen Sie die Klemme des Universalteleskop-Digitalkameraadapters an einem Okular des Stereomikroskops. Befestigen Sie dann eine kompakte Digitalkamera sicher am Adapter, indem Sie abwechselnd die Kamerabefestigungsschraube und die Kamerabefestigungsschraube drehen. Schalten Sie die Digitalkamera ein und drehen Sie die horizontalen/vertikalen Feinabstimmungsknöpfe, bis der FBOC-Rand deutlich in der Mitte des hellen kreisförmigen Sichtfelds auf dem LCD-Bildschirm der Kamera erscheint.

Drehen Sie das Modusrad in den automatischen Blendenprioritätsmodus. Drücken Sie den Fokusmodus auf dem Multiselektor, wählen Sie Makro-Nahaufnahme und drücken Sie dann die Taste OK. Bewegen Sie den Zoomschalter vom Weitwinkelende zum Teleende und zoomen Sie in das kreisförmige Bild, bis sein zentraler Teil den vollen LCD-Bildschirm ausfüllt.

Drücken Sie die Filmaufzeichnungstaste und beginnen Sie mit der Aufzeichnung des Fliegenverhaltens. Drehen Sie den Fokusknopf des Mikroskops, bis die Fliegen im FBOC deutlich sichtbar sind. Wählen Sie das Fliegenverhalten, das für die Beobachtung oder Videoaufzeichnung von Interesse ist.

Drehen Sie den Zoomknopf zum Vergrößern und Verkleinern, um die gewünschte Vergrößerung für die Beobachtung oder Videoaufnahme zu erreichen. Das repräsentative Foto, das durch den UV-Filter aufgenommen wurde, ist klar und scharf, sehr ähnlich dem Foto, das aufgenommen wurde, wenn die Kulturfläschchen nicht abgedeckt ist. Die Qualität des Fotos, das durch das Glas der Petrischale aufgenommen wurde, ist sehr schlecht und teilweise verschwommen.

Ein Foto aus der Videoaufnahme, das die Details jedes Teils des Körpers der Fliege zeigt, wird hier gezeigt. Da die Kamera an ein Zoom-Stereomikroskop angeschlossen ist, ist es sehr einfach, mit dem Zoom-System von Panorama- bis nahaufnahmen zu fotografieren. Mit diesem Protokoll kann das Fliegenverhalten für mehrere Betrachtungswinkel beobachtet und dokumentiert werden.

Zum Beispiel reibt die weibliche Fliege während des Eiablagens ständig den Ovipositor mit ihren Hinterbeinen. Dieses Detail des Eiablageverhaltens ist von der Seite nicht klar zu sehen. Mit dieser einfachen und wirtschaftlichen Methode können wir ein Panorama oder eine Nahaufnahme des Verhaltens und der Morphologie von Fliegen machen und ein Video oder Foto in guter Qualität erhalten.