Name: Basophiler Aktivierungstest zur Allergiediagnostik (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-05-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 22 s
Description: Erfahren Sie den basophilen Aktivierungstest zur Allergiediagnostik mit Durchflusszytometrie. Diese Methode ermöglicht die Analyse von IgE-vermittelten Reaktionen auf Arzneimittel und Allergene.

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Wir danken Claudia Corazza für ihre unschätzbare Unterstützung in englischer Sprache. Diese Arbeit wurde vom Institute of Health ''Carlos III'' (ISCIII) des MINECO unterstützt (Zuschuss kofinanziert durch EFRE: "Una manera de hacer Europa"; Fördernummern PI20/01715; PI18/00095; PI17/01410; PI17/01318; PI17/01237 und RETIC ARADYAL RD16/0006/0001; Andalusisches Regionalministerium für Gesundheit (Förder-Nr. PI-0127-2020, PIO-0176-2018; PE-0172-2018; PE-0039-2018; PC-0098-2017; PI-0075-2017; PI-0241-2016). ID ist ein klinischer Prüfarzt (B-0001-2017) und AA hat einen Senior Postdoc-Vertrag (RH-0099-2020), beide unterstützt vom andalusischen Regionalgesundheitsministerium (kofinanziert durch ESF: "Andalucía se mueve con Europa").

Die Protokolldurchführung wurde gemäß den Prinzipien der Deklaration von Helsinki durchgeführt und von der lokalen Ethikkommission (Comité de Ética para la Investigación Provincial de Málaga, Spanien) genehmigt. Alle Probanden wurden mündlich über die Forschungsstudie informiert und unterschrieben die entsprechende Einwilligungserklärung.
HINWEIS: Das vorliegende Protokoll beschreibt das BAT-Verfahren, das die Autoren täglich anwenden. Dies ist jedoch keine standardisierte Methode und es gibt Unterschiede zu Verfahren, die von anderen Autoren veröffentlicht wurden. Die wichtigsten Protokollmodifikationen beziehen sich auf die Verwendung von IL-3 im Stimulationspuffer, die Inkubationszeit mit dem Stimulus, die Methode zum Stoppen der basophilen Degranulation und die Durchflusszytometriestrategien. Darüber hinaus enthalten verschiedene kommerziell erhältliche Kits für BVT spezifische, vom Hersteller empfohlene Protokolle.
1. Probenvorbereitung
<ol><li>Sammeln Sie peripheres Blut in 9 ml heparinisierten Röhrchen und halten Sie die Probe bei Raumtemperatur (RT) in einem Rotor, bis sie für das experimentelle Protokoll erforderlich ist.</li>
	<li>Kennzeichnen Sie 5-ml-Zytometerröhrchen für Negativkontrollen (2 Röhrchen), Positivkontrollen (2 Röhrchen) und unterschiedliche Konzentrationen von Allergenen/Arzneimitteln (1 Röhrchen pro getesteter Allergen-/Arzneimittelkonzentration). Legen Sie die Schläuche in ein Gestell, wo die Schläuche perfekt passen, ohne zu verrutschen.</li>
	<li>Einen Stimulationspuffer in doppelt destilliertem Wasser herstellen, das 2% (v/v) HEPES, 78 mg/L NaCl, 3,7 mg/L KCl, 7,8 mg/L CaCl2, 3,3 mg/L MgCl2, 1 g/L HSA enthält. Stellen Sie den pH-Wert auf 7,4 ein und fügen Sie IL-3 bei 2 ng / ml hinzu. Normalerweise 100 ml vorbereiten und in 2,5 ml Aliquots teilen, um bei -20 °C eingefroren zu werden.</li>
	<li>Positivkontrollen in PBS-Tween-20 0,05% (v/v) (PBS-T): Positivkontrolle 1, N-Formylmethionyl-Leucyl-phenylalanin (fMLP) (4 μM), um die Qualität der Basophilen zu bestätigen; Positivkontrolle 2, Anti-IgE (0,05 mg/ml) als IgE-vermittelte Positivkontrolle.</li>
	<li>Bereiten Sie das Allergen / Medikament in PBS-T bei 2x der gewünschten Endkonzentration vor. ANMERKUNG: Die optimalen zu verwendenden Allergen-/Arzneimittelkonzentrationen müssen zuvor unter Verwendung eines breiten Konzentrationsbereichs, durch Dosis-Wirkungs-Kurven und durch Zytotoxizitätsstudien nach denselben Protokollschritten139 bestimmt werden.</li>
</ol>2. Zubereitung der Färbemischung
<ol><li>Geben Sie monoklonale Antikörper, die mit Fluorochrom markiert sind, nach der vom Hersteller empfohlenen Antikörperkonzentration oder durch vorherige Antikörpertitration in den Stimulationspuffer. In diesem Protokoll fügen wir 1 μL jedes Antikörpers hinzu (CCR3-APC und CD203c-PE zur basophilen Identifizierung; CD63-FITC zur basophilen Aktivierung)140 pro 20 μL Stimulationspuffer. HINWEIS: Schützen Sie die Zubereitung der Färbemischung vor Licht.</li>
	<li>Fügen Sie 23 μL Färbemischung zu jedem Röhrchen hinzu.</li>
</ol>3. Blutstimulation
<ol><li>Fügen Sie 100 μL PBS-T zu den Röhrchen 1 und 2 (Negativkontrolle), 100 μL fMLP zu Röhre 3, 100 μL Anti-IgE zu Röhre 4 und 100 μL der verschiedenen Allergen-/Arzneimittelkonzentrationen zu den folgenden Röhrchen hinzu. 10 min bei 37 °C in einem Thermostatbad mit mittlerem Rühren inkubieren, um Reagenzien vorzuwärmen.</li>
	<li>Fügen Sie vorsichtig 100 μL Blut in jedes Röhrchen hinzu, um Hämolyse zu vermeiden. Die Schläuche vorsichtig durchwirbeln und 25 min bei 37 °C in einem Thermostatbad mit mittlerem Rühren inkubieren.</li>
	<li>Stoppen Sie die Degranulation und halten Sie die Röhrchen mindestens 5 min bei 4 °C. HINWEIS: Das Protokoll kann hier bei 4 °C für 30-45 min pausiert werden, fallserforderlich 141,142,143.</li>
</ol>4. Erythrozyten lysieren
<ol><li>Fügen Sie 2 ml 1x Lysepuffer zu jedem Röhrchen hinzu, um Erythrozyten zu lysieren. Jedes Röhrchen vorvertreiben und 5 min bei RT inkubieren. HINWEIS: In diesem Schritt werden Zellen aufgrund von Fixiermitteln (Formaldehyd), die im Puffer enthalten sind, fixiert.</li>
	<li>Zentrifugieren bei 300 x g bei 4 °C für 5 min. Dekantieren Sie den Überstand und kippen Sie das Gestell in ein Waschbecken. Zellen verbleiben am Boden der Röhrchen.</li>
	<li>Fügen Sie 3 ml PBS-T zu jedem Röhrchen hinzu, um die Zellen zu waschen. Wirbeln Sie jede Röhre.</li>
	<li>Zentrifugieren bei 300 x g bei 4 °C für 5 min. Dekantieren Sie den Überstand und kippen Sie das Gestell in ein Waschbecken. HINWEIS: Bewahren Sie die Proben bis zur Erfassung des Durchflusszytometers bei 4 °C vor Licht geschützt auf.</li>
</ol>5. Erfassung der Durchflusszytometrie
<ol><li>Erfassen Sie Proben mit einem Durchflusszytometer (z. B. BD FACSCalibur Durchflusszytometer). Verbinden Sie das Durchflusszytometer mit der Computersoftware und warten Sie, bis das Zytometer bereit ist. Laden Sie die Vorlagen- und Geräteeinstellungen (Tabelle 1).</li>
	<li>Starten Sie die Probenerfassung.</li>
	<li>Verwenden Sie die folgenden Zytometerstrategien zur Auswahl aktivierter Basophiler139.<ol><li>Gate der Lymphozyten aus dem Diagramm Seitenstreuung (SSC) - Vorwärtsstreuung (FSC).</li>
		<li>Gate die Basophilen aus der Lymphozytenpopulation als CCR3+CD203c+ Zellen. Erwerben Sie mindestens 500 Basophile pro Röhre.</li>
		<li>Zeigen Sie ein CCR3 - CD63-Diagramm an, um die Aktivierung mit CD63 als Aktivierungsmarker zu analysieren. Stellen Sie den negativen Schwellenwert CD63 mit den negativen Kontrollröhrchen auf ca. 2,5% ein.</li>
		<li>Erfassen Sie alle Proben.</li>
	</ol></li>
</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

BAT ist ein ergänzender in-vitro-diagnostischer Test zur Beurteilung von IgE-vermittelten allergischen Reaktionen, der sich bei der Diagnose von Reaktionen, die durch verschiedene Auslöser wie Medikamente, Lebensmittel oder Inhalationsmittel ausgelöst werden, sowie bei einigen Formen chronischer Urtikaria als nützlich erwiesen hat. Im Allgemeinen sollte die BAT-Leistung in Betracht gezogen werden, wenn i) das Allergen/Arzneimittel falsch positive Ergebnisse bei ST liefert; ii) das Allergen/Arzneimittel steht nic...

Die IgE-vermittelte Allergiediagnose basiert auf der klinischen Anamnese, Hauttests (STs), der Quantifizierung von serumspezifischen IgE (sIgE) und, falls erforderlich und indiziert, kontrollierten Provokationstests (CCTs)1,2,3,4,5,6. Die klinische Anamnese kann jedoch unzuverlässig sein, da es an genauen Informationen mangeln kann und STs und CCTs keine risikofreien Verfahren sind, die bei Patienten mit schweren lebensbedrohlichen Reaktionen kontraindiziert werden können 1,2,3,4,5,6 . Diese Probleme, zusammen mit der Tatsache, dass die Bestimmung von sIgE durch validierte und kommerzielle Fluorenzym-Immunoassays nur für wenige Allergene und Medikamente verfügbar ist, haben die wichtige Rolle anderer funktioneller In-vitro-Assays wie dem Basophilenaktivierungstest (BAT) hervorgehoben.
Basophile sind wichtige Effektorzellen, die an IgE-vermittelten allergischen Reaktionen beteiligt sind, die bei Vernetzung benachbarter sIgE, die an hochaffine Rezeptoren (FcεRI) auf der Zelloberfläche gebunden sind, nach Allergen- / Arzneimittelexposition aktiviert werden. Die basophile Aktivierung löst die Zelldegranulation und Freisetzung von vorgeformten und neu synthetisierten Entzündungsmediatoren aus, die in intrazytoplasmatischen Sekretionsgranula 7,8,9 enthalten sind. BAT ist eine In-vitro-Methode, die versucht, die basophile Aktivierung in Gegenwart eines Stimulus (Allergen oder Arzneimittel) nachzuahmen und Veränderungen in der Expression basophiler Aktivierungsmarker durch Durchflusszytometrie 7,10 zu bestimmen. Es gibt verschiedene Strategien zur Identifizierung von Basophilen (IgE+, CCR3+, CRTH2+, CD203c+) und zur Messung der Zellaktivierung (hauptsächlich Hochregulierung von CD63 und CD203c) mit Kombinationen von fluorochrommarkierten Antikörpern 7,10. CD63, der beste klinisch validierte Aktivierungsmarker 11,12,13,14, ist ein Membranprotein, das an den sekretorischen Granula verankert ist, die Histamin enthalten, das nach Zellaktivierung und Fusion des Granulats mit der Membran auf der basophilen Oberfläche exprimiert wird 15,16,17,18,19,20,21 . CD203c ist ein Oberflächenmarker, der konstitutiv auf Basophilen exprimiert und nach FcεRI-Stimulation hochreguliert wird, was auch zuverlässige Ergebnisse in BAT 15,22,23,24,25 gezeigt hat. Außerdem scheint es mit CD6326 zu koexprimieren.
In den letzten Jahrzehnten hat sich BVT als nützlich bei der Diagnose von IgE-vermittelten allergischen Reaktionen erwiesen, die durch verschiedene Auslöser wie Medikamente, Nahrungsmittel oder Inhalationsmittel induziert werden, sowie bei einigen Formen der chronischen Urtikaria, wie unten beschrieben. Die Position dieser Technik in den Diagnosealgorithmen ist jedoch sehr variabel und nicht gut bestimmt.
Überempfindlichkeit gegen Medikamente BAT hat sich als ergänzender Test für ausgewählte Arzneimittel und Patienten als nützlich erwiesen, insbesondere für diejenigen, bei denen schwere Reaktionen auftreten, da der diagnostische Wert von ST für die meisten Arzneimittel nicht gut etabliert ist, da sie für eine begrenzte Anzahl von Arzneimitteln validiert und standardisiert sind27,28,29,30. Darüber hinaus ist die Quantifizierung von sIgE nur für eine begrenzte Anzahl von Arzneimitteln verfügbar, mit geringerer Empfindlichkeit als ST 27,28,29,30,31,32. Daher beruht die Diagnose einer Arzneimittelüberempfindlichkeit in der Regel auf einem Drogenprovokationstest, der bei Probanden mit schweren lebensbedrohlichen Reaktionen kontraindiziert sein kann33.
Vielversprechende Ergebnisse wurden für die Anwendung von BAT bei ausgewählten Patienten berichtet, die über sofortige Überempfindlichkeitsreaktionen auf verschiedene Arzneimittel wie Betalactame (BLs)20,34,35,36,37,38,39, neuromuskuläre Blocker (NMBAs)19,22,40,41,42, 43,44,45, Fluorchinolone (FQs)46,47,48,49, Pyrazolone 50,51,52, Radiokontrastmittel (RCM)53,54,55,56 und Platinverbindungen57,58,59 . Es wurde berichtet, dass BAT eine Sensitivität und Spezifität zwischen 51,7-66,9 % bzw. 89,2-97,8 % aufweist; und positive und negative prädiktive Werte werden zwischen 93,4% und 66,3% bzw.27,31 beschrieben. Darüber hinaus wurde BAT als prädiktiver Biomarker für Durchbruchreaktionen während der Desensibilisierung mit Platinverbindungen vorgeschlagen, da die CD203c-Expression im Vergleich zu CD63 bei Patienten mit hohem Risiko für Nebenwirkungen während der Desensibilisierung von Arzneimitteln erhöht ist57.
Es ist anzumerken, dass BVT bei Arzneimittelüberempfindlichkeit nur dann nützlich ist, wenn die Reaktion eine basophile Degranulation beinhaltet; Daher ist es nicht nützlich bei Reaktionen, die aus einer enzymatischen Hemmung der Cyclooxygenase 142 resultieren.
Lebensmittelallergie BVT hat sich als potenzielles Diagnoseinstrument für Nahrungsmittelallergien herausgestellt, da die Bestimmung von Serum-sIgE für den gesamten Allergenextrakt oder einzelne Allergene oft mehrdeutig ist und eine orale Nahrungsprovokation zur Bestätigung der Diagnose erfordert, was ähnlich wie bei der Arzneimittelüberempfindlichkeit ein kostspieliges und nicht risikofreies Verfahren ist60. Mehrere Studien haben relevante Ergebnisse mit Kuhmilch 61,62, Ei 61,63, Weizen 64,65,66,67,68, Erdnuss 63,69,70,71,72, Haselnuss 73,74,75,76 gezeigt ,77, Schalentiere78, Pfirsich 79,80,81, Apfel21, Sellerie und Karotte82,83.
Der Hauptmehrwert von BAT bei der Diagnose von Nahrungsmittelallergien im Vergleich zu STs und sIgE im Serum besteht darin, dass es eine höhere Spezifität und ähnliche Sensitivität aufweist. Daher ist BAT ein nützliches Instrument, um klinisch allergische Patienten von sensibilisierten, aber toleranten Probanden zu unterscheiden, die sowohl eine hohe Spezifität (75-100%) als auch eine hohe Sensitivität (77-98%) aufweisen63,69,84. Sensitivitäts- und Spezifitätswerte hängen vom Allergen und anderen Faktoren wie Phänotypen (z. B. orales Allergiesyndrom versus Anaphylaxie), Alter und geografisch bedingten Sensibilisierungsmustern ab63,85.
BVT unter Verwendung einzelner Allergenkomponenten kann möglicherweise die diagnostische Genauigkeit für einige Lebensmittelallergeneverbessern 61,80. Es gibt Studien mit Samenspeicherproteinen (z. B. Ara h 1, Ara h 2, Ara h 3 und Ara h 6 aus Erdnüssen)86; Lipidtransferproteine (z.B. Pru p 3 aus Pfirsich und Ara h 9 aus Erdnüssen)80,86; und Bet v 1 Homologe (z. B. Ara h 8 aus Erdnuss)87. Andere mögliche Nutzen beziehen sich auf die Identifizierung des Täterallergens in Fällen von Pollen-Nahrungsmittel-Allergie-Syndrom 21,87,88, Allergie gegen rotes Fleisch 89 oder lebensmittelabhängiger belastungsinduzierter Anaphylaxie66.
Interessanterweise kann die BVT Aufschluss über den Schweregrad und die Schwelle allergischer Reaktionen geben, da Patienten mit schwereren Reaktionen einen größeren Anteil an aktivierten Basophilen aufweisen, wie in Studien mit Erdnuss- und Kuhmilchallergikern beobachtetwurde 84,90,91; und Patienten, die auf Spuren des Allergens reagieren, zeigen eine größere basophile Empfindlichkeit 84,90,92. Diese Daten deuten darauf hin, dass BAT nützlich sein kann, um allergische Hochrisikopatienten zu identifizieren, die eine engere Nachsorge und eine intensivere Aufklärung benötigen93. Darüber hinaus wurde berichtet, dass BVT die Reaktionen auf Lebensmittelherausforderungen 70,91,92,94 und die Reaktivitätsschwellen 90,95 vorhersagen kann, um festzustellen, wann Lebensmittel sicher (wieder) eingeführt werden können 84. Diese Ergebnisse sind jedoch in einigen Studien umstritten63,96 und weitere Forschung sind erforderlich.
Andererseits wurde BVT verwendet, um das Abklingen von Nahrungsmittelallergien, entweder auf natürliche Weise oder unter immunmodulatorischen Behandlungen, im Laufe der Zeit zu überwachen, was bisher nur durch orale Nahrungsmittelprovokation mit den damit verbundenen Risiken und Kosten bewertet wurde. 84,97,98,99,100,101,102,103,104,105,106 ,107,108. Darüber hinaus wurde es auch verwendet, um die Wirkung von Omalizumab bei Nahrungsmittelallergien zu überwachen, da die basophile Aktivierung während der Behandlung mit Omalizumab abnimmt, aber nach Beendigung der Behandlung zunimmt109.
Inhalationsallergie BAT ist selten vorteilhaft bei Inhalationsallergien, da die Diagnose routinemäßig durch sIgE-Quantifizierung und ST gestellt werden kann. In Fällen von lokaler allergischer Rhinitis (nicht nachweisbare sIgE-Werte und negative STs mit positiven nasalen Provokationstests) hat die BVT jedoch in 50% der Fälle eine Diagnose ermöglicht110. Es wurde ferner über eine Korrelation zwischen der basophilen Empfindlichkeit und dem Ansprechen auf nasale/bronchiale Provokationstests sowie zwischen dem Schweregrad des Asthmas und der Wirksamkeit der Behandlung mit Omalizumab111,112 berichtet.
BAT wurde auch verwendet, um die Allergenimmuntherapie für Hausstaubmilben und Pollen zu überwachen, da die basophile Empfindlichkeit während der Immuntherapie abnimmt, wahrscheinlich aufgrund der Interferenz der blockierenden IgG-Antikörper 113,114,115,116,117.
Hymenoptera-Giftallergie Die Diagnose einer Hymenoptera-Giftallergie basiert routinemäßig auf ST und Serum-sIgE. BAT hat eine hohe Sensitivität (85-100%) und Spezifität (83-100%) gezeigt und es wurde berichtet, dass es in Fällen nützlich ist, die zu mehrdeutigen Ergebnissen führen, oder bei Patienten mit einer suggestiven klinischen Vorgeschichte einer Giftallergie, aber nicht nachweisbarem sIgE und negativem ST118,119. Die BVT scheint jedoch keinen Schweregrad für diese Reaktionen vorherzusagen120,121.
Bis zu 60% der Patienten zeigen sIgE sowohl für Wespen- als auch für Bienengift, und die Identifizierung eines dominanten Allergens ist entscheidend für eine adäquate Immuntherapie. In diesen Fällen hat sich die BVT als nützlich bei der Identifizierung des dominanten Allergens 119,122,123,124 erwiesen. Obwohl sIgE zu den Hauptallergenen von Bienen- und Wespengiften den Nutzen von BAT bei Patienten mit doppelter Positivität für beide Gifte verringern kann, liefert es nützliche Informationen, hauptsächlich bei Probanden mit negativen Ergebnissen bei sIgE-Bestimmungen123.
Einige Studien deuten darauf hin, dass BAT als prädiktiver Biomarker für Nebenwirkungen während der Aufbauphase der Giftimmuntherapie nützlich sein kann, da diese Behandlungsoption die basophile Empfindlichkeit verringert. Die Reaktivität nimmt jedoch nicht ab und dieses BAT-Dienstprogramm ist heutzutage umstritten 13,120,125,126,127,128,129,130.
Urtikaria und Angioödem Eine Untergruppe von Patienten mit chronischer Urtikaria hat eine autoinmune Pathophysiologie aufgrund von IgE-Autoantikörpern gegen Autoallergene und IgG-Autoantikörpern, die auf FcεRI- oder IgE-FcεRI-Komplexe abzielen, die auf der Mastzelloberfläche131,132 vorhanden sind. In der klinischen Praxis stützt sich die Diagnose dieser Art von chronischer Urtikaria auf positive autologe Serum-ST, die das Risiko einer versehentlichen Infektion birgt. BAT wurde als In-vitro-Test zur Diagnose und Überwachung von Patienten mit Verdacht auf chronische Urtikaria vorgeschlagen. Es wurde berichtet, dass sowohl die CD63- als auch die CD203c-Expression auf der Oberfläche von Basophilen nach Stimulation mit Seren von Patienten mit chronischer Urtikaria erhöht war, was den Nachweis der aktiven Autoantikörper 133,134,135,136,137 zeigt. Kürzlich wurde berichtet, dass Patienten mit positiver BAT häufig den aktivsten Krankheitszustand aufweisen, der anhand des Urtikaria-Aktivitätsscores beurteilt wird, und höhere Dosen von Antihistaminika zusammen mit Drittlinienbehandlungen (Ciclosporin A oder Omalizumab) benötigen als Patienten mit negativem BAT138.

<table><tbody><tr><td>5 mL Reagenzglas aus Polystyrol mit rundem Boden, ohne Kappe, unsteril</td><td>Corning</td><td>352008</td><td></td></tr><tr><td>APC Anti-Human-CD193 (CCR3) Antikörper</td><td>BioLegend 310708</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD FACSCalibur Durchflusszytometer</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Calciumchlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1016</td><td></td></tr><tr><td>FITC Anti-Human-CD63-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>353006</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (1 m)</td><td>Thermo-Fisher</td><td>15630106</td><td></td></tr><tr><td>Lysing Solution 10x konzentriert</td><td>BD Biosciences</td><td>349202</td><td></td></tr><tr><td>Magnesiumchlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>N-Formyl-Met-Leu-Phe</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F3506</td><td></td></tr><tr><td>PE Anti-Human-CD203c (E-NPP3) Antikörper</td><td>BioLegend 324606</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kaliumchlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>Gereinigtes Maus-Anti-Human-IgE</td><td>BD Biosciences</td><td>555857</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinantes humanes IL-3</td><td>R& D Systems</td><td>203-IL</td><td></td></tr><tr><td>Mantelflüssigkeit</td><td>BD Biosciences</td><td>342003</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3014</td><td></td></tr><tr><td>TUBE 9 mL LH Lithium Heparin</td><td>Greiner Bio-One</td><td>455084</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379</td><td></td></tr></tbody></table>

basophiler aktivierungstest zur allergiediagnostik

Basophil Activation Test for Allergy Diagnosis

Der Basophilenaktivierungstest (BAT) ist ein ergänzender In-vitro-Diagnosetest , der zusätzlich zur klinischen Anamnese, zum Hauttest (ST) und zur spezifischen IgE-Bestimmung (sIgE) bei der Beurteilung von IgE-vermittelten allergischen Reaktionen auf Lebensmittel, Insektengift, Medikamente sowie einige Formen chronischer Urtikaria verwendet werden kann. Die Rolle dieser Technik in den Diagnosealgorithmen ist jedoch sehr variabel und nicht gut bestimmt.
Die BVT basiert auf der Bestimmung der basophilen Reaktion auf die IgE-Aktivierung durch Allergen-/Wirkstoffvernetzung durch die Messung von Aktivierungsmarkern (wie CD63, CD203c) mittels Durchflusszytometrie. Dieser Test kann ein nützliches und ergänzendes Werkzeug sein, um kontrollierte Provokationstests zur Bestätigung der Allergiediagnose zu vermeiden, insbesondere bei Probanden mit schweren lebensbedrohlichen Reaktionen. Im Allgemeinen sollte die Leistung der BVT in Betracht gezogen werden, wenn i) das Allergen/Arzneimittel falsch positive Ergebnisse bei ST liefert; ii) es gibt keine Allergen-/Arzneimittelquelle, die für die ST- oder sIgE-Bestimmung verwendet werden kann; iii) es besteht Diskrepanz zwischen der Anamnese und der ST- oder sIgE-Bestimmung; iv) Symptome deuten darauf hin, dass ST zu einer systemischen Reaktion führen kann; v) bevor ein CCT in Betracht gezogen wird, um das schuldige Allergen / Medikament zu bestätigen. Die Haupteinschränkungen des Tests beziehen sich auf die nicht optimale Empfindlichkeit, insbesondere bei Arzneimittelallergien, die Notwendigkeit, den Test nicht länger als 24 Stunden nach der Probenextraktion durchzuführen, und die fehlende Standardisierung zwischen Laboratorien in Bezug auf Verfahren, Konzentrationen und Zellmarker.

BVT, die mit Allergenen oder Arzneimitteln durchgeführt wird, ermöglicht die Untersuchung von IgE-abhängigen Überempfindlichkeitsreaktionen. Die basophile Reaktivität sollte in mindestens zwei optimalen Konzentrationen gemessen werden, um die besten Ergebnisse zu erzielen34 und die Aktivierung wird durch die Hochregulierung von CD63 auf der Zelloberfläche visualisiert. Im Falle von Allergenen sollte darüber hinaus zur Bestätigung der basophilen Reaktivität die basophile Empfindlichkeit analysiert ...

Der basophile Aktivierungstest ist ein ergänzender in-vitro-diagnostischer Test zur Bewertung von IgE-vermittelten allergischen Reaktionen basierend auf dem Nachweis einer basophilen Aktivierung in Gegenwart eines spezifischen Stimulus durch die Messung von Aktivierungsmarkern durch Durchflusszytometrie.

Basophiler Aktivierungstest zur Allergiediagnostik

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and ...

Der basophile Aktivierungstest ist ein ergänzender In-vitro-diagnostischer Test zur Beurteilung von IgE-vermittelten allergischen Reaktionen, die sich als nützlich für Reaktionen erwiesen haben, die durch Medikamente, Lebensmittel oder Inhalationsmittel sowie bei einigen Formen der chronischen Urtikaria induziert werden. Dieser Test basiert auf der Bestimmung der basophilen Reaktion auf eine Allergen- oder Arzneimittelvernetzungs-IgE-Aktivierung durch die Messung von Aktivierungsmarkern durch Durchflusszytometrie. Der basophile Aktivierungstest kann ein nützliches und ergänzendes Werkzeug sein, um kontrollierte Provokationstests zur Bestätigung der Allergiediagnose zu vermeiden, insbesondere bei Probanden mit schweren lebensbedrohlichen Reaktionen.Darüber hinaus hat dieser Test den Vorteil, dass er die Reaktion gegen jedes Medikament oder Allergen im Vergleich zu anderen In-vitro-Methoden, die nur für wenige Medikamente und Allergene verfügbar sind, analysieren kann. Die Haupteinschränkungen des Tests beziehen sich auf eine nicht optimale Empfindlichkeit, insbesondere bei Arzneimittelallergien. Die Notwendigkeit, den Test nicht länger als 24 Stunden nach der Probenentnahme durchzuf

basophil-activation-test-for-allergy-diagnosis

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Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Basophilenaktivierungstest ist ein starkes Werkzeug für den Nachweis von IgE-abhängige...

Basophilenaktivierungstest für die Untersuchung von IgE-vermittelten Mechanismen in Drug Überempfindlichkeit

Experimentelle Mausmodellen von allergischem Asthma bieten neue Möglichkeiten zur Untersuchung von Krankheitsentstehung und die Entwicklung neuer Therapeutika. Diese Modelle sind gut, um Mess-Faktoren, die die allergische Immunantwort, Entzündung der Atemwege, Lungen-und Pathophysiologie geeignet.

Mausmodell von Allergen-induzierte Asthma

In diesem Video beschreiben wir eine in vitro Methode, um das allergische Potenzial eines Antigens zur Induktion der basophilen Degranulation zu bewerten. β-Hexosaminidase wird als Index für die Freisetzung chemischer Mediatoren verwendet, und die Enzymaktivität von β-Hexosaminidase wird mit einem fluorogenen Substrat gemessen.

Humanisierter Mediator-Enzym-Freisetzungsassay: Eine immunchemische Methode zum Screening des allergischen Potenzials von Testantigenen durch Überwachung der Basophilen-Degranulationsreaktion in vitro

In diesem Video demonstrieren wir den Test zur Bewertung der Basophilenaktivierung in Gegenwart eines Testallergens mittels Durchflusszytometrie.

Analyse der Basophilenaktivierung in Gegenwart eines Testallergens mittels Durchflusszytometrie

Dieses Video demonstriert ein Protokoll zum Nachweis von serumspezifischem Immunglobulin E unter Verwendung eines mikrofluidischen Kartuschen-basierten Chemilumineszenzsystems. Serum-IgEs interagieren mit unterschiedlichen Allergenen, die in der Reaktionszone der Kartusche immobilisiert sind, die anschließend mit Peroxidase-konjugierten Anti-IgE-Antikörpern und einem chemilumineszierenden Substrat nachgewiesen werden, was den gleichzeitigen Nachweis mehrerer allergenspezifischer IgE ermöglicht.

Ein mikrofluidisches kartuschenbasiertes Detektionssystem für allergenspezifisches Immunglobulin E

Hier stellen wir ein Protokoll allergen-beladenen Partikel durch Durchflusszytometrie quantifiziert. Feinstaub in der Luft Partikel können als Träger von adsorbiertem Allergene wirken. Wir zeigen hier, dass der Durchflusszytometrie ist ein Verfahren allgemein zur Charakterisierung von Schwebstoffen verwendet&gt; 0,5 um im Durchmesser, können diese allergen-beladenen Partikel zu messen, verwendet werden.

Durchflusszytometrische Analyse von partikelgebundenen Bet v 1 Allergens in PM10

Diese Arbeit beschreibt ein Protokoll, das einen komponentenaufgelösten Ansatz verwendet, um Sensibilisierung für Gräserpollenallergene in einer Kohorte von Patienten aus Südchina mit allergischer Rhinitis und / oder Asthma zu untersuchen.

Ein komponenten-aufgelöster diagnostischer Ansatz für eine Studie auf Gras-Pollen-Allergenen in chinesischen Südländer mit allergischer Rhinitis und / oder Asthma

Dieser Beitrag stellt ein Protokoll zum Nachweis von Serum-spezifische Immunglobulin E mit einem mikrofluidischen Patrone-basierte Chemilumineszenz-System und die Bewertung der Nützlichkeit Allergie Diagnosen.

Einsatz von Biochip mikrofluidischen Technologie zur Erkennung Serum Allergen-spezifische Immunglobulin E (sIgE)

Hier stellen wir den Mediator-Release-Assay vor, bei dem eine basophile Leukämiezelllinie der Ratte verwendet wird, die mit dem menschlichen IgE-Rezeptor transfiziert ist, um die Degranulation von Effektorzellen zu simulieren, die typischerweise bei allergischen Reaktionen vom Typ 1 beobachtet wird. Diese Methode untersucht die biologische Aktivität von Allergenen hochempfindlich, reproduzierbar und passgenannt.

Humanized Mediator Release Assay als Ausleser für Allergenpotenz

Es wird ein Protokoll für die Durchführung einer Challenge in einer Allergenexpositionskammer (AEC) vorgestellt. AECs haben sich aufgrund ihrer Fähigkeit, stabile Partikelkonzentrationen und Umweltbedingungen aufrechtzuerhalten, als sichere und wirksame Werkzeuge für die Induktion allergischer Symptome oder als Endpunkt bei der Wirksamkeitsprüfung der Allergenimmuntherapie erwiesen.

Symptombeurteilung von Patienten mit allergischer Rhinitis anhand einer Allergenexpositionskammer

Erfahren Sie den basophilen Aktivierungstest zur Allergiediagnostik mit Durchflusszytometrie. Diese Methode ermöglicht die Analyse von IgE-vermittelten Reaktionen auf Arzneimittel und Allergene.

Basophiler Aktivierungstest zur Allergiediagnostik

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