Entwicklung eines Lateral Flow Immunochromatographic Strip für den schnellen und quantitativen Nachweis niedermolekularer Verbindungen

Das Verfahren beschreibt die Herstellung von kolloidalem Gold und die Montage der immunchromatographischen Streifen. Zunächst wurden Chloraurinsäure und Natriumcitrat für die Synthese von kolloidalem Gold verwendet. Natriumcitrat wurde der Chlorauriersäurelösung zugesetzt und gekocht, um kolloidales Gold mit entsprechender Partikelgröße zu erhalten.

Synthese, das kolloidale Goldantikörperkonjugat. Nach der Zentrifugation wurden kolloidale Goldpartikel in geeigneter Lösung gelöst und dann resuspendiert, um kolloidale Goldlösung zu erhalten. Tauchen Sie die Glasfasermembran in die Konjugation ein, um das Konjugatpad vorzubereiten.

Lassen Sie künstliches Antigen und sekundäre Antikörper als T-Linie und C-Linie auf die NC-Membran fallen. Befestigen Sie die NC-Membran, die absorbierende Membran, das Probenpad und die Glasfasermembran in der PVC-Platte. Schneiden Sie den bestückten Karton in 3,5 Millimeter breite Streifen.

Konfekt volle Prozent Goldchloridsäurelösung bzw. 1% Natriumcitratlösung. Schalten Sie den Magnetrührer ein und legen Sie den Kolben auf einen Mischer. 120 Milliliter destilliertes Wasser in einen Rundkolben geben und auf einem thermostatischen Magnetrührer zum Kochen erhitzen.

Weiter kochen und schnell 0,5 Milliliter volles Prozent Chloraurinsäure und fünf Milliliter 1% Natriumcitrat hinzufügen. Fünf bis 10 Minuten weiter erhitzen. Beobachten Sie, wie sich die Farbe der Lösung von blassgelb zu weinrot ändert.

Schalten Sie die Stromversorgung des thermostatischen Magnetmischers aus, kühlen Sie sie auf Raumtemperatur ab und legen Sie die Mischung in eine saubere Flasche. Bei vier Grad Celsius lagern. Die Gold-Nanopartikel zeigen den Tyndall-Effekt.

Die Größe und die Morphologie der Goldnanopartikel wurden durch Ultraviolettspektroskopie und die transmissionselektronenmikroskopische Bildgebung bestimmt. Fügen Sie 100 Mikroliter Natriumchloridlösung zu acht Röhrchen hinzu. Stellen Sie die kolloidalen Goldlösungen mit 0,1 mol pro Liter Kaliumcarbonat auf pH 5 bis 12 ein.

Fügen Sie 100 Mikroliter kolloidale Goldlösung zu acht Röhrchen hinzu, die Natriumchlorid enthalten. Stehen Sie einige Minuten nach dem Mischen für den Pfosten. Beobachten Sie die Farbänderung jeder Röhrchenlösung und zeichnen Sie die Röhrchen auf, die rot bleibt.

Wählen Sie den pH-Wert mit der geringsten Menge an zugesetztem Kaliumcarbonat und einer stabilen Lösungsfarbe als optimalen pH-Wert für die Herstellung von Konjugat. Den gleichen Ansatz angepasst. Beobachtete die Farbänderung und zeichnete die Röhre auf, die rot bleibt.

Wählen Sie die Antikörpermenge mit der niedrigsten Konzentration an mAB und einer stabilen Lösungsfarbe als optimale mAB-Menge. Nehmen Sie 10 Milliliter kolloidale Goldlösung und verwenden Sie 0,1 mol pro Liter Kaliumcarbonat, um die Lösung auf den optimalen pH-Wert einzustellen. Fügen Sie langsam SSd-mABs mit der entsprechenden Konzentration hinzu und schütteln Sie sie bei Raumtemperatur für 30 Minuten.

Zentrifugieren Sie das Gemisch bei 2000 U / min für 20 Minuten bei vier Zentrieren. Entfernen Sie den Niederschlag, der Verunreinigungen des gefällten kolloidalen Goldes enthält. Zentrifugieren Sie die Mischung bei 10.000 U / min für 40 Minuten.

Verwerfen Sie den Überstand. Der Niederschlag ist ein kolloidales Gold-mAB-Konjugat. Fügen Sie Tris-Salzsäure, BSA, Tween 20 und PEG 20.000 hinzu und mischen Sie dann gut, um einen Resuspensionspuffer vorzubereiten.

Fügen Sie den Resuspensionspuffer hinzu, und dissoziieren Sie den Niederschlag. Der Membranmaterialstreifen, einschließlich Glascellulosemembran, Polyesterzellulosemembran und PVC-Platte. Das Membranmaterial muss mit einem sterilen Mikroskop verfolgt und bewertet werden, um die Inhomogenität loszuwerden.

Legen Sie zunächst die NC-Membran zwei Zentimeter vom Rand des Abschnittsendes der Platte auf die PVC-Platte. Zweitens, lassen Sie zwei Milligramm pro Milliliter SSd-BSA auf die NC-Membran bei zwei Zentimetern vom oberen Rand als Testlinie fallen und lassen Sie 1,5 Milligramm pro Milliliter Gold Anti-Maus-IgG auf die NC-Membran in zwei Zentimetern von der Unterkante als Kontrolllinie fallen. Befestigen Sie das saugfähige Pad an der PVC-Platte über der NC-Membran und überlappen Sie sich um zwei Millimeter mit der NC-Membran.

Die Glasfasermembran auf fünf Zentimeter Länge und zwei Zentimeter Breite trimmen und als Konjugatpad verwenden. Tauchen Sie die Glasfasermembran in die Goldnanopartikel mAB-Konjugatlösung. Eine Weile einweichen, um die Goldnanopartikel mAB-Absorption zu machen.

Trocknen Sie die breite Membran im Inkubator bei 37 Grad. Fügen Sie das vorbehandelte Konjugatpad unter die NC-Membran ein und die überlappende Länge mit der NC-Membran sollte 0,1 Zentimeter betragen. Schneiden Sie die Fusion3-Membran auf 1,8 Zentimeter lang und 3,5 Zentimeter breit und verwenden Sie sie als Probenpad.

Legen Sie dann das Probenpad auf die PVC-Platte und überlappen Sie sich mit dem konjugierten Pad um zwei Millimeter. Schneiden, montieren Sie den Karton mit einer Schneidemaschine in 3,5 Millimeter breite Streifen und verdichten Sie ihn mit einem Chargenkaschierungssystem. Legen Sie abschließend die Teststreifen in die Schale.

Verschließen Sie sie in einem Aluminiumfolienbeutel, der Trockenmittel enthält, und lagern Sie sie lichtbeständig. Das ICS ist nun montiert. Lassen Sie 50 Mikroliter Probenlösung auf das Probenloch fallen, um den Chromatographieprozess zu beobachten.

Als nächstes analysieren Sie die Streifen mit einem tragbaren Streifenleser. Die Maschine kann das Verhältnis der Prüflinie zur Steuerleitung bereitstellen. Bewerten Sie die Spezifität, Sensitivität, Wiederholbarkeit und Stabilität des ICS-Tests.

Die vorbereiteten kolloidalen Goldlösungen wurden abgelesen. Transmissionselektronenmikroskopische Analysen ergaben, dass die Partikel polyedrisch geformt waren und gleichmäßig mit einem durchschnittlichen Durchmesser von 14 Nanometern verteilt waren. Hochauflösende Transmissionselektronenmikroskopische Aufnahmen zeigten ein kontinuierliches Streifenmuster mit einem Abstand von 0,117 Nanometern Goldnanopartikeln.

Ultraviolette sichtbare Absorption zeigte, dass unterschiedliche Größen von kolloidalen Goldpartikeln durch Änderung des Anteils von Citrat-Natrium und Chlorauursäure erhalten werden können. Im quantitativen Experiment wurden die Streifen mit den Testergebnissen von Saikosaponin D mit einem tragbaren ICS-Lesegerät gescannt. Wir berechneten eine Standardkurve, indem wir die Nichtkonzentrationen von Saikosaponin D mit der entsprechenden Absorption bei jeder Konzentration in Beziehung setzten.

Nach methodischer Untersuchung kann die Methode zum quantitativen und semi-qualitativen Nachweis von niedermolekularen Verbindungen angewendet werden. Dieses Verfahren umfasst die Herstellung von kolloidalem Gold, die Synthese von Goldnanopartikeln mAB-Konjugat, die Zusammenstellung des Streifens und die methodische Untersuchung. Diese Arbeit bietet ein detailliertes Protokoll für die Entwicklung von immunchromatographischen Streifen für den Einsatz beim schnellen und quantitativen Nachweis kleiner Moleküle.

Nachdem Sie dieses Video gesehen haben, hoffe ich, dass Sie ein gutes Verständnis für die Herstellung des immunchromatographischen Streifens haben. Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Glück für Ihre Experimente.